Efecto del gel de aloe vera “sábila” en la cicatrización de úlceras cutáneas en ratas Holtzman diabéticas

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(1)Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE MEDICINA. IC. IN. A. -U. NT. ESCUELA PROFESIONAL DE MEDICINA. ED. TESIS. DE. M. Efecto del gel de aloe vera “sábila” en la cicatrización de. AD. úlceras cutáneas en ratas Holtzman diabéticas.. FA. CU. LT. PARA OPTAR EL TITULO PROFESIONAL DE: MÉDICO CIRUJANO. AUTOR: Romero Bermúdez, Jam Piere. ASESOR: Huamán Saavedra, Juan Jorge.. TRUJILLO – PERÚ 2018. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(2) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. DEDICATORIA A Dios, por darme la vida y bendecirme con lo más preciado que tengo, mi familia; por mostrarme siempre el camino correcto; por compartir conmigo los momentos más felices de mi vida y también los más tristes; por estar siempre en mi corazón, y nunca dejar que los. NT. temores, dificultades y preocupaciones me superaran.. -U. A mis padres, Alberto y Julia, por su infinito amor; por enseñarme que en la vida nada. A. llega fácil, que las cosas hay que ganárselas con trabajo honrado y mucha dedicación;. IN. porque me enseñaron que nada es imposible cuando das todo de ti; porque, aunque ya no. ED. IC. sea un niño pequeño sigo aprendiendo de ellos; porque siempre serán mi inspiración.. M. A mis hermanos, Estefany y Gianel. A ti hermanita por ser la mejor influencia, porque sin. DE. tu apoyo, compañía y consejo no estaría aquí. A ti hermanito, por llenar de inmensa alegría y felicidad nuestras vidas, porque me motivas a ser mejor cada día.. AD. A mis queridos tíos, porque de cada uno aprendí algo valioso. En especial a Felipe, por ser. LT. un amigo y ejemplo. Donde quiera que estés, confió en que pronto nos reuniremos.. CU. A mis queridos amigos: Gustavo, Héctor, Manuel, Jessica, Alexis, L. Ernesto, L. Jhoel,. FA. Niller, José Carlos, Fernando, José Luis, Arnold, Luis Daga, Jawer, James Rodríguez, Carla, Sofia, Johan & Marthitha; Y los grupos: R’s, F’s, Akatsuki, Acheches, Pastoral y Visión Médica.. LUIZ FELIPE VASQUEZ, SIEMPRE PRESENTE EN NUESTROS ♥. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(3) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. AGRADECIMIENTOS Al Dr. Juan Jorge Huamán Saavedra, por todos los conocimientos impartidos a lo largo de mi formación profesional, y sobre todo por aceptar amablemente ser asesor de mi tesis, así como por el valioso tiempo que dedico a conversar conmigo y a guiarme hasta la. NT. culminación de mi investigación.. IN. A. consecución de trámites concernientes a la investigación.. -U. A la Dra. Elva Mejía Delgado, por su amabilidad y orientación desinteresada en la. IC. A la Dra. Gaby Soto Mayor, porque a lo largo de estos años fue una segunda madre para. ED. todos sus ahijados, por llenarnos de cariño y compartir nuestras alegrías y preocupaciones;. M. porque llenaba con alegría y espíritu deportivo las canchas de nuestra querida facultad.. AD. largo de esta investigación.. DE. A mi hermana, Estefany, por su apoyo técnico, intelectual, y por supuesto económico a l. A mis amigos de la faculta de farmacia y Bioquímica, Arnold y Fiorella, por su ayuda en. LT. la obtención de materiales farmacéuticos, necesarios en la ejecución de este trabajo. Y a. CU. todos aquellos quienes de alguna manera colaboraron en la ejecución del mismo, les estaré. FA. eternamente agradecido.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(4) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. ÍNDICE RESUMEN .......................................................................................................................... 1 ABSTRACT ........................................................................................................................ 2 INTRODUCCIÓN ..................................................................................................... 3. II.. MATERIALES Y MÉTODOS ................................................................................. 7. III.. RESULTADOS ...................................................................................................... 16. IV.. ANALISIS Y DISCUSIÓN .................................................................................... 19. V.. CONCLUSIONES .................................................................................................. 22. VI.. RECOMENDACIONES ........................................................................................ 23. VII.. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS ................................................................... 24. DE. M. ED. IC. IN. A. -U. NT. I.. FA. CU. LT. AD. ANEXOS ........................................................................................................................... 29. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(5) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO. FACULTAD DE MEDICINA. RESUMEN Objetivo: El presente estudio se realizó para investigar el efecto del gel de Aloe vera “sábila” en la cicatrización de úlceras cutáneas en ratas Holtzman diabéticas. Materiales y métodos: Se realizó un estudio experimental, analítico, prospectivo, longitudinal. Se. NT. crearon heridas abiertas de espesor total (2 cm de diámetro) bajo anestesia, en el dorso de las ratas. Se establecieron aleatoriamente dos grupos de trabajo, cada uno con 8. -U. especímenes machos, grupo control (ratas diabéticas sin tratamiento) y grupo experimental. A. (ratas diabéticas tratadas tópicamente con gel de Aloe vera). Se midió el diámetro, área. IN. superficial y porcentaje de contracción de la herida, cada 5 días durante 15 días.. IC. Resultados: Se evidenció que los animales tratados con el gel de Aloe vera mostraron una. ED. mejoría no significativa en el diámetro, área superficial y contracción de la herida en el día. M. 5. Esta mejoría si fue significativa (p<0.05) a los 10 y 15 días. Conclusión: La aplicación. DE. del gel de Aloe vera mejoró la cicatrización de úlceras cutáneas en ratas Holtzman diabéticas.. FA. CU. LT. AD. Palabras clave: Aloe vera, Diabetes mellitus, cicatrización úlceras cutáneas.. 1 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(6) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO. FACULTAD DE MEDICINA. ABSTRACT Objective: The present study was performed to investigate the effect of Aloe vera gel "sábila" on the healing of cutaneous ulcers in diabetic Holtzman rats. Materials and methods: An experimental, analytical, prospective, longitudinal study was carried out.. NT. Open wounds of total thickness (2 cm diameter) were created under anesthesia on the back of the rats. Two working groups were randomly established, each with 8 male specimens,. -U. control group (diabetic rats without treatment) and experimental group (diabetic rats treated. A. topically with Aloe vera gel). The diameter, surface area and percentage of contraction of. IN. the wound was measured every 5 days for 15 days. Results: It was evidenced that the. IC. animals treated with the Aloe vera gel showed a non-significant improvement in the. ED. diameter, surface area and contraction of the wound on day 5. This improvement was. M. significant (p <0.05) at 10 and 15 days. Conclusion: The application of Aloe vera gel. DE. improved the healing of skin ulcers in diabetic Holtzman rats.. FA. CU. LT. AD. Key words: Aloe vera, Diabetes mellitus, wound healing.. 2 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(7) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO. I.. FACULTAD DE MEDICINA. INTRODUCCIÓN. La cicatrización de las heridas es un proceso complejo, regulado por fenómenos celulares y bioquímicos, cuyo objetivo es restablecer la integridad tisular después de una lesión1. Este proceso implica tres fases independientes y relacionadas: la hemostasia e inflamación, la proliferación y la remodelación2. Cada. NT. una de estas fases está regulada por factores de crecimiento, que regulan el. -U. metabolismo, el crecimiento y la diferenciación celular; y otras citocinas como el factor α de necrosis tumoral y la interleucina-1, implicadas en la angiogénesis y en. IN. A. la síntesis de colágeno1,2,3.. IC. Se ha demostrado que la diabetes mellitus (DM) influye sobre muchas de. ED. las respuestas habituales de la cicatrización1. Es así, que el proceso de cicatrización puede verse comprometido por factores extrínsecos del paciente afecto e intrínsecos. M. de la propia herida4. Los factores extrínsecos específicos de la diabetes incluyen. DE. neuropatía, isquemia e infección; y los factores intrínsecos, alteraciones en la producción de factores del crecimiento, una menor actividad de neutrófilos, así. AD. como una menor expresión de la matriz extracelular1,5. Además, la hiperglucemia. LT. mantenida favorece la pérdida de elasticidad del tejido conectivo, disminuye el. CU. número de células madre de la epidermis, desestabiliza las moléculas de adhesión celular y promueve la degradación de la matriz extracelular; lo que deteriora la. FA. proliferación celular, la angiogénesis y la reparación de los tejidos6. Aproximadamente el 20% de los pacientes diabéticos pueden desarrollar. úlceras del pie6, que de no ser tratadas oportunamente se pueden infectar y requerir tiempos de hospitalización más largos, el empleo de productos sofisticados y costosos; o en el peor de los casos la amputación de la extremidad afectada6,7. Aunque varias prácticas clínicas han sido probadas con el fin de mejorar el proceso. 3 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(8) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO. FACULTAD DE MEDICINA. de cicatrización, las opciones de tratamiento son todavía limitadas. Para hacer frente a esta necesidad, importantes esfuerzos se han realizado en la investigación de terapias tradicionales, como tratamientos clínicos alternativos8,9. El Aloe vera (Av) es una planta perenne perteneciente a la familia de las Liliáceas, y la más popular en la cicatrización de las heridas. Aunque, también ha. NT. demostrado propiedades antiinflamatorias, antimicrobianas, antidiabéticas e. -U. hipoglucemiantes8,11. De las hojas frescas de esta planta se obtienen dos productos principales: un jugo amargo amarillo y un gel mucilaginoso claro. El gel de Av es. IN. A. el producto más valioso en el tratamiento de las heridas, está compuesto. IC. principalmente de agua (99,5%), polisacáridos (manosa-6-fosfato, glucomanano),. ED. glicoproteínas, azúcares solubles, saponinas, heteróxidos antracénicos, vitaminas, enzimas, ácidos salicílicos, proteínas y minerales10,11,12. Varios autores13-19 afirman. M. que la actividad biológica del gel de Av en el proceso de cicatrización se debe. DE. principalmente a la manosa-6-fosfato, que se une a receptores presentes sobre la superficie de los fibroblastos, estimulando su proliferación y la síntesis de colágeno.. AD. Los ensayos in vivo, utilizando modelos animales y humanos, confirman los efectos. LT. positivos del Av en el proceso de cicatrización de heridas al aumentar la síntesis y. CU. el grado de reticulación del colágeno, la expresión del factor de crecimiento, la proliferación de fibroblastos, la formación de vasos sanguíneos y la contracción de. FA. la herida14,20,21. Oryan et al.20 en un estudio experimental en 60 ratas Wistar investigaron el. efecto de la aplicación tópica de gel de Av. Las lesiones tratadas con dosis altas del gel mostraron un porcentaje significativamente mayor de contracción de la herida en comparación con las lesiones tratadas con dosis bajas. En general, el tejido cicatrizal disminuyó gradualmente dependiendo del tiempo, de modo que la. 4 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(9) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO. FACULTAD DE MEDICINA. contracción de la herida y la epitelización habían ocurrido mejor y más rápido que en los controles. Asimismo, Tarameshloo et al.21 en un ensayo controlado aleatorizado, compararon la eficacia de la aplicación tópica del gel de Av, crema de hormona tiroidea, y crema de sulfadiazina de plata en el proceso de cicatrización de incisiones suturadas en 36 ratas Wistar. Los resultados mostraron que la. NT. aplicación de AV aumento significativamente el número medio de fibroblastos, las. -U. secciones de los vasos sanguíneos y el espesor del epitelio regenerador luego de cuatro días de la cirugía.. IN. A. Por otro lado, Molazem et al.22 realizaron un ensayo clínico aleatorizado a. IC. doble ciego, en 90 mujeres sometidas a operación cesárea, con el objetivo de. ED. determinar la efectividad del gel fresco de Av en la cicatrización de heridas por cesárea. Los resultados revelaron una diferencia significativa entre el gel de Av y. M. los grupos de control con respecto a la puntuación REEDA después de 24 horas;. DE. sin embargo, no se observó dicha diferencia después de 8 días. No obstante, de acuerdo con los hallazgos de este estudio, la aplicación dérmica de gel de Av no. AD. tiene efectos secundarios y en consecuencia podría ser utilizado como un. LT. tratamiento adyuvante a los tratamientos estándar de la herida por cesárea.. CU. Por lo mencionado, está claro, que se han realizado importantes estudios alrededor del Av, sin embargo, las técnicas de procesamiento del Av empleadas son. FA. complejas y requieren de equipos sofisticados para obtener productos finales de “mejor calidad”, que contienen muy poco o prácticamente ningún ingrediente activo9. Por tanto, surgió la necesidad de evaluar el efecto del gel de Aloe vera “sábila” en la cicatrización de úlceras cutáneas en ratas Holtzman diabéticas; con una técnica de procesamiento del gel menos compleja.. 5 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(10) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO. FACULTAD DE MEDICINA. 1.1. Problema: ¿Cuál es el efecto del gel de Aloe vera “sábila” en la cicatrización de úlceras cutáneas en ratas Holtzman diabéticas?. 1.2. Hipótesis:. NT. La aplicación del gel de Aloe vera “sábila” mejora la cicatrización de úlceras. -U. cutáneas en ratas Holtzman diabéticas.. IN. A. 1.3. Objetivos:. Determinar el efecto del gel de Aloe vera “sábila” en la cicatrización de. ED. -. IC. 1.3.1. Objetivo general:. M. úlceras cutáneas en ratas Holtzman diabéticas.. Medir el diámetro, el área y el porcentaje de contracción de la herida en el. AD. -. DE. 1.3.2. Objetivos específicos:. grupo de ratas Holtzman diabéticas no tratadas con el gel de Aloe vera. Medir el diámetro, el área y el porcentaje de contracción de la herida en el. LT. -. CU. grupo de ratas Holtzman diabéticas tratadas con el gel de Aloe vera.. FA. -. Comparar el diámetro, el área y el porcentaje de contracción de la herida entre el grupo de ratas Holtzman diabéticas tratadas y no tratadas con el gel de Aloe vera.. 6 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(11) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO. II.. FACULTAD DE MEDICINA. MATERIALES Y MÉTODOS. 2.1. MATERIALES 2.1.1. Diseño Estadístico de la muestra Unidad de análisis. NT. Rattus norvegicus cepa Holtzman macho, adultas, 200-250 g de peso,. -U. certificado para experimento por el Instituto nacional de Salud.. IN. A. Tamaño muestral:. IC. El tamaño de la muestra se obtendrá mediante la fórmula para la determinación de medias de muestras independientes23:. ED. n = (Z∞/2+Zβ)2 δ2/d2. M. Dónde:. n = Tamaño mínimo de la muestra.. . Z∞/2 = 1.96 para α = 0.05. . Zβ = 0.84 para β = 0.20. AD. δ2: Varianza de la variable cuantitativa= 61.4. LT. . DE. . d: Valor mínimo de la diferencia que se desea detectar = 8.24. CU. . FA. Remplazando: n = 7.08 ᵙ 7 ratas.. Muestra ajustada a las perdidas = n (1/1-R) . n= número de ratas sin perdidas (n=7). . R= proporción esperada de pérdidas (R=14.3%). Así, realizando la sustitución da un total de 8 ratas para cada grupo.. 7 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(12) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO. FACULTAD DE MEDICINA. 2.1.2. Criterios de selección: Criterios de inclusión: Espécimen: Rattus norvegicus cepa Holtzman. . Edad: adultas.. . Sexo: Macho. . Peso promedio 200-250 gramos.. . Ratas con niveles de glucosa sérica mayor a 200 mg/dL. -U. NT. . IN. Especímenes a los que se les infecte la herida durante el experimento.. Especímenes que mueran durante el experimento o la aclimatación.. DE. 2.1.3. Material Biológico. M. . ED. Criterios de eliminación:. IC. . A. Criterios de exclusión:. AD. Se trabajó con 16 especímenes machos de Rattus norvegicus cepa Holtzman, adultos y peso entre 200 y 250 gramos, obtenidas en el bioterio del Instituto. LT. Nacional de Salud, Lima (Anexo Nº 01). Los cuales, fueron repartidos. CU. aleatoriamente en 2 grupos de 8 integrantes cada uno (alojadas por separado). FA. y aclimatados durante una semana en el Laboratorio de Microbiología de la Facultad de Medicina de la universidad Nacional de Trujillo, bajo condiciones de temperatura y humedad ambiental, en un ciclo de luz/oscuridad de 12 h. Se proporciono alimento y agua ad libitum, de acuerdo con las normas éticas para el uso y manejo de animales de experimentación24.. 8 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(13) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO. FACULTAD DE MEDICINA. 2.1.4. Material de estudio . Aloe vera “Sábila” como agente cicatrizal, la cual fue certificada por el Herbarium Truxillense (HUT), de la Universidad Nacional de Trujillo. (Anexo N°02) Aloxano se obtuvo de Cayman Chemical (Ann Arbor, EE. UU.), como. NT. . A. -U. agente diabetogénico a dosis de 100 mg/kg peso vivo (p.v.)25.. IC. IN. 2.1.5. Variables y escalas de medición. Por su relación. Por su naturaleza. Escala. Gel de Aloe vera. Independiente. Cualitativo. Nominal. Cuantitativo. Razón. DE. M. ED. VARIABLE. Dependiente. AD. Cicatrización de herida. (Diámetro, Área superficial,. FA. CU. LT. Porcentaje de contracción). 9 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(14) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO. FACULTAD DE MEDICINA. 2.2. MÉTODOS 2. 2.1. Diseño de estudio: Diseño experimental, analítico, prospectivo, longitudinal.. DE. M. ED. IC. IN. A. -U. NT. 2. 2.2. Esquema del diseño de estudio:. 2. 2.3. MODELO ANIMAL DE DIABETES EXPERIMENTAL. AD. Se administró Aloxano vía intraperitoneal (IP) a 24 ratas normoglicémicas,. LT. en dosis de 100 mg/kg p.v. disuelto en agua destilada, con un periodo de. CU. ayuno de 12 horas previas a la inducción de DM. Los niveles de glucosa se midieron a las 24 horas, y se incluyeron en el estudio solamente a las ratas. FA. con niveles de glucosa sérica mayor a 200 mg/dL25,26 (Fig. I). Luego, las ratas se mantuvieron en observación durante 40 días para permitir el completo desarrollo de la patología y se comprobó su estabilidad, con. controles semanales de glucosa sérica27.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons10 Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(15) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO. FACULTAD DE MEDICINA. Determinación de glucosa en sangre de ratas Los niveles de glucosa sérica en las ratas fueron determinadas usando un glucómetro digital y tiras reactivas Accu-Chek Active de laboratorios Roche. Las muestras de sangre se obtuvieron al hacer una pequeña incisión en el ápice de la cola hasta obtener una gota homogénea, que se aplicó. NT. directamente sobre la tira reactiva del glucómetro (Fig. I E). Los valores. -U. obtenidos del glucómetro fueron expresados en mg/dL26,28. (Anexo N°04). IN. A. 2. 2.4. MODELO DE HERIDA. IC. La herida se creó el día cero en todas las ratas; pero primero estas fueron. ED. anestesiadas con Ket-A-Xyl® vía IP en dosis de 0.5 ml/kg p.v. Luego se afeitó el pelo del dorso de cada rata, se esterilizó la herida con alcohol al. M. 70%, y se realizó la escisión, disección y extracción de una región circular. AD. DE. de piel de espesor completo, de 2 cm de diámetro29 (Fig. II L, M, N).. LT. 2. 2.5. PROTOCOLO EXPERIMENTAL Posterior a la injuria, los especímenes se dividieron aleatoriamente en dos. CU. grupos de 8 integrantes cada uno; grupo control (GC): ratas diabéticas no. FA. tratadas tópicamente con gel de Av; y grupo experimental (GE): ratas diabéticas tratadas tópicamente con gel de Av.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons11 Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(16) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO. FACULTAD DE MEDICINA. DE. M. ED. IC. IN. A. -U. NT. A. C. FA. CU. LT. AD. B. D. E. Fig. I. (A, B, C, D, E) Metodología de la experimentación. A. Muestra de ratas cepa Holtzman. B. Aloxano, pesado en la microbalanza. C. Preparación de la solución Aloxano en agua destilada D. Inyección intraperitoneal de la solución de Aloxano. E. Toma de glicemias de ratas con Hemoglucotest, 24 h post inducción de DM con Aloxano.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons12 Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(17) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO. FACULTAD DE MEDICINA. Preparación y administración del gel de Aloe vera En nuestro estudio usamos el gel no refinado de Av, que se obtuvo mediante la técnica de fileteado tradicional a mano9,22. Se recolectaron hojas de Av frescas, de tamaño completo; inmediatamente después se procedió a lavar. NT. las hojas con una solución antiséptica, se cortaron las hojas y se extrajo su epidermis con guantes y un cuchillo estéril. Luego, se extrajo el gel de. -U. mucílago dentro de las hojas con guantes estériles (Fig. II F, G, H, I, J, K).. A. Todas las heridas se enjuagaron diariamente con 10 ml de solución salina. IN. estéril. Luego, se aplicó directamente a la herida el gel de Av en el GE y se. IC. cubrió con una gasa seca, diariamente durante 15 días (Fig. II O, Q). las. M. ED. heridas del GC sólo se cubrieron con una gasa seca tras ser enjuagadas.. DE. Medición de las heridas. AD. Se midió la herida de todas las ratas con una regla de papel milimetrado, en. LT. los días posteriores a la injuria (DPI), cada 5 días durante 15 días (Fig. II. CU. P). Esta medición incluyó el diámetro (D), el área superficial (AS) y el porcentaje de contracción (PC) de la herida, mediante las siguientes. FA. ecuaciones20: - AS (%) = (área de la herida en X DPI / área de la herida en 0 DPI) x 100 - PC en X DPI = 100% - porcentaje de área de la herida en X DPI. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons13 Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(18) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. FACULTAD DE MEDICINA. G. H. I. K. M. N. P. Q. FA. CU. LT. L. AD. DE. M. J. ED. IC. IN. A. F. -U. NT. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO. O. Fig. II. Metodología de la investigación. F, G, H, I, J, K) Fileteado tradicional a mano de la hoja de Aloe vera. L, M, N) Realización del defecto excisional. O) Aplicación del gel de Av sobre la herida. P) Medición de la herida con papel milimetrado. Q) Cobertura de las heridas con gasas secas.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons14 Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(19) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO. FACULTAD DE MEDICINA. 2.3. ASPECTOS ÉTICOS El protocolo experimental de este estudio se realizó de acuerdo con la Guía para el cuidado y uso de animales de laboratorio, publicado por el National Health Institute (NIH Publication Nº 85-23, 1996)30; y las normas éticas de. NT. CIOMS24 para el uso y manejo de animales de experimentación.. -U. En el manejo de los animales se tuvo en cuenta el principio de “las tres erres”: reducir, reemplazar y refinar, con la finalidad de generarle el menor. IN. A. sufrimiento posible al animal de experimentación31.. IC. Además, el presente trabajo fue evaluado y aprobado por el comité de ética de. ED. la Facultad de Medicina de la Universidad Nacional de Trujillo (Anexo N°03).. DE. M. 2.4. ANÁLISIS E INTERPRETACIÓN DE LA INFORMACIÓN Se realizó mediante el programa estadístico IBM SPSS® Statistics versión. AD. 23.0 (SPSS Inc, Chicago). Se determinó la normalidad muestral de los grupos. LT. mediante la prueba de Chapiro Wilk para muestras pequeñas (<30. CU. especímenes) y se usó la prueba de “t” de Student para la comparación de los diámetros, áreas y porcentajes de contracción de las úlceras cutáneas entre los. FA. grupos (análisis macroscópico), a intervalos de 5 días durante el experimento. Se consideró una diferencia estadísticamente significativa al valor de p<0,05. (Anexo N°05). Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons15 Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(20) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO. III.. FACULTAD DE MEDICINA. RESULTADOS. De los 24 animales empleados, 9 fueron excluidos del estudio debido a las siguientes razones: muerte durante la inducción de diabetes experimental (5 animales), ausencia de hiperglucemia tras la inducción de diabetes experimental (1 animal), muerte durante la inducción de anestesia (2 animales) y muerte previa a la. NT. finalización del estudio (1 animal).. -U. Después de la administración del gel de Av para evaluar el efecto en la cicatrización de ulceras cutáneas en ratas Holtzman diabéticas, se determinó que, a los 10 y 15. IN. A. días posteriores a la injuria, las heridas del grupo tratado con el gel de Av redujeron. IC. su diámetro significativamente más rápido que los controles no tratados (TABLA 1).. ED. Además, hubo una reducción significativa en el área superficial de las heridas. M. tratadas con el gel de Av en comparación con el grupo control no tratado (TABLA 2).. DE. Tabla 1. Efecto del gel de Aloe vera (sábila) sobre el diámetro (cm) de la. AD. herida en ratas diabéticas en los días posteriores a la injuria. GE (gel de Av). DPI. Promedio. DE. Promedio. DE. Valor - p. CU. LT. GC (NaCl). 1.80. 0.04. 1.79. 0.04. 0.740. Día 10. 1.61. 0.07. 1.51. 0.06. 0.007*. Día 15. 1.49. 0.05. 1.39. 0.04. 0.001*. FA. Día 5. Fuente: Datos obtenidos por el investigador. DPI = Días posteriores a la injuria. DE = Desviación estándar. * Estadísticamente significativo.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons16 Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(21) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO. FACULTAD DE MEDICINA. Tabla 2. Efecto del gel de Aloe vera (sábila) sobre el área superficial (cm2) de la herida en ratas diabéticas en los días posteriores a la injuria. GE (gel de Av). Promedio. DE. Promedio. DE. Día 5. 2.54. 0.10. 2.52. 0.10. Día 10. 2.05. 0.17. 1.78. Día 15. 1.74. 0.11. 1.52. Valor - p 0.739. 0.15. 0.007*. A. -U. DPI. NT. GC (NaCl). 0.001*. IN. 0.10. M. ED. IC. Fuente: Datos obtenidos por el investigador. DPI = Días posteriores a la injuria. DE = Desviación estándar. * Estadísticamente significativo.. DE. En cuanto al porcentaje de contracción de las heridas, el GC (19.20±3.26) y el GE (19.98±3.23) no mostraron una diferencia significativa (p = 6.36), en el día 5. Pero,. AD. a los 10 y 15 DPI, las heridas tratadas con el gel de Av mostraron una velocidad de. LT. contracción mucho mayor y estadísticamente significativa (p <0.05) respecto al. CU. grupo control no tratado. La figura 1 muestra la velocidad de contracción de la. FA. herida expresada en términos del porcentaje promedio de contracción de las heridas. En general, las heridas tratadas con el gel de Av tuvieron mayor tejido de granulación durante el tiempo que se observó su evolución en comparación con el GC. No se infectaron heridas y se produjo una respuesta de curación normal en todas las heridas.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons17 Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(22) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO. FACULTAD DE MEDICINA. Fig. 1. Efecto del gel de Aloe vera (sábila) sobre el porcentaje de contracción de la herida en ratas diabéticas en los días posteriores a la injuria.. 80. 51.66. 43.29. *. -U. 40 19.76 20. **. NT. 60. 44.55. A. 34.75 19.20. IN. CONTRACCIÓN DE LA HERIDA (%). 100. 0. DÍA 10. IC. DÍA 5. ED. GRUPO CONTROL. DÍA 15. GRUPO EXPERIMENTAL. FA. CU. LT. AD. DE. M. Fuente: Datos obtenidos por el investigador. Los datos se dan como promedios. Resultados estadísticamente significativos p<0.05 (*p=0.01 y **p=0.001). Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons18 Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(23) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO. IV.. FACULTAD DE MEDICINA. ANALISIS Y DISCUSIÓN. Al evaluar el efecto del gel de Aloe vera “sábila” en la cicatrización de úlceras cutáneas en ratas Holtzman diabéticas, se evidenció macroscópicamente un patrón de comportamiento similar en las heridas de ambos grupos en los primeros cinco días de estudio, pero hacia el décimo día las heridas tratadas con el gel de Av. NT. mostraron un porcentaje significativamente mayor de contracción en comparación. -U. con las heridas no tratadas; esto se debería a las propiedades fisicoquímicas del gel. IN. celular propia del proceso de cicatrización1,2,3.. A. de Av, que actúa como una cubierta resistente y húmeda que promueve la migración. IC. El Av posee una composición tan compleja que incluso hoy se desconocen. ED. todos los principios a los que se le atribuye sus efectos terapéuticos. Pero más allá. M. de atribuir cada propiedad a un determinado componente del gel de Av, se toma. DE. como válido un mecanismo de acción en la curación de la herida de tipo multifactorial, que incluyen, mantener la herida húmeda, reducir la inflamación,. AD. estimular directamente fibroblastos y macrófagos, aumentar la migración de células. LT. epiteliales y endoteliales que forman los vasos15-20,32. Por lo que como se ve, la actividad cicatrizante favorece directamente a la fase inflamatoria y proliferativa,. CU. que da como resultado una reducción global del tiempo de reepitelización.. FA. Algunos investigadores afirman que, algunas sustancias eficaces del gel de. Av podrían desperdiciarse con el empleo de procesos sofisticados de preparación y. conservación9,33; por ello, en este estudio se empleó el gel de Av fresco obtenido por fileteado tradicional a mano. En contraste, la mayoría de los estudios realizados alrededor del Av se basan en el uso de extractos, hidrogeles, o pomadas de Av obtenidas por un proceso completo e industrializado del Av, mostrando resultados favorables y que se corresponden con los obtenidos en el presente estudio. En. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons19 Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(24) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO. FACULTAD DE MEDICINA. consecuencia, una técnica de procesamiento mal empleada puede influir en las propiedades farmacológicas del gel de Av; sin embargo, consideramos que el empleo del gel de Av obtenido por fileteado tradicional a mano viene favorecida por su aceptación por los usuarios, su accesibilidad, facilidad de aplicación y reducido coste económico-sanitario.. NT. Varios estudios12-22,34,36 han demostrado que el gel de Av mejora la. -U. cicatrización de las heridas tras su administración tópica y/o sistémica, mientras que otros afirman que no hay efecto e incluso provocaría un retraso en la misma. IN. A. (Schmidt & Greenspoon, 1991)35. En este último caso, posiblemente a que el. IC. tratamiento con Av no fue instaurado inmediatamente luego de que se produjese el. ED. cierre de la herida por primera intención después de un parto cesárea o laparotomía para cirugía ginecológica, sino cuando las pacientes tenían complicaciones de la. DE. M. herida que requerían curación por segunda intención. Chithra y col34. estudiaron el efecto cicatrizal del gel de Av liofilizado,. AD. administrados por vía oral o tópica, en un modelo animal de ratas diabéticas;. LT. encontrando que el porcentaje de contracción de la herida fue de 85.6% para el grupo tratado por vía oral, 82.7% para el grupo tratado vía tópica y de 70.7% para. CU. el grupo control no tratado, en el día dieciséis. En comparación, en nuestro estudio. FA. el porcentaje de contracción de la herida fue de 51.66% para el grupo tratado tópicamente con el gel de Av y de 44.55% para el grupo control no tratado, en el día quince. En ambos casos, el gel de Av fue efectivo en la cicatrización de heridas, lo que concuerda con los resultados del presente estudio. Sin embargo, se observa una diferencia considerable en los porcentajes de contracción a pesar de tratarse de heridas de naturaleza y dimensiones similares; esto podría explicarse por el tiempo. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons20 Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(25) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO. FACULTAD DE MEDICINA. que cada estudio le dedico al desarrollo de la patología diabética, que fue de 7 días para el estudio de Chithra y col. y de 40 días para el nuestro. Se sabe que la diabetes mellitus está asociada con una variedad de alteraciones en el metabolismo del tejido conectivo, como resultado de lo cual los diabéticos enfrentan el problema de una mala cicatrización de la herida. La pérdida. NT. de colágeno observada en la diabetes puede deberse a la disminución de los niveles. -U. de síntesis o al aumento del catabolismo del colágeno recién sintetizado o ambos36.. A. Daburkar y col37. estudiaron el efecto del extracto etanólico de Av en ratas. IN. diabéticas, y demostraron que el tamaño de la herida se redujo gradualmente en. IC. animales diabéticos tratados con extracto etanólico de gel de Av (p <0.01) o. ED. aplicación tópica de gel de Av (p <0.01), siendo potenciado este efecto al emplear ambas a la vez; por tanto es muy posible que la curación mejorada de heridas en. M. ratas diabéticas por el gel de Av sea también resultado de su actividad. DE. hipoglucemiante (ya que se ha demostrado que un control sobre los niveles de. AD. glucosa en sangre mejora la cicatrización de heridas en diabéticos) y/o su capacidad para estimular función de fibroblastos durante el proceso de curación38. Sin. LT. embargo, actualmente no existen pruebas de ensayos clínicos de alta calidad que. CU. respalden el uso de agentes tópicos de aloe vera o apósitos de Av como tratamientos. FA. para heridas crónicas en pacientes diabéticos39.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons21 Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(26) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO. V.. FACULTAD DE MEDICINA. CONCLUSIONES.  La aplicación del gel de Aloe vera mejora la cicatrización de úlceras cutáneas en ratas Holtzman diabéticas.. NT.  La aplicación del gel de Aloe vera reduce el diámetro de las úlceras cutáneas en. -U. ratas Holtzman diabéticas.. A.  La aplicación del gel de Aloe vera reduce el área superficial de las úlceras. IN. cutáneas en ratas Holtzman diabéticas.. IC.  La aplicación del gel de Aloe vera aumenta el porcentaje de contracción de las. FA. CU. LT. AD. DE. M. ED. úlceras cutáneas en ratas Holtzman diabéticas.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons22 Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(27) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO. VI.. FACULTAD DE MEDICINA. RECOMENDACIONES. Podemos recomendar y apoyar la aplicación del Aloe vera en heridas menores y superficiales con total seguridad y eficacia. Sin embargo, destacamos la necesidad de más estudios clínicos que amplíen las líneas de investigación sobre su uso en. NT. heridas de mayor complejidad o en la administración del Aloe vera oral, pues la. -U. mayoría de la literatura existente informa sobre sus propiedades botánicas y. FA. CU. LT. AD. DE. M. ED. IC. IN. A. beneficios medicinales, sin indagar en estudios científicos de calidad.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons23 Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(28) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO. VII.. FACULTAD DE MEDICINA. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS. 1. Conway K, Harding K. Cicatrización de las heridas en el pie diabético. En: Sanders L, Frykberg R, editores. El pie diabético. 7a ed. Barcelona: Elsevier; 2008. p. 323-332. 2. Téllez A, Franco V. Fisiología de la reparación de las heridas y dianas. NT. terapéuticas en la cicatrización anormal. Piel. 2016; 32(4): 207-213.. -U. 3. Valencia C. Cicatrización: Proceso de reparación tisular. Aproximaciones terapéuticas. Investigaciones Andina. 2010; 12(20): 85-98.. IN. A. 4. Chaput B, Courtade M, De Bonnecaze G, Eburdery H, Crouzet C, Chavoin J, et. IC. al. Anomalías de la cicatrización. EMC. 2012; 20(3): 1-13.. ED. 5. López L, Lomas A, Quílez R, Huguet I. El pie diabético. Medicine. 2012; 11(17): 1032-1039.. M. 6. Gómez L, Cruz W, Castro S, Muñoz A. Uso de Plasma rico en factores de. DE. crecimiento en el tratamiento de ulceras crónicas de pacientes diabéticos. Piel. 2017; 32(4): 234-241.. AD. 7. Paiva O, Rojas N. Pie diabético: ¿Podemos prevenirlo? Rev. Med. Clin.. LT. CONDES. 2016; 27(2): 227-234.. CU. 8. Pereira R, Bártolo P. Traditional Therapies for Skin Wound Healing. Advances in Wound Care. 2016; 5(5): 208–229.. FA. 9. Ramachandra C, Srinivasa P. Processing of Aloe Vera Leaf Gel: A Review. Am. J. Agril. & Biol. Sci. 2008; 3(2): 502-510.. 10. Domínguez R, Arzate I, Chanona J, Welti J, Alvarado J, Calderón G, et al. El gel de Aloe vera: estructura, composición química, procesamiento, actividad biológica e importancia en la industria farmacéutica y alimentaria. Rev. Mex. Ing. Quím. 2012; 11(1): 23-43.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons24 Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(29) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO. FACULTAD DE MEDICINA. 11. Pazyar N, Yaghoobi R, Rafiee E, Mehrabian A, Feily A. Skin Wound Healing and Phytomedicine: A Review. Skin Pharmacol Physiol. 2014; 27: 303-310. 12. Hashemi S, Madani S, Abediankenari S. The Review on Properties of Aloe Vera in Healing of Cutaneous Wounds. Bio. Med. Res. Int. 2015; 1-6. 13. Davis R, Donato J, Hartman G, Haas R. Anti-inflammatory and wound healing. NT. activity of a growth substance in Aloe vera. JAPMA. 1994; 84(2): 77-81.. -U. 14. Chithra P, Sajithlal G, Chandrakasan G. Influence of Aloe vera on the. IN. Ethnopharmacology. 1998; 59(3): 179-186.. A. glycosaminoglycans in the matrix of healing dermal wounds in rats. Journal of. IC. 15. Lee M, Lee O, Yoon S, Lee S, Chung M, Park Y, et al. In Vitro angiogenic. Res. 1998; 21(3): 260-265.. ED. activity of aloe vera gel on calf pulmonary endotelial (CPAE) cells. Arch Pharm. M. 16. Moon E, Lee Y, Lee O, Lee M, Lee S, Chung M, et al. A novel angiogenic factor. 3(2): 117-123.. DE. derived from aloe vera gel: beta-sitosterol, a plant sterol. Angiogenesis 1999;. AD. 17. Choi S, Son B, Son Y, Park Y, Lee S, Chung M. The Wound-healing effect of a. CU. 545.. LT. glycoprotein fraction isolated from aloe vera. Br J Dermatol. 2001; 145(4): 535-. 18. Oryan A, Aboutorab T, Behrooz N, Gorjian E. Effect of aqueous extract of Aloe. FA. vera on experimental cutaneous wound healing in rat. Veterinarski Archiv. 2010; 80(4): 509-522.. 19. Farzadinia P, Jofreh N, Khatamsaz S, Movahed A, Akbarzadeh S, Mohammadi M, et al. Anti-inflammatory and Wound Healing Activities of Aloe vera, Honey and Milk Ointment on Second-Degree Burns in Rats. Int J Low Extrem Wounds. 2016; 15(3): 241-248.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons25 Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(30) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO. FACULTAD DE MEDICINA. 20. Oryan A, Mohammadalipour A, Moshiri A, Reza M. Topical Application of Aloe vera Accelerated Wound Healing, Modeling, and Remodeling: An 20Experimental Study. Ann Plast Surg. 2016; 77(1):37-46. 21. Tarameshloo M, Norouzian M, Zarein S, Dadpay M, Mohsenifar J, Gazor R. El gel de aloe vera y la crema de hormona tiroidea pueden mejorar la cicatrización. NT. de heridas en ratas Wistar. Anatomy & Cell Biology. 2012; 45(3): 170-177.. -U. 22. Molazem Z, Mohseni F, Younesi M, Keshavarzi S. Aloe Vera Gel and Cesarean Wound Healing; A Randomized Controlled Clinical Trial. Global Journal of. IN. A. Health Science. 2015; 7(1): 203-209.. IC. 23. Trapp R. Tamaño de la muestra. En: Dawson-Saunders B, Trapp R, editores.. ED. Bioestadística Médica. 5° ed. México: El manual Moderno; 2005.p 186-192. 24. Research NRC (US) I for LA. International Guiding Principles for Biomedical. [citado. 20. de. noviembre. de. 2018].. Disponible. en:. DE. 2004. M. Research Involving Animals (1985) [Internet]. National Academies Press (US);. https://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK25438/. AD. 25. Radenković M, Stojanović M, Prostran M. Experimental diabetes induced by. LT. alloxan and streptozotocin: The current state of the art. J Pharmacol Toxicol. CU. Methods. 2016; 78:13-31. 26. Justil C, Angulo P, Justil H, Arroyo J. Evaluación de la Actividad. FA. Hipoglicemiante del Extracto Acuoso de Abuta grandifolia (Mart.) en Ratas con Diabetes Inducida por Aloxano. Rev Inv Vet Perú. 2015; 26(2): 206-212.. 27. Cifuentes A. Modulación de la cicatrización en un modelo animal de diabetes mediante el empleo de hidrogeles de quitosano funcionalizados con heparina sin fraccionar y heparina de bajo peso molecular. [Tesis doctoral]. Alcalá de. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons26 Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(31) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO. FACULTAD DE MEDICINA. Henares: Universidad de Alcalá, Facultad de Medicina y Ciencias de la Salud; 2015. 28. Tasayco N. Actividad hipoglucemiante del extracto hidroalcohólico de las hojas de Smallanthus sonchifolius (yacón) en ratas con diabetes tipo 1 y 2. [Tesis de maestría en Farmacología Experimental]. Lima: Universidad Mayor de San. NT. Marcos, Facultad de Farmacia y Bioquímica; 2007.. -U. 29. Galehdari H, Negahdari S, Kesmati M, Rezaie A, Shariati G. Effect of the herbal mixture composed of Aloe Vera, Henna, Adiantum capillus-veneris,. IN. A. and Myrrha on wound healing in streptozotocin-induced diabetic rats. BMC. IC. Complementary and Alternative. 2016; 16:1-9.. ED. 30. National Research Council. Euthanasia in: NHI Guide for the care and use of laboratory animals. National Academy Press. Washintong. DC. 1996: 65-66.. M. 31. Mrad de Osorio A. Ética en la investigación con modelos animales. DE. experimentales. Alternativas y las 3 RS de Russel. Una responsabilidad y un compromiso ético que nos compete a todos. Revista Colombiana de Bioética.. AD. 2006; 1(1): 163-183.. LT. 32. Takzaree N, Hadjiakhondi A, Hassanzadeh G, Reza M, Manayi A, Majidi M.. CU. Transforming Growth Factor-ß (TGF-ß) Activation in Cutaneous Wounds after Topical Application of Aloe Vera Gel. Can J Physiol Pharmacol. 2016;. FA. 94(12):1285-1290. 33. Sahu P, Giri D, Singh R, Pandey P, Gupta S, Shrivastava A, et al. Therapeutic and medicinal uses of aloe vera: a review. Pharmacology & Pharmacy. 2013; 4(08):599-610.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons27 Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(32) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO. FACULTAD DE MEDICINA. 34. Chithra P, Sajithlal G, Chandrakasan G. Influence of Aloe vera on the healing of dermal wounds in diabetic rats. Journal of Ethnopharmacology. 1998; 59(3): 195-201. 35. Schmidt J, Greenspoon J. "El gel de la herida dérmica de Aloe vera está asociado con un retraso en la cicatrización de las heridas". Obstetricia y ginecología. 1991;. NT. 78(1): 115-117.. metabolism. Exp Mol Pathol. 1992; 57:215–221.. -U. 36. Lien Y, Tseng M, Stern R. Glucose and glucose analogs modulate collagen. IN. A. 37. Daburkar M, Lohar V, Rathore A, Bhutada P, Tangadpaliwar S. An in vivo and. IC. in vitro investigation of the effect of Aloe vera gel ethanolic extract using animal. ED. model with diabetic foot ulcer. Journal of pharmacy & bioallied sciences, 2014; 6(3): 205-212.. M. 38. Atiba A, Ueno H, Uzuka Y. The Effect of Aloe Vera Oral Administration on. 73(5): 583-589.. DE. Cutaneous Wound Healing in Type 2 Diabetic Rats. J. Vet. Med. Sci. 2011;. AD. 39. Dat A, Poon F, Pham K, Doust J. Aloe vera for treating acute and chronic. LT. wounds. Base de Datos Cochrane de Revisiones Sistemáticas. Rev [Internet]. [cited. 2018. Nov. 02].. Available. from:. CU. 2012. FA. https://www.cochranelibrary.com/cdsr/doi/10.1002/14651858.CD008762/. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons28 Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(33) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. FACULTAD DE MEDICINA. ED. IC. IN. A. -U. NT. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO. FA. CU. LT. AD. DE. M. ANEXOS. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons29 Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(34) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO. FACULTAD DE MEDICINA. ANEXO Nº 01 Certificado sanitario de los especímenes de Rattus norvegicus cepa Holtzman. FA. CU. LT. AD. DE. M. ED. IC. IN. A. -U. NT. otorgado por el instituto Nacional de Salud (INS). Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons30 Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(35) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO. FACULTAD DE MEDICINA. ANEXO Nº 02. FA. CU. LT. AD. DE. M. ED. IC. IN. A. -U. NT. Certificado de Aloe vera (sábila) por el Herbarium Truxillense (HUT). Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons31 Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(36) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO. FACULTAD DE MEDICINA. ANEXO Nº 03. FA. CU. LT. AD. DE. M. ED. IC. IN. A. -U. NT. Constancia de aprobación del Comité de ética de la Facultad de Medicina de la UNT. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons32 Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(37) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO. FACULTAD DE MEDICINA. ANEXO Nº 04 TABLAS DE RECOLECCIÓN DE DATOS. DE. M. ED. IC. IN. A. -U. NT. Tabla Nº 01. Glicemias de ratas diabéticas durante el desarrollo de la patología.. AD. Valores de glicemia en mg/dL. H = Glicemia > 600 mg/dl. LT. Tabla Nº 02. Medición de la herida, en base al Diámetro (cm), Área superficial (cm2). FA. CU. y Porcentaje de contracción (%) a los 5, 10 y 15 días posteriores a la lesión.. –Muerte previa a la finalización del estudio. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons33 Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(38) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO. FACULTAD DE MEDICINA. ANEXO Nº 05 ANÁLISIS ESTADÍSTICO HIPÓTESIS . H0: La aplicación del gel de Aloe vera (sábila) no mejora la cicatrización de úlceras cutáneas en ratas Holtzman diabéticas.. . H1: La aplicación del gel de Aloe vera (sábila) mejora la cicatrización de úlceras. -U. NIVEL ALFA → Alfa = 5% = 0.05 (seguridad del 95%). NT. cutáneas en ratas Holtzman diabéticas.. A. PRUEBA DE NORMALIDAD: Chapiro-Wilk, muestras pequeñas (<30 individuos). P-Valor > α → Aceptar H0 = Los datos provienen de una distribución normal.. . P-Valor < α → Aceptar H1 = Los datos no provienen de una distribución normal.. ED. IC. IN. . PRUEBAS DE NORMALIDAD. M. GRUPOS. GRUPO CONTROL GRUPO EXPERIEMNTAL. ÁREA DÍA 5. GRUPO CONTROL GRUPO EXPERIEMNTAL. CONTRACCIÓN DÍA 5. GRUPO CONTROL GRUPO EXPERIEMNTAL. DIÁMETRO DÍA 10. GRUPO CONTROL GRUPO EXPERIEMNTAL. LT. AD. DE. DIÁMETRO DÍA 5. CU. ÁREA DÍA 10. FA. CONTRACCIÓN DÍA 10. GRUPO CONTROL GRUPO EXPERIEMNTAL GRUPO CONTROL GRUPO EXPERIEMNTAL. DIÁMETRO DÍA 15. GRUPO CONTROL GRUPO EXPERIEMNTAL. ÁREA DÍA 15. GRUPO CONTROL GRUPO EXPERIEMNTAL. CONTRACCIÓN DÍA 15. GRUPO CONTROL GRUPO EXPERIEMNTAL. Chapiro-Wilk Estadístico gl. 0,894 8 0,878 8 0,879 8 0,886 8 0,891 8 0,879 8 0,918 7 0,850 8 0,923 7 0,841 8 0,923 7 0,843 8 0,908 7 0,943 8 0,909 7 0,936 8 0,914 7 0,942 8. Sig. 0,255 0,179 0,182 0,213 0,237 0,185 0,456 0,095 0,493 0,078 0,492 0,082 0,646 0,391 0,391 0,570 0,422 0,633. Datos obtenidos por el autor con el Programa estadístico IBM SPSS.. CONCLUSIÓN: Los datos provienen de una distribución normal.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons34 Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(39) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO. FACULTAD DE MEDICINA. IGUALDAD DE VARIANZA: Prueba de Levene . P-Valor > α → Aceptar H0 = Las varianzas son iguales.. . P-Valor < α → Aceptar H1 = Existe diferencia significativa entre las varianzas.. PRUEBA T PARA IGUALDAD DE MEDIAS:. ÁREA DÍA 5. SI NO. Sig.. 0,124 0,063. 0,806. 0,730. 0,752. SI NO. 0,048. 0,831. 0,151. 0,704. LT. CU. CONTRACCIÓN DÍA 10. SI NO SI NO SI NO. FA. DIÁMETRO DÍA 15. DE. 0,104. DIÁMETRO DÍA 10. ÁREA DÍA 10. SI NO. F. AD. CONTRACCIÓN DÍA 5. Prueba de Levene. M. DIÁMETRO DÍA 5. ¿SE ASUMEN VARIANZAS IGUAES? SI NO. SI NO. CONTRACCIÓN DÍA 15. SI NO. ÁREA DÍA 15. A. Si P-Valor > α, No se rechaza H0. Prueba t para igualdad de medias. IN. . IC. Si P-Valor ≤ α, se rechaza H0. ED. . -U. NT. DECISIÓN ESTADÍSTICA. 0,136. 0,718. 0,009. 0,927. 0,005. 0,945. 0,004. 0,950. t. gl.. Sig. (bilateral). 0,339. 14. 0,740. 0,339. 13,979. 0,740. 0,340. 14. 0,739. 0,340. 13,998. 0,739. -0,337. 14. 0,741. -0,337. 13,986. 0,741. 3,179. 13. 0,007. 3,162. 12,418. 0,008. 3,214. 13. 0,007. 3,187. 12,182. 0,008. -3,179. 13. 0,007. -3,152. 12,168. 0,008. 4,098. 13. 0,001. 4,066. 12,228. 0,002. 4,145. 13. 0,001. 4,096. 11,881. 0,002. -4,119. 13. 0,001. -4,071. 11,895. 0,002. Datos obtenidos por el autor con el Programa estadístico IBM SPSS. CONCLUSIÓN: La aplicación del gel de Av mejora la cicatrización de úlceras cutáneas en ratas Holtzman diabéticas, en los 10 y 15 días posteriores a la lesión. No hay diferencia significativa entre ambos grupos a los 5 días de tratamiento.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons35 Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(40) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO. FACULTAD DE MEDICINA. ANEXO Nº 06 CRITERIOS DE EVALUACIÓN DEL INFORME FINAL DE LOS TRABAJOS DE INVESTIGACIÓN EN LA FACULTAD DE MEDICINA DE LA UNT Aspectos. Puntajes. a. Contiene las variables del problema de investigación. No es mayor a quince palabras.. 1. 1.TITULO. NT. b. El título refiere de manera general las variables del problema. Tiene más de 15 palabras. -U. c. El título no refleja el contenido del trabajo. 2. RESUMEN a. Tiene no más de 200 palabras y palabras clave.. IC. 3. ABSTRACT. IN. c. Tiene más de 200 palabras o no tiene palabras clave.. A. b. Tiene más de 200 palabras y palabras clave.. 0.5. 0.1. 0.5 0.3 0.1. 0.5. b. Tiene más de 200 palabras y palabras clave con correcto uso del idioma inglés.. 0.3. c. Tiene más de 200 palabras en idioma inglés o no tiene palabras clave o uso. 0.1. ED. a. Tiene no más de 200 palabras y palabras clave con correcto uso del idioma inglés.. M. incorrecto del idioma inglés.. DE. 4. INTRODUCCIÓN. a. Se basa en antecedentes de conocimientos previos, presenta el problema con. 3.5. sustento, la hipótesis es coherente con el problema y objetivos.. AD. b. Se basa en antecedentes de conocimientos previos, el problema no está bien. 2. sustentado o la hipótesis no es coherente con el problema y/u objetivos.. objetivos.. LT. c. Se basa en antecedentes de conocimientos previos. No presenta problema y/u. 1. CU. 5. MATERIAL Y MÉTODO a. La muestra recolectada es representativa, adecuada y plantea un diseño experimental. 3. FA. apropiado a la solución del problema. 2. c. La muestra recolectada no es representativa, ni adecuada.. 1. b. La muestra recolectada es representativa, adecuada y no plantea un diseño experimental apropiado a la solución del problema.. 6. RESULTADOS a. Presenta los resultados en forma sistemática en función de las variables del problema. 4. e incluye pruebas estadísticas, figuras y tablas de acuerdo a las normas internacionales.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons36 Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(41) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO. FACULTAD DE MEDICINA. b. Presenta los resultados en forma sistemática en función de las variables del. 2. problema. No incluye pruebas estadísticas, figuras y tablas de acuerdo a las normas internacionales. c. No presenta los resultados en forma sistemática en función de las variables del. 1. problema. 7. ANALISIS Y DISCUSION a. Discute cada uno de los resultados para probar su validez y contrasta con las pruebas. 4. estadísticas mencionadas en los resultados. Busca generalizaciones y establecer las. NT. posibles implicancias de los nuevos conocimientos.. 2. -U. b. Discute algunos resultados para probar su validez y no contrasta con las pruebas estadísticas mencionadas en los resultados. Busca generalizaciones y establecer las posibles implicancias de los nuevos conocimientos.. A. c. Discute algunos resultados para probar su validez y no contrasta con las pruebas. 1. IC. 8. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES. IN. estadísticas mencionadas en los resultados. No busca generalizaciones.. a. Replantea sumariamente el problema y las características de la muestra. Formula. 2. ED. conclusiones lógicas y emite recomendaciones viables.. b. Replantea sumariamente el problema y las características de la muestra. No formula. 1. M. conclusiones lógicas o no emite recomendaciones viables.. c. No replantea sumariamente el problema, ni las características de la muestra.. 0.5. DE. 9. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS. a. Presentan citas justificables y asentadas de acuerdo a un solo sistema de referencia. 1. AD. bibliográfica reconocido internacionalmente.. b. No presenta citas justificables que están asentadas de acuerdo a un solo sistema de. 0.5. LT. referencia bibliográfica reconocido internacionalmente. c. Presenta citas que no se justifican o usa más de un sistema de referencia bibliográfica. 0.2. CU. reconocido internacionalmente.. a. Presentar valores ordenados sistemáticamente de acuerdo a las normas. 0.5. FA. 10. APÉNDICE Y ANEXOS. b. Presentar valores desordenados, pero de acuerdo a las normas internacionales.. 0.3. c. Presentar valores desordenados que no están de acuerdo a las normas internacionales. 0.1. internacionales.. CALIFICACIÓN DEL INFORME FINAL. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons37 Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(42) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO. FACULTAD DE MEDICINA. ANEXO Nº 07 CRITERIOS DE EVALUACIÓN DE LA DEFENSA DE LA TESIS EN LA FACULTAD DE MEDICINA DE LA UNT Aspectos. Puntaje 5 3. AD. DE. M. ED. IC. IN. A. -U. NT. 1. EXPOSICIÓN a. Formalidad lógica, lingüística y metodológica y uso adecuado de medios audio/visuales b. Exposición con formalidad lógica lingüística y metodológica pero no hace uso adecuado de los medios audiovisuales c. Incongruencia en la formalidad lógica, lingüística y metodológica y uso inadecuado de medios audiovisuales 2. CONOCIMIENTO DEL TEMA a. Fluidez, dominio del tema y suficiente en responder preguntas b. Fluidez, dominio del tema, pero lentitud e inseguridad en las respuestas c. No dominio del Tema, respuestas contradictorias o no responde 3. RELEVANCIA DE LA INVESTIGACIÓN a. Relevancia completa de las conclusiones en la salud. b. Relevancia parcial. c. Ninguna relevancia 4. ORIGINALIDAD a. Original b. Repetitivo en nuevo ámbito c. Repetitivo 5. FORMALIDAD a. Presentación personal formal acorde con el acto académico. b. Presentación formal pero no acorde con el acto académico. c. Presentación informal CALIFICACION DE LA DEFENSA DE LA TESIS. 5 3 1 4 2 1 4 2 1 2 1 0.5. x3=. LT. CALIFICACION DEL INFORME FINAL (A):. 1. x1=. CU. CALIFICACIÓN DE LA DEFENSA DE LA TESIS (B):. FA. SUBTOTAL(A+B) / 4 = NOTA. NOTA:. Jurado: ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________ __________________________________________________________________. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons38 Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(43) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO. FACULTAD DE MEDICINA. FA. CU. LT. AD. DE. M. ED. IC. IN. A. -U. NT. IDENTIFICACIÓN DE LA TESIS:. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons39 Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(44) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO. FACULTAD DE MEDICINA. ANEXO Nº 08 OBSERVACIONES DE LA TESIS TESIS:..……………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………….. TÍTULO: ……………………………………………………………………………. NT. ………………………………………………………………………………………. -U. ……………………………………………………………………………………… RESUMEN: …………………………………………………………………………. IN. A. ………………………………………………………………………………………. IC. ………………………………………………………………………………………. ED. ABSTRACT: ……………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………. M. ………………………………………………………………………………………. DE. INTRODUCCIÓN: ………………………………………….……………………. AD. ……………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………. LT. MATERIAL Y MÉTODO:. CU. ……………………………………............................................................................. FA. ……………………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………… RESULTADOS: …………………….……………………….…………………… ……………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons40 Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.