Preparación de Medios de Cultivo Para El Crecimiento De

(1)

DESARROLLO DE LA ESCHERICHIA COLI EN MEDIO LIQUIDO

OBJETIVO

::

Construir una curva de relación para la medida indirecta del crecimiento Construir una curva de relación para la medida indirecta del crecimiento diversas bacteria

diversas bacterias E. s E. colicoli

Inocular unos medios de cultivo liquido de la bacteria Escherichia coli Inocular unos medios de cultivo liquido de la bacteria Escherichia coli para observar su crecimiento en el tiempo

para observar su crecimiento en el tiempo

MARCO TEORICO

M

Meeddiioos s llííqquuiiddooss: : SSoon n lloos s qquue e sse e pprreesseennttaan n een n eesstte e eessttaaddoo,, denominándose por esta razón caldos. El medio líquido más utilizado es denominándose por esta razón caldos. El medio líquido más utilizado es el

el llallamadmado o calcaldo do nunutritritivtivo, o, cocompmpueuesto sto prprinincipcipalmalmenente te eetratracto cto dede levadura, tripteina de so!a caldo , cloruro de sodio ! a"ua destilada.

levadura, tripteina de so!a caldo , cloruro de sodio ! a"ua destilada.

Se utiliza #undamentalmente cuando se pretende la obtención de una Se utiliza #undamentalmente cuando se pretende la obtención de una suspensión bacteriana de una determinada concentración. Cuando se suspensión bacteriana de una determinada concentración. Cuando se a$ade una peque$a cantidad de c%lulas vivas a una disolución líquida a$ade una peque$a cantidad de c%lulas vivas a una disolución líquida que contiene nutrientes esenciales a p& ! temperatura adecuados, el que contiene nutrientes esenciales a p& ! temperatura adecuados, el cultivo crece.

cultivo crece.

El crecimiento tiene dos mani#estaciones di#erentes se"'n la naturaleza El crecimiento tiene dos mani#estaciones di#erentes se"'n la naturaleza de las c%lulas implicadas. (ara or"anismos unicelulares, que se dividen de las c%lulas implicadas. (ara or"anismos unicelulares, que se dividen cuando crecen, el aumento de biomasa va acompa$ado del aumento del cuando crecen, el aumento de biomasa va acompa$ado del aumento del n'

n'memerro o de de c%c%lululalas. s. ((or or tatantnto, o, el el prproboblelema ma se se plplanantetea a cocomo mo el el dede cr

crececimimieientnto o de de la la popoblblacacióión n )u)urarantnte e el el crcrececimimieientnto o de de ununa a c%c%lululala ocurren otros dos procesos asociados: captación de ciertos materiales ocurren otros dos procesos asociados: captación de ciertos materiales d

del el mmedediio o ! ! lilibbeerracacióión n dde e prproodduuctctoos s mmeetatabbóólilicocos s **nnalales es a a loloss alrededores.

alrededores.

+a velocidad de estos procesos varía mucho a lo lar"o del crecimiento +a velocidad de estos procesos varía mucho a lo lar"o del crecimiento celular, ! la compleidad de los modelos que proporcionen la descripción celular, ! la compleidad de los modelos que proporcionen la descripción cin%tica adecuada depende de la compleidad del cultivo ! del obetivo cin%tica adecuada depende de la compleidad del cultivo ! del obetivo con el que se plantee la cin%tica

con el que se plantee la cin%tica

-ase de latencia, en la que no se produce un aumento sustancial del -ase de latencia, en la que no se produce un aumento sustancial del n'mero de c%lulas ! en la que tiene lu"ar la adaptación al medio ! n'mero de c%lulas ! en la que tiene lu"ar la adaptación al medio ! condiciones de cultivo.  continuación se inicia la #ase de crecimiento condiciones de cultivo.  continuación se inicia la #ase de crecimiento e

eppoonenencnciaial, l, en en la la quque e el el crcrececimimieientnto o se se e#e#ecect't'a a a a la la vevelolocicidadadd e

espspececí*í*cca a coconnststaanntete. . En En eeststa a #a#ase se se se ppuueedde e coconnsisiddereraar r qquue e eell cr

creecicimmieiennto to eeststá á bbalalanancceeaadodo, , een n el el sesenntitiddo o dde e qquue e nno o eeiiststeenn limitaciones ! el comportamiento metabólico ! *sioló"ico de las c%lulas limitaciones ! el comportamiento metabólico ! *sioló"ico de las c%lulas es básicamente constante /a veces se de*ne como un comportamiento es básicamente constante /a veces se de*ne como un comportamiento

(2)

pseudoestacionario0 -inalmente se lle"a a una #ase de muerte celular, en la que decrece el n'mero de c%lulas: una vez que se a"otan las reservas de nutrientes, los microor"anismos metabolizan su propio material celular, sin que ha!a reposición, de #orma que tiene lu"ar la destrucción de las c%lulas /respiración endó"ena0. 1urbidimetría: +a turbidimetría mide la reducción de la transmisión de luz debido a partículas de una suspensión ! cuanti*ca la luz residual transmitida. Estudios teóricos ! eperimentales han mostrado que soluciones diluidas de di#erentes tipos de bacterias, independientemente del tama$o celular, tienen casi la misma absorbancia por unidad de concentración de peso seco. Esto quiere decir que, en soluciones diluidas, la absorbancia es directamente proporcional al peso seco, independientemente del tama$o celular del microor"anismo. Sin embar"o, se encuentran absorbancias mu! di#erentes por partícula o por 2-C /2nidad -ormadora de Colonia0 cuando los tama$os de las c%lulas bacterianas son di#erentes. (or esta razón, para estimar el n'mero de microor"anismos tota3les o el n'mero de microor"anismos viables de una suspensión bacteriana debe realizarse una 4curva de calibración4 con cada tipo de microor"anismo, sólo de esta #orma es posible relacionar bsorbancia /)ensidad 5ptica0 con el n'mero de microor"anismos totales o con 2-C.

FLUJOGRAMA DE PROCEDIMIENTO

6lanco

Sembrar una colonia

"itar periódicamente

2tilizar el blanco para

Medio líquido 78 ml "uardar a 9 C despu%s Medio liquido 78 ml Incubar a  Medir la absorbancia a =98 nm

(3)

Calibrar el instrumento

>uardar el cultivo bacteriano a 9C

CALCULO DE LA PREPARACIÓN DEL MEDIO DE CULTIVO

Etracto de levadura 7" ?888ml

@ 78ml

@A 8,B7"

Cloruro de sodio

1ripteina so!a caldo

;7" ?888ml @ 78ml @A ?,<7" ?8" ?888ml @ 78ml @A 8,7" epetir el proceso ; +a muestra se utiliza en la si"uiente práctica

(4)

REGISTRE

EN

LA

TABLA

DE

MEDICIÓN

EN

EL

ESPECTROFOTÓMETRO VERSUS ABSORBANCIA

Determinacine!

Tiem" #ra!

a$!r%ancia

? ? 8,?=D B ; ?,9=; ; ?7 ?,998 9 ? ?,=?< ? B ; 9 7 = < D  ?8 ?? ?B ?; ?9 ?7 ?= ?< 8 8.B 8.9 8.= 8.D ? ?.B ?.9 ?.= ?.D a$!r%ancia

OBSERVACIONES

ealizar la practica con cuidados ! mediciones correctas para la preparación de cultivo.

1ener en cuenta el remover la medio de cultivo cada 8 min para que si"a el crecimiento bacteriano.

ealizar de manera cuidadosa las lectura de en el espectro#otómetro ! evitar la contaminación del medio.

(5)

Se inocularon correctamente unos medios de cultivo líquido con la bacteria Escherichia Coli para un posterior análisis de absorbancia en el espectro#otómetro, proceso que se repitió cada 8 minutos.

BIBLIOGRAFIA

http:FFGGG.u"r.esFHclFmediosB8deB8cultivo.pd# https:FFlibroslaboratorio.*les.Gordpress.comFB8?BF8Fmedios3de3cultivo3 en3un3laboratorio3de3microbiolo"c;ada.pd# https:FFprezi.comFssnzrtvat<rFdeterminacion3de3la3curva3de3 crecimiento3de3la3bacteria3escF

(6)

U&A&G&R&

M&

Materia:

BIOTECNOLOGIA

1ema:

1rabao (ráctico )e

+aboratorio

Jombre:

@imena Sanabria 1orrez

)ocente:

)r. )ante -lores

>rupo:

?

(7)