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Peroxidação lipídica e obesidade: Métodos para aferição do estresse oxidativo em obesos

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www.elsevier.pt/ge

ARTIGO

DE

REVISÃO

Peroxidac

¸ão

lipídica

e

obesidade:

Métodos

para

aferic

¸ão

do

estresse

oxidativo

em

obesos

Bruna

Karoline

Franc

¸a

a,∗

,

Maria

Rosa

Melo

Alves

b

,

Fernanda

Maria

Silveira

Souto

a

,

Larissa

Tiziane

a

,

Raquel

Freire

Boaventura

b

,

Adriana

Guimarães

b

e

Antonio

Alves

Jr

a,c

aDepartamentodeMedicina,UniversidadeFederaldeSergipe(UFS),SãoCristóvão,SE,Brasil bDepartamentodeBiomedicinaUniversidadeTiradentes(UNIT),Aracaju,SE,Brasil

cServic¸odeCirurgiaBariátrica,HospitalUniversitário(HU),UniversidadeFederaldeSergipe(UFS),SãoCristóvão,SE,Brasil

Recebidoa28dejunhode2012;aceitea14deabrilde2013 DisponívelnaInterneta4deoutubrode2013

PALAVRAS-CHAVE Estresseoxidativo; Peroxidac¸ãolipídica; Biomarcadores; Obesidade

Resumo A obesidade é uma doenc¸a cada vez mais comum, cuja prevalência já atinge proporc¸õesepidêmicas,porestarassociadaainúmerasdoenc¸ascrônicastemsidoalvode mui-taspesquisas.Oestresseoxidativo,aferidopelaperoxidac¸ãolipídicanoplasma,éapontado comoalterac¸ãomarcantenaobesidade;sendo,portanto,umdistúrbioquedeveser detalha-damenteestudadoafimdeelucidarpossíveisabordagensparaessacondic¸ão.Oobjetivodesta revisãoéapresentarmétodosquecomprovamoaumentodoestresseoxidativonaobesidadee suainfluêncianascomorbidadesdoobeso.

©2012SociedadePortuguesadeGastrenterologia.PublicadoporElsevierEspaña,S.L.Todosos direitosreservados. KEYWORDS Oxidativestress; Lipidperoxidation; Biomarkers; Obesity

Lipidperoxidationandobesity:Methodstomeasuretheoxidativestressoftheobese paciente’splasma

Abstract Obesityisanincreasinglycommondisease,whichprevalencehasreachedepidemic proportions,andextensiveresearchhasbeendoneinmanyresearchesbecauseofthe associa-tionwithmanyisassociatedwithmanyimportantchronicdiseases.Oxidativestress,measured throughlipidperoxidationinplasma,hasbeenpointedasaremarkablechanginginobesity,and therefore,adisorderthatshouldbethoroughlystudiedinordertoelucidatepossible appro-achestothiscondition.Theobjectiveofthisreviewistopresentmethodswhichconfirmthe increasedoxidativestressinobesityanditsinfluenceonthecomorbiditiesoftheobese. ©2012SociedadePortuguesadeGastrenterologia.PublishedbyElsevierEspaña,S.L.Allrights reserved.

Autorparacorrespondência.

Correioeletrónico:bpfranca@yahoo.com.br(B.K.Franc¸a).

0872-8178/$–seefrontmatter©2012SociedadePortuguesadeGastrenterologia.PublicadoporElsevierEspaña,S.L.Todososdireitosreservados.

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Introduc

¸ão

Aobesidadeé umadoenc¸aquetemalcanc¸adoproporc¸ões alarmantesem todoo mundoeé umimportantefatorde risco para o desenvolvimento de diversas comorbidades deelevada morbidade e mortalidade como diabetes mel-litus, dislipidemia, aterosclerose, hipertensão arterial, resistênciaàinsulina,esteatosehepática,doenc¸ahepática nãoalcoólicaentreoutras1---5.Nospacientesobesos

diver-sosfatoresqueinterferem nasuscetibilidadedoindivíduo à presenc¸a do excesso de lesões oxidativas contribuintes paraascomorbidades.Dentreelessedestacama hipergli-cemia,aatividademuscularaumentada,osníveiselevados delipídiosteciduais,ainflamac¸ãocrônica,asdefesas antio-xidantesinadequadas e a hiperleptinemia. Vários estudos mostram ainda, acúmulo de subprodutos da peroxidac¸ão lipídicanoplasma depacientesobesos6---8,noentanto são

escassosnaliteraturaartigosqueversemsobreos mecanis-mosespecíficosenvolvidosnesseprocesso.

A cirurgia bariátrica tem se mostrada como o método mais efetivo para o tratamento e a profilaxia das complicac¸ões causadas pela obesidade mórbida, já tendo sidobemdemonstradaaeficáciaeaseguranc¸ados procedi-mentoscirúrgicos bariátricos em aumentar a longevidade e a qualidade de vida dos obesos mórbidos. A cirurgia é realizadaparaotratamentodascomorbidadesrelacionadas àobesidade mórbida, sendoa gastroplastia com«bypass»

emYdeRoux,considerado oprocedimentomaisefetivoe recomendadocomopadrãoourodetratamento9.Alguns

tra-balhosdemonstram oimpactodacirurgiabariátrica sobre areduc¸ãodoestresseoxidativonopacienteobeso, melho-randoascomorbidadesadvindasdoexcessoderadicaislivres eperoxidac¸ãolipídicaexistentenaobesidade10.

Devidoàescassezdeartigosquedetalhemos mecanis-mosrelacionados àslesõesoxidativas noindivíduo obeso, esseartigo possui aimportância de apresentar asviasde aumento de estresse oxidativo e sua mensurac¸ão. Assim, talfatopodepermitir arealizac¸ãode pesquisasfuturase adescobertadeintervenc¸õesnessesmecanismosque sabi-damentepredispõemàscomorbidadesdessespacientes.

Estresseoxidativoelipoperoxidac¸ão

A peroxidac¸ão lipídica constitui uma reac¸ão em cadeia dosácidosgordospolinsaturadosdasmembranascelulares, gerandoradicaislivresquealteramapermeabilidade, flui-dez e integridade das mesmas11,12. Esses danoscelulares,

queseencontramaumentadosnosindivíduosobesos, predis-põemàscomorbidadesjácitadas,comohipertensãoarterial sistêmica,dislipidemia,eventostromboembólicos,diabetes mellitus,alémdeneoplasias13---16.

No entanto, a gerac¸ão de radicais livres constitui um processo contínuo e fisiológico. Eles são necessários para quefunc¸õescomo a sinalizac¸ãocelular ea defesacontra micro-organismosocorramde maneiraadequada. Durante osprocessosmetabólicos,essesradicaisatuamcomo medi-adoresparaatransferênciadeeletrõesnasváriasreac¸ões bioquímicas. Porém, a produc¸ão excessiva pode conduzir a lesões oxidativas17. Estes radicais livres, cujo eletrão

desemparelhadoseencontracentrado nosátomos de oxi-gênioounitrogênio sãodenominados espéciesreativasde

Redução tetravalente 4

e-O2 H2O

(O2-, H2O2, OH-) Compostos intermediários

Figura1 Reduc¸ãotetravalentedamoléculadeO2.Formac¸ão de compostos intermediários, espécies reativas ao oxigênio (ROS),comoO2−(ânionsuperóxido),H2O2(peróxidode hidro-gênio),OH−(radicalhidroxila).(Fonte:Franco38).

oxigênio (ERO) e espécies reativas de nitrogênio (ERN), respectivamente18,19(fig.1).

AsERO sãoprodutosinstáveis, decorrentesdareduc¸ão tetravalente sofrida pela molécula de oxigênio, aceita-dora final de eletrões, durante a produc¸ão de energia na etapa de fosforilac¸ão oxidativa20 (fig. 1).As principais

ERO distribuem-se em 2 grupos, os radicalares: hidroxila (HO•),superóxido(O2•−),peroxila(ROO•)ealcoxila(RO•); e os não-radicalares: oxigênio, peróxido de hidrogênio e ácidohipocloroso.DentreasERNincluem-seoóxidonítrico (NO•), óxido nitroso (N2O3), ácido nitroso (HNO2), nitri-tos (NO2−), nitratos (NO3−) e peroxinitritos (ONOO−)21.

Enquanto alguns deles podem ser altamente reativos no organismoatacandoapenaslipídios,outrossãoreativoscom essese comproteínase DNA.Natabela 1estão represen-tadasalgumascaracterísticasdasespéciesradicalaresmais importantes.

A produc¸ão contínua de radicais livres durante os processos metabólicos culminou no desenvolvimento de mecanismos de defesa antioxidante, que têm o objetivo delimitarosníveisintracelularesdetaisespéciesreativas econtrolaraocorrênciadedanosdecorrentes17.

Ainstalac¸ãodoprocessodeestresseoxidativodecorreda existênciadeumdesequilíbrioentrecompostosoxidantese antioxidantes, em favor da gerac¸ão excessiva de radicais livresouemdetrimentodavelocidadederemoc¸ãodesses. Talprocessoconduzàoxidac¸ãodebiomoléculascom conse-quenteperdadesuasfunc¸õesbiológicase/oudesequilíbrio homeostático,cujamanifestac¸ãoéodanooxidativo poten-cialcontracélulasetecidos22.

Osantioxidantes,sejamnaturaisousintéticos,possuem elevadaestabilidadeoxidativaemfunc¸ãodesuaestrutura molecular e, por isso, desempenham papel fundamental na prevenc¸ão daoxidac¸ãoresultantedaac¸ão dosradicais livres23.Ossistemasantioxidantesexistemsobaformade

compostosenzimáticosenãoenzimáticos.Osistema anti-oxidante enzimático incluia superóxido dismutase (SOD), glutationaperoxidase (GSH-PX),glutationaredutase (GSH-Rd)eacatalase(CAT).Estasenzimassãoresponsáveispela remoc¸ãodoâniãosuperóxido(O2·−),hidroperóxidos orgâni-coseperóxidodehidrogênio(H2O2),respectivamente19,24.

Jáosistemaantioxidantenãoenzimáticorelaciona-secom umgrupodeantioxidantesquepodemsercongregadosem compostosproduzidosinvivo,comoéocasodaglutationa, da ubiquinona e do ácido úrico, e em compostos obtidos diretamentedadietataiscomooa-tocoferol(vitamina-E),

␤-caroteno (pro-vitamina-A),ácidoascórbico(vitamina-C), e compostos fenólicos onde se destacamos flavonoidese

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Tabela1 Característicasdasespéciesradiculares

Espéciesreativas Características

Ânion-radicalsuperóxidoO2•--- Geradocontinuamentepordiversosprocessoscelulares.Emsoluc¸ãoaquosaé umforteagenteredutor.Épermeávelamembranaseemfagócitos,como neutrófilosemacrófagos,éumdosmicrobicidasmaisimportantes PeróxidodehidrogênioH2O2 Intermediárioformadopelareac¸ãodedismutac¸ãodeO2---catalisadapela

enzimaSOD,pelareduc¸ãode2e−namoléculadeO2epelaac¸ãodediversas enzimasoxidasesinvivo,localizadasnosperoxissomas.Éumfracoagente oxidanteeumfracoagenteredutor,masproduzdanoscelularesquando produzidosemexcesso

Radicalhidroxila•OH Éomaisreativoemaislesivoradicalconhecidoeparaoqual,umavez formado,oorganismohumanonãodispõedemecanismodedefesa.Écapaz dereagircomumasériedeendobióticos,modificaroDNA,inativarenzimase causardanosaproteínasegerarperoxidac¸ãolipídica.Possui,contudo,âmbito limitadodeac¸ão(poucosdiâmetrosmoleculares)

Radicaisperoxila(RO2•)ealcoxila(RO•) Formadosduranteadecomposic¸ãodeperóxidosorgânicosereac¸ões decarbonoradicalarcomoxigênio,comonaperoxidac¸ãolipídica Oxigêniosinglete1O2* Estadoeletronicamenteexcitadodooxigênio,produzidoporreac¸ões

fotoquímicasouporoutrasradiac¸õesquereagecomumgrandenúmerode moléculasbiológicas,incluindolipídiosdamembrana,iniciandoprocessos deperoxidac¸ão

OzônioO3 Produzidonoaratmosféricopoluídoeporfontesdeluzintensadealgumas fotocopiadoraseoutrosequipamentos.Éextremamentelesivoparaopulmão, oxidandorapidamenteproteínas,DNAelipídios

ÓxidonítricooumonóxidodenitrogênioNO• Sintetizadonosorganismosvivospelaac¸ãodaenzimaóxidonítricosintase (NOS),queconverteoaminoácidoL-argininaaNO•+L-citrulina.Éumradical abundantequeageemváriosprocessosbiológicos,incluindorelaxamento muscular,neurotransmissãoeregulac¸ãoimune.Potentevasodilatador, envolvidonaregulac¸ãodapressãoarterial.Quandoexpostoaoar,reage comoxigênioparaformarNO2•

DióxidodenitrogênioNO2 Potenteiniciadordaperoxidac¸ãolipídicaemfluidosbiológicos

PeroxinitritoONOO--- Instável,tempodevidacurto,oxidantepotente,propriedadessemelhantesao radicalhidroxila,causadanosamuitasmoléculasbiológicasalémdesercapaz deformar•OH

Fonte:Vasconcelosetal.27

poliflavonoides20,26.Natabela2estãorepresentadosos

anti-oxidantesenzimáticoseosantioxidantesnãoenzimáticos O desequilíbrio entre os sistemas antioxidante e pró-oxidante, com predomínio da ac¸ão oxidante e dano consequente,resultanoestresseoxidativo23,25---27.Este

pro-movealterac¸õescomo peroxidac¸ãolipídica,fragmentac¸ão de DNA e oxidac¸ão de diferentes moléculas, levando à mortecelular17.Algunsestudostêmdemonstradométodos

Tabela2 Antioxidantesenzimáticosenãoenzimáticos Antioxidantesenzimáticos Antioxidantesnão

enzimáticos

Glutationaperoxidase Vitaminaslipossolúveis (␣-tocoferol,ß-tocoferol)

Catalase Ácidoascórbico

Metionina-redutase Oligoelementos (Zinco,cobre,selênio,magnésio)

Superóxido-dismutase Flavonoides Fonte:Franco38.

capazes de quantificar os níveis de estresse oxidativo no plasma12,13,15.

Obesidadeeestresseoxidativo

Ospacientesobesoscomumentepossuemumdesequilíbrio entregordura,pesocorporal,lipoproteínaselipídios,oque interferena suscetibilidadedoorganismoalesões oxidati-vas.

Sabe-seque existempelomenos3mecanismosatravés dosquaisaobesidadepodeproduzirperoxidac¸ãolipídica28.

Aobesidadeaumentaanecessidademetabólicado miocár-dio,comoconsequenteaumentodoconsumodeoxigênio. Comisso,aproduc¸ãodeespéciesreativasdeoxigênio(ROS) comoossuperóxidoseosperóxidosdehidrogênioaumenta devidoàmaiorrespirac¸ãomitocondrial.Seaproduc¸ão des-sasespéciesdeoxigênioexcederacapacidadeantioxidante dacélula,oestresseoxidativopodeocorrer,resultandoem peroxidac¸ão lipídica29. O segundo mecanismo através do

quala obesidadepode aumentara peroxidac¸ão lipídica é atravésdalesãocelularprogressivaecumulativadevidoà pressãopelagrande massa corporal.Ainjúriacelular,por

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suavez,liberacitocinas como ofatordenecrosetumoral quegeraespéciesreativasdeoxigênio30.Umúltimo

meca-nismopropostoé queatravés deumadieta hiperlipêmica sealtereometabolismodooxigênio,poisasmoléculasdos ácidosgordoscomduplasligac¸õessãovulneráveisareac¸ões oxidativaseconsequentementepodemlevaraperoxidac¸ão lipídica31.

Em crescente discussão na literatura é a hipótese de que a obesidade «per se» causa aumentoda peroxidac¸ão lipídica plasmática e diminuic¸ão das enzimas citoprote-toras eritrocitárias32. O estudo de Olusi (2002), com o

objetivodeconfirmaressahipótese,avaliouaperoxidac¸ão lipídica e a citoprotec¸ão eritrocitária através da medida dasconcentrac¸õesplasmáticasdomalondialdeído(p-MDA) e daatividade dasenzimassuperóxido dismutase (SOD)e glutationaperoxidase(GPX)empacientesobesossemoutras comorbidades. Esse estudo chegou à conclusão que a obesidade, mesmo não associada ao tabagismo, à diabe-tes mellitus, à hipertensão arterial, à hiperlipidemia, a doenc¸asrenaisouhepáticasestárelacionadaaoaumentoda peroxidac¸ãolipídicaeàdiminuic¸ãodaatividadedeenzimas citoprotetoras,edeve,portanto,receberamesmaatenc¸ão queaobesidadeassociadaacomplicac¸ões28.A

consequên-ciadeumabaixaatividade deenzimascitoprotetorasé o danocelularprogressivoquepodelevaraaterosclerose,ao cancroeaoutrasdoenc¸as.

Diversas medidas como intervenc¸ões farmacológicas e cirúrgicas, prática de atividades físicas para reduc¸ão do peso,restric¸ãocalóricaemudanc¸as comportamentaistêm sido propostas para o tratamento da obesidade e con-sequente reduc¸ão do estresse oxidativo. Terapia com antioxidantes,desdequeem doseetempodetratamento adequado,tambémpareceválida.Todasessasintervenc¸ões favorecemaperdadepesoqueseassociaaumareduc¸ãona produc¸ãodeespéciesoxidanteseaumamelhorcapacidade antioxidante,favorecendoumareduc¸ãodosfatoresderisco eumamelhoriadascomorbidades33.

Em crescente destaque encontra-se a cirurgia da obe-sidade,tendoem vista onúmerocrescentedeobesos ea efetividadedastécnicascirúrgicasemmelhoraras comor-bidadesassociadaseemaumentaraqualidadedevida33,34.

Alguns estudos têm sido realizados com intuito de com-provarasmelhoriaspromovidaspelacirurgiabariátricana obesidadeeemsuascomorbidadesdecorrentesdoestresse oxidativo.Estudocompacientesdoservic¸odecirurgia bariá-tricanoHospitalUniversitário daUniversidadeFederalde Sergipe (HU-UFS) submetidos à cirurgia de «bypass» gás-tricoanalisou o perfillipídico dos indivíduos antese após acirurgiabariátrica.Comoresultado,houveumamelhoria apósoprocedimento,sendoamaiorreduc¸ãoconstatadanos níveismédiosdetriglicerídeos(32,0%),alémdeumaumento do colesterol associado à lipoproteína de alta densidade (HDL)33.Outroestudo,realizadonamesmainstituic¸ão,

ava-liouoimpactodacirurgiabariátricasobreoriscodeevento cardiovascularemobesosatravésdoescoredeFramingham, que foi calculado antes e após 6 meses de cirurgia. Os resultadosforamsignificativamente diferentes,sendoque oriscodeFramingham,ocolesteroltotal,oHDLeapressão arterialobtiveramvaloresmelhoresquandocomparadosao pré-operatório,comprovandoqueacirurgiabariátricareduz oriscodeocorrênciadeeventocardiovascularem pacien-tesobesos40.Além destes benefícios, a análiseda fibrose

hepáticaanteseapósacirurgiabariátricaatravésdoNAFLD FibrosisScorecomprovouqueháreduc¸ãonograudefibrose hepáticadospacientessubmetidosàgastroplastia35.

Estudodesenvolvido peloDepartamento deCirurgia da UniversidadeFederal doParanáacompanhou 50pacientes com obesidade mórbida e portadores de doenc¸a hepática não-alcoólica duranteoperíodo de1anoapósterem sido submetidos à gastroplastia com «bypass» em Y de Roux. O trabalho comprovou a melhora significativa da doenc¸a hepática não alcoólica, cuja fisiopatologia envolve o aumentodoestresseoxidativopresentenoobeso10.

Métodos

para

aferic

¸ão

da

peroxidac

¸ão

lipídica

Osestudosacerca daavaliac¸ão doestresseoxidativo vêm adquirindorelevânciasignificativa,poisosmarcadores oxi-dativos desempenham fundamental papel na gênese de enfermidadescrônicasdegenerativas.Assim,são importan-tesferramentasquepossibilitamoplanejamentodeac¸ões eficazesnocontroleeprevenc¸ãodetaisdoenc¸as35.

Atualmente,noentanto,nãohá consensosobrequal o métodomaisútil,maisconfiável,maisacuradoouespecífico para osdiferentestipos dedano oxidativo36.Enquanto os

trabalhos de sistematizac¸ão prosseguem, é útil conhecer osprincipaismarcadoreseosmétodosmaisutilizadospara suaquantificac¸ão.

Adetec¸ãodiretadasEROemsistemasbiológicosé difi-cultadapelassuasconcentrac¸õesextremamentebaixas(da ordemde10−11M)epelassuasaltasvelocidadesdereac¸ão, chegando ao ponto deas taxasde produc¸ão serem iguais àstaxasdereac¸ãocombiomoléculas35.Ossubprodutosdas

EROpodemseraferidosdiretamenteportécnicade resso-nânciaparamagnéticadeeletrões,porémocustoeoutras limitac¸õesdestaavaliac¸ãodificultamseuusoregular38.

Osmétodosmaisutilizadosparaaferic¸ãoindiretadasERO e, consequentemente,daslesõesoxidativassão os espec-trofotométricosecromatométricos,quemedemaatividade enzimática(superóxidodismutase-SOD,catalase, glutati-ona peroxidase - GSH-Pxe glutationa redutase- GSH-Rd) e/ou a concentrac¸ão detripeptídeos (glutationa reduzida - GSH) e aldeídos (malondialdeido - MDA).Estas medidas podemserrealizadasem tecidos,sangue eoutrosfluidos. A lipoperoxidac¸ão de membranas é habitualmente moni-torada pelométododoMDA(malondialdeido)e oestresse oxidativo,pordosagensdeGSSG(formaoxidadada glutati-ona)e/oupelocálculodarazãoGSSG/GSH26.

Essesmétodosbaseiam-senousodebiomarcadoresque, segundoZwartetal.29eLaBaer39,possuemcaracterísticas

passíveis deavaliac¸ãoemensurac¸ão,comoindicadorasde processos biológicos normais, processos patogênicos ou derespostafarmacológicaaumaintervenc¸ãoterapêutica. Comotal,refletiriammudanc¸asemsistemasbiológicos rela-cionadas à exposic¸ão ou aos efeitos de xenobióticos, ou outrostiposdefatores,comoosrelacionadosadoenc¸as.

Osmarcadoresdeperoxidac¸ãolipídicasãoclassificados em primários (os hidroperóxidos lipídicos) e secundários, que derivam da ␤-ruptura dos hidroperóxidos lipídicos. As principais metodologias utilizadas para a avaliac¸ão da lipoperoxidac¸ãooxidativaemsistemasbiológicosmedema formac¸ãodeprodutosgeradosduranteasdiferentesfases deste processo. Portanto, é importante utilizar as várias

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Tabela3 Biomarcadoresdedanooxidativoemalgumasdoenc¸ashumanas

Doenc¸as BiomarcadoresdeDano

Câncer;doenc¸acardiovascular;aterosclerose MDA,razãoGSH/GSSG,NO2−Tyr,F2−isoprostano Doenc¸adeAlzheimer MDA,HNE,razãoGSH/GSSG,acrileína,

Doenc¸adeParkinson MDA,HNE,razãoGSH/GSSG,acrileína,isoprostano,proteínas carboniladas,níveldeferro

Diabetesmellitus MDA,razãoGSH/GSSG,proteínasS-glutationadas,F2 isoprostano,NO2−Tyr

Fonte:Vasconcelosetal.27

técnicasdisponíveis,poisasuaescolhadependerádo pro-pósitodoinvestigador,ouseja,dafasedoprocessodeLPO quesepretendaavaliarAtabela3exemplificaalguns bio-marcadoresparadoenc¸asselecionadas39.

Malondialdeido

Omalondialdeido(MDA)éumbiomarcador,produto secun-dário da peroxidac¸ão lipídica, derivado da ␤-ruptura de endociclizac¸ãodeácidosgordos polinsaturados,taiscomo ácidolinoléico,araquidônicoedocosahexaenóico20,40.Eleé

considerado,atualmente,umcandidatopotencialparaser escolhidocomoumbiomarcadorgeraldelesãooxidativaem plasma26,27.

O métodointroduzido porYagi (1976) temsido ampla-mente utilizado. O princípio deste método consiste na reac¸ãodoMDAcomoácidotiobarbitúrico(TBA),formando comoprodutoumcromógenodecorrosafluorescentecapaz deserdetectadoatravésdeleituraespectrofotométricae cuja absorc¸ão ocorre em ␭ de 532nm e fluorescênciaem 553nm37,39.

Apesar de sua simplicidade e facilidade de execuc¸ão, o teste do TBA não é específico para o malondialdeido, reagindo com uma ampla variedade de compostos como ac¸úcares,aminoácidos,proteína,aminase bilirrubina.Por este motivo é também denominadoteste das substâncias quereagemcomoácidotiobarbitúrico(Thiobarbituric Acid-ReactiveSubstances---TBARS)35,41.

O testedeTBARS,apesardesabidamenteinespecífico, aindaapresentaamplaaplicac¸ãodevido,especialmente,à suafacilidadedeexecuc¸ãoebaixocustoemcomparac¸ãoaos demaismétodos.Apossibilidadedereac¸ãodoTBAcom subs-tânciasintervenientestemcomoconsequênciasuperestimar aextensãodoprocessodeperoxidac¸ãolipídica,decorrente dadetecc¸ãonãosódomalondialdeido,mastambémde com-postos interferentes. Assim, umaadaptac¸ão relevante de taltécnicaconsisteemassociá-lacomaseparac¸ãodo com-postomalondialdeido-TBA(MDA-TBA),pormeiodetécnicas cromatográficas22,41,42.

Algunsestudosreferemousodométododeavaliac¸ãodo estresseoxidativopeloTBARSemobesos.NoHospital Uni-versitário daUniversidadeFederal de Sergipe, realizou-se estudoemindivíduosobesosem pré-operatóriodecirurgia bariátrica para quantificac¸ão da lipoperoxidac¸ão plasmá-tica utilizando o MDAcomo marcador (técnica de análise daformac¸ãodesubstânciasreativasaTBARS).Nesteestudo, foram analisados22 indivíduos deambos osgêneros, dis-tribuídosem grupoobesidadeecontrole. Comoresultado,

o nível médio de MDA foi estatisticamente superior no grupoobesidade(p=0,04),permitindo inferiraumento da produc¸ãodeespéciesreativasdeoxigênioemaiorestresse oxidativoemobesos6.

Sobreoefeitodadietarestritivaedaperdadepesona gerac¸ãodasERO,outroestudoconcluiuqueaconcentrac¸ão plasmáticadeTBARSdiminuiu87,9±5,8%nogrupoobesona quartasemana dedieta43.Em pesquisa experimentalcom

ratos Cani et al. observaram que os animais tratados com dieta hipercalórica apresentaram concentrac¸ão de TBARS significativamente mais elevada que o grupo controle44.

Detecc¸ãodo4-hidroxinonenal

O 4-hidroxi-2-nonenal (HNE), um aldeído insaturado, é o produtoquantitativamentemaisimportantedadegradac¸ão peroxidativadeácidosgraxosômega641.

Mais recentemente,a quantificac¸ão deHNE noplasma passouaserrealizadacompentafluorobenzil-hidroxilamina paraformaroderivadopentafluorobenziloxima,queé anali-sadoporcromatografiagasosaacopladaàespectrometriade massascomionizac¸ãoquímicanegativa(GC/NICI-MS)usando HNEdeuteradocomopadrãointerno.Nessemétodo,apesar dehaverumaumentosignificativonarecuperac¸ãodeHNE doplasma(60-80versus8%),suaconcentrac¸ãopermanece, ainda,maisbaixadoqueadeoutrosaldeídosmarcadoresde peroxidac¸ãolipídica,devido,provavelmente,àligac¸ãoaos grupossulfidrilaouaminadeproteínas42,45,sendomotivode

crítica.UmproblemaadicionaléqueoHNEpodesergerado durante as fases de armazenamento, extrac¸ão e análise, produzindoresultadoserroneamenteelevados5,12.

Detecc¸ãodosisoprostanos(8-epi-prostaglandina 2,8---epi-PGF2)

Outrométodo deavaliac¸ãodo estresseoxidativo baseado naoxidac¸ãolipídica,consistenaaferic¸ãodosisoprostanos, compostos derivados da ac¸ão de radicais livres sobre os ácidosgraxospolinsaturados35,46---49.Osisoprostanos

perten-cemàfamíliadoseicosanoides,deorigemnãoenzimática e são produzidos pela oxidac¸ão do ácido araquidônico. Inicialmente,sãoformadosnosfosfolipídiosdamembrana celulare depois liberados para os fluidos biológicos pela fosfolipase37. Ao contrário do que ocorre com os

hidro-peróxidos lipídicos (produtos primários da peroxidac¸ão lipídica), que se decompõem rapidamente nos fluidos e tecidoshumanos,F2-isoprostanossãoprodutossecundários

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da peroxidac¸ão lipídica quimicamente estáveis podendo, inclusive,serdosadosnaurina.Essaestabilidadeéarazão pela qual a sua quantificac¸ão desperta interesse, com o aparecimentodemuitosprotocolosparasuaanálise.Além disso, são produtos específicos da peroxidac¸ão lipídica, estando presentes em quantidades detectáveis em todos os fluidos biológicos e tecidos, sua formac¸ão aumenta drasticamente em modelos animais de dano oxidativo44.

Como MDA, ele é, também, considerado um candidato potencialparaserescolhidocomoumbiomarcadorgeralde danooxidativonoplasma.

Entre as técnicas empregadas para detecc¸ão de isoprostanos destacam-se os radioimunoensaios (radioim-munoeassays--- RIA),osimunoensaiosenzimáticos(Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay --- ELISA) e as técnicas cromatográficas (separac¸ão) associadas à espectrometria de massa (detecc¸ão) (GC-MS). A aplicac¸ão de técnicas imunológicas,naaferic¸ãode8-iso-PGF2␣temlimitada espe-cificidade,decorrente daspossíveisreac¸õescruzadascom outrosprostanoides. A GC-MS tem boa especificidade, no entanto,consisteemumatécnicaonerosae, consequente-mente,dedifícilexecuc¸ãoemestudospopulacionais20,33,47.

Assim,os métodos radiométricose imunológicos são mais utilizados37,50.

Aaferic¸ãodeisoprostanospodeserrealizadaemfluidos biológicos,soro e plasma sanguíneo e urina, sendoque a utilizac¸ãodeurinatemmaioraplicabilidade.

Hidrocarbonetos:etanoepentano

A quantificac¸ão de compostos voláteis constitui em outra técnica de aferic¸ão da oxidac¸ão lipídica. Entre tais com-postos destacam-se, alémdos isoprostanos e aldeídos, os hidrocarbonetos:etanoepentano.Estes2últimossão for-mados mediante peroxidac¸ão lipídica dos ácidos graxos polinsaturadosdasérieômega3e 6,respectivamente.Os hidrocarbonetossãoosmaisvoláteise dessaformasãoos maisfrequentementeutilizados35,51---53.

Aaferic¸ãobaseia-sena concentrac¸ão de hidrocarbone-tosexaladosnoar expirado.Existe umagrande variedade de técnicas para tal propósito, estas variam em relac¸ão à forma de coleta, armazenamento e processamento das amostras.Comodecorrência desta falta depadronizac¸ão, ocorrerelevantevariac¸ãoentreosresultadosprovenientes dediferentesestudos.Aanálisedasamostras,usualmente, sedápormeiodeGC.Apesardagrandevariedadede téc-nicas, aslimitac¸ões sãocomuns e convergem para o fato dacontaminac¸ãodasamostrascomapresenc¸adeetanoe pentanonoambiente52.

Sugere-se quea aferic¸ão doetano tenha maior viabili-dade em predizer a peroxidac¸ão lipídica, entre ascausas destaca-se o fato do etano ser metabolizado em menor extensãoqueopentano,sermenossolúvelemtecidos, exi-bir menor coeficiente de variac¸ão diária na sua taxa de exalac¸ãoe,ainda,sofrermenorinfluênciadefatores inter-venientesnasuataxadeexalac¸ão53.

Testedoalaranjadodexilenol(xilenol-orange)

Oshidroperóxidos são produtos primários da peroxidac¸ão dos AGPI55, daí a importância da sua medida, uma vez

que a maioria dos métodos avalia seus produtos de degradac¸ão.Umdosmétodosutilizadosparasedeterminar a concentrac¸ão dehidroperóxidos em amostrasbiológicas éaquelequeutilizaoxilenol-orange.Estemétodo baseia-se no princípio de que os hidroperóxidos oxidam ferro II a ferroIII, o qualreage como xilenol orange, produzindo umcromóforoque temabsorc¸ãomáximaem 560nm55.Os

resultadossãorelativamentereprodutíveiseométodopode serusadoparaa determinac¸ão dehidroperóxidosem fase aquosa e lipídica56. É um método simples,que não exige

equipamentossofisticados,poréméinespecífico,poispode sofrer interferências de diversas substâncias presentes no plasmasanguíneo.

Cromatografialíquidadealtaeficiência comdetecc¸ãoporquimiluminescência

O método de CLAE com detecc¸ão por quimiluminescên-cia tem sido bastante utilizado na mensurac¸ão específica de hidroperóxidos lipídicos54,56,57,45,58,59. Utilizando este

método é possível a quantificac¸ão de hidroperóxidos pre-sentesemamostrasbiológicas,seminterferênciasdeoutras biomoléculas.

Esse método tem demostrado alta sensibilidade, podendo-se detectar níveis abaixo de 10nmol/L, dependendodaqualidadedodetector.

Cromatografialíquidadealtaeficiênciaacoplada àespectrometriademassas

Ousodatécnicadecromatografialíquidaacopladaà espec-trometriademassas(CLAE-EM)paraaanálisedeamostras biológicas é recente, tendohavido importante avanc¸o na últimadécada.

Umadasvantagensmaisimportantesdestatécnicaé per-mitiraseparac¸ão,quantificac¸ãoeelucidac¸ãoestruturaldas substânciaspresentesnaamostra,demaneiracontínua,sem anecessidadedepurificac¸ãoouderivatizac¸ãoprévias, per-mitindoanálisemuitomaisrápidaeeficiente.Outroponto importanteéapossibilidadedeseanalisarsubstânciasnão voláteisoutermolábeis,oqueseriadifícilemoutras técni-cascomoacromatografiagasosaacopladaàespectrometria demassas60.

AtécnicadeCLAE-EMtemsidoutilizadaemdiversos tra-balhosnaanálisedederivadoslipídicoseseusprodutosde oxidac¸ão60---65 erepresentao que demaisavanc¸adoem

técnicasdedetecc¸ãoecaracterizac¸ãoqualitativae quanti-tativadebiomoléculasemmatrizesbiológicas.Alémdisso, osresultadosobtidosporestatécnicaapresentamelevadas especificidadeesensibilidade.

Dosagemdeácidoshidroxieicosatetranóicos

Os ácidos hidroxieicosatetranóicos são derivados da oxidac¸ão do ácido aracdônico e os ácidos hidroxiocta-decanóicos (HODE), resultantes da oxidac¸ão do ácido linoléico66.

Estescompostosjáforamencontradosaderidosàplaca ateroscleróticaecogita-sequesuapresenc¸aestáassociada aplacasinstáveisesujeitasàruptura67.

(7)

Apresenc¸adestescompostospodeserdeterminada,após aextrac¸ãodafrac¸ãolipídicadomaterialaseranalisado,por técnicasdecromatografialíquidadealtaeficiência(CLAE).

Conclusão

Aobesidadetemprevalênciamundialcrescenteeaanálise defatoresqueparticipamnafisiopatologiadas comorbida-des temelevada importância. Nesse sentido,o estudo do estresseoxidativo nos obesostem papel fundamental.Tal atitudepodebalizarmedidasfuturasparapreveniro surgi-mentodessasdoenc¸as,bemcomocolaborarnotratamento.

Conflito

de

interesses

Osautoresdeclaramnãohaverconflitodeinteresses.

Agradecimentos

Agradecemos ao Instituto de Tecnologia e Pesquisa (ITP) daUniversidade Tiradentes (UNIT)e ao Departamento de Nutric¸ãodaUniversidadeFederaldeSergipepeloapoiopara desenvolvimentodessalinhadepesquisaacercadaaferic¸ão ecomprovac¸ãodoselevadosníveisdeestresseoxidativona obesidade.

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