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Efecto antifúngico in vitro del extracto etanólico de flores de Helianthus annuus L “girasol” sobre el crecimiento de Alternaria tenuis N

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Academic year: 2020

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(1)Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS. O. LO. G. IC A. S. ESCUELA PROFESIONAL DE CIENCIAS BIOLÓGICAS. BI. “Efecto antifúngico in vitro del extracto etanólico de flores de Helianthus. AS. annuus L. “girasol” sobre el crecimiento de Alternaria tenuis N.”. EN. CI. TESIS PARA OPTAR EL TÍTULO PROFESIONAL DE:. CI. BIÓLOGO. TE CA. DE. Br CABRERA VALDIVIA, Ismael AUTOR. Dr. HUARANGA MORENO, Felix Ricardo.. BI. BL. IO. ASESOR. TRUJILLO – PERÚ 2019. 1 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(2) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DR. ORLANDO MOISÉS GONZÁLES NIEVES. BI. O. LO. G. RECTOR. IC A. S. AUTORIDADES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO. AS. Dr. RUBÉN CÉSAR VERA VÉLIZ. EN. CI. VICE-RECTOR ACADÉMICO. CI. DR. WEYMER PORTOCARRERO CÁRDENAS. TE CA. DE. VICE-RECTOR DE INVESTIGACIÓN. SECRETARIO GENERAL. BI. BL. IO. DR. ESTEBAN ALEJANDRO ILICH ZERPA. ii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(3) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. LO. DR. FREDDY ROGGER MEJÍA COICO. G. IC A. S. AUTORIDADES DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS. EN. CI. AS. BI. O. DECANO DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS. CI. DR. WILIAM ELMER ZELADA ESTRAVER. DR. FREDY PELÁEZ PELÁEZ. BI. BL. IO. TE CA. DE. SECRETARIO DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS. DIRECTOR DE LA ESCUELA PROFESIONAL DE CIENCIAS BIOLÓGICAS. iii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(4) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. PRESENTACIÓN. Señores miembros del jurado dictaminador:. IC A. S. En cumplimiento con las disposiciones establecidas en el Reglamento de Grados y Títulos exigido por La Escuela Profesional de Ciencias Biológicas de la Facultad de Ciencias. G. Biológicas de la Universidad Nacional de Trujillo, someto a vuestra consideración la. LO. TESIS TITULADA: “Efecto antifúngico in vitro del extracto etanólico de flores de. BI. O. Helianthus annuus L. “girasol” sobre el crecimiento de Alternaria tenuis N.”. AS. Se propone el presente trabajo a vuestro criterio, para que con la serenidad y justicia que. CI. ustedes poseen, sea evaluado y se emita el dictamen correspondiente, siendo este uno de. CI. EN. los requisitos indispensables para optar el Título de Biólogo.. TE CA. DE. Trujillo, marzo del 2019. Br. ISMAEL CABRERA VALDIVIA. BI. BL. IO. -----------------------------------------------. iv Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(5) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DEL ASESOR. S. El que suscribe en calidad de asesor de la tesis titulada: “Efecto antifúngico in vitro del. IC A. extracto etanólico de flores de Helianthus annuus L. “girasol” sobre el crecimiento de. G. Alternaria tenuis N.” certifica que la investigación ha sido desarrollada en conformidad. LO. con su respectivo proyecto y las orientaciones pertinentes al tesista, que el informe ha sido. O. redactado bajo mi asesoramiento acogiendo mis observaciones y sugerencias alcanzadas.. BI. Por lo tanto, autorizo al Br. Ismael Cabrera Valdivia para continuar con los trámites. Trujillo, marzo del 2019. TE CA. DE. CI. EN. CI. AS. correspondientes.. ---------------------------------------------------------ASESOR. BI. BL. IO. DR. FELIX RICARDO HUARANGA MORENO. v Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(6) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. MIEMBROS DEL JURADO DICTAMINADOR. S. Los suscritos miembros de jurado, declara que la presente tesis ha sido ejecutada en. IC A. concordancia con las normas de la escuela académico profesional de Ciencias. BI. O. LO. G. Biológicas de la Universidad Nacional De Trujillo.. AS. DR. MANUEL ROBERTO RODRÍGUEZ LACHERRE. DE. CI. EN. CI. PRESIDENTE. SECRETARIO. BI. BL. IO. TE CA. DRA. MARLENE RENE RODRÍGUEZ ESPEJO. DR. FELIX RICARDO HUARANGA MORENO VOCAL. vi Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(7) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DE LA APROBACIÓN. S. Los profesores que suscriben, miembros del jurado dictaminador, declaran que el presente. IC A. informe de Tesis ha cumplido con los requisitos formales y fundamentales, siendo. BI. O. LO. G. APROBADO por UNANIMIDAD.. AS. DR. MANUEL ROBERTO RODRÍGUEZ LACHERRE. DE. CI. EN. CI. PRESIDENTE. SECRETARIO. BI. BL. IO. TE CA. DRA. MARLENE RENE RODRÍGUEZ ESPEJO. DR. FELIX RICARDO HUARANGA MORENO VOCAL. vii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(8) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DEDICATORIA. S. A Dios, por permitirme llegar a este. IC A. momento tan especial en mi vida. Por los triunfos y los momentos difíciles. G. que me han enseñado a valorarlo cada día. BI. O. LO. más.. AS. A mis padres: Oscar Cabrera Cornejo y Susana Valdivia Rufasto, por darme la. CI. vida, por su apoyo incondicional, porque oraciones. guiaron. mi. camino. EN. sus. difíciles, por su amor infinito y porque me enseñaron que la fortaleza solo existe en las personas con la voluntad de alcanzar el éxito.. TE CA. DE. CI. siempre. Por estar en los momentos más. IO. A mi familia, fuente de apoyo constante. BL. e incondicional en toda mi vida y más aún en mis años de carrera profesional.. BI. A todas las personas que me han apoyado y han hecho que el trabajo se realice con éxito.. viii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(9) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AGRADECIMIENTO. S. Quiero expresar mi gratitud a Dios, quien. IC A. con su bendición llena siempre mi vida y a toda mi familia por estar siempre. G. presente.. LO. A la Universidad Nacional De Trujillo, a la. O. Facultad de Ciencias Biológicas, a mis. BI. profesores quienes con la enseñanza de sus valiosos conocimientos hicieron que. AS. pueda crecer día a día como profesional,. CI. gracias a cada uno de ustedes por su. EN. paciencia, dedicación, apoyo incondicional y amistad.. CI. Agradecer la ayuda que muchas personas. DE. y colegas me han prestado durante el. proceso de investigación y redacción de. TE CA. este trabajo. A mis padres que me han ayudado y apoyado en todo, a mi Asesor Dr. Félix R. Huaranga Moreno y a la Dra.. IO. Marlene R. Rodríguez Espejo por haberme orientado en todos los momentos que. BI. BL. necesité.. Finalmente. expresar. mi. sincero. agradecimiento al Dr. Manuel R. Rodríguez Lacherre por su aporte en la identificación de la especie Alternaria tenuis N.. ix Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(10) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. INDICE. AS. AUTORIDADES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO…….ii. IC. AUTORIDADES DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS……...iii. ...……………………………………………………………...v. LO. DEL ASESOR. G. PRESENTACIÓN……………………………………………………………... iv. BI O. MIEMBROS DEL JURADO DICTAMINADOR……………………………...vi. AS. DE LA APROBACION………………………………………………………..vii. CI. DEDICATORIA……………………………………………………………… viii. EN. AGRADECIMIENTO…………………………………………………………. ix. CI. INDICE……………………………………………………………………….…x. DE. LISTA DE ANEXOS………………………………………………………….xii. CA. LISTA DE FIGURAS…………………………………………………...…... ..xv. TE. RESUMEN…………………………………………………………………....xvii. BI. BL. IO. ABSTRACT…………………………………………………………………...xviii. x Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(11) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. I.INTRODUCCION……………………………………………………………….1 II. MATERIAL Y METODOS………………………………………………........6. AS. A. Recolección del material biológico…………………………………………..6. IC. B. Preparación de la muestra……………………………………………….……6. G. C. Preparación del extracto etanólico de las flores de Helianthus annuus L.. BI O. LO. “girasol”……………………………………………………………………...6. D. Obtención del Hongo Fitopatógeno Alternaria tenuis N..................................7. AS. E. Elaboración de Medio de Cultivo y Tratamientos ……………………………7. CI. F. Siembra y evaluación………………………………………………………...8. EN. G. Prueba Estadística……………………………………………………………8. CI. III. RESULTADOS ………………..……………………………………………..9. DE. IV. DISCUSIÓN ………………..………………………………………………14. CA. V. CONCLUSIÓN……………………………………………………………...17. TE. VI. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS………………………………………18. BI. BL. IO. ANEXOS……………………………………………………………………….23. xi Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(12) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. LISTA DE ANEXOS. ANEXO 1. Flores de Helianthus annuus L. “girasol” secas al cabo de tres días………25. AS. ANEXO 2. Maceración de las flores de Helianthus annuus L. “girasol”…….………...25. IC. ANEXO 3. Materiales utilizados para el extracto etanólico de Helianthus annuus L.. G. “girasol”………………………………………………………………………………...26. LO. ANEXO 4. Preparación del extracto etanólico con las flores pulverizadas de Helianthus. BI O. annuus L.…………………………………………………………………………..........26 ANEXO 5. Filtrado del macerado obtenido en un frasco de penicilina………………...27. AS. ANEXO 6. Preparación del Medio Agar Sabouraud…………………………………....27. CI. ANEXO 7. Medio Agar Sabouraud estéril con el antibiótico Cefalexina a 35 °C….......28. EN. ANEXO 8. Material biológico de Lycopersicum esculentum “tomate” con signos de. CI. ataque del fitopatógeno.………………………………………………………………...28. DE. ANEXO 9. Cortes en bloques (1cm2) de Lycopersicum esculentum “tomate”, usando un bisturí estéril y pinza estéril…………………………………………………………29. CA. ANEXO 10. Lavado del material biológico Lycopersicum esculentum “tomate” con lejía. TE. al 2% durante 20 segundos………………………………………………………...........29 ANEXO 11. Enjuague del material biológico Lycopersicum esculentum “tomate” con. IO. agua destilada estéril…………………………………………………………………....30. BL. ANEXO 12. Material biológico Lycopersicum esculentum “tomate” desinfectado (placa. BI. Petri derecha) y Medio agar Sabouraud (placa Petri izquierda)………………………...30 ANEXO 13. Inoculación de los bloques (1cm2) de Lycopersicum esculentum “tomate” en el medio agar Sabouraud…………………………………………………………….31 ANEXO 14. Observación del crecimiento miceliar del hongo al día 4 de evaluación…31 ANEXO 15. Tubos de vidrio con el medio agar Sabouraud …………………………...32 xii. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(13) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. ANEXO 16. Inoculación del hongo obtenido en los tubos de vidrio…………………...32 ANEXO 17. Observación en el microscopio para identificar la especie la cual correspondía a Alternaria tenuis N.……………………………………………………..33. AS. ANEXO 18. Crecimiento miceliar al día 4 en los tubos de vidrio……………………...33. IC. ANEXO 19. Preparación del control y tratamientos con medio agar Sabouraud……....34. G. ANEXO 20. Medio agar Sabouraud estéril……………………………………………..34. LO. ANEXO 21. Preparación del medio agar Sabouraud con el extracto etanólico de. BI O. Helianthus annuus L. “girasol” a 35 °C a diferentes concentraciones…………………35 ANEXO 22. Secado de las placas Petri con el medio agar Sabouraud a diferentes. AS. concentraciones en la estufa a 30 °C……………………………………………………35 ANEXO 23. Inoculación en la placa Petri del medio agar Sabouraud con un aza de punta. EN. CI. de la cepa Alternaria tenuis N..…………………………………………………………36 ANEXO 24. Diseño Experimental Completamente al Azar, para demostrar el efecto de. CI. Helianthus annuus L. “girasol” a diferentes concentraciones frente Alternaría. DE. tenuis N…………………………………………………………………………………36 ANEXO 25. Incubación de las placas Petri a 30°C…………………………………….37. CA. ANEXO 26. Diámetro (cm) del crecimiento miceliar de Alternaría tenuis N., en los. TE. diferentes Tratamientos del extracto etanólico de Helianthus annuus L. “girasol” al día 3. IO. de evaluación....................................................................................................................37. BL. ANEXO 27. Diámetro (cm) del crecimiento miceliar de tenuis N., en los diferentes. BI. Tratamientos del extracto etanólico de Helianthus annuus L. “girasol” al día 4 de evaluación…………………………………………………………………………........38 ANEXO 28. Diámetro (cm) del crecimiento miceliar de tenuis N., en los diferentes Tratamientos del extracto etanólico de Helianthus annuus L. “girasol” al día 5 de evaluación………………………………………………………………………………38. xiii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(14) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. ANEXO 29. Análisis de Varianza entre tratamientos para la variable diámetro (cm) del crecimiento miceliar de Alternaria tenuis N., frente a diferentes concentraciones de Helianthus annuus L. “girasol” al día 1 de evaluación………………………................39. AS. ANEXO 30. Comparación de Medias de Tukey en el extracto etanólico de flores de. IC. Helianthus annuus L. en los tratamientos, sobre el CDM de Alternaria tenuis N., al día 1. G. de evaluación…………………………………………………………………………...39. LO. ANEXO 31. Análisis de Varianza entre tratamientos para la variable diámetro (cm) del. BI O. crecimiento miceliar de Alternaria tenuis N. frente a diferentes concentraciones de Helianthus annuus L. “girasol” al día 2 de evaluación…………………………………40. AS. ANEXO 32. Comparación de Medias de Tukey en el extracto etanólico de flores de. CI. Helianthus annuus L. en los tratamientos sobre el CDM de Alternaria tenuis N., al día 2. EN. de evaluación…………………………………………………………………………....41. CI. ANEXO 33. Análisis de Varianza entre tratamientos para la variable diámetro (cm) del crecimiento miceliar de Alternaria tenuis N. frente a diferentes concentraciones de. DE. Helianthus annuus L. “girasol” al día 3 de evaluación………………………………...42. CA. ANEXO 34. Comparación de Medias de Tukey en el extracto etanólico de flores de Helianthus annuus L. en los tratamientos, sobre el CDM de Alternaria tenuis N. al día 3. TE. de evaluación…………………………………………………………………………....42. IO. ANEXO 35. Análisis de Varianza entre tratamientos para la variable diámetro (cm) del. BL. crecimiento miceliar de Alternaria tenuis N. frente a diferentes concentraciones de. BI. Helianthus annuus L. “girasol” al día 4 de evaluación……………………………………..43. ANEXO 36. Comparación de Medias de Tukey en el extracto etanólico de flores de Helianthus annuus L. en los tratamientos, sobre el CDM de Alternaria tenuis N., al día 4 de evaluación……………………………………………………………………………44. xiv Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(15) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. ANEXO 37. Análisis de Varianza entre tratamientos para la variable diámetro (cm) del crecimiento miceliar de Alternaria tenuis N., frente a diferentes concentraciones de Helianthus annuus L. “girasol” al día 5 de evaluación…………………………………….44. AS. ANEXO 38. Comparación de Medias de Tukey en el extracto etanólico de flores de. IC. Helianthus annuus L. en los tratamientos, sobre el CDM de Alternaria tenuis N., al día 5. LO. G. de evaluación…………………………………………………………………………...45. BI O. ANEXO 39. Certificado de Herbarium Truxillense (HUT)……………………………45. AS. LISTA DE TABLAS. al extracto etanólico en diferentes concentraciones a partir de flores de. EN. frente. CI. Tabla 1. Medidas del diámetro (cm) de crecimiento miceliar de Alternaría tenuis N.,. CI. Helianthus annuus L. “girasol” a diferentes días de evaluación………………………...10. DE. Tabla 2. Promedio y Desviación estándar del diámetro (cm) de crecimiento micelial de Alternaría tenuis N., frente al extracto etanólico a diferentes concentraciones a flores. de. Helianthus. CA. de. annuus. L.. “girasol”. a. diferentes. partir días. de. TE. evaluación………………………………………………………………………………11. IO. Tabla 3. Porcentaje de Inhibición del crecimiento del diámetro miceliar (CDM) 8% y. BL. promedio de Alternaria tenuis N., en las concentraciones de 0% (Control), 5%,. BI. 10% del extracto etanólico de flores de Helianthus annus L. “girasol” al día 5 de evaluación respectivamente…………………………………………………………….11. xv Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(16) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. LISTA DE FIGURAS. Fig. 1. Comparación del diámetro (cm) de crecimiento micelial promedio de Alternaría tenuis N., sembrada en medio agar Sabouraud a diferentes concentraciones al 0%. AS. (control), 5%, 8% y 10% del extracto etanólico a partir de flores de Helianthus annuus L.. G. IC. “girasol” en diferentes tiempos (días) de evaluación…………………………………..12. LO. Fig. 2. Porcentaje promedio de inhibición del crecimiento de Alternaria tenuis N. a. BI O. diferentes concentraciones del extracto etanólico de flores de Helianthus annuus “girasol”. BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI. EN. CI. AS. en diferentes tiempos (días) de evaluación……………………………………………...13. xvi Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(17) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. RESUMEN. El presente trabajo de investigación tiene como objetivo determinar el efecto antifúngico. AS. in vitro del extracto etanólico de flores de Helianthus annuus L. "girasol" sobre el. IC. crecimiento de Alternaria tenuis N. Las flores de girasol fueron recolectadas en el Valle. G. de Moche, Departamento La Libertad entre los meses de enero y febrero, las cuales fueron. LO. lavadas con agua destilada estéril y secada a temperatura ambiente, para luego proceder. BI O. con su pulverización. Se colocaron 300 g de flores en un disolvente de extracción (alcohol 96%) por espacio de 5 días; el macerado obtenido fue filtrado y dejado a temperatura. AS. ambiente hasta eliminar el solvente orgánico. Se utilizó un diseño experimental de. CI. estímulo creciente, completamente aleatorizado con tres tratamientos más control y cinco. EN. repeticiones (0% (control), 5%, 8%, 10%) de extracto etanólico de flores de Helianthus annuus L. "girasol" en medio de cultivo agar Sabouraud. Además se determinó el. CI. Porcentaje de Inhibición, el Análisis de Varianza (ANAVA) y la prueba de Tukey para. DE. determinar si existe diferencias estadísticamente significativas entre los tratamientos. Según los resultados obtenidos se concluye que: el extracto etanólico de las flores de. CA. Helianthus annuus L. “girasol” tiene efecto antifúngico a concentraciones de 5%. 8% y. TE. 10% sobre el crecimiento de Alternaria tenuis N., en condiciones de laboratorio;. IO. asimismo el efecto antifúngico in vitro del extracto etanólico de Helianthus annuus L.. BL. “girasol” fue mayor en la concentración del 10%, produciendo un porcentaje de inhibición. BI. de 76.2% en el crecimiento miceliar de Alternaría tenuis N.. Palabras clave: Flores de Helianthus annuus L. "girasol", extracto etanólico, Alternaría tenuis N.. xvii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(18) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. ABSTRACT. The objective of this research work is to determine the antifungal effect in vitro of the. AS. ethanolic extract of flowers of Helianthus annuus L. "sunflower" on the growth of Alternaria tenuis N. The sunflower flowers were collected in the Moche Valley,. IC. Department of La Libertad between the months of January and February, which were. LO. G. washed with sterile distilled water and dried at room temperature, and then proceed with its pulverization. 300 g of flowers were placed in an extraction solvent (96% alcohol) for. BI O. 5 days; the macerate obtained was filtered and left at room temperature until the organic solvent was eliminated. An experimental design of increasing stimulus was used,. AS. completely randomized with three treatments plus control and five repetitions (0%, 5%,. CI. 8%, 10%) of ethanolic extract of flowers of Helianthus annuus L. "sunflower" in. EN. Sabouraud agar culture medium. In addition, the Inhibition Percentage, Variance. CI. Analysis (ANAVA) and Tukey's test were determined to determine if there are. DE. statistically significant differences between treatments. According to the results obtained it is concluded that: the ethanolic extract of the flowers of Helianthus annuus L.. CA. "sunflower" has an antifungal effect at concentrations of 5%. 8% and 10% on the growth. TE. of Alternaria tenuis N., under laboratory conditions; also the antifungal effect in vitro of. IO. the ethanolic extract of Helianthus annuus L. "sunflower" was greater in the concentration. BL. of 10%, producing a percentage of inhibition of 76.2% in the mycelial growth of. BI. Alternaria tenuis N.. Keywords: Flowers of Helianthus annuus L. "sunflower", ethanolic extract, Alternaria tenuis N.. xviii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(19) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. I. INTRODUCCIÓN. La medicina tradicional fue usada desde la antigüedad, en la cual diversas plantas. AS. medicinales fueron utilizadas para alimentar, curar enfermedades, aliviar dolores, etc.. IC. Las propiedades curativas de las plantas se atribuyen a la presencia de un principio activo,. G. el cual produce un efecto fisiológico, que están siendo estudiadas científicamente por. LO. investigadores de forma multidisciplinaria, con la intervención de biólogos, químicos,. BI O. farmacólogos, farmacognocistas1.. Casi todos los principios activos conocidos han sido utilizados por la industria. AS. farmacéutica. Sin embargo, la principal diferencia entre los fármacos y las plantas. CI. medicinales (al margen de la procedencia biológica o sintética de ciertos componentes). EN. es precisamente la sinergia entre esa multitud de sustancias que componen una planta. CI. medicinal, muchas de ellas aún desconocidas 2. La actividad antifúngica de extractos de plantas usadas en medicina popular contra diversos hongos las cuales causan infecciones. DE. frecuentes en humanos, así como aquellos que atacan a diversos cultivos, ha sido. CA. ampliamente estudiada. Dentro de las revisiones sobre plantas antifúngicas y sus. TE. principios activos destacan los trabajos de algunos autores 3, 4, 5, 6, 7, 8.. IO. La producción de moléculas biológicamente activas o metabolitos secundarios. BL. puede ser inducida por el estrés de la planta por ejemplo al ser atacadas por un microorganismo y por consiguiente muchos de estos metabolitos se distribuyen a través. BI. de diferentes vías metabólicas generando gran número de compuestos, los cuales presentan actividad antifúngica. Entre los compuestos más conocidos se encuentran: flavonoides, fenoles, glicósidos de fenoles, terpenos, saponinas, aceites esenciales, alcaloides, etc. 3, 9, 10.. 1 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(20) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Montes et al. (2000) evaluaron 206 especies vegetales contra 26 especies, de hongos fitopatógenos, y encontraron que entre 32 y 51% de las plantas evaluadas interactuaban con los hongos y causaban desde estimulación biológica hasta inhibición. AS. total 11.. IC. Dentro de lo mencionado se destaca la especie Helianthus annuus L. “girasol”.. G. Esta especie pertenece a la familia Asteraceae es una planta herbácea originaria de. LO. América del Norte. Se desarrolla en suelos secos y soleados, debido a que sus raíces. BI O. pueden explorar capas profundas del suelo. Es una planta anual de grandes proporciones que pueden alcanzar más de 3 metros de altura. Su inflorescencia denominada capítulo. AS. floral es grande (10 a 30 cm de diámetro). En la parte externa del capítulo se disponen las. CI. lígulas o flores liguladas en una o dos filas que parecen pétalos. En sus flores y hojas se. EN. han reportado varios metabolitos secundarios que presentan actividad antifúngica tales. CI. como los terpenoides, fenoles, flavonoides y cumarinas 12, 13, 14, 15, 16, 17,18.. DE. Trabajos realizados en Helianthus annuus L. “girasol”, tomando como materia prima las flores y las cabezuelas desprovistas de las semillas, dieron como resultado el. CA. aislamiento de diterpenos de tipo kaurano, como los ácidos kaurenoico y traquilobánico 19.. TE. También se ha descrito la presencia de otro derivado, el ácido grandiflorólico en extractos. IO. provenientes de estas sumidades 20.. BL. Los diterpenos constituyen un grupo numeroso de compuestos en el género. BI. Helianthus, siendo más abundantes los que llevan un esqueleto de tipo kaurano o trachilobano, como el ácido kaur-16-en-19-oico, ácido grandiflórico o sus derivados, se encuentran presentes en casi todas las especies de Helianthus y tienen actividad antifúngica 21, 22, 23, 24.. 2 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(21) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Existen compuestos derivados de los terpenoides; como los monoterpenos aislados de girasol y son α y β- pineno, camfeno, α-fellandreno, α-terpineno, p-cimeno, limoneno, borneol y terpinen-4-olm. Los bisnorsesquiterpenos, son una pequeña familia. AS. de terpenos con un esqueleto básico de 13 átomos de carbono, que han sido aislados de. IC. H. heterophyllus, H. hirsutus y H. annuus 21, 22, 25,26.. G. Asimismo, las enfermedades que ocasionan más pérdidas económicas en los. LO. cultivos de post-cosecha, en granos, frutos y hortalizas son provocadas principalmente. BI O. por hongos y bacterias que causan la degradación de los tejidos y su consiguiente pudrición. Los hongos constituyen el grupo más importante entre los agentes causales de. AS. tipo infectivo que provocan enfermedades de las plantas. El número exacto de hongos. CI. fitopatógenos se desconocen, pero se estima en número superior a las 10 mil especies,. EN. pertenecientes a diversas categorías taxonómicas 27.. CI. A nivel mundial los hongos fitopatógenos constituyen el grupo más importante. DE. desde el punto de vista económico en cuanto a su frecuencia de aparición y daño que pueden causar. El daño que ocasionan no sólo se refiere a las pérdidas de producción. CA. económica, sino también a las pérdidas en la producción biológica 28, 29.. TE. Una amplia gama de hongos han sido caracterizados como causantes del deterioro. IO. patológico en una variedad de productos, siendo las más comunes especies de Alternaria,. BL. Botrytis, Diplodia, Monilinia, Penicillium, Colletotrichum, Phomopsis, Fusarium,. BI. Rhizopus y Mucor 27. Alternaria tenuis N., es un hongo filamentoso que tiene distribución mundial,. siendo un saprofito muy común que se encuentra en plantas, alimentos, textiles y en diferentes tipos de suelos. Forma colonias de color negro o negro-oliváceo. Sus esporas o conidios tienen una forma muy típica ovoide o elipsoidal (con forma de pera), con un 3 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(22) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. tamaño de 18 a 80 micras de longitud y de 7 a 18 de ancho. Tiene un patrón estacional, apareciendo sobre todo cuando el tiempo es cálido y húmedo, alcanzando sus máximas concentraciones a finales de verano. Los conidios se aíslan con frecuencia del aire libre. AS. durante el tiempo caluroso (alcanzando el pico de máxima concentración en los últimos. IC. días de verano). El rango de temperatura de crecimiento varía entre 2 y 32 °C, con. G. temperaturas óptimas entre 25 y 28 °C 30.. LO. La infección secundaria se provoca cuando las esporas producidas en las plantas. BI O. infectadas se diseminan a otras plantas a través del aire y precipitaciones. Esta enfermedad es importante en climas áridos al utilizarse riego por aspersión. 31. AS. Alternaria tenuis, es causante de manchas en hojas y frutos, que se caracteriza por. CI. depresiones, de ovales a circulares, lesiones que eventualmente llegan a tornarse de color. EN. negro. Las lesiones solo aparecen en la superficie el fruto y no se extienden hacia la parte. CI. de la pulpa. Sin embargo, las lesiones de varias zonas infectadas pueden coalescer y 32, 33, 41. .. DE. extenderse, pero muy rara vez cubrir por completo la superficie del fruto. La Agricultura Orgánica considera un manejo contra las enfermedades causadas. CA. por fitopatógeno con el fin el generar un sistema equilibrado en el medio ambiente.. TE. Lo que hacen necesario un manejo racional, por lo que se considera diversas alternativas,. IO. entre ellas, el uso de los extractos naturales 42. Los extractos de plantas constan de una. BL. combinación de elementos activos producto del metabolismo vegetal 34, 36, 47, 48.. BI. Todo el conjunto de sustancias del vegetal forman un todo; la gran cantidad de. sustancias químicas que contiene, interacciona de modo sinérgico, es decir, dan como resultado, efectos superiores al efecto de los mismos elementos por separado. Las sustancias coadyuvantes, contenidas en menor proporción y sólo aparentemente. 4 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(23) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. superfluas, hacen posible el desarrollo óptimo de la sustancia principal o principio activo, al fomentar su absorción, acelerar y reforzar de esta manera el efecto antifúngico. 21,22. .. Existen muchos trabajos publicados sobre el aislamiento de sustancias bioactivas. AS. de las hojas y flores de girasol, pero en la mayoría se utilizan métodos de extracción con. IC. disolventes convencionales 21,25, 26.. G. Estudios antifúngicos realizados con extractos de metanol utilizando flores y hojas. LO. se han demostrado actividades inhibidoras significativas, principalmente contra el hongo. BI O. patógeno Sclerotinia sclerotiorumn13.. De igual manera estudios realizados han descrito la importancia que tiene esta. AS. especie Helianthus annuus L. “girasol” ya que es un potente fungicida gracias a los. CI. principios activos que están presentes en sus flores y hojas, esta planta se podría utilizar. EN. en extractos para prevenir y controlar las plagas agrícolas causadas por los fitopatógenos. CI. que ocasionan grandes pérdidas económicas en los cultivos; siendo un producto natural y. DE. una tecnología limpia, no causaría ningún impacto sobre el medio ambiente como los productos químicos que son nocivos 12.. CA. Teniendo en cuenta los antecedentes se realizó la presente investigación, que tiene. TE. como objetivo determinar el Efecto antifúngico in vitro del extracto etanólico de flores. IO. de Helianthus annuus L. “girasol” en concentraciones de 0% (Control); 5%; 8% y 10%. BI. BL. sobre el crecimiento de Alternaria tenuis N.. 5 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(24) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. II. MATERIAL Y MÉTODOS El presente trabajo se realizó en el Laboratorio de Biotecnología e Ingeniería Genética de. AS. la Escuela de Microbiología y Parasitología, de la Facultad de Ciencias Biológicas, de la. IC. Universidad Nacional de Trujillo.. G. A. Recolección del material biológico:. LO. Las flores de Helianthus annuus L. "girasol" fueron recolectadas en el Valle de Moche,. BI O. Departamento La Libertad durante los meses de enero y febrero. Las muestras obtenidas correspondían a plantas en estado de madurez, la cual fue determinada con el N° 59808. AS. en el Herbarium Truxillense (HUT).. CI. El hongo fitopatógeno Alternaria tenuis N., se aisló de frutos post cosecha de. EN. Lycopersicum esculentum “tomate” con signos de ataque por el fitopatógeno,. CI. recolectadas del mercado Mayorista, Departamento de La Libertad.. DE. B. Preparación de la muestra:. B.1 Selección de la muestra: Se obtuvo una muestra de 300 g de flores liguladas y. CA. tubulosas de Helianthus annuus L. “girasol”, previamente seleccionadas, las cuales. TE. fueron lavadas con agua destilada estéril y secadas a temperatura ambiente,. IO. posteriormente llevadas a la estufa a 27°C por 24 horas, para luego proceder con su. BL. pulverización12 (Anexo 1).. BI. C. Preparación del extracto etanólico de las flores de Helianthus annuus L. “girasol” C.1 Procedimiento de maceración: Se colocaron 300 g de flores en un disolvente. de extracción (alcohol 96%) por espacio de 5 días (Anexo 2), en dicho intervalo de tiempo se realizó movimientos continuos de rotación a los recipientes. El macerado obtenido fue 6 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(25) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. filtrado y dejado a temperatura ambiente por 24 horas, hasta eliminar el solvente orgánico. Una vez obtenido el extracto seco se colocó en un frasco de penicilina previamente esterilizado (Anexo 5).. AS. D. Obtención del hongo fitopatógeno Alternaria tenuis N.. IC. Se preparó el medio de cultivo agar Sabouraud y se llevó al autoclave para su. G. esterilización. Una vez obtenido el medio estéril se dejó que baje la temperatura a 35 °C. LO. aproximadamente, para luego agregar el antibiótico Cefalexina, luego se dispensó 10 ml.. BI O. en las placas Petri (Anexo7). Con un bisturí se cortaron bloques de 1cm2 de Lycopersicum esculentum “tomate” (con signos de ataque del fitopatógeno) y se colocó en una placa. AS. estéril (Anexo 9); se realizó el lavado y desinfección de los bloques con lejía al 2% por. CI. 20 segundos. (Anexo 10), luego se enjuago 5 veces con agua destilada estéril (Anexo 11).. EN. Una vez lavada, con una pinza estéril se tomó el bloque de tomate y se inoculó en la placa. CI. Petri conteniendo agar Sabouraud, colocándose 4 bloques por placa Petri (Anexo 13).. DE. D.1 Obtención del cultivo monospórico: Se incubó los inóculos (los 4 bloques por placa Petri) a temperatura ambiente por 48 horas, posteriormente se observó al. CA. microscopio las esporas germinadas y se determinó la especie con las claves taxonómicas.. TE. La especie identificada correspondió a Alternaría tenuis N. (Anexo 17), y con ayuda de. IO. una aza bacteriológica se tomó un inóculo que fue transferido a tubos de vidrio con medio. BL. agar Sabouraud, la cual se dejó a temperatura ambiente durante 48 horas (Anexo 18).. BI. E. Elaboración de medio de cultivo y tratamientos Se preparó el medio cultivo agar Sabouraud en 4 matraces Erlenmeyer de 50ml., y se procedió a colocarlo en la autoclave para su esterilización (Anexo 20). Estando aún tibio el medio (35°C aproximadamente) se añadió el extracto etanólico de flores de Helianthus annuus L. “girasol” (Anexo 21), bajo un diseño completamente al azar (DECA) con 3 7. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(26) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. tratamientos más control y 5 repeticiones para cada tratamiento (Anexo 24). Se utilizó las concentraciones de 0% (Control), 5%, 8%, 10%, luego se procedió a dispensar en las placas Petri, aproximadamente 10ml en cada una de ellas 12.. AS. F. Siembra y evaluación. IC. F.1 Siembra de Alternaría tenuis N.: A partir del cultivo monospórico de Alternaria. G. tenuis N., se realizó la siembra con los tratamientos de: 0% (Control), 5%, 8% y 10% del. 37,42. . Todo este proceso se ejecutó bajo. AS. condiciones estrictamente asépticas (Anexo 25).. BI O. temperatura 30°C ±2 por un periodo de 5 días. LO. extracto etanólico de flores de Helianthus annuus L. “girasol”, incubadas a una. F.2 Evaluación: A partir del día 1, se empezó a medir el diámetro (cm) del. EN. CI. crecimiento miceliar de Alternaría tenuis N., en todas las placas durante los 5 días, para. DE. placa control (Anexo 29).. CI. determinar que tratamiento tuvo mayor efecto antifúngico tomando como referencia la. G. Prueba Estadística:. CA. Para determinar el porcentaje de inhibición se usó la fórmula propuesta por Vicent (1947):. TE. I % = C-T/C X 100; donde I es el porcentaje de inhibición, C es el diámetro del micelio. IO. en la placa Petri de control y T es el diámetro del micelio en la placa Petri de los. BL. tratamientos. Asimismo se realizó el análisis estadístico completamente aleatorizado,. BI. usando el programa estadístico STAGRAPHICS Centurión, para realizar el análisis de varianza (ANAVA) y la prueba de Tukey para determinar si existen diferencias estadísticamente significativas entre los tratamientos.. 8 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(27) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. III.. RESULTADOS. En la Tabla 1. Se muestra las medidas del diámetro (cm) de crecimiento miceliar (CDM) de Alternaria tenuis N., en los tratamientos de: 0% (Control), 5%, 8% y 10% del extracto. AS. etanólico de flores de Helianthus annuus L. “girasol”, observándose que en el tratamiento. IC. del 10%, el crecimiento del diámetro miceliar promedio disminuyo con respecto al. G. control.. LO. En la Tabla 2. Se muestra los Promedios y Desviación estándar del diámetro (cm) de. BI O. crecimiento miceliar (CDM) de Alternaria tenuis N., en los tratamientos de: 0% (Control), 5%, 8% y 10% del extracto etanólico de flores de Helianthus annuus L.. AS. “girasol”, en diferentes días de evaluación.. CI. En la Tabla 3. Se muestra el Porcentaje de Inhibición del crecimiento del diámetro. EN. miceliar (CDM) promedio de Alternaria tenuis N., en las concentraciones de 0% (Control), 5%, 8% y 10% del extracto etanólico de flores de Helianthus annus L. “girasol”. CI. al día 5 de evaluación respectivamente.. DE. En la Fig. 1. Se muestra los valores promedios del crecimiento del diámetro miceliar (CDM) de Alternaria tenuis N., en los tratamientos de: 0% (Control), 5%, 8% y 10% del. CA. extracto etanólico de flores de Helianthus annuus L. “girasol”, observándose que en el. TE. tratamiento del 10%, el crecimiento del diámetro miceliar promedio disminuyo con. IO. respecto al control. Así también, en las pruebas estadísticas de análisis de varianza y. BL. Tukey demuestran que existen diferencias significativas entre los tratamientos, con un. BI. nivel de confianza del 95%. En la Fig. 2. Se observa el efecto del extracto etanólico de flores de Helianthus annuus L. “girasol” sobre el porcentaje de inhibición del CDM promedio de Alternaria tenuis N. en las concentraciones de: 0% (Control), 5%, 8% y 10%, en donde la. concentración del 10% obtuvo un porcentaje de inhibición del 76.2% (Anexo 31). 9 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(28) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Tabla 1. Medidas del diámetro (cm) de crecimiento miceliar de Alternaría tenuis N., frente al extracto etanólico en diferentes concentraciones a partir de flores de Helianthus annuus L. “girasol” a diferentes días de evaluación. Diámetro ( cm). TIEMPO T1 (0%). 0.6. 0.4. 0.9. 0.7. 0.3. 0.9. 0.6. 1.0. 0.5. 1.1. 0.6. 1.8. G. 0.2. 0.1. 1.0. 0.9. 0.6. 2.0. 1.2. 0.9. 0.6. 2.0. 1.2. 0.8. 0.5. 1.0. 0.2. 1.1. 0.7. 0.2. BI O. 0.4. 0.9. 3.1. 2.0. 1.7. 1.5. 3.0. 1.9. 1.8. 1.0. 2.9. 1.8. 1.5. 1.2. 3.0. 2.3. 1.6. 0.4. 2.8. 2.1. 2.0. 0.4. 4.2. 2.8. 2.6. 1.8. 4.0. 2.7. 2.2. 1.9. 4.3. 2.9. 2.3. 1.8. 4.4. 3.2. 2.4. 0.6. 4.2. 3.0. 2.1. 0.7. 5.6. 4.0. 3.0. 2.7. 5.4. 4.2. 2.9. 2.6. 5.6. 3.9. 3.2. 2.9. 5.6. 4.0. 3.0. 1.0. 5.5. 3.8. 2.8. 1.2. 5,54. 3,98. 2,98. 2,08. EN. CI DE. CA. TE IO BL BI. Día 5. 0.2. 0.1. 1.8. Día 4. 0.4. 0.2. 0.3. 1.9. Día 3. IC. 1.0. T4 (10%). AS. Día 2. T3 (8%). CI. Día 1. T2 (5%). LO. (repeticiones). AS. TRATAMIENTO. T1: Tratamiento control T2: Tratamiento del 5% de extracto etanólico de flores de Helianthus annus L. T3: Tratamiento del 8% de extracto etanólico de flores de Helianthus annus L. T4: Tratamiento del 10% de extracto etanólico de flores de Helianthus annus L.. 10 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(29) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Tabla 2. Promedio y desviación estándar del crecimiento miceliar de Alternaría tenuis N., frente al extracto etanólico de Helianthus annus L. en las concentraciones de. AS. 0% (control), 5%, 8% y 10%, a los diferentes días de evaluación.. T. 0,98. 0,6. 0,084. 0,071. 1,9. 1,1. 0,1 2,96. 0,055. 0,055. 0,84. 0,42. 0,1. 0,089. 0,205. 2,02. 1,72. 0,9. 0,192. 0,192. 0,49. 2,92. 2,32. 1,36. 0,148. 0,192. 0,192. 0,650. 5,54. 3,98. 2,98. 2,08. 0,148. 0,148. 0,904. 0,114 4,22. S : Promedio. 0,089. BI O. CA. S: Desviación estándar. DE. Día 5. CI. Día 4 S. CI. Día 3 S. 0,36. AS. Día 2 S. T4 (10%). 0,16. Día 1 S. T3 (8%). G. T2 (5%). LO. T1 (0%). EN. R. IC. Diámetro ( cm). TE. Tabla 3. Porcentaje de Inhibición del crecimiento del diámetro miceliar (CDM) promedio de Alternaria tenuis N., en las concentraciones de 0% (Control), 5%,. IO. 8% y 10% del extracto etanólico de flores de Helianthus annus L. “girasol” a los. BL. 5 días de evaluación respectivamente.. BI. Hongo. % de Inhibición del CDM. Fitopatógeno. 0%. 5%. 8%. 10%. Alternaria tenuis N.. 0. 15.2. 39.4. 76.2. 11 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(30) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 6. AS. 5,54. IC. 4,22 3,98. 2,92 2,32. 2. 2,08. 2,02 1,72. 1,9. 1. 0,98 0,6 0,36 0,16. 0,42. Día1 12. Día2 24. Tratamiento t1(0%) Tratamiento t2(5%) Tratamiento t3(8%) Tratamiento t4(10%). AS. 1,36 1,1 0,84. 2,98. BI O. 2,96 3. LO. G. 4. 0,9. CI. Diametro de crecimiento (cm). 5. EN. 0. Día3 36. Día4 48. Día5 60. DE. CI. Días de evaluación. Fig. 1. Comparación del diámetro (cm) de crecimiento miceliar promedio de Alternaría. CA. tenuis N., sembrada en medio agar Sabouraud a diferentes concentraciones: 0% (control), 5%, 8% y 10% del extracto etanólico a partir de flores de Helianthus annuus L. “girasol”. BI. BL. IO. TE. en diferentes días de evaluación.. 12 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(31) IC. AS. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. G. 60. BI O. 39,4. 40 15,2 20. 0. 0 5%. 8%. 0% 5% 8% 10%. 10%. CI. 0%. LO. 80. AS. % de Inhibición del CDM. 76,2. EN. Tratamientos. CI. Hongo Fitopatógeno Tratamientos. DE. Fig. 2. Porcentaje promedio de inhibición del crecimiento de Alternaria tenuis N. en diferentes concentraciones del extracto etanólico de flores de Helianthus annuus L.. BI. BL. IO. TE. CA. “girasol” a los 5 días de evaluación.. 13 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(32) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. IV.. DISCUSIÓN. Los resultados obtenidos mostraron, que el efecto del extracto etanólico de flores de Helianthus annuus L. “girasol” a concentraciones 0% (Control), 5%, 8% y 10% sobre el. AS. crecimiento del diámetro miceliar de Alternaría tenuis N., presentó actividad antifúngica. IC. (Tabla 1); apreciándose en la concentración del 10% un porcentaje de inhibición del. G. 76.2 % en el crecimiento del diámetro miceliar de Alternaría tenuis N. (Fig. 2).. LO. Esto podría deberse a los principios activos que se encuentra presente en dicho extracto,. BI O. tal como lo describen algunos autores, que en las flores y hojas de girasol han identificado metabolitos secundarios tales como: fenoles, cumarinas, flavanoides y terpenoides los . Según Lock de Ugas, demuestra. propiedades antifúngicas, antibacterial cuyo. CI. que los fenoles y flavonoides tienen. 13, 14, 15, 16,17. AS. cuales presentan propiedades antifungicos. EN. contenido provoca lesiones en la membrana citoplasmática, ocasionando una disfunción. CI. en composición interna de la célula 39.. DE. Según la Tabla 2 y Fig. 1, se da a conocer los promedios del diámetro de crecimiento miceliar de Alternaría tenuis N., frente al extracto etanólico de Helianthus annuus L.. CA. “girasol” en diferentes tiempos de evaluación; observándose que el tratamiento 4 (10%). TE. tiene mayor efecto en inhibir el diámetro (cm) de crecimiento miceliar, obteniéndose las. IO. siguientes medidas: al día 1, 0.16 cm, al día 2, 0.42, al día 3, 0.9, al día 4, 1.36 y al día 5,. BL. 2.08. Los resultados de esta investigación concuerdan con otras investigaciones y se confirma que ha mayor concentración del extracto etanólico de Helianthus annuus L.. BI. “girasol”, menor es la velocidad de crecimiento de Alternaría tenuis N.; debido a que en las flores y hojas la concentración de metabolitos secundarios es mayor, según Bermúdez 38.. 14 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(33) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Estudios realizados han reportado que los extractos de flores y hojas de girasol depende mucho de la edad que tengan, mientras más jóvenes mayor es el efecto 14,18. Según los análisis de Tukey el efecto del extracto etanólico de Helianthus annuus L.. AS. “girasol”, sobre el crecimiento de Alternaría tenuis N., se observa que hay diferencia. IC. significativa en los tratamientos 5%, 8%, 10% con respecto al control, lo cual significa. G. que se podría utilizar cualquiera de las concentraciones de dicho extracto, siendo la más. LO. indicada la de mayor concentración.. BI O. En estudios realizados, evaluaron la actividad antimicrobiana de Helianthus annuus L. tanto del ácido kaurenoico como del traquilobánico sobre cepas bacterianas. AS. (Staphylococcus aureus, E. coli, etc.) y sobre cepas fúngicas (Candida albicans). 50. . Así también el girasol produce terpenoides antifungicos, los acidos. EN. bacteriana. CI. encontrándose que ambos ácidos poseían equivalente potencia contra la cepa. CI. kaurenoico y angeloylgrandiflorico, ambos inhibitorios del crecimiento de las hifas de. DE. verticillium dahliae y de Sclerotinium sclerotium 52. Puentes et al., demostraron la actividad inhibitoria de especies vegetales como Helianthus. CA. annuus L. (girasol), Polyscia guilfoyleyBailey (aralia), Parthenium hysterophorus L.. TE. (escoba amarga), y Muralla paniculata L. (muralla) sobre el crecimiento y desarrollo de. IO. especies de hongos como Fusarium oxysporum Slecht. y Rhizoctonia solani Kühn entre. BL. otros, probados en condiciones de laboratorio 51.. BI. En otros trabajos de Helianthus annuus L. (girasol) contra el hongo Sporothrix shenckii, se determinó que hubo una significativa actividad antifúngica del extracto metanólico de flores, en concentraciones mínimas inhibitorias que van desde 3.59 mg/ml hasta 14.48 mg/ml y concentraciones fungicidas mínimas que varían entre 7.19 mg/ml hasta 57.5. 15 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(34) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. mg/ml, con el fin de determinar los marcadores que permitan la identificación genotipos de resistencia frente a ese patógeno la cual produce micosis en humanos35. Respecto al extracto, sus propiedades fungicidas tienen efectos mutuamente sinérgicos. AS. entre los diferentes compuestos químicos que contiene el extracto, la cual es una mezcla. IC. de numerosas moléculas complejas y que existe la posibilidad de que sus efectos. G. biológicos sean el resultado de un sinergismo de todos los compuestos o que solo reflejen. BI O. LO. los de las principales moléculas que presentan mayor porcentaje del vegetal 36. La presencia de metabolitos secundarios sin ser esenciales para la supervivencia de. su entorno ecológico. AS. células individuales, tienen un papel importante en la vida y supervivencia de la planta en 48. . Según Montes, los extractos vegetales y aceites esenciales de. CI. cada planta pueden tener hasta más de sesenta componentes y de ellos puede haber varios. EN. con propiedades antifúngicas. Generalmente están presentes como mezclas de. CI. compuestos y los patógenos pueden ser afectados diferencialmente por los compuestos. DE. individuales o por las mezclas en determinadas concentraciones y proporciones 49.. CA. Con el presente trabajo podemos demostrar que la especie de Helianthus annuus L. “girasol” tiene propiedades antifúngicas, pero para dicha investigación no se observó una. TE. inhibición total en el diámetro de crecimiento de Alternaria tenuis N., teniendo en. IO. consideración factores como: el estado fenológico del vegetal., la estación en la cual se. BL. realizó la investigación, las concentraciones utilizadas, entre otros. Cabe mencionar que. BI. la aplicación de los extractos vegetales para el control de fitopatógenos puede ser usada como una alternativa en reemplazo de los agroquímicos.. 16 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(35) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. V.. CONCLUSIÓN. En base a los resultados obtenidos en la presente investigación, se concluye que:. AS.  El extracto etanólico de las flores de Helianthus annuus L. “girasol” tiene efecto. IC. antifúngico a concentraciones de 5%. 8% y 10% sobre el crecimiento de Alternaria. LO. G. tenuis N., en condiciones de laboratorio.. BI O.  El efecto antifúngico in vitro del extracto etanólico de Helianthus annuus L. “girasol” fue mayor en la concentración del 10%, produciendo un porcentaje de. BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI. EN. CI. AS. inhibición de 76.2% en el crecimiento miceliar de Alternaría tenuis N.. 17 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(36) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. VI.. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS. 1. Garrido V., H. Yasmine 2003. Efecto Antimicrobiano de la Caesalpinea spinosa. IC. Bachiller]. Lima: Univ. San Martín de Porres. Facultad de Odontología.. AS. (TARA) y tetraciclina frente Actinobacillus actinomycetemcomitans. [Tesis. 2. Liu H., L. Lengua, G. León, C. La torre, J. Huapaya, J. Chauca 2002. Evaluación de. G. la Actividad Antibacteriana in vitro de los Extractos de Caesalpinia spinosa “tara” y. LO. Eucalyptus sp. “eucalipto”. Rev Horiz Med. Lima: Univ. San Martín de Porres.. BI O. Facultad de Medicina.2 (1-2):40-44.. 3. Grayer R., H. Jeffrey. 1994. A survery of antifungal compounds from higher plants,. AS. 1982 – 1993. United Kingdom. Phytochemistry. 27(1): 19-42.. CI. 4. Cowan M. 1999. Plant products as antimicrobial agents. Clin. Microbiol. American. EN. Society for Microbiology, EEUU. Rev. 10: 564-582.. CI. 5. Quiroga E., A. Sampietro, M. Vattuone. 2001. Screeninn antifungal activities of selected medicinal plants. Institute of Vegetal Studies, National University of. DE. Tucumán- Argentina. Journal of Ethnopharmacol. 74 (1): 89-96.. CA. 6. Navarro V., A. Gonzalez, M. Fuentes, et al. 2003. Antifungal activities of nine traditional Mexican medicinal plants. National School of Biological Sciences. DF,. TE. Mexico. J Ethnopharmacol. 87 (1): 85 – 88.. IO. 7. Carpinella M., G. Herrero, R. Alonso, et al. 1999. Antifungal activity of Melia. BL. azedarach fruit extract. Center for Applied Chemistry, Univ. Nacional de Cordoba-. BI. Argentina. Fitoterapia 70 (3): 296-298.. 8. Dabur R., H. Singh, A. Chhillar, et al. 2004. Antifungal potential of Indian medicinal plants. Regional Research Institute- India. Fitoterapia. 75 (3-4): 389-391. 9. Grayer R., T. Kokubun. 2003. Plant – fungal interactions: mechanisms of action. United Kingdom. Trends microbial. 11: 272 – 279.. 18 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(37) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 10. Osbourn A. 1996. Preformed Antimicrobial Compounds and Plant Defense against Fungal Attak. The Sainsbury Laboratory United Kingdom. American Society of Plant Physiologists. Plant cell. 8:1821-1831. 11. Montes R., V. Cruz, G. Martínez, G. Sandoval, R. García, S. Zilch, L. Bravo, K.. AS. Bermúdez, T H E Flores, M. Carvajal. 2000. Propiedades antifúngicas en plantas. IC. superiores. Análisis retrospectivo de investigaciones. Rev. México. Fitopatol.18:125-. G. 131.. LO. 12. Malqui C., 2014. Efecto del extracto etanólico de flores y hojas de Helianthus annuus. BI O. L. “girasol” sobre el crecimiento de Fusarium oxysporum S. y Alternaria tenuis N. [Tesis Bachiller]. Trujillo: Univ. Nacional de Trujillo. Facultad de Ciencias. AS. Biológicas.. 13. Prats E., J. Galindo, M. Bazzalo, et al. 2007. Antifungal activity of a new phenolic. CI. compoun from capitulum of a head rot – resistant sunflower genotype. ETSIAM-. EN. University of Córdoba- Spain. J. Chem. Ecol, 33: 2245-2253.. CI. 14. Prast E., M. Bazzalo, León, J. Jorrin, 2003. Acumulation of soluble phenolic compouns in sunflower capitula correlates with resistance to Sclerotinia sclerotiorum.. DE. Plant and Agricultural Biochemistry Research Group. Córdoba- Spain. Ecol, 132:. CA. 321-329.. 15. Prats, E., Rubiales, D. & JorrÍn, J., 2002. Acibenzolar‐. S ‐ methyl‐ induced. TE. resistance to sunflower rust (Puccinia helianthi) is associated with an enhancement of coumarins on foliar surface. Physiological and Molecular Plant Pathology. Córdoba-. BL. IO. Spain, 60(3), pp.155–162. 16. Gutierrez M., A. Parry, M. Tena, J. Jorrín, R. Edwards. 1995. Elicitación abiótica de. BI. fitoalexinas cumarina en girasol. Reino Unido. Fitoquímica. 38: 1185-1191.. 17. Ukiya M., T. Akihisa, K. Yasukawa et al. 2007. Glicósidos de triterpeno de la flor, pétalos de girasol (Helianthus annuus) y su actividad anti inflamatoria. Univ. de Nihon- Japón. J. Nat. Prod. 70:813-816.. 19 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

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