Determinación y cuantificación de gentamicina sulfato en multiderm crema del laboratorio farmindustria s a por potencia antibiótica

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(1)Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUIMICA. Y. BI O. Q. UI M. IC A. ESCUELA ACADEMICO PROFESIONAL DE FARMACIA Y BIOQUIMICA. M. AC I. A. “DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACIÓN DE GENTAMICINA SULFATO EN MULTIDERM CREMA DEL LABORATORIO FARMINDUSTRIA S.A POR POTENCIA ANTIBIÓTICA “. FA R. INFORME DE PRÁCTICAS PRE-PROFESIONALES. DE. PARA OPTAR EL TÍTULO PROFESIONAL DE. TE. CA. QUÍMICO FARMACÉUTICO. Br. GARCIA CHUQUI, JUAN CARLOS. BL. IO. AUTOR:. Mg. CRUZADO RAZCO, LIZARDO.. BI. ASESOR:. TRUJILLO-PERU 2013. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(2) Q. UI M. IC A. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. BI O. A Dios;. BI. BL. IO. TE. CA. DE. FA R. M. AC I. A. Y. Porque somos ciegos en el camino de la vida, él guía nuestros pasos hacia el camino de la verdad, porque sin él nada sería posible. Y en su infinita sabiduría nos da lecciones difíciles de aprender comprendiéndolas en el camino de nuestras vidas.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(3) Q. UI M. IC A. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. BI O. A mi papá Pedro José y mi mamá Segunda,. Y. con amor y cariño, por ser mis primeros mentores, por ser mi apoyo moral, por su amor, cariño, comprensión y apoyo sin condiciones ni medida, porque creyeron en mí, porque en gran parte, gracias a ellos veo alcanzado mi meta.. Juan Carlos. BI. BL. IO. TE. CA. DE. FA R. M. AC I. A. Los amo!!!. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(4) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. AGRADECIMIENTO. UI M. IC A. Una vez finalizado mi informe de prácticas pre-profesionales, tengo la obligación de enfrentarme al capítulo más complicado de este trabajo, que no es otro que el de los agradecimientos. He de sintetizar en unas breves líneas mi sentida y sincera gratitud hacia las personas que me han ayudado. Sin ellas, hubiese sido del todo imposible afrontar con éxito la elaboración de este trabajo de investigación, en la que tanta ilusión he puesto.. Y. BI O. Q. De forma muy especial, quiero dejar constancia de mi agradecimiento a la Dra. Noemí Sarmiento Herrera, a la que nunca podré corresponder como merecería tantas oportunidades de conocimiento y sabiduría empleados en mi formación. Por si no fuera suficiente la deuda de gratitud que con ella tengo contraída, me ha distinguido al brindarme las facilidades para este trabajo, y me honra cada día con su personal trato y afecto. Gracias, de corazón, por ser una verdadera maestra.. TE. CA. DE. FA R. M. AC I. A. Mi gratitud, para la Dra. Rosario Mimbela Mocarro, por haber trabajado conmigo todo el tiempo necesario con una entrega y dedicación absoluta, además de su inestimable amistad, y porque supo trasmitirme su ilusión para despertar en mí el "gusanito" de la investigación. Su apoyo y confianza en mi trabajo y su capacidad para guiar mis ideas ha sido un aporte invaluable, no solamente en el desarrollo de este trabajo, sino también en mi formación como investigador.. BI. BL. IO. A mis compañeros de la sección de Microbiología del área de control de calidad del Laboratorio Farmindustria S.A, técnicos y químicos, por su inestimable ayuda incondicional, para la elaboración de este trabajo.. Agradecimiento al Mg. Lizardo Cruzado Razco, por aceptar realizar este trabajo de investigación bajo su dirección. Su ideas propias, siempre enmarcadas en su orientación y rigurosidad han sido clave del buen trabajo que hemos realizado juntos, el cual no se puede concebir sin su siempre oportuna participación.. Por último, en el apartado personal, mi gratitud y todo mi amor a Pedro José Garcia Blas y Segunda Chuqui Diestra, mis padres, compañeros y amigos, por su inestimable apoyo y comprensión para sobrellevar el abandono al que han estado sometidos durante todo un año que he dedicado a éste trabajo. También gracias, una y otra vez a mis hermanos y sobrinos, quienes innumerables veces me llamaban para expresarme su apoyo desinteresado, motivo por el que. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(5) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. BI. BL. IO. TE. CA. DE. FA R. M. AC I. A. Y. BI O. Q. UI M. IC A. durante tantas horas no he pensado en ninguna otra cosa más que en el superar mis miedos, en enfrentar los retos y en seguir conservando la esencia de aquel joven que en el 2007 decidió estudiar y convertirse en un gran Químico Farmacéutico.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(6) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. PRESENTACIÓN. IC A. Señores Miembros del Jurado: En cumplimiento con las disposiciones vigentes emanadas del reglamento de Grados. UI M. y Títulos de la Facultad de Farmacia y Bioquímica de la Universidad Nacional de. Trujillo, sometemos a vuestra consideración y elevado criterio, el presente informe de. Q. Prácticas Pre-Profesionales: “Determinación y Cuantificación de Gentamicina. BI O. Sulfato en Multiderm Crema del Laboratorio Farmindustria S.A por Potencia Antibiótica “. Y. Esperando que el jurado se sirva a calificar este trabajo según su criterio establecido, a. FA R. M. presente trabajo de investigación.. AC I. A. pesar de la existencia de alguna deficiencia encontrada durante el desarrollo del. GARCIA CHUQUI, JUAN CARLOS Autor. BI. BL. IO. TE. CA. DE. Trujillo, Mayo del 2013. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(7) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. INDICE. IC A. RESUMEN ........................................................................................................................ i. UI M. ABSTRACT...................................................................................................................... ii. INTRODUCCIÓN .....................................................................................................1. II.. MATERIAL Y MÉTODO .........................................................................................8. BI O. Q. I.. Y. 2.1.MATERIAL ........................................................................................................8. AC I. A. 2.2.MÉTODO .........................................................................................................10. FA R. M. III. RESULTADOS .......................................................................................................18. IV. DISCUSIÓN............................................................................................................20. DE. V. RECOMENDACIONES ..........................................................................................24. TE. CA. VI. CONCLUSIONES ...................................................................................................24. IO. VII. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS.....................................................................25. BI. BL. ANEXOS .........................................................................................................................27. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(8) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. RESUMEN. IC A. En el presente trabajo se determinó experimentalmente la Potencia Antibiótica de la Gentamicina Sulfato en el Multiderm crema del Laboratorio Farmindustria S.A mediante el método placa cilindro de. UI M. “Valoración Microbiológica”, descrita en el USP 35.. La metodología empleada fue el método microbiológico placa-cilindro basado en los lineamientos dados. Q. en la Farmacopea de los Estados Unidos (USP). Se utilizaron el lote 10422212 de Multiderm crema, un. BI O. estándar secundario de Gentamicina Sulfato y el microorganismo Staphylococcus epidermidis ATCC 12228.. Con este método microbiológico se encontró 111,74 mg de Gentamicina Sulfato; lo que condujo a. Y. resultados satisfactorios y concordantes con las especificaciones del contenido de Gentamicina Sulfato. A. del lote evaluado; según la USP 35.. AC I. Se determinó las condiciones de ensayo apropiadas para este método, siendo las principales: la utilización. M. del microorganismo Staphylococcus epidermidis ATCC 12228 y del medio antibiótico Nº 11; la. FA R. proporción de inoculación en el medio de 0,03 mL por cada 100 mL de agar; la dosis media del estándar de 1,00 μg; tiempo de difusión del antibiótico en el agar inoculado de 8 horas; tiempo de incubación de 18 horas y temperatura de incubación entre 36,7ºC.. DE. Se demostró mediante el diseño experimental, con la evaluación estadística de los resultados experimentales y teniendo como base los criterios de aceptación permitidos, que el método analítico es. CA. especifico, selectivo, lineal (r2 = 0,9989), preciso (CV <5%) en el intervalo de concentraciones estudiadas. Finalmente, con los resultados obtenidos se pudo concluir que el método microbiológico placa-cilindro. TE. para la determinación de la potencia antibiótica de Gentamicina Sulfato en Multiderm crema del. IO. Laboratorio Farmindustria S.A es confiable para demostrar la efectividad antibiótica; de acuerdo a los. BL. requerimientos de la calidad establecidos por la USP 35.. BI. Palabras claves: Potencia Antibiótica, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Gentamicina Sulfato, Multiderm crema, Valoración Microbiológica, estándar secundario.. i Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(9) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ABSTRACT In the present work I determine experimentally the Antibiotic Power of the Gentamicina Sulfato in the. IC A. Multiderm cream of the Laboratory Farmindustria S.A by means of the method plate cylinder of " Microbiological Valuation", described in the USP 35. The used methodology was the microbiological method. UI M. plate - cylinder based on the limits given in the Pharmacopoeia of the United States (USP). 10422212 of. Multiderm were in use the lot it cremates, a secondary standard of Gentamicina Sulfato and the. Q. microorganism Staphylococcus epidermidis ATCC 12228. With this microbiological method one found. BI O. 111.74 mg of Gentamicina Sulfato, which he led to satisfactory and concordant results with the specifications of Gentamicina Sulfato's content of the evaluated lot; according to the USP 35.. One determined the test conditions adapted for this method, being the principal ones: the utilization of the. Y. microorganism Staphylococcus epidermidis ATCC 12228 and of the antibiotic way N º 11; the proportion of. A. inoculation in the way of 0,03 mL for every 100 mL of agar; the dose happens of the standard of 1,00 µg;. M. temperature of incubation between 36,7ºC.. AC I. time of diffusion of the antibiotic in the agar inoculated of 8 hours; time of incubation of 18 hours and. FA R. It was demonstrated by means of the experimental design, with the statistical evaluation of the experimental results and taking the criteria of acceptance as a base allowed, that the analytical method is specific, selective, linear (r2 = 0,9989), I add (CV <5 %) in the interval of studied concentrations. Finally, with the obtained. DE. results it was possible to conclude that the microbiological method plate - cylinder for the determination of the antibiotic power of Gentamicina Sulfato in Multiderm cremates of the Laboratory Farmindustria S.A it is. IO. TE. the USP 35.. CA. reliable to demonstrate the antibiotic efficiency; in agreement to the requirements of the quality established by. BL. Palabras claves: Potencia Antibiótica, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Gentamicina Sulfato,. BI. Multiderm crema, Valoración Microbiológica, estándar secundario.. ii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(10) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. I. INTRODUCCIÓN La industria farmacéutica, como segmento vital del sistema de asistencia de la salud, conduce la investigación, fabricación y comercialización de productos farmacéuticos y biológicos, así como. IC A. dispositivos médicos usados para el tratamiento agudo o crónico y el diagnóstico de la. UI M. enfermedad 1.. Los medicamentos son compuestos esenciales para el ser humano y sus organizaciones sociales.. Q. Se utilizan principalmente para diagnosticar, prevenir, curar o aliviar enfermedades; y en general. BI O. para proteger y preservar la salud. A pesar de que han sido considerados como un "bien social” su uso no está exento de riesgos, entre ellos los relacionados con la dosificación, el. Y. incumplimiento de condiciones durante el diseño, procesamiento, almacenamiento, distribución,. AC I. A. prescripción, dispensación y modalidades de conservación y uso por los pacientes 2, 3.. La fabricación de productos farmacéuticos, así como la de otros productos relacionados con el. M. campo de la salud, es indispensable realizar una inspección completa al proceso de la producción. DE. son de buena calidad 4.. FA R. aplicando normas establecidas a fin de garantizar al consumidor que los productos que recibe. Por lo anterior, para todos los medicamentos, especialmente los antibióticos, es indispensable. CA. garantizar su eficacia y calidad, pues de lo contrario se pone en riesgo la salud del paciente. En este sentido, se debe evaluar el comportamiento de estas sustancias tanto in vitro como in vivo,. TE. para así certificar la idoneidad de los productos empleados para las terapias. Por eso, a pesar de. IO. que la industria farmacéutica es la que ha desarrollado una de las mayores experiencias en lo. BL. relacionado al aseguramiento y control de calidad, en la actualidad, dichas organizaciones. BI. necesitan establecer sistemas cada vez más eficientes para ser competitivas y de esta manera satisfacer las necesidades de los clientes y de la propia empresa, además de culminar con el proceso de comercialización de los productos 5, 6.. En la industria farmacéutica se requiere de una serie de pruebas que aseguren la calidad de los componentes de un determinado medicamento, como por ejemplo, los ensayos de estabilidad,. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(11) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. que se definen como estudios cuyos resultados sustentan la proposición de aprobación, la comprobación y/o la modificación del periodo de validez o de las condiciones de almacenamiento rotuladas de un producto farmacéutico. Otra prueba importante es la. IC A. determinación de la potencia o actividad, conceptualizada como el contenido de principio activo o fármaco presente en un producto farmacéutico o en una unidad de dosificación. Ambos. UI M. parámetros son fundamentales para garantizar a la empresa productora y a los clientes el. cumplimiento de ciertas especificaciones para mantener un alto nivel de efectividad y eficiencia. Q. en el producto. De modo que, éstos se convierten en dos de los ensayos más importantes durante. BI O. el control de calidad de los mismos, pues permiten conocer su rango de acción y las diferentes dosis necesarias, además de la duración y permanencia de éstas con respecto al tiempo y las. Y. condiciones de almacenamiento 7.. AC I. A. Los adelantos recientes en el descubrimiento de drogas, principalmente en el campo de la biotecnología y en los controles requeridos sobre los procesos de fabricación, están planteando. M. nuevos desafíos al control de calidad y a los sistemas que operan internamente en la industria y. FA R. que deben ajustarse a las normas establecidas 1.. La garantía de calidad y el control de calidad desarrollan y siguen procedimientos operativos. DE. internos convencionales encaminados a asegurar la calidad, la inocuidad, la pureza y la eficacia. CA. de la provisión de drogas 1.. TE. El control de la calidad es parte de las Buenas Prácticas de Manufactura (BPM) y comprende el. IO. muestreo, especificaciones y ensayos como también a los procedimientos de organización, documentación y autorización que aseguren que los ensayos necesarios y pertinentes realmente. BL. se efectúen, y que no se permita liberación de los materiales, ni se autorice la venta o suministro. BI. de los productos, hasta que su calidad haya sido aprobada como satisfactoria, el control de la calidad no se limita a las operaciones de laboratorio, sino que debe estar presente en todas las 4. decisiones concernientes a la calidad del producto .. 2 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(12) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. El control de calidad dentro de una organización tiene varias funciones principales: pruebas analíticas de laboratorio de los productos, muestreo, inspección, y pruebas de la materia prima entrante, componentes del empaque, y el prospecto (inspección física del producto y de las. IC A. operaciones intermedias criticas) y control del producto a lo largo de su distribución. Deben de existir especificaciones detalladas y métodos de prueba convalidados con los que se evalúen los. UI M. productos y la materia prima 1.. Q. Otro concepto a considerar, cuando se aplican las BPM en la industria farmacéutica es el de la. BI O. Validación de Procesos, definida por la OMS como el acto documentado para probar que los procedimientos, procesos, equipos, materiales, o sistemas aplicados producen efectivamente los. Y. resultados esperados. Las BPM también se encargan de prevenir las contaminaciones cruzadas, así como las confusiones que puedan producirse con algunos ingredientes o durante el etiquetado 2. AC I. A. .. M. La validación de un procedimiento analítico es el proceso que establece, mediante estudios en. FA R. laboratorio que las características de desempeño del procedimiento cumplen los requisitos para las aplicaciones analíticas previstas. El objetivo de la validación no es comparar un método con otro ya existente, sino conocer mejor sus características. Los estudios de validación constituyen. DE. una parte esencial de las BPM, deben efectuarse conforme a protocolos definidos de antemano. Debe prepararse y archivarse un reporte escrito que resuma los resultados y las conclusiones. CA. registrados. Deben establecerse procesos y procedimientos sobre la base de un estudio de. TE. validación. Los cuales se sometan periódicamente a una revalidación para asegurar que con ellos se puedan seguir obteniendo los resultados deseados. Se debe prestar especial atención a la. BL. IO. validación de los procedimientos de proceso, limpieza y de los métodos analíticos 4,8.. BI. La investigación de los últimos tiempos está apoyada y facilitada por los métodos instrumentales y de análisis; los cuales entre sus diversas ventajas, incluyen el hecho de requerir cantidades de muestra cada vez más reducidas, así como también la rapidez con que se realizan los procedimientos de cálculos mediante computadoras. 9. 3 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(13) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. En la Industria Farmacéutica, los laboratorios de control de calidad junto con las BPM y los procesos de validación constituyen las "piedras angulares" del sistema de aseguramiento de la calidad, eficacia e inocuidad. Las pruebas analíticas físicoquímicas que los laboratorios emplean. IC A. para demostrar la pureza, potencia, identidad, desempeño, estabilidad y otras características, son muy valiosas. Las técnicas microbiológicas para comprobar la ausencia de contaminaciones, con. UI M. gérmenes de alteración o patógenos, en productos estériles o no estériles, deben reunir, al igual. Q. que las físicoquímicas, una serie de características para que sean confiables 10.. BI O. Para la valoración de antimicrobianos se tienen metodologías referenciadas por los organismos de control y vigilancia; algunas se evalúan con técnicas instrumentales, o bien, mediante bioensayos. Estos últimos se refieren a ensayos que requieren seres vivos para la determinación. AC I. A. Y. de una característica de calidad en los medicamentos 11.. Las valoraciones microbiológicas forman parte integral de la evaluación de calidad requerida. M. para la fabricación y comercialización de muchos productos biológicos y de algunos. FA R. medicamentos o biológicos. Debido a los múltiples factores operativos y biológicos que surgen de su fundamento biológico, por lo general presentan una mayor variabilidad que las pruebas. DE. químicas 12.. En condiciones adecuadas, la actividad (potencia) de los antibióticos puede demostrarse por su. CA. efecto inhibidor obre los microorganismos. En la evaluación de la potencia de las sustancias. TE. antibióticas el efecto medido es la inhibición del crecimiento de una cepa apropiada de microorganismos, o sea, la prevención de la multiplicación de los microorganismos de prueba. Se. IO. utilizan dos técnicas generales: la valoración en cilindro- placa (o en placa) y la valoración. BI. BL. turbidimétrico (o en tubo) 12.. El ensayo de la placa-cilindro para medir la potencia del antibiótico se basa en la medición del diámetro de zonas de inhibición de crecimiento bacteriano que rodea a cilindros que contienen distintas diluciones del compuesto de prueba, las cuales se colocan sobre la superficie de un medio nutritivo sólido inoculado previamente con un cultivo de un microorganismo adecuado. La. 4 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(14) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. inhibición producida por el compuesto de ensayo se compara con la producida por concentraciones conocidas de un estándar de referencia 13.. IC A. El ensayo turbidimétrico de potencia antibiótica se basa en la inhibición del crecimiento microbiano indica por la medición de la turbidez (transmitancia) de suspensiones de un microorganismo. UI M. apropiado en un medio líquido al cual se le han agregado cantidades graduadas del compuesto a ensayar. Los cambios de transmitancia producidos por el compuesto de la prueba se comparan con. BI O. Q. los producidos por concentraciones conocidas del material de referencia 13.. Bajo las condiciones adecuadas, la actividad (potencia) de los antibióticos puede demostrarse por su. Y. efecto inhibidor sobre los microorganismos. La reducción en la actividad antimicrobiana también revela cambios sutiles no comparables mediante métodos químicos. En consecuencia las. AC I. A. valoraciones microbiológicas o biológicas siguen siendo, por lo general, el estándar para disipar dudas en cuanto a la posible pérdida de actividad 12.. M. Para dar pie al diseño y evaluación de la valoración de potencia antibiótica de la gentamicina, se. FA R. utilizó el método placa-cilindro, el cual fue sustentado en referencias bibliográficas y los datos. DE. obtenidos.. FARMINDUSTRIA S.A, fabrica y comercializa productos farmacéuticos sólidos no. CA. penicilínicos, líquidos y semisólidos; posee una línea de más de cien productos en el mercado para la sanidad humana. Dentro de estos productos se encuentra el Multiderm crema, antibiótico. IO. TE. cuyo principio activo es la Gentamicina Sulfato (aminoglucósido).. BL. Los aminoglucósidos poseen un espectro antimicrobiano de acción activa frente a bacilos. BI. gramnegativos no anaerobios. Entre las bacterias grampositivas, muchos estafilococos son sensibles in vitro, pero su uso clínico debe restringirse a una combinación con un β-lactámico. La gentamicina fue el primero de los aminoglucósidos modernos y presenta una amplia actividad contra muchos bacilos gramnegativos; la resistencia ha aumentado de manera considerable en especial entre las cepas intrahospitalarias 14.. 5 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(15) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Los aminoglucósidos representan un grupo importante de antibióticos utilizados tanto de forma tópica como sistemática en el tratamiento de infecciones producidas por bacilos gramnegativos. Los aminoglucósidos ejercen sus efectos bactericidas por la unión a la subunidad ribosómica 80S. IC A. e interfieren con la síntesis proteica. El sulfato de gentamicina deriva de un producto de fermentación de Micromonospora purpurea.. UI M. Se encuentra disponible como crema o pomada tópica al 0,1 %. Es utilizada por algunos cirujanos dermatológicos para las operaciones en las orejas, sobre todo en pacientes diabéticos u. Q. otros pacientes inmunocomprometidos, con el fin de proveer profilaxis contra la otitis externa. BI O. maligna debido a P.aeruginosa. La fórmula oftálmica es útil para el cuidado de las heridas quirúrgicas en el área periorbitaria 15.. Y. La visión de Farmindustria S.A es brindar valor y el mejor servicio a sus clientes externos e. A. internos, trabajando en un ambiente confianza y crecimiento personal. Para alcanzar el propósito. AC I. de la misión, la validación de cada uno de los métodos analíticos (como por ejemplo la valoración microbiológica de gentamicina sulfato) aplicados en un laboratorio especifico, podrá. M. demostrar con un alto grado de confianza, por medio de evidencia documentada que el proceso. FA R. produciría de forma consistente y permanente productos que poseen la características de calidad predefinidas cumpliendo y generando valor al cliente. Con métodos de análisis validados se. DE. alcanzan las metas de calidad que se haya trazado como parte de los procesos de mejoramiento continuo del sistema de calidad, formando una empresa cada vez más líder en la industria. CA. farmacéutica del país.. TE. Farmindustria S.A, fabrica y comercializa productos farmacéuticos, dentro de estos productos. IO. encontramos antibióticos (Multiderm que posee como principio activo Gentamicina sulfato) a los. BL. cuales se les debe garantizar sus efectividad y calidad para lo cual son destinados. La efectividad. BI. de estos productos antimicrobianos, se evalúa para determinar la capacidad de los mismos de otorgar la protección necesaria o su efecto inhibidor contra cualquier tipo de infección, viral o bacteriana. Para ello se realiza la valoraciones microbiológica de antibióticos que nos permite cuantificar la concentración y la potencia de un principio activo en el fármaco para obtener una medida del efecto de este comparado con la misma dosis de un estándar y de esta forma salir al mercado con las características predeterminadas.. 6 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(16) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. En el control de calidad de antibiótico se requiere del análisis específico por medio de la valoración microbiología del antibiótico, que sometido a un proceso de validación garantice de forma consistente y permanente la confiabilidad y validez de los datos obtenidos y poder así. IC A. juzgar de la seguridad(calidad) del producto para su comercialización. Al realizar la valoración microbiológica del Multiderm crema se crea evidencia documentada de. UI M. un alto grado de confianza, que el procedimiento descrito suministra una serie de direcciones. precisas y definidas del método analítico que deben seguirse al realizar y efectuarse en el. Q. laboratorio para garantizar y cumplir los requerimiento de la aplicación analítica propuesta. Por. BI O. lo que se planteó el siguiente problema:. ¿Qué cantidad de principio activo Gentamicina Sulfato se identificó en el Multiderm crema. Y. del Laboratorio Farmindustria S.A por Potencia Antibiótica?. AC I. A. Los objetivos planteados fueron:. Determinar la Potencia Antibiótica de Gentamicina Sulfato en el Multiderm crema del. FA R. 1.. M. Objetivo General:. Laboratorio Farmindustria S.A.. Determinar la concentración de Gentamicina Sulfato mediante el método de Potencia. DE. 2.. CA. Antibiótica en el Multiderm crema del Laboratorio Farmindustria S.A.. TE. Objetivos específicos:. Determinar si la concentración de Gentamicina Sulfato en el Multiderm crema del. IO. 1.. Laboratorio Farmindustria S.A, corresponden a las establecidas en la USP 35.. BI. BL. 2.. Determinar si el método microbiológico placa-cilindro empleado para estimar la Potencia Antibiótica de Gentamicina Sulfato en el Multiderm crema del Laboratorio Farmindustria S.A es confiable y preciso.. 3.. Determinar si el microorganismo Staphylococcus epidermidis ATCC 12228 es sensible al antibiótico Gentamicina Sulfato en medio de cultivo N° 11 en la condiciones propuestas .. 7 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(17) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. II. MATERIAL Y MÉTODO 2.1. MATERIAL. IC A. 2.1.1. Material de Laboratorio:. Frascos de 100 mL, 250 mL, 1000 mL y 200 mL. Pyrex® Clase A.. . Frascos de 500 mL. Pyrex® Clase A.. . Fiolas de 10 mL, 50 mL y 100 mL. Kimax® Clase A.. . Micropipetas (10 -100 µL). Transferpette® S.. . Pipetas graduadas de 5mL, 10 mL y 25 mL, estériles. Brand® - Clase A.. . Placas petri estériles de 20 x 90 mm aproximadamente.. . Placa Petri de vidrio (20x100 mm). Pyrex® USA.. . Cilindros de acero inoxidable estériles diámetro interno 6mm, diámetro. AC I. A. Y. BI O. Q. UI M. . externo 8 mm y altura 10 mm con una tolerancia de + 0,1 mm. Perlas de vidrio.. . Frascos Roux.. . Tubos.. . Tips estériles.. . Vernier calibrado (0-150 mm) Digital. Mitutoyo.. . Propipeta. Seropet Kartell.. CA. DE. FA R. M. . BI. BL. IO. TE. 2.1.2. Reactivos, soluciones y Medios de cultivo: a. Reactivos: . Cloroformo.. . Hidróxido de sodio.. . Ácido clorhídrico.. . Ácido fosfórico.. . Hidróxido de potasio.. . Fosfato monobásico de potasio.. . Fosfato dibásico de sodio dihidro.. 8 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(18) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. . Cloruro de sodio.. Solución salina 0,9 % estéril.. . Solución amortiguadora de fosfato N° 3 (Según USP 35).. . Solución de Hidróxido de sodio 1 N.. . Solución de Ácido clorhídrico 1 N.. . Solución de Ácido fosfórico 18 N.. . Solución de Hidróxido de potasio 10 N.. . Solución Buffer pH-4.. . Solución Buffer pH-7.. . Solución Buffer pH-10.. c. Medios de cultivo:. AC I. A. Y. BI O. Q. UI M. . IC A. b. Soluciones:. Agar antibiótico N° 1. Merck®. . Agar antibiótico N° 11.DifcoTM. FA R. M. . d. Equipos:. Baño María. Memmert. . Cabina de Bioseguridad. Esco®. . Incubadora programada entre 32°C-35°C. Presicion. . Incubadora programada entre 36 °C – 37,5 °C. Memmert. . Autoclave a vapor. Amsco. . Autoclave eléctrica. Autester.. . Potenciómetro. Methrom 827.. BI. BL. IO. TE. CA. DE. . 9 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(19) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.2. MÉTODO 12. 2.2.1. Preparación de Medios de Cultivo y Soluciones de Trabajo.. IC A. a. Medios de Cultivo. UI M. Para la preparación de los medios requeridos para la siembra y crecimiento de un microorganismo se siguieron las instrucciones dadas en el Anexo Nº 01.. Q. Podrán utilizarse ligeras modificaciones de los ingredientes individuales, o. BI O. medios deshidratados reconstituidos, siempre y cuando los medios resultantes posean las mismas propiedades de promoción de crecimiento o superiores y. Y. produzcan una curva de respuesta estándar similar.. A. Se disolvió los ingredientes en agua para hacer 1 L y se ajustó con las. AC I. soluciones de Hidróxido de sodio 1N o Ácido clorhídrico 1N, según sea necesario, para obtener el pH especificado después de la esterilización con. FA R. M. vapor.. b. Soluciones amortiguadoras de fosfato y otras soluciones. DE. La preparación de soluciones reguladoras de pH se hizo de acuerdo como está indicado en el Anexo Nº 1. Se preparó la solución amortiguadoras Fosfato Nº 3. CA. (0,1 M; pH=8) y la solución salina 0,9 % estéril; las cuales fueron esterilizadas posteriormente a su preparación y ajuste, por calor húmedo. Se midió el pH. BI. BL. IO. TE. después de la esterilización.. 2.2.2. Estandarización del Método. Se llevó a cabo en un ambiente limpio, asegurando que la limpieza de los equipos se realice antes y después de la prueba. El material de vidrio utilizado en la prueba estuvo esterilizado por método de calor a vapor.. 10 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(20) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. La temperatura fue controlada durante la siembra del microorganismo y preparación del inóculo; así como en la incubación de las placas.. IC A. 2.2.3. Estándar de referencia. La potencia de los antibióticos en el estudio se estableció en “Unidades” o µg de. UI M. actividad. La “Unidad” de actividad de Gentamicina sulfato que se empleó es la. establecida y definida según el Maestro Federal de los Estados Unidos designado. Q. para este antibiótico. De esta forma para el desarrollo del estudio se empleo un. BI O. estándar secundario obtenido a partir de un Estándar de Referencia USP de Gentamicina Sulfato, de Protocolo: 11100185 y de Potencia 594.73 µg/mg.. Y. 2.2.4. Muestra de estudio.. A. La muestra que se utilizó en el análisis fue el Multiderm crema al 0,09 - 0,135 g. AC I. %, con principio activo Gentamicina Sulfato, de Lote 10422212 y Potencia USP. FA R. ANEXO 2.. M. asignada 90 -135 % (indicada en la hoja de inspección del producto terminado). La planificación y la ejecución de las valoración microbiológica del antibiótico muestra (Multiderm crema) se realizó según lo establecido en la USP con. DE. respecto a las especificaciones para Gentamicina Sulfato descritos en la técnica de Valoraciones Microbiológicas de Antibióticos y en las especificaciones. CA. descritas para la realización de la Validación de los Procedimientos. BI. BL. IO. TE. Farmacopeicos. (USP35, Antibióticos-Valoraciones Microbiológicas (81) pag. 78 y Validación de Procedimientos Farmacopeicos (1033) pag. 5719).. Los análisis estadísticos para la Valoración Microbiológica se realizaron utilizando el Software (Hoja de cálculo) “Valoración Microbiológica de Antibióticos, Método de cilindro en placa. Esta Hoja de cálculo fue validada para proporcionar cálculos en la Valoración Microbiológica de Antibióticos por el Método de cilindro e placa, demostrando reproducibilidad de resultados frente a cálculos hechos con una calculadora de mano. Anexo N° 03. 11 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(21) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.2.5. Preparación y estandarización de la suspensión del microorganismo de ensayo. Basados en la técnica de valoraciones microbiológicas descrita en la USP 35, se. de. prueba. para. el. antibiótico. Gentamicina. Sulfato:. UI M. Microorganismo. IC A. determinó:. Staphylococcus epidermidis ATCC 12228.. BI O. Q. Medio de cultivo (Agar) a emplear para los repiques: Agar antibiótico N°1. Método de valoración: Difusión en placa.. Y. 2.2.6. Cultivo bacteriano.. A. La cepa de Staphylococcus epidermidis liofilizada se obtuvo de las colecciones. AC I. estandarizadas de la American Type Culture Collection (ATCC). Se reconstituyó el vial liofilizado y a partir de este cultivo de origen se sembró por agotamiento. M. en placas con agar nutritivo (AN) (Anexo N° 01) y en caldo nutritivo (Anexo N°. horas.. FA R. 01) para su recuperación, los medios se incubaron de 32 a 35 °C durante 24. DE. A partir de los aislamientos de cultivo primerio se realizó su identificación a través de métodos microscópicos mediante tinción Gram y macroscópicos. CA. mediante. observación. de. colonias.. Para. mantener. la. viabilidad. del. BI. BL. IO. TE. microorganismo durante la validación a partir del cultivo se realizaron subcultivos en agar nutritivos cada 3 días.. 2.2.7. Preparación del inóculo. Se sembró el Staphylococcus epidermidis ATCC 12228 en un tubo de Agar Antibiótico N° 1 inclinado y se incubó a 32-35 °C por 24 horas. Se lavó el crecimiento del cultivo inclinado de 24 horas con 3 mL de solución salina estéril SR y perlas de vidrio estériles y se inoculó la superficie de 250 mL de Agar Antibiótico N° 1 que se halló en el lado plano de un frasco Roux. Luego. 12 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(22) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. se esparció la suspensión en forma pareja sobre la superficie del agar con ayuda de perlas de vidrio estériles; se movió el frasco de lado a lado permitiendo que la suspensión se ponga en contacto con toda la superficie del agar y se incubó de 32. IC A. °C a 35°C por 24 horas. Se preparó la suspensión madre, añadiendo 30 mL de solución salina estéril SR. UI M. al frasco Roux, cuidadosamente, se movió el frasco de lado a lado con ayuda de las perlas de vidrio, lavando el crecimiento de la superficie del agar. Se transfirió. Q. asépticamente la solución a un frasco estéril con 20 mL de la solución salina,. BI O. obteniendo al final un volumen de 50 mL de la suspensión madre.. Y. 2.2.8. Determinación de la cantidad de suspensión madre para inóculo.. A. La cantidad de suspensión madre del microorganismo que se utilizó como. AC I. inóculo se determinó inoculando diferentes volúmenes de la suspensión madre, comenzando con el volumen sugerido (0,03 mL por cada 100 mL del medio. M. antibiótico N° 11) para inóculo por la USP 35. Se dejó las placas servidas con la. FA R. capa siembra previa secada de la capa base (Agar antibiótico N° 11) unos 15 minutos y se procedió a dejar caer seis cilindros de valoración sobre la superficie inoculada desde una altura de 12 mm, utilizando una pinza estéril para asegurar. DE. el espaciado uniforme en un radio de 2,8 cm y se tapó las placas para evitar la. CA. contaminación. Se llenó los seis cilindros en cada placa con 100 microlitros de la. BI. BL. IO. TE. dilución media del estándar de referencia en una concentración de 1,0 µL/mL. Se incubaron las placas a 36,7 °C durante 18 horas, después de este periodo de incubación se determinó la cantidad de suspensión madre para el inóculo que mostró una demarcación satisfactoria de las zonas de inhibición obtenida por la relación dosis respuesta optima a partir de la cantidad de cultivo del microorganismo en las placas. (USP 35). 13 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(23) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.2.9. Preparación del estándar (Método de la curva patrón). Diluciones del patrón: La preparación de la solución madre y diluciones de. IC A. prueba del estándar se realizaron según lo establecido por la USP 35 en la valoración microbiológica de antibióticos.. UI M. Solución stock madre (1mg/mL).- Se pesó una cantidad equivalente a 50 mg de Gentamicina y se transfirió a una fiola de 50 mL. Luego se enrasó con Solución. BI O. Q. amortiguadora de Fosfato N°3.. Esta solución puede durar hasta 14 días en refrigeración si es un estándar USP.. Y. Solución madre final (1 µg/mL).- A partir de la solución Stock Madre se tomó. A. 1 mL y se llevó a una fiola de 100 mL. Se enrasó con Solución amortiguadora de. AC I. Fosfato N° 3.. Concentración 0,64 µg/mL (S1).- Se tomó 0,64 mL de solución estándar. FA R. a.. M. De la solución anterior se preparó las siguientes concentraciones:. y se llevó a una fiola de 10 mL; se enrasó con Solución amortiguadora de. DE. Fosfato N°3. b.. Concentración 0,80 µg/mL (S2).- Se tomó 0,80 mL de solución estándar. CA. y se llevó a una fiola de 10 mL; se enrasó con Solución amortiguadora de. c.. BL BI. Concentración 1,0 µg/mL (Dilución Estándar de Referencia) (S3).- Se tomó 1,0 mL de solución estándar y se llevó a una fiola de 10 mL; se enrasó. IO. TE. Fosfato N°3.. con Solución amortiguadora de Fosfato N°3. d.. Concentración 1,25 µg/mL (S4).- Se tomó 1,25 mL de solución estándar y se llevó a una fiola de 10 mL; se enrasó con Solución amortiguadora de Fosfato N°3.. 14 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(24) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. e.. Concentración 1,56 µg/mL (S5).- Se tomó 1,56 mL de solución estándar y se llevó a una fiola de 10 mL; se enrasó con Solución amortiguadora de. IC A. Fosfato N°3.. 2.2.10. Preparación de la muestra (Preparar por triplicado).. UI M. Dilución de la muestra: se determinó la cantidad de muestra a pesar para la valoración del antibiótico presente en el producto a partir de información que. Q. proporcionó el fabricante de la potencia asignada al producto en el certificado de. BI O. análisis.. Se pesó 3,0 g de muestra, se trasvasó a una pera de decantación y se añadió 25. A. Y. mL de cloroformo. Se agitó por 5 minutos hasta la disolución total de la crema.. AC I. Luego se agregó 75 mL de Solución amortiguadora de Fosfato N° 3 y se agitó por 5 minutos. Se dejó 3 minutos en reposo hasta la separación de fases,. M. trasvasando 10 mL de la fase acuosa (fase superior) a una fiola de 100 mL. Se. FA R. enrasó la fiola con Solución amortiguadora de Fosfato N°3. Finalmente enrasar la fiola con Solución amortiguadora de Fosfato N° 3.. DE. La dilución de prueba de cada una de las muestras se trabajó en concentración. CA. 1,0 µg/ mL igual al nivel medio del estándar.. BI. BL. IO. TE. 2.2.11. Preparación de las placas de valoración (Se emplean 3 placas petri estériles por cada dilución). Se prepararon placas de valoración utilizando placas de petri de 20 x 90 mm aproximadamente a las que se les adicionó 21 mL de medio antibiótico N°11. Se dejó solidificar el medio en una superficie nivelada durante 40 minutos para formar una capa de agar base lisa de profundidad uniforme. Se agregó 4 mL de inóculo como capa de siembra, inclinando la placa petri atrás y hacia delante para esparcirlo uniformemente sobre la capa base y se dejó solidificar. El inóculo se preparó adicionando un volumen de 0,04 mL de suspensión madre del. 15 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(25) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. microorganismo Staphylococcus epidermidis ATCC 12228 por cada 100 mL de medio agar antibiótico N° 11 fundido a una temperatura de 45 a 50 ° C. Se dejó solidificar durante una hora.. IC A. Una vez sólida la segunda capa de agar, se colocó sobre la superficie 6 cilindros. estériles y equidistantes en forma circular en cada una de las placas.. UI M. Inmediatamente se cubrió las placas. En todas las placas se aplicó 100 µL de la. solución S3, tal como se muestra en el Anexo N° 04 (Las aplicaciones se realizó. BI O. Q. con tips estériles).. Por cada una de estas soluciones, se preparó 3 placas, obteniendo al final 21 placas por cada lote trabajado. Estas se incubaron por 16 a 18 horas entre 36 °C y. Y. 37, 5°C. Transcurrido este tiempo se midió los diámetros de los halos de. FA R. M. 2.2.12. Cálculo de Potencia.. AC I. A. inhibición obtenidos en cada una de las placas.. Para calcular la potencia a partir de los datos obtenidos de la medición de los halos se procedió a interpolar con la curva de estandarización. Con ayuda del. DE. programa o Software se trazó la curva usando los promedios de todas las mediciones y una transformación logarítmica de las concentraciones con. CA. respecto a la medición de los halos de inhibición. Además se aplicó el Método de. BI. BL. IO. TE. regresión Lineal mediante el procedimiento de mínimos cuadrados y se hizo la prueba de linealidad para comprobar la relación entre las concentraciones y lo valores obtenidos. Finalmente el porcentaje o valor de las unidades internacionales de potencia se calculó haciendo una comparación por regla de tres con el patrón de referencia utilizado para el antibiótico, del cual sí se conoce con certeza la potencia. USP < 111> Diseño y análisis de valoraciones biológicas. Límite: 3,15 mg/g -4,55mg/g (90,0-130,0 %).. 16 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(26) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.2.13. Evaluación de Resultados a.. Plan de recolección y elaboración de datos.. IC A. Instrumentos.-El instrumento que se utilizó para recolectar los datos fue: La Hoja Reporte.. UI M. Procedimiento.-La Hoja Reporte se elaboró de acuerdo a lo indicado en USP/BP/PH. Eu; con el fin de que el contenido esté dirigido hacia los. Q. objetivos de la investigación.. BI O. Dicho formato recogió en la primera parte los datos del producto farmacéutico a analizar, indicando fecha de inicio así como fecha final del. Y. análisis.. A. En esta parte se especificó también los datos del estándar (nombre,. AC I. protocolo, potencia, peso y fecha de expiración); los datos del microorganismo utilizado; los códigos de los equipos a utilizar; el número. M. de lote de cada uno de los medios que se preparó y la temperatura a la cual. FA R. serán incubados.. DE. En la segunda parte de La Hoja Reporte, se detalló en sí la hoja de cálculo. CA. para hallar la Potencia Antibiótica del producto. Anexo N° 05. b.. Análisis de datos.- Los datos fueron procesados y ordenados en tablas de. BI. BL. IO. TE. doble entrada.. 17 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(27) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. III. RESULTADOS. 1. 13.59. 15.25. 14.85. 15.93. 16.25. 15.85. 17.58. 2. 13.08. 15.58. 14.52. 15.66. 16.63. 15.52. 17.66. 3. 13.7. 15.95. 14.45. 15.77. 16.52. 15.46. 4. 13.18. 15.72. 14.65. 15.85. 16.42. 15.59. 5. 13.01. 15.32. 14.63. 15.96. 16.45. 15.66. 6. 13.17. 15.42. 14.69. 15.28. 16.58. 15.77. 17.56. 15.54. 7. 13.78. 15.36. 14.85. 15.45. 16.58. 15.82. 17.5. 15.69. 8. 13.58. 15.27. 14.59. 15.63. 16.75. 15.49. 17.63. 15.77. 9. 13.6. 15.54. 14.66. 15.72. 16.58. 15.63. 17.25. 15.69. PROMEDIO. 13.41. 15.49. 14.65. 15.69. 15.64. 17.61. 15.59. S3. 15.51. UI M. 15.58 15.62. 17.85. 15.42. 17.78. 15.48. Q. 17.66. AC I. A. 16.53. S5. IC A. S3. BI O. HALOS DE INHIBICION (en mm) S2 S3 S4 S3. S1. Y. DATOS. FA R. M. TABLA N° 1.- MEDIDA DE HALOS DE INHIBICIÓN PRODUCIDOS EN LAS PLACAS QUE CORRESPONDEN A LAS SOLUCIONES DEL ESTANDAR MEDIO Y LAS CONCENTRACIONES DEL ESTANDAR.. DATOS. S3(3). DE. M1. HALOS DE INHIBICION (en mm) S3(1) M2 S3(2) M3. 15.66. 15.22. 16.63. 15.11. 16.27. 15.52. 15.99. 15.12. 16.77. 15.32. 15.96. 15.32. 15.96. 15.51. 15.96. 15.52. 16.02. 15.42. 16.63. 15.32. 15.85. 15.63. 15.85. 15.25. 16.12. 15.42. 15.96. 15.22. 16.05. 15.53. 6. 16.12. 15.63. 15.85. 15.32. 15.85. 15.36. 7. 16.22. 15.63. 16.55. 15.51. 16.02. 15.44. 8. 15.99. 15.22. 16.22. 15.21. 16.02. 15.58. 9. 16.32. 15.22. 16.11. 15.22. 15.99. 15.22. PROMEDIO. 16.11. 15.37. 16.21. 15.34. 16.00. 15.40. 1. 3 4. BI. BL. IO. TE. 5. CA. 2. TABLA N° 2.- MEDIDA DE HALOS DE INHIBICIÓN PRODUCIDOS EN LAS PLACAS QUE CORRESPONDEN A LAS SOLUCIONES DE LAS MUESTRAS.. 18 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(28) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. SOLUCION DE ESTANDAR MEDIO. S3. S3. S3. S3. S3. S3. S3. PROMEDIO. 15.49. 15.69. 15.64. 15.59. 15.37. 15.34. 15.40. IC A. PROMEDIO TOTAL. UI M. 15.604. S3. S2. S3. PROMEDIO CORREGIDO. 13.41. 15.49. 14.65. 15.69. 1.50. AC I. 2.20. 0.91. 1.41. 0.86. S3. S5. S3. 15.64. 17.61. 15.59. -0.04. 0.92. 0.02. 0.98. 0.73. FA R. COEFICIENTE DE VARIACIÓN (%). 16.53. -0.09. M. 0.11. CORECCIÓN. S4. Y. S1. A. SOLUCIONES DEL ESTANDAR. BI O. Q. TABLA N° 3.- PROMEDIO DEL ESTANDAR MEDIO (S3) DE LA CURVA ESTANDAR.. CA. DE. TABLA N° 4.- CORRECCIÓN Y COEFICIENTE DE VARIACIÓN DE LOS PROMEDIOS DEL ESTANDAR MEDIO (S3) Y DE LAS SOLUCIONES S1, S2, S4, S5 DE LA CURVA ESTÁNDAR.. TE. SOLUCIONES DE LAS MUESTRAS. BL. IO. PROMEDIO CORREGIDO. S3(1). M2. S3(2). M3. S3(3). 16.11. 15.37. 16.21. 15.34. 16.00. 15.40. CORECCIONES. COEFICIENTE DE VARIACIÓN (%). BI. M1. 0.24. 1.67. 1.24. 0.26. 2.18. 1.14. 0.20. 0.78. 0.82. TABLA N° 5.- CORRECCIÓN Y COEFICIENTE DE VARIACIÓN DE LOS PROMEDIOS DEL ESTANDAR MEDIO (S3) Y DE LAS SOLUCIONES M1, M2; Y M3.. 19 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(29) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. IV. DISCUSIÓN. IC A. El desarrolló del método de difusión en placa-cilindro para la valoración de potencia antibiótica de Gentamicina Sulfato en el Multiderm crema del Laboratorio Farmindustria, el cual fue. UI M. sensible a una dosis media de 1 ug, pudo obtener resultados precisos dentro de las. Q. especificaciones establecidas por la Farmacopea de los Estados Unidos (USP 35).. BI O. Se utilizó como microorganismo de prueba al Staphyloccus epidermidis ATCC 12228, debido a que el Laboratorio en mención realizó anteriormente pruebas de comparación con el Staphyloccus aureus ATCC 29737; siendo los resultados insatisfactorios, debido a las. Y. características propias de estos microorganismos, la actividad propia del antibiótico Gentamicina. A. Sulfato, concentraciones del inóculo, tiempo de difusión en el agar y de incubación. Se utilizó la. AC I. temperatura entre 36 y 37,5 °C como la óptima que permite el crecimiento de esta bacteria y la. M. difusión del antibiótico. Como medio de cultivo se empleó el agar antibiótico Nº 11, debido a. FA R. que es un medio adecuado para el crecimiento del microorganismo a ensayar y ofrece un pH óptimo (7,8-8,0) que evita la degradación de la Gentamicina Sulfato, lo cual ocurre cuando se trabaja con pHs ácidos debido a la naturaleza básica de esta droga.. DE. Como diluente se utilizó buffer fosfato pH 8, de manera de favorecer la estabilidad del antibiótico y cloroformo para disolver la Gentamicina Sulfato en la crema ya que al ser éste. CA. ligeramente miscible con el agua permite la difusión del antibiótico en el agar, sin inhibir la. TE. respuesta del microorganismo frente al antibiótico.. IO. Según la USP 35 (2013) los halos de inhibición obtenidos en un análisis de cilindro en placa,. BL. deben estar por encima de 14 mm de diámetro para considerarlos como una zona de inhibición. BI. satisfactoria. Con una concentración del 0,03 % del inóculo, la cual es la empleada por la mayoría de los laboratorios que aplican métodos microbiológicos para la Gentamicina Sulfato, los halos de inhibición obtenidos tenían diámetros mayores a 14 mm con bordes claramente 12. definidos que facilitaron su lectura y mejoraron la precisión en el análisis .. 20 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(30) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Dentro de las restricciones el diseño de valoración recomendado emplea una curva estándar de cinco concentraciones y una sola concentración de cada preparación muestra. Por lo que se. IC A. realizó el ensayo de potencia antibiótica de Gentamicina Sulfato con diferentes sistemas de concentración de dosis, obteniéndose resultados confiables y reproducibles. En las preparaciones. UI M. de la solución madre del estándar y muestras problemas, se siguió las indicaciones de la. Q. Farmacopea de los Estados Unidos de referencia (USP 35) 12.. BI O. Antes de proceder con la incubación de las placas de Petri inoculadas fue necesario que el antibiótico difunda adecuadamente en el agar; caso contrario se produce un crecimiento de los. Y. microorganismos en paralelo con la escasa difusión del antibiótico, teniendo como consecuencia una actividad inhibitoria no satisfactoria.. AC I. A. Es decir que brindan tamaños de zonas de inhibición fuera del intervalo de 11 a 19 mm, que no 12. M. adecuados debido a que contribuyen a la variabilidad de la valoración .. FA R. La potencia del antibiótico se calcula mediante la interpolación de una recta estándar o patrón obtenida por transformación logarítmica y ajustada por cuadros mínimos. El método de potencia del antibiótico permite ajustar los datos a una línea recta evaluando un. DE. intervalo de concentración estrecho en el que los resultados se acercan a la linealidad. Según los resultados se obtuvo la gráfica de la recta, el cual nos permitió establecer que los. CA. resultados son directamente proporcionales a la concentración de la dosis. Anexo N° 06. TE. En la bibliografía consultada se encontró una metodología semejante a la propuesta en: el microorganismo utilizado, inoculación y acondicionamiento del microorganismo en las placas.. IO. Pero difiere en las concentraciones de las dosis (St1 a ST5) del estándar, la preparación del. BL. estándar, solventes utilizados.. BI. Los resultados de la valoración se consideraron válidos porque la potencia está entre 80% -125% de la potencia asumida al preparar la solución madre de la muestra. Si la potencia calculada. hubiese estado fuera del intervalo de 80% -125%, el resultado para la muestra pudo quedar fuera del intervalo de concentración estrecho en el que se ha establecido la linealidad, en cuyo caso, se. 21 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(31) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. deberá ajustar la potencia asumida de la muestra según corresponda y repetir la valoración para 12. obtener un resultado valido .. IC A. Por lo que no se encontró un trabajo similar de acuerdo a los parámetros óptimos planteados en la presente investigación, las condiciones óptimas de trabajo expuestas en la presente tesis son. UI M. resultados referenciales para una posterior estandarización y validación de la metodología de. Q. análisis.. BI O. Al realizar el estudio estadístico de los datos obtenidos se obtuvo los siguientes resultados: la curva de calibración realizada entre el logaritmo de la concentración en la variable dependiente. Y. (Y) y el diámetro el halo (mm) en la variable independiente(X) resultó ser lineal en el intervalo. A. de concentraciones comprendidas entre 0,64 y 1,56 µg/mL. Al aplicar la regresión lineal a los. AC I. datos se obtuvo la ecuación de la recta que se expresó según y= 10.4649 x +26,015. El. M. coeficiente de correlación fue de 0,9989.. FA R. La regresión lineal obtenida es el diseño del modelo matemático, representado como una ecuación, que permite establecer o simular el comportamiento de la variable dependiente con 12. respecto a la variable independiente .. DE. En el anexo N° 06 se muestra la curva de calibración para Gentamicina Sulfato (Estándar) teniendo una regresión lineal y un coeficiente de correlación de 0,9989 hasta una concentración. CA. de 1,56 µg/mL arriba de esta concentración el sistema puede perder su respuesta lineal. Dentro. TE. del intervalo de concentraciones 0,64 y 1,56 µg/mL se puede construir una curva de calibración. IO. lineal es el rango lineal.. BL. El coeficiente de correlación obtenido es nuestro índice estadístico que mide la relación lineal. BI. entre las dos variables cuantitativas (Log de concentración y diámetro) y una variable independiente Y (Log de la concentración). El coeficiente de correlación obtenido es muy cercano a 1 existiendo una correlación positiva casi perfecta. El índice indica que existe una dependencia total entre las dos variables denominada relación directa: cuando el halo tiene mayor diámetro (mm) la concentración µg/mL del principio activo es mayor, es decir cuando. 22 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(32) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. una de las variables aumenta, la otra también lo hace en idéntica proporción, es decir hay una relación directamente proporcional.. IC A. El coeficiente de variación nos indica la relación existente entre la desviación de una muestra y su medida. Si comparamos la dispersión en varios Grupos de mediciones, tendrá menor. UI M. dispersión aquella que tenga menor coeficiente de variación. En la tabla N°04 y N°05 se. muestran los valores obtenido de los coeficientes de variación de las soluciones de la curva. BI O. Q. estándar y de las muestras.. Con un nivel de confianza de 95% que se corresponde con valores α de 0,05 informa con un. Y. 95% de seguridad que nuestro valor estimado se encuentra en un intervalo de confianza. Los valores obtenidos de los intervalos de confianza, muestran los valores que componen el intervalo. AC I. A. dentro de la cual se considera que se encuentra el verdadero valor de aquella característica que se está estimando, el diámetro del halo en milímetros con respeto a la concentración del principio. BI. BL. IO. TE. CA. DE. FA R. M. activo.. 23 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(33) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. V. RECOMENDACIONES. 1.. Utilizar microorganismos ATCC para eliminar variables biológicas externas que pueden. 2.. IC A. interferir con los ensayos. Tratar en lo posible de utilizar estándar USP, tener precaución en las condiciones de. 3.. UI M. conservación.. Realizar diferentes pruebas en la dosis media del estándar, y ajustar la dosis hasta obtener los. Antes de incorporar la segunda capa de agar inoculado, tener todas las placas listas; ya que la. BI O. 4.. Q. resultados satisfactorios.. operación debe realizarse rápidamente para evitar grumos debido al enfriamiento del agar. El agar inoculado no debe estar a una temperatura mayor de los 45 ºC.. Al incorporar el antibiótico en la placa inoculada, dejar difundir el antibiótico en diferentes. Y. 5.. A. periodos de tiempo (en esta fase de desarrollo del ensayo, el volumen de dosis adicionada,. AC I. cumple un papel relevante); ya que existe una relación directamente proporcional entre el. FA R. M. volumen y el tiempo de difusión, la cual influye en las dimensiones de los halos de inhibición.. VI. CONCLUSIONES. Se determinó la Potencia Antibiótica de Gentamicina Sulfato en el Multiderm crema del. DE. 1.. Laboratorio Farmindustria S.A, obteniéndose resultados proporcionales en comparación con los. Se determinó la concentración de Gentamicina Sulfato mediante el método de Potencia. TE. 2.. CA. resultados de las dosis de la muestras y de los estándares USP utilizados.. Antibiótica en el Multiderm crema del Laboratorio Farmindustria S.A. La concentración de Gentamicina Sulfato en el Multiderm crema del Laboratorio Farmindustria. IO. 3.. 4.. El método microbiológico placa-cilindro empleado para estimar la Potencia Antibiótica de. BI. BL. S.A, corresponde a las establecido en la USP 35 (no menor de 900 μg por mg).. Gentamicina Sulfato en el Multiderm crema del Laboratorio Farmindustria S.A es confiable y. 5.. El microorganismo Staphylococcus epidermidis ATCC 12228 es sensible al antibiótico. preciso.. Gentamicina Sulfato en medio de cultivo N° 11 en la condiciones propuestas.. 24 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(34) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. VII. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS. 1.. Remington G, A. Farmacia: Garantía y Control de Calidad. 20° ed. Tomo 1.Mexico: Ed. Médica. 2.. IC A. Panamericana; 2003. p. 1137-1141.. Quevedo F. 2004. El control de la calidad integral de los medicamentos. Revista Diagnóstico.. 3.. UI M. 2004. Vol. 43, no. 2.. Jiménez M, Estival M. 1995. Estudio de la estabilidad microbiológica de la ampicilina. Q. trihidratada suspensión oral de 125 mg. Revistas Médicas Cubanas. Sintefarma Revista. 4.. BI O. electrónica. Junio 1995, vol. 1, no. 2.. DIGEMID. Manual de Buenas Prácticas de Manufactura de Productos Farmacéuticos. Perú;. Méndez P, Díaz J, Silva E, González P, Moreno E, Amaya P, Serrato N, Sáenz E. 2005. Estudio. A. 5.. Y. 1999. p. 9, 23, 26.. AC I. comparativo de la actividad antimicrobiana de diferentes presentaciones comerciales de antibióticos de administración intravenosa a través de métodos in vitro. Revista Colombiana de. Camacho A, Arias J. 2002. Implementación y estandarización de la técnica para la. FA R. 6.. M. Ciencia, Química y Farmacia. 2005. Vol. 34, no. 2.. determinación de potencia microbiológica de Neomicina en crema tópica fabricada en una planta productora de medicamentos. Departamento de Microbiología. Pontificia Universidad Javeriana.. 7.. DE. Bogotá, Colombia. <http://www.javeriana.edu.co/ciencias/universitas/vol8n1/JARIAS.htm>. Leiva A, Morales I, Pachco J, Demiranda J, Esquivel. M y Alvarado A. 2001. Guía para la. CA. Realización de Estudios de Estabilidad de Medicamentos. Comisión Nacional de Calidad de Medicamentos. Subcomisión de Estabilidad de Medicamentos. Inf. 32, Costa Rica, Octubre. Pradeau D. Análisis Químicos Farmacéuticos de Medicamentos. México: UTEHA; 1998. p.112.. IO. 8.. TE. 2001.. Goodman & Gilman. Las bases farmacológicas de la Terapéutica. 12º ed. México: Mc Graw. BL. 9.. BI. Hill; 2012. p. 397- 414.. 10. Obregón G, Zavaleta A. 2000. Control de calidad de Discos de Sensibilidad Antibiótica Comercializados en el Mercado Peruano. Revista Medicina Experimental. 2000. Vol. 17, no. 14.. 25 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(35) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 11. Méndez P, Díaz J, Silva E, González P, Moreno E, Amaya P, Serrato N, Sáenz E. 2005. Estudio comparativo de la actividad antimicrobiana de diferentes presentaciones comerciales de antibióticos de administración intravenosa a través de métodos in vitro. Revista Colombiana de Ciencia, Química y Farmacia. 2005. Vol. 34, no. 2.. IC A. 12. USP 35-NF 30. Farmacopea de los Estados Unidos de América. 2012; 1: 70-93 y 5702-5749.. UI M. 13. Belluci S. La Ciencia y Práctica de Farmacia. 20° ed. Estados Unidos: Panamericana; 2000. pp: 639.. Q. 14. Moreno A. Farmacología Básica y Clínica. 18 ed. Editorial Médica Panamericana. España. 2008. BI O. Pp: 827. BI. BL. IO. TE. CA. DE. FA R. M. AC I. A. Y. 15. Defillo B. Farmacología Médica. 3 ed. Santo Domingo, 1985. pp:49.. 26 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(36) Y. BI O. Q. UI M. IC A. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. BI. BL. IO. TE. CA. DE. FA R. M. AC I. A. ANEXOS. 27 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

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