Efecto protector del extracto etanolico de annona muricata sobre la citotoxicidad y genotoxicidad del sorbato de potasio en meristemos radiculares de allium cepa

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(1)Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO. AC IÓ. N. FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS. M UN. IC. ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE CIENCIAS BIOLÓGICAS. IC. A. Y. CO. TESIS PARA OPTAR EL TÍTULO DE BIÓLOGO. RM ÁT. EFECTO PROTECTOR DEL EXTRACTO ETANOLICO DE Annona muricata SOBRE LA CITOTOXICIDAD Y GENOTOXICIDAD DEL SORBATO DE. AUTOR. EM. AS. DE. IN FO. POTASIO EN MERISTEMOS RADICULARES DE Allium cepa. DI. RE CC IO. N. DE. SI. ST. Br. JHAJAIRA MAIGRETH ARAUJO SORIA. ASESOR Dr. JOSÉ ANTONIO SALDAÑA JIMENEZ. TRUJILLO – PERÚ 2012. 1. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(2) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AC IÓ. N. AUTORIDADES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO QUE OTORGAN EL TÍTULO PROFESIONAL DE BIÓLOGO. RECTOR. M UN. CO. VIRRECTOR ACADÉMICO. IC. Dr. Orlando Velásquez Benites. RM ÁT. IC. A. Y. Dra. Vilma Julia Méndez Gil. VICERRECTOR ADMINISTRATIVO. IN FO. Dr. Flor Marlene Luna Victoria Mori. DE. JEFE DE LA OFICINA DE REGISTRO ACADÉMICO. ST. EM. AS. Msc. Roberto Rodríguez Rodríguez. Dr. Hermes Escalante Añorga. RE CC IO. N. DE. SI. DECANO DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS. SECRETARIO DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS. DI. Dr. César Augusto Jara Campos. DIRECTOR DE LA ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE CIENCIAS BIOLÓGICAS Dr. Eloy López Medina. ii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(3) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. M UN. MsC. Miguel Ángel Jaime Chamochumbi. IC. AC IÓ. N. JURADO DICTAMINADOR. IN FO. RM ÁT. IC. A. Y. CO. PRESIDENTE. DE. Dra. Gina Zavaleta Espejo. Dr. José Antonio Saldaña Jiménez VOCAL. DI. RE CC IO. N. DE. SI. ST. EM. AS. SECRETARIA. iii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(4) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. VºBº DEL ASESOR. El que suscribe, profesor asesor de la presente tesis para optar por el Título. AC IÓ. N. Profesional de Biólogo, certifica que ha sido desarrollada de conformidad con los. IC. objetivos propuestos y que el informe ha sido revisado y acoge las observaciones. M UN. y sugerencias alcanzadas.. CO. Por lo tanto autorizo a la Br. Jhajaira Maigreth Araujo Soria a continuar con los. DE. IN FO. RM ÁT. IC. A. Y. trámites correspondientes.. DI. RE CC IO. N. DE. SI. ST. EM. AS. Dr. José Antonio Saldaña Jiménez ASESOR. iv Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(5) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. APROBACIÓN DE TESIS. Los profesores que suscriben, miembros del jurado dictaminador, declaran que. AC IÓ. N. ésta reúne todos los requisitos exigidos, por lo que fue aprobada por. IC. A. Y. CO. M UN. IC. UNANIMIDAD, el 26 de Marzo del año 2012.. RM ÁT. Ms. C. Miguel Ángel Jaime Chamochumbi. Dra. Gina Zavaleta Espejo SECRETARIA. DI. RE CC IO. N. DE. SI. ST. EM. AS. DE. IN FO. PRESIDENTE. Dr. José Antonio Saldaña Jiménez VOCAL. v Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(6) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. N. DEDICATORIA. AC IÓ. A MI MADRE DEYSI, por su amor, paciencia y. IC. apoyo incondicional, que. M UN. me motivan a seguir. CO. luchando para lograr mis. DE. IN FO. RM ÁT. IC. A. Y. metas.. A MIS HERMANAS SHEYLY Y SUNNY, por estar siempre a mi lado y alegrar mis días. AS. con sus risas y. SI. ST. EM. ocurrencias.. DE. A LA FAMILIA. N. SALDAÑA AYAY,. RE CC IO. por acogerme como un miembro más de su. DI. familia y darme su amor y apoyo.. vi Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(7) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. A MI PROFESORA SEHYUN OH, por sus consejos y por. N. hacer que siempre quiera. AC IÓ. dar lo mejor de mí y ser. IC. una mejor persona.. M UN. A SOOHEUNG KIM,. CO. por devolverme la fe, por creer en mí, por estar a mi. amor.. RM ÁT. IC. A. Y. lado apoyándome y por su. por brindarme su apoyo y. ST. EM. AS. en mis sueños.. DE. hacer que vuelva a creer. IN FO. A ALDO DIAZ,. SI. A TODOS MIS AMIGOS. DE. por estar conmigo en las. N. buenas, en las malas y en. RE CC IO. las peores, haciendo que vuelva a sonreír y no me. DI. dé por vencida.. vii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(8) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AGRADECIMIENTO. Mi más profundo y sincero agradecimiento a mi asesor de tesis, el profesor Dr.. N. siempre me brindo su apoyo. AC IÓ. José Antonio Saldaña Jiménez, porque. IC. incondicional, tanto en el desarrollo de esta tesis como a lo largo de mi vida. M UN. universitaria; quiero agradecerle también , por sus escucharme, por su paciencia. CO. y por sus consejos. A la vez, aprovecho esta oportunidad para expresarle mi. EM. AS. DE. IN FO. RM ÁT. IC. A. Y. admiración y respeto.. DI. RE CC IO. N. DE. SI. ST. Jhajaira Maigreth Araujo Soria. viii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(9) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. PRESENTACIÓN. AC IÓ. N. Señores miembros del Jurado Dictaminador:. IC. Dando cumplimiento a lo dispuesto en el reglamento de Grados y Títulos de la. M UN. Facultad de Ciencias Biológicas de la Universidad Nacional de Trujillo, me es. CO. honroso presentar y someter a vuestra consideración y elevado criterio el presente. A. Y. informe de tesis titulado:. RM ÁT. IC. “Efecto protector del extracto etanólico de Annona muricata sobre la. DE. radiculares de Allium cepa”. IN FO. citotoxicidad y genotoxicidad del sorbato de potasio en meristemos. EM. AS. Con el cual pretendo obtener el Título Profesional de Biólogo.. RE CC IO. N. DE. SI. ST. Trujillo, el 26 de Marzo del año 2012.. DI. Br. Jhajaira Maigreth Araujo Soria. ix Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(10) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. INDICE. AUTORIDADES UNIVERSITARIAS…………………………………………...ii. AC IÓ. N. JURADO DICTAMINADOR…………………………………………………....iii. IC. VºBº DEL ASESOR………………………………………………………………iv. M UN. APROBACIÓN DE TESIS………………………………………………………..v. CO. DEDICATORIA………………………………………………………………….vi. Y. AGRADECIMIENTO…………………………………………………………..viii. IC. A. PRESENTACIÓN…...……………………………………………………………ix. RM ÁT. INDICE…………………………………………………………………………....x RESUMEN………………………………………………………………………..xi. AS. DE. IN FO. ABSTRACT……………………………………………………………………...xii. EM. INTRODUCCIÓN………………………………………………………………...1. ST. MATERIALES Y MÉTODOS……………………………………………………6. SI. RESULTADOS…………………………………………………………………..12. DE. DISCUSIÓN……………………………………………………………………..22. RE CC IO. N. CONCLUSIONES……………………………………………………………….27 REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS…………………………………………...28. DI. ANEXOS…………………………………………………………………………36. x Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(11) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. RESUMEN. N. En el presente trabajo se evaluó el efecto protector del extracto etanólico (70º). AC IÓ. seco al 20% de hojas de Annona muricata “guanábana” a concentraciones de 100. IC. mg, 200 mg y 300 mg, frente al daño citotóxico y genotóxico ocasionado por el. M UN. sorbato de potasio (1 g/L), en células meristemáticas de Allium cepa “cebolla”. CO. var. Roja Arequipeña. Para lo cual, se indujo el crecimiento de raicillas de 2 a 3. Y. cm de longitud que luego fueron expuestas al tratamiento respectivo de acuerdo al. IC. A. diseño de investigación establecido. Los resultados obtenidos muestran una mayor. RM ÁT. disminución del índice mitótico en T2 (9.27%) y un mayor incremento del índice. IN FO. profásico (78.75%) así como la formación de puentes anafásicos. Se evidenció un mayor efecto protector del extracto etanólico (70º) seco al 20% de hojas de. DE. Annona muricata “guanábana” a concentración de 100 mg. El análisis de varianza siendo comprobado con la. AS. indicó la existencia de diferencias significativas. ST. EM. prueba de comparación múltiple.. DE. SI. PALABRAS CLAVES: Annona muricata, guanábana, extracto etanólico, Allium. DI. RE CC IO. N. cepa, sorbato de potasio, citotoxicidad, genotoxicidad.. xi Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(12) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. ABSTRACT In this study, was determined the protective effect of ethanolic extract (70°) dry to. AC IÓ. N. 20% of leaves of Annona muricata "soursop" at concentrations of 100 mg, 200. mg and 300 mg, in front of cytotoxic and genotoxic damage caused by potassium. M UN. IC. sorbate (1 g/L) in meristematical cells of Allium cepa "onion" var. Red Arequipeña. For that which, the rootlets growth was induced of 2 to 3 cm length. CO. which were then exposed to the respective treatment according to established. A. Y. research design. The obtained results show a greater decrease in mitotic index in. RM ÁT. IC. T2 (9.27%) and a further increase profásico index (78.75%) and bridging anaphasic. A greater protective effect of ethanol extract (70°) dry to 20% of leaves. IN FO. of Annona muricata "soursop" is evidenced mainly at 100 mg (T6). The variance analysis showed significant differences annong the diferents treatments, that wich. ST. EM. AS. DE. was confirmed by means of the test of comparison of averages.. SI. KEYWORDS: Annona muricata, soursop, ethanolic extract, Allium cepa,. DI. RE CC IO. N. DE. potassium sorbate, cytotoxicity, genotoxicity.. xii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(13) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. INTRODUCCIÓN. N. El sorbato de potasio es una sal que posee un comprobado efecto. 1, 2. Se puede utilizar en. IC. como el conservante ideal de productos alimenticios.. AC IÓ. antimicrobiano y antimicótico, por lo que ha sido adoptado en muchos países. M UN. bebidas, galletas, productos lácteos, conservas, emulsiones cárnicas, vinos,. Y. CO. etc. 3, 4, 5, 6. IC. A. Los sorbatos han sido clasificados por FDA (Food and Drug. RM ÁT. Administration) como GRAS (Generally Recognized as Safe), sigla que le da al producto la patente de "generalmente reconocido como seguro" para la. IN FO. salud7. Sin embargo estudios realizados demuestran que los productos de la. DE. oxidación del sorbato de potasio tienen propiedades mutagénicas y. AS. genotóxicas, lo cual fue demostrado en células de la médula ósea de ratón,. 8, 9,10. En el año 2009 se evaluó el potencial genotóxico de esta sal en. ST. hámster.. EM. células ováricas de hámsters chinos y en células embrionarias de Syrian. DE. SI. linfocitos humanos, los resultados revelaron que el sorbato de potasio. N. incrementó significativamente la frecuencia de aberraciones y rupturas. RE CC IO. cromosómicas, así como una disminución del índice mitótico, alterando de esta manera el ciclo celular. Similares resultados se obtuvieron utilizando. DI. células meristemáticas de Allium cepa. 11, 12. Se sabe que el ciclo celular no siempre termina en la división celular y que su regulación genética condiciona a cada una de las fases que lo conforman.. 1 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(14) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Exige una transcripción y síntesis de proteínas específicas, estas proteínas determinan el inicio del ciclo celular, la replicación, la finalización del período S, el paso de G2 hacia la mitosis y el flujo de cada fase de esta última.. N. De esta manera este ciclo puede ser afectado por sustancias. AC IÓ. 13, 14. IC. antimitóticas, citotóxicas y genotóxicas que alteran su normal desarrollo e. M UN. inducen la aparición de figuras mitóticas anormales como puentes anafásicos. Y. CO. y daños a nivel cromosómico. 12, 15, 16, 17. IC. A. Las aberraciones cromosómicas inducidas por agentes químicos son la. RM ÁT. evidencia de una serie de fenómenos ocurridos a nivel citológico. Para que se produzcan tales alteraciones es necesario que el agente deba inducir un daño a. IN FO. nivel del DNA y ésta a su vez debe amplificarse desde el nivel molecular al. DE. nivel microscópico, evidenciándose en alteraciones de tipo estructural en los. AS. cromosomas. Esto puede ocurrir por una replicación incompleta del DNA,. ST. EM. reparación errónea o falta de reparación. 18, 19, 20, 21, 22. SI. Ante esto, existen diversos bioensayos que nos permiten evaluar el riesgo. DE. toxicogénico de una sustancia o una mezcla de sustancias. En 1938 el uso de. RE CC IO. N. A. cepa se introdujo como un sistema de prueba biológico para evaluar los efectos citogenéticos de la colchicina; desde entonces, ha sido un material de. DI. amplio uso en pruebas de laboratorio. 23, 24, 25, 26. ya que debido al crecimiento. rápido de sus raíces y las características de sus células meristemáticas constituye un sistema in vitro ideal para estudiar los mecanismos regulatorios que puedan afectar el ciclo celular.. 27, 28, 29. A. cepa ha sido utilizada para. 2 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(15) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. evaluar el efecto de algunos agentes químicos y físicos, ya que dichos agentes tendrían el potencial de generar un efecto similar en los procesos de división celular de las células eucariotas debido a la universalidad del código genético.. IC. AC IÓ. N. 30, 31,32. M UN. En la actualidad, las industrias alimentarias utilizan una serie de aditivos. CO. que son potencialmente mutagénicos como el sorbato de potasio y que causan. Y. severos daños al patrimonio genético de la población humana y de otras. IC. A. especies. Es por esta razón que es de imperiosa necesidad concientizar a la. RM ÁT. población para que incluya en su dieta el consumo de principios activos naturales con capacidad antioxidante como las presentes en especies vegetales. IN FO. de cultivo tradicional, ya que dichas sustancias disminuirán notablemente la. AS. DE. capacidad de producir algún tipo de daño. 33, 34, 35. EM. Annona muricata, también conocida en nuestro medio como “guanábana”. ST. es un pequeño árbol perteneciente a la familia Annonaceae, género Annona.. SI. Es originaria de las Antillas. En el Perú los centros de producción se. DE. encuentran en Chanchamayo (Junín), Bagua y Jaén.. 36. Los primeros estudios. RE CC IO. N. químicos de esta planta se llevaron a cabo en las décadas del 70 y 80, los cuales condujeron al aislamiento de alcaloides isoquinolínicos en diversos. DI. órganos de la planta. Se ha reportado que A. muricata, posee más de 50 acetogeninas con diferentes actividades biológicas encontradas en frutos, corteza y hojas. 37. 3 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(16) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Las acetogeninas son miembros de una clase de derivados policétidos que se caracterizan por poseer una larga cadena alifática con uno a tres anillos de tetrahidrofurano (THF), los que algunas veces son reemplazados por anillos. 36. Desde la primera acetogenina, uvaricina,. IC. sustituido como grupo terminal.. AC IÓ. N. de epóxido o dobles enlaces, y con un anillo de γ-lactona insaturado metil. M UN. reportada en 1982, la investigación en estos compuestos ha tenido una gran. CO. expansión debido a sus diversas actividades biológicas, incluida la. IC. A. Y. citotóxica.38. RM ÁT. Se ha evaluado la actividad antitumoral de varias acetogeninas de A. muricata contra diversas líneas celulares tumorales in vitro, por ejemplo,. carcinoma pulmonar (A-549),. 41,42. 37,. carcinoma de mama (MCF-7) 42,43 y. DE. 39,40. IN FO. contra células de carcinoma pancreático y prostático (PACA-2 y PC-3),. AS. carcinoma epidermoide (KB). 44 En el año 2002, se publicó el aislamiento de. EM. tres nuevas acetogeninas: muricin H, muricin I y Cis-annomontacin, las. ST. cuales mostraron actividad antitumoral significativa contra dos líneas. SI. celulares de hepatoma humano (Hep2, 2,15 44,45 y HepG2 45,46). Además se ha. DE. evaluado su efecto en el ciclo celular utilizando meristemos radiculares de A.. RE CC IO. N. cepa. 52. DI. Estudios realizados en los años 1998 al 2000 han revelado que las. acetogeninas son inhibores del complejo I de la cadena de fosforilación oxidativa con lo cual bloquean la formación de ATP; energía que necesita la célula cancerosa para poner en funcionamiento su bomba mediada por P-. 4 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(17) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. glucoproteína, que le permite mantenerse activa. La acetogeninas, también inhiben la ubiquinona - ubiquinona oxidasa, enzima dependiente del NADH. AC IÓ. N. que es peculiar en la membrana plasmática de la célula cancerosa. 47, 48. IC. Debido a los antecedentes mencionados anteriormente, acerca de la. M UN. capacidad antioxidante de las acetogeninas presentes en A. muricata, en el. CO. presente trabajo se determinó el efecto protector del extracto etanólico (70º). Y. al 20% de sus hojas a concentraciones de 100 mg, 200 mg y 300 mg frente al. IC. A. daño citotóxico y genotóxico ocasionado por el sorbato de potasio (1 g/L) a. RM ÁT. través de la normalización del ciclo celular y la disminución en la frecuencia. DI. RE CC IO. N. DE. SI. ST. EM. AS. DE. IN FO. de puentes anafásicos (Ap) en meristemos radiculares de A. cepa.. 5 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(18) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. MATERIALES Y MÉTODOS. N. 1. MATERIAL BIOLÓGICO. AC IÓ. 1.1. Bulbos de Allium cepa L. Var. Roja Arequipeña “cebolla”, con un. IC. peso aproximado de 60-80 g cada uno, forma de perilla y. M UN. condiciones fitosanitarias adecuadas. Se compraron 11 kg en el. CO. Mercado Mayorista del distrito de Trujillo.. Y. 1.2. Hojas de Annona muricata “guanábana”, en condiciones. IC. A. fitosanitarias adecuadas (ANEXO1). Procedentes del distrito de. DE. 2. MÉTODOS Y TÉCNICAS. IN FO. provincia de Trujillo.. RM ÁT. Simbal (07º58’21’’ latitud sur y 78º48’36’’ longitud oeste),. AS. 2.1. Recolección de hojas de Annona muricata “guanábana”. EM. Se realizó con un muestreo al azar y representativo de colección de. ST. hojas de todas las partes (inferior, media y superior) del árbol de A.. DE. SI. muricata “guanábana” descartándose las hojas que por acción. DI. RE CC IO. N. mecánica fueron arrancadas o que presentaron daños por animales o deterioro por el agua o viento, de acuerdo a lo propuesto por Hoss. 49. 2.2. Secado y triturado de las hojas de Annona muricata “guanábana” Las hojas se lavaron con agua de caño y se secaron en estufa durante 72 horas a 40 ºC, posteriormente se procedió a triturar las hojas secas. 6 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(19) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. utilizando un molino de mano y un mortero, obteniéndose un polvillo, el cual fue cernido con la ayuda de un colador.. AC IÓ. N. 2.3. Obtención de los extractos etanólicos de Annona muricata. IC. “guanábana”. M UN. Se colocaron 20 g del polvillo de hojas en 100 mL de alcohol de 70º. CO. para su maceración durante una semana, agitándose manualmente. Y. por un tiempo de 2 horas diarias. Después de este tiempo en. IC. A. maceración, se filtró la solución, para luego aforar el volumen a 100. RM ÁT. mL con alcohol de 70º, con lo cual se obtuvo un extracto etanólico de hojas de A. muricata “guanábana” al 20%. A partir de este. IN FO. extracto y en tres repeticiones se tomaron 5 mL en 4 crisoles y se. DE. secó en estufa durante 72 horas a 40 ºC para obtener así el peso. AS. seco promedio, con el cual se determinó la cantidad de extracto seco. EM. presente en 100 mL. Finalmente con este resultado se obtuvo la. ST. cantidad de extracto seco de A. muricata presente en 1mL de. SI. solución alcohólica 70º al 20%, a partir del cual, se prepararon. DI. RE CC IO. N. DE. concentraciones del extracto etanólico de “guanábana” a razón de. 100 mg, 200 mg y 300 mg. (ANEXO 2).. 2.4. Preparación de la solución de sorbato de potasio Se pesó 1g de sorbato de potasio que luego fue colocado en una probeta, se aforó hasta 1 litro con agua potable.. 7 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(20) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 2.5. Obtención de las raicillas de Allium cepa “cebolla” Se utilizaron 10 bulbos de “cebolla” para cada repetición con un peso aproximado de 60 – 80 g cada uno; a cada bulbo, se le quitaron. AC IÓ. N. las catáfilas y raicillas secas. En la parte ecuatorial se introdujeron 3. IC. a 4 mondadientes distribuidos equidistantemente para sostener el. M UN. bulbo en la boca del vaso plástico de 100 mL, el cual previamente se. CO. lleno con 80 mL de agua. Esto hizo posible que el líquido se ponga. Y. en contacto con el disco germinativo para así permitir la emisión de. IC. A. nuevas raicillas, necesarias para la experiencia. Para la aplicación de. RM ÁT. los tratamientos se seleccionaron 3 bulbos de cebolla (para cada tratamiento) teniendo en cuenta que tengan enraizamiento uniforme. DE. IN FO. y un buen número de raicillas (ANEXO 3).. AS. 2.6. Acondicionamiento del material biológico. EM. Las cebollas se mantuvieron a una temperatura ambiente en un. ST. sistema de soporte diseñado especialmente hecho de triplay; se. SI. utilizó un motor de pecera para proporcionar aireación constante a. DI. RE CC IO. N. DE. razón de 10 – 20 mL/min, la renovación del agua contenida en los vasos fue diaria; 48 horas después se seleccionaron aquellos bulbos con más de 15 raicillas cuya longitud promedio sea de 2 a 3 cm, a fin de asegurar la presencia de muestras con cinética en la mitosis (ANEXO 3).. 8 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(21) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 2.7. Diseño experimental Se realizó un diseño en bloques con tres repeticiones para cada. agua. 300 mg. de. de. de. Sorbato. extracto. extracto. extracto. de. etanólico. etanólico. etanólico. potasio. (70º) al. (70º) al. (70º) al. (1 g/L). 20 % de. 20 % de. 20 % de. durante. hojas de. hojas de. hojas de. 16. Annona. Annona. Annona. horas.. IC. muricata muricata muricata durante. durante. durante. 16 horas.. 16 horas.. 16 horas.. 300 mg. de. de. de. extracto. extracto. extracto. etanólico. etanólico. etanólico. (70º) al. (70º) al. (70º) al. 20 % de. 20 % de. 20 % de. hojas de. hojas de. Annona. Annona. AC IÓ. 200 mg. hojas de. Annona. T8. muricata muricata muricata durante. durante. durante. 16 horas.. 16 horas.. 16 horas.. +. +. +. Sorbato. Sorbato. Sorbato. de. de. de. Potasio. Potasio. Potasio. (1 g/L). (1 g/L). (1 g/L). durante. durante. durante. 16 horas. 16 horas. 16 horas. DE. SI. ST. EM. AS. DE. 100 mg. IC. 200 mg. T7. A. 100 mg. T6. M UN. T5. CO. T4. Y. T3. RM ÁT. Solo. T2. IN FO. T1. N. bloque.. DI. RE CC IO. N. Luego de aplicar el extracto etanólico (70º) seco al 20 % de hojas de. A. muricata “guanábana” a diferentes concentraciones (16 horas) y posteriormente someter a las raicillas de A. cepa, a la acción genotóxica del sorbato de potasio (16 horas), se evaluó el índice mtitótico y de fases; así como la presencia o ausencia de puentes anafásicos. Finalmente se realizó las comparaciones estadísticas entre los diferentes tratamientos.. 9 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(22) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 2.8. Obtención de preparados citológicos Finalizado cada uno de los tratamientos, las raicillas fueron disectadas y colocadas en la solución fijadora de Carnoy`s. Luego se. AC IÓ. N. lavó tres veces en agua potable para retirar de esta manera los restos. IC. del fijador y se secaron. Posteriormente se secaron con papel toalla. M UN. para eliminar los restos de agua en la superficie. Por último, éstas. CO. fueron depositadas sobre una luna de reloj para su respectiva. Y. coloración de acuerdo a la técnica rápida de Tjio y Levan50. RM ÁT. IC. A. (ANEXOS 3 y 4).. genotoxicidad. IN FO. 2.9. Análisis citológico para la determinación de la citotoxicidad y la. DE. Los ápices coloreados fueron colocados entre una lámina porta y Los. AS. cubreobjetos para realizar el “squash” (aplastamiento).. EM. preparados citológicos se observaron con un microscopio compuesto. ST. con el objetivo de inmersión (100x). Posteriormente, se procedió a. SI. contar un total de 2000 células meristemáticas por cada uno de los. DI. RE CC IO. N. DE. diferentes tratamientos ensayados¸ lo cual se realizó por triplicado, utilizando la técnica de barrido. Para la evaluación de la citotoxicidad se estimaron los valores del índice mitótico y de fases (ANEXOS 5 y 6), mientras que para la determinación de la genotoxicidad se tomó cuenta el índice de puentes anafásicos (Ap) (ANEXO 7). Los resultados obtenidos fueron expresados en porcentaje (ANEXOS 12-17).. 10 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(23) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 2.10. Análisis estadístico Los datos obtenidos fueron organizados en tablas, gráficos y figuras para realizar la comparación de los diferentes tratamientos ensayados. 52. ; utilizando el. IC. Duncan con una probabilidad de error de 0,05. AC IÓ. N. mediante el análisis de varianza y la prueba de contraste de medias. DI. RE CC IO. N. DE. SI. ST. EM. AS. DE. IN FO. RM ÁT. IC. A. Y. CO. M UN. programa Statgraphics Centurion versión XV para Windows.53. 11 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(24) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. RESULTADOS En el presente trabajo, se determinó el efecto protector del extracto. N. etanólico (70º) seco al 20% de hojas de Annona muricata “guanábana” en. AC IÓ. concentraciones de 100 mg, 200 mg y 300 mg sobre la citotoxicidad y genotoxicidad inducida por el sorbato de potasio a 1 g/L en meristemos. M UN. IC. radiculares de Allium cepa var. Roja Arequipeña, obteniéndose los siguientes. CO. resultados:. En la tabla 1, se observan los promedios de los porcentajes de los índices. A. Y. mitótico y de fases; así como también, de los puentes anafásicos (Ap). La figura 1,. IC. muestra el gráfico de barras del índice mitótico, en el cual se observa una. RM ÁT. disminución del mismo a la concentración de 1 g/L de Sorbato de Potasio.. IN FO. En la figura 2, el gráfico de barras del índice profásico (IP) muestra un incremento notable alcanzando su máximo valor en T2. Las figuras 3, 4 y 5;. DE. muestran los gráficos de barras de los índices metafásico (Imet), anafásico (IA) y telofásico (IT), los cuales disminuyen en relación a los valores encontrados en el. AS. T1; los valores mínimos para dichos índices se encontraron en el T2 existiendo. ST. EM. diferencia estadísticamente significativa respecto a los otros tratamientos.. SI. Las figuras 6 y 7 muestran los efectos genotóxicos del sorbato de potasio a. RE CC IO. N. DE. la concentración de 1 g/L a tarvés de la formación de puentes anafásicos (Ap).. La figura 8 muestra células meristemáticas de A. cepa en distintas fases del. DI. ciclo celular en el tratamiento control negativo.. 12 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(25) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. M UN IC AC IÓ. N. Tabla 1. Promedios de los porcentajes ± Desviación Estándar de los valores obtenidos de los distintos parámetros evaluados en meristemos radiculares de Allium cepa var. Roja Arequipeña expuestos a concentraciones de Sorbato de potasio 1 g/L, extracto Etanólico (70º) seco al 20% de hojas de Annona muricata (100 mg, 200 mg, 300 mg) y al efecto combinado de ambos.*. Índice Telofásico. Puentes Anafásicos (Ap). 28.84 ±0.389915. 0 ±0.0. 4.85 ± 0.438216. 11.17 ±0.827224. 22.41 ±2.50. 9.92 ± 1.16323. 25.70 ± 0.41509. 0 ±0.0. 12.54 ± 0.718401. 9.59 ± 0.275136. 23.43 ±0.704651. 5.01 ±0.25. FO. Parámetro. 10.88 ± 0.115326. 7.43 ± 0.377403. 21.44 ±1.25524. 6.98 ±0.27. 49.79 ± 0.750267. 13.56 ± 0.698642. 9.67 ± 0.775263. 26.98 ±1.07802. 0±0.0. 10.45 ± 1.11692. 55.22 ± 0.688501. 11.12 ± 0.68391. 9.22 ± 0.510523. 24.43±0.497226. 6.84 ±2.43. 9.85 ± 0.76974. 57.29 ± 1.62197. 9.67 ± 0.571664. 8.28 ± 0.130128. 24.76 ±1.18361. 10.09±3.04. Índice Profásico. Índice Metafásico. Índice Anafásico. 13.75 ± 1.01489. 46.09 ± 0.620967. 14.92 ± 0.22942. 10.15 ±0.546291. 9.27 ± 0.404145. 78.75 ± 0.99955. 5.23 ± 0.519711. 12.96 ±0.393234. 50.24 ± 0.856096. 14.14 ± 0.115326. 10.25 ±0.377492. 54.44 ± 1.24925. 9.65 ± 0.409268. 60.24 ± 1.52644. 12.05 ±0.132288. T6 T7 T8. RM. IN. T5. DE. T4. AS. T3. EM. T2. * Leyenda : Tratamientos:. SI. T1: Control Negativo, solamente agua potable 16 horas de exposición.. ST. T1. ÁT IC A. Tratamiento. Y. CO. Índice Mitótico. DE. T2: Control Positivo, 1g/L Sorbato de Potasio 16 horas de exposición.. N. T3: 100 mg de Extracto Etanólico al (70º) seco al 20% de hojas de Annona muricata 16 horas de exposición.. IO. T4: 200 mg de Extracto Etanólico al (70º) seco al 20% de hojas de Annona muricata 16 horas de exposición.. RE CC. T5: 300 mg de Extracto Etanólico al (70º) seco al 20% de hojas de Annona muricata 16 horas de exposición. T6: 100 mg de Extracto Etanólico al (70º) seco al 20% de hojas de Annona muricata 16 horas de exposición + 1g/L Sorbato de Potasio 16 horas de exposición.. DI. T7: 200 mg de Extracto Etanólico al (70º) seco al 20% de hojas de Annona muricata 16 horas de exposición + 1g/L Sorbato de Potasio 16 horas de exposición. T8: 300 mg de Extracto Etanólico al (70º) seco al 20% de hojas de Annona muricata 16 horas de exposición + 1g/L Sorbato de Potasio 16 horas de exposición.. 13 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(26) DE. IN FO. RM ÁT. IC. A. Y. CO. M UN. IC. AC IÓ. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DE. SI. ST. EM. AS. Las letras (a-c) representan los 3 grupos estadísticamente homogéneos según el test de comparación múltiple de medias. Los promedios relacionados con la misma letra no presentan diferencias significativas entre ellos para un valor de p<0,05.. DI. RE CC IO. N. Figura 1. Promedio de los porcentajes ± DE del índice mitótico en dddddddd..meristemos radiculares de Allium cepa var. Roja Arequipeña, dddddddd..expuestos a los distintos tratamientos.. 14 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(27) IC. AC IÓ. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AS. DE. IN FO. RM ÁT. IC. A. Y. CO. M UN. ¡. DE. SI. ST. EM. Las letras (a-f) representan los 6 grupos estadísticamente homogéneos según el test de comparación múltiple de medias. Los promedios relacionados con la misma letra no presentan diferencias significativas entre ellos para un valor de p<0,05.. DI. RE CC IO. N. Figura 2. Promedio de los porcentajes ± DE del Índice Profásico en dddddddd..meristemos radiculares de Allium cepa var. Roja Arequipeña, dddddddd..expuestos a los distintos tratamientos.. 15 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(28) DE. IN FO. RM ÁT. IC. A. Y. CO. M UN. IC. AC IÓ. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DE. SI. ST. EM. AS. Las letras (a-f) representan los 6 grupos estadísticamente homogéneos según el test de comparación múltiple de medias. Los promedios relacionados con la misma letra no presentan diferencias significativas entre ellos para un valor de p<0,05.. DI. RE CC IO. N. Figura 3. Promedio de los porcentajes ± DE del Índice Metafásico en dddddddd.meristemos radiculares de Allium cepa var. Roja Arequipeña, dddddddd.expuestos a los distintos tratamientos.. 16 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(29) DE. IN FO. RM ÁT. IC. A. Y. CO. M UN. IC. AC IÓ. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DE. SI. ST. EM. AS. Las letras (a-d) representan los 4 grupos estadísticamente homogéneos según el test de comparación múltiple de medias. Los promedios relacionados con la misma letra no presentan diferencias significativas entre ellos para un valor de p<0,05.. DI. RE CC IO. N. Figura 4. Promedio de los porcentajes ± DE del Índice Anafásico en dddddddd.meristemos radiculares de Allium cepa var. Roja Arequipeña, dddddddd.expuestos a los distintos tratamientos.. 17 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(30) IC. AC IÓ. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AS. DE. IN FO. RM ÁT. IC. A. Y. CO. M UN. f. DE. SI. ST. EM. Las letras (a-f) representan los 6 grupos estadísticamente homogéneos según el test de comparación múltiple de medias. Los promedios relacionados con la misma letra no presentan diferencias significativas entre ellos para un valor de p<0,05.. DI. RE CC IO. N. Figura 5. Promedio de los porcentajes ± DE del Índice Telofásico en dddddddd.meristemos radiculares de Allium cepa var. Roja Arequipeña, dddddddd.expuestos a los distintos tratamientos.. 18 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(31) DE. IN FO. RM ÁT. IC. A. Y. CO. M UN. IC. AC IÓ. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DE. SI. ST. EM. AS. Las letras (a-d) representan los 4 grupos estadísticamente homogéneos según el test de comparación múltiple de medias. Los promedios relacionados con la misma letra no presentan diferencias significativas entre ellos para un valor de p<0,05.. DI. RE CC IO. N. Figura 6. Promedio de los porcentajes ± DE de los Puentes Anafásicos (Ap) dddddddd.en meristemos radiculares de Allium cepa var. Roja Arequipeña, dddddddd.expuestos a los distintos tratamientos.. 19 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(32) DE. IN FO. RM ÁT. IC. A. Y. CO. M UN. IC. AC IÓ. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AS. Figura 7. Células meristemáticas de A. cepa expuestas a sorbato de potasio. DI. RE CC IO. N. DE. SI. ST. EM. ddddddd (1 g/L) durante 16 horas mostrando un puente anafásico a 100x.. 20 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(33) AS. DE. IN FO. RM ÁT. IC. A. Y. CO. M UN. IC. AC IÓ. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. EM. Figura 8. Fases del ciclo celular en células meristemáticas de A. cepa en el ffffffffffffftratamiento control negativo, observadas a 100x. a) Interfase, b). DI. RE CC IO. N. DE. SI. ST. fffffffffffffProfase, c) Metafase, d) Anafase y e) Telofase.. 21 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(34) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DISCUSIÓN. AC IÓ. N. En el análisis de los resultados obtenidos se encontró que los valores del índice mitótico (IM) de los tratamientos disminuyen en relación al control. M UN. IC. negativo (T1) sobre todo en el tratamiento expuesto a sorbato de potasio (1 g/L) en donde alcanzó un valor de 9.27% (Tabla 1, Figura 1); lo cual se debería a que. CO. el sorbato de potasio estaría actuando a nivel del segundo punto de control en el. A. Y. ciclo celular (G2) impidiendo la formación del complejo CdK1-ciclina B llamado. RM ÁT. IC. Factor Promotor de la Mitosis (FPM) que permite el paso a través de este punto hacia el período M, ello traería como consecuencia que las células no transiten. IN FO. normalmente de la fase G2 hacia la mitosis deteniéndose entonces en interfase y consecuentemente disminuyendo el número de células en división.. 55,56. Similares. DE. resultados se obtuvieron en ensayos con linfocitos humanos 11 y en otros trabajos. ST. EM. AS. con células meristemáticas de A. cepa. 12. SI. Respecto al IM de los tratamientos T3, T4 y T5 (Tabla1, Figura1), en los. DE. que solo actuó el extracto etanólico (70º) al 20% de hojas de A. muricata se. RE CC IO. N. obtuvieron valores de 12.96% a 100 mg, 10.25% a 200 mg y 9.65% a 300 mg. Lo cual se debería a que al no existir una sustancia citotóxica o genotóxica (como. DI. lo es el sorbato de potasio), las acetogeninas, sustancias que involucran complejos tetrahidrofuránicos (THF). 39, 41,42. y tetrahidropiránicos (THP). 45,46. actúan como. inhibores del complejo I de la cadena de fosforilación oxidativa con lo cual bloquean la formación de ATP energía que necesita las células para realizar el proceso de división mitótico;. 47. así como también, a un complejo de alcaloides 22. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(35) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. benciltetrahidroisoquinolénico (BTHIQ) y flavonoides que mediante su unión a sistemas enzimáticos muy similares a los involucrados en la cadena respiratoria,. AC IÓ. N. causan una potente inhibición en el transporte electrónico. 40, 48. IC. Sin embargo al evaluar el efecto sucesivo (extracto etanólico 70º seco al 20%. M UN. de hojas de A. muricata + sorbato de potasio), se encontró una recuperación de los. 10.45% a 200 mg y 9.85% a 300 mg. (Tabla 1 y Figura 1);. Y. a 100 mg,. CO. valores de los IM con respecto al tratamiento con solo sorbato de potasio, 12.05%. IC. A. probablemente debido al efecto protector antioxidante de las acetogeninas. normalmente su ciclo celular.. 34,36. RM ÁT. presentes en el extracto etanólico, permitiendo que las células desarrollen El análisis de varianza evidenció la existencia. IN FO. de diferencias significativas, a su vez. la prueba Duncan estableció la. DE. conformación de 3 grupos estadísticamente homogéneos en función a su efecto.. EM. AS. (ANEXO 18). ST. En cuanto al índice profásico (IP) (Tabla 1 y Figura 2), se observó un. SI. incremento del mismo, alcanzado su valor más alto (78.75%) en el tratamiento. DE. con sorbato de potasio. Esto ocurriría debido probablemente a que dicha sustancia. RE CC IO. N. al inactivar la formación del FPM, traería como consecuencia que los procesos de condensación del material genético y de polimerización de microtúbulos para la. DI. formación del huso se vean afectados por lo que las células no transitarían normalmente desde profase hacia metafase.. 14,15. Así se reporta también al evaluar. el efecto de otros extractos vegetales. 18,33 En los tratamientos con solo extracto se obtuvo 50.24% a 100 mg, 54.44% a 200 mg, 60.24% a 300 mg. En los. 23 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(36) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. tratamientos con efecto sucesivo de extracto con sorbato de potasio se obtuvo 49.79% a 100 mg, 55.22% a 200 mg y 57.29% a 300 mg. Estos valores son menores con respecto al IP del T2, por lo cual se evidencia el efecto antimitótico. la prueba Duncan estableció la. IC. de diferencias significativas, a su vez. AC IÓ. N. de las acetogeninas de A. muricata. El análisis de varianza evidenció la existencia. M UN. conformación de 6 grupos estadísticamente homogéneos en función a su efecto.. Y. CO. (ANEXO 19). IC. A. La disminución del índice metafásico (Imet) (Tabla 1 y Figura 3), 5.23% en. RM ÁT. T2, 12.54% en T4, 10.88% en T5, 11.12% en T7 y 9.67% en T8, se debería a la inhibición del FPM, disminuyendo el ensamblaje del huso mitótico y dejando de. IN FO. inducir la polimerización de microtúbulos que se elaboran perpendicularmente al. DE. eje mayor del cromosoma y que se anclan por una de sus extremidades en el 19,23. AS. cinetocoro, logrando solo pasar a metafase un número reducido de células.. EM. Además el Imet disminuye como una consecuencia de la interferencia del ciclo 26,33. El análisis de varianza evidenció la. ST. celular desde el aumento de la profase.. SI. existencia de diferencias significativas, a su vez la prueba Duncan estableció la. DE. conformación de 6 grupos estadísticamente homogéneos en función a su efecto.. RE CC IO. N. (ANEXO 20). DI. La disminución en el IA (Tabla 1 y Figura 4), estaría ocurriendo debido a que. el aumento del número de células en profase generó una disminución en metafase y por ende una disminución en anafase. Por otro lado, ya que el sorbato de potasio actuaría inhibiendo el FPM, el complejo promotor de la anafase (APC). 24 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(37) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. permanecería inactivo no ubiquitinizando al factor inhibidor de la anafase, con lo cual el proceso de segregación de cromátidas hermanas se vería afectado y las células no podrían transitar hacia la anafase. 22,23 El análisis de varianza evidenció. AC IÓ. N. la existencia de diferencias significativas, a su vez la prueba Duncan estableció. IC. la conformación de 4 grupos estadísticamente homogéneos en función a su efecto.. CO. M UN. (ANEXO 21). Y. Además la disminución del IT (Tabla 1 y Figura 5) se originaría por el 26,28. . El análisis de. IC. A. detenimiento del proceso en profase, discutido anteriormente. RM ÁT. varianza evidenció la existencia de diferencias significativas, a su vez la prueba Duncan estableció la conformación de 6 grupos estadísticamente homogéneos en. DE. IN FO. función a su efecto. (ANEXO 22). AS. Por otro lado se encontraron puentes anafásicos (Ap) (Tabla 1, Figuras 6 y 7). EM. en las células expuestas a sorbato 1 g/L (T2, 22.41%), a los extractos etanólicos. ST. (T4, 5.01%; T5, 6.98%) y al efecto sucesivo de ambos a (T7, 6.84%; T8, 10.09%),. SI. esto debería a efectos deletéreos. en los extremos que comprenden el ADN. DE. telomérico, tornando adhesivos a los cromosomas, generando figuras mitóticas. RE CC IO. N. anómalas como puentes anafásicos. Similares resultados obtuvieron otros investigadores al evaluar el efecto del sorbato de sodio12. Sin embargo, en los. DI. tratamientos T3 y T6, el porcentaje de formación de los Ap fue 0%, lo cual es resultado probablemente en primer lugar a que a esa concentración del extracto no se producen efectos deletéreos y en segundo lugar a la acción protectora antioxidante de las acetogeninas. El análisis de varianza evidenció la existencia. 25 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(38) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. de diferencias significativas; a su vez. la prueba Duncan estableció la. conformación de 4 grupos estadísticamente homogéneos en función a su efecto.. DI. RE CC IO. N. DE. SI. ST. EM. AS. DE. IN FO. RM ÁT. IC. A. Y. CO. M UN. IC. AC IÓ. N. (ANEXO 23). 26 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(39) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. CONCLUSIONES La concentración de 100 mg de extracto etanólico (70º) seco al 20% de. M UN. IC. citotóxico y genotóxico ocasionado por el sorbato de potasio 1 g/L. AC IÓ. N. hojas de Annona muricata, evidencia un mayor efecto protector frente al daño. CO. El extracto etanólico (70º) seco al 20% de hojas de Annona muricata a. Y. 200mg y 300mg ocasiona un incremento mayor del índice profásico y una. RM ÁT. IC. A. disminución mayor de los índices mitótico, metafásico, anafásico y telofásico.. El extracto etanólico (70º) seco al 20% de hojas de Annona muricata a. IN FO. 200mg y 300mg genera efectos deletéreos en los extremos teloméricos de los. DI. RE CC IO. N. DE. SI. ST. EM. AS. DE. cromosomas, formando puentes anafásicos.. 27 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(40) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS 1. NOBOA, M. Evaluación de tortillas de papa refrigerada, bajo el efecto de. AC IÓ. N. Sorbato de Potasio como conservante y su influencia en la vida útil. [Tesis Pregrado]. Ecuador. Universidad Nacional de Chimborazo; 2005.. IC. 2. SOFOS, J.N.; Sorbate Food Preservatives; CRC Press, Inc.; Boca Raton;. M UN. USA. 1989.. CO. 3. INDUSTRIAS RAGAR [página de internet]. México. [Citado: Octubre 2011] Disponible en: http:// www.quiminet.com.mx.. A. Y. 4. PONS M., GALOTTO M., SUBIRATS S. Comparison of the steady. RM ÁT. IC. rheological characterization of normal and light mayonnaises.1994. 5. HERRERO R. Generalidades de los conservantes en las formulaciones. IN FO. oftálmicas. Madrid. Rev Arch Soc Esp Oftalmol. 2007; 82 (9). 6. OTINIANO M., TUESTA L., ROBLES H., LUJÁN M., CHÁVEZ M.. DE. Biorremediación de cromo VI de aguas residuales de curtiembres por. AS. Pseudomonas sp. y su efecto sobre el ciclo celular de Allium cepa. Perú.. EM. Rev. Med. Vallejiana. 2007; 4 (1).. ST. 7. GERSCHENSON L., VARELA O., BINSTOCK G. Food Research. SI. Internacional. Argentina. Rev. Centro de Investigaciones Toxicológicas. DE. (Ceitox) de Citefa/Conicet. 2007.. RE CC IO. N. 8. JUNG R., COJOCEL C., MÜLLER W., BÖTTGER, E. LÜCK D. Evaluation of the genotoxic potential of sorbic acid and potassium sorbato.. DI. Rev Fd. Chem. Toxic. 1992; 30(1): 1-7.. 9. MÜNZNER R., GUIGAS C., RENNER H.W. Re-examination of potassium sorbate and sodium sorbate for possible genotoxic potential. Rev Fd. Chem. Toxic. 1990; 28(6): 397-401.. 28 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

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(47) RM ÁT. IC. A. Y. CO. M UN. IC. AC IÓ. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DI. RE CC IO. N. DE. SI. ST. EM. AS. DE. IN FO. ANEXOS. 35 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(48) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AS. DE. IN FO. RM ÁT. IC. A. Y. CO. M UN. IC. AC IÓ. N. ANEXO 1. DI. RE CC IO. N. DE. SI. ST. EM. Figura 9. Hojas de Annona muricata “guanábana”. 36 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..