Efecto antifúngico “in vitro” de la miel de apis mellifera l en hongos ambientales (mohos) y dermatofitos patógenos

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(1)Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUIMICA. O. Q. UI M. IC A. ESCUELA ACADEMICO PROFESIONAL DE FARMACIA Y BIOQUIMICA. Y. BI. TESIS I. AC. IA. Efecto Antifúngico “in vitro” de la miel de Apis mellifera L. en. SANCHEZ MUGUERZA LEIDY VERONICA. TE. AUTORES:. CA. DE. FA. RM. hongos ambientales (mohos) y dermatofitos patógenos. BI BL. IO. VIDAL VIERA GUISELA LISBETH. ASESOR:. PROF. LIZARDO CRUZADO RAZCO. TRUJILLO – PERU 2009. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(2) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ÍNDICE. Dedicatoria Agradecimiento Presentación. IC A. Miembros del Jurado. O. Q. UI M. Resumen. BI. I. INTRODUCCIÓN.................................................................................1. IA. Y. II. MATERIAL Y MÉTODO……………………………………..……...7. AC. III. RESULTADOS………………………………………….………….…14. FA. RM. IV. DISCUSIÓN………………………………………………………..….46. DE. V. CONCLUSIONES………………………………………………..…...50. CA. VI. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS…………………………..…..51. BI BL. IO. TE. VII. ANEXOS………………………………………………………….........55. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(3) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. A DIOS: Por su gran amor, por guiarme siempre por el sendero de la verdad y el bien, por ser mi mejor y gran amigo en los momentos más difíciles de mi vida, por que siempre está a mi. IC A. lado, para poder superar los obstáculos que se me presentan.. UI M. A MIS PADRES:. Con profunda gratitud por su. valioso sacrificio, grandes esfuerzos. y sabios consejos; que hicieron posible estar más cerca de mis metas profesionales. TE. CA. DE. FA. RM. AC. IA. Y. BI. O. Q. Juan y Miriam.. BI BL. IO. A MIS HERMANOS Lenin y Linel Con amor, por su comprensión y apoyo. Por mantenernos siempre unidos y que la felicidad este siempre en nuestras vidas. LEIDY VERONICA. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(4) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. A DIOS: Por estar presente en cada uno de los pasos que doy, por ayudarme a superar todos los. UI M. IC A. problemas y por darme la oportunidad de lograr una de mi más anhelada meta.. O. Q. A MIS PADRES: Y. BI. José y Maritza. AC. IA. Por su comprensión, gran apoyo e innumerables. RM. esfuerzos y sacrificios que hicieron por mí a lo. BI BL. IO. TE. CA. DE. FA. largo de mi vida y mi carrera.. A MI QUERIDO ESPOSO: Paul Por su apoyo, ayuda y afecto constante en los momentos más difíciles. GUISELA LISBETH. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(5) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. O. Q. UI M. IC A. AGRADECIMIENTO. BI. A NUESTRO ASESOR:. RM. AC. IA. Y.  Mg. Lizardo Cruzado Razco.. FA. Quien nos brindó su valiosa orientación e incondicional apoyo. BI BL. IO. TE. CA. DE. para el desarrollo y culminación del presente trabajo.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(6) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. FA. RM. AC. IA. Y. BI. O. Q. UI M. IC A. Nuestro especial agradecimiento al Dr. Hernán Miranda, Director del Instituto de Medicina Tropical, ya que con su apoyo se hizo posible el desarrollo de nuestro trabajo científico.. BI BL. IO. TE. CA. DE. Al profesor Marlon Mantilla, por su apoyo en la elaboración del presente trabajo de investigación. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(7) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. SEÑORES MIEMBROS DEL JURADO:. Dando cumplimiento a las disposiciones emanadas por el Reglamento de Grados y Títulos vigente de la Facultad de Farmacia y Bioquímica de la Universidad Nacional de Trujillo, queda a vuestra consideración y elevado criterio el presente trabajo de. IC A. investigación I:. UI M. Efecto Antifúngico “in Vitro” de la miel de Apis mellifera L.. Y. BI. O. Q. en hongos ambientales (mohos) y dermatofitos patógenos.. oportunidad. para. expresar. IA. la. nuestros. más. sinceros. AC. Aprovechamos. agradecimientos a la plana docente y administrativa de la Facultad de Farmacia y. DE. FA. RM. Bioquímica, cuyas enseñanzas vertidas han contribuido a nuestra formación profesional.. CA. Dejamos a vuestra consideración, señores miembros del jurado, la calificación. BI BL. IO. TE. del presente trabajo.. ___________________________ Leidy Verónica Sanchez Muguerza. Trujillo 18 mayo del 2009. __________________________ Guisela Lisbeth Vidal Viera. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(8) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Q. UI M. IC A. JURADO DICTAMINADOR. BI. O. ___________________________. Y. Amelia Villar López. IO. TE. CA. DE. FA. RM. AC. IA. (Presidente). BI BL. ___________________________ Lizardo Cruzado Razco (Miembro). __________________________ William Sagástegui Guarniz (Miembro). Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(9) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. RESUMEN El presente trabajo se orientó a determinar el efecto Antifúngico “in Vitro” de la Miel de Apis mellifera L., frente a hongos ambientales (Aspergillus sp., Penicillium sp.) y dermatofitos. patógenos. (Epidermophyton. floccosum,. Microsporum. canis. y. Trichophyton rubrum), estas micosis cutáneas se encuentran entre las infecciones de. IC A. considerable prevalencia en el mundo, así mismo determinar la composición química de las muestras de miel, a fin de establecer los rangos de valores de algunos de sus. UI M. componentes principales como son azúcares, acidez, humedad y pH que indican su. Q. estabilidad microbiológica.. BI. O. En el Ensayo Químico se determinó pH, acidez, concentración de azucares y humedad presentando valores que se encuentran dentro de los rangos establecidos.. IA. Y. Para el Efecto Antifúngico “in Vitro” se empleo el Método de Difusión en Discos -. AC. Método de Kirby – Bauer, en el cual se hizo uso de dos muestras de mieles de diferentes. RM. lugares de procedencia, quienes fueron identificadas como (A y B).. FA. Se sometió a los grupos control (Fluconazol, Itraconazol y Clotrimazol) y problema (miel “A” y miel “B”) en cada placa con el microorganismo seleccionado (hongos. DE. ambientales o dermatofitos patógenos) y en el medio Agar Glucosado de Sabouraud con. CA. cloranfenicol. Los resultados se evidenciaron mediante la medición con regla. TE. milimetrada de los diámetros de la zona de inhibición del crecimiento antifúngico, de. IO. cada disco de sensibilidad y para cada microorganismo, además se realizó un control. BI BL. fotográfico, concluyendo en que la miel de abeja tiene menor efecto antifúngico “in vitro” sobre cultivos de Aspergillus ssp. y Penicillum ssp, frente a Fluconazol y mayor efecto antifúngico frente a Clotrimazol, además tiene menor efecto antifúngico “in vitro” sobre cultivos de Epidermophyton floccosum, frente a Itraconazol y Fluconazol, pero mayor efecto antifúngico frente a Clotrimazol y por último la miel de abeja tiene mayor efecto antifúngico “in vitro” sobre cultivos de Microsporum canis y Trichophyton rubrum, frente a Itraconazol, Fluconazol y Clotrimazol.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(10) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ABSTRACT The present work was aimed at determining the antifungal effect in vitro of Apis. IC A. mellifera L. honey versus environmental fungi (Aspergillus sp., Penicillium sp.) Pathogens and dermatophytes (Epidermophyton floccosum, Microsporum canis and. UI M. Trichophyton rubrum), cutaneous mycoses are among the significant prevalence of. Q. infections in the world, and also determine the chemical composition of honey samples. BI. O. in order to establish ranges of values of some of its main components such as sugars,. Y. acidity, moisture and pH indicating its microbial stability. In Chemical Testing was. IA. determined pH, acidity, concentration of sugars and humidity values that are within the. AC. ranges established. For the antifungal effect in vitro using the disk diffusion method -. RM. method of Kirby - Bauer, which made use of two samples of honey from different. FA. places of origin, who were identified as (A and B). Was submitted to the control groups (fluconazole, itraconazole and clotrimazole) and problem (honey "A" Honey "B") on. DE. each plate from the selected microorganism (fungi or dermatophytes environmental. CA. pathogens) and in the Sabouraud dextrose agar with chloramphenicol . The results were. TE. evidenced by measuring ruler with millimeter diameters of the zone of antifungal. IO. inhibition of growth of each disc and sensitivity for each organism, we also conducted a. BI BL. photographic control, concluded that the honey has a lower antifungal effect in vitro on cultures of Aspergillus spp. and ssp Penicillum versus Fluconazole and enhanced antifungal effect against Clotrimazole also has lower antifungal effect in vitro on cultures of Epidermophyton floccosum, compared with fluconazole and itraconazole, but higher antifungal effect against Clotrimazole and finally the honey bee has higher antifungal effect in vitro on cultures of Microsporum canis and Trichophyton rubrum, compared to itraconazole, fluconazole and clotrimazole.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(11) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. I.. INTRODUCCION. La miel de Apis mellifera L. ha sido utilizada como medicina natural desde tiempos antiguos, y hasta la actualidad sigue siendo ampliamente utilizada. Entre sus propiedades terapéuticas se destacan sus acciones bactericida, bacteriostática, antimicótica, cicatrizante, etc. principalmente para el tratamiento de heridas de piel,. IC A. quemaduras, úlceras, infecciones oculares, dolor de garganta, así como otras afecciones. Este uso de la miel se inició de manera empírica, simplemente porque se conocía como. Q. UI M. un remedio efectivo y no por el conocimiento de sus propiedades antimicrobianas 1,2.. BI. O. La miel es una sustancia dulce y madura, producida por las abejas mediante la. Y. recolección de néctar, miel de palo u otro fluido dulce de plantas vivas; que las abejas. IA. recogen, transforman y adosan sustancias específicas propias, almacenan y dejan en el. RM. AC. panal para que madure y añeje9.. FA. Con el advenimiento del uso de los antibióticos, el interés se enfocó en el tratamiento de las infecciones con éstos. No fue sino, hasta la aparición de diferentes. DE. cepas de bacterias resistentes a antibióticos que se recobró el interés por el posible uso. CA. de la miel como terapia alternativa, lo que ha llevado a un gran número de. IO. BI BL. de infecciones 1.. TE. investigaciones a nivel mundial para probar la efectividad de la miel en el tratamiento. Se ha estudiado diferentes cepas bacterianas resistentes a antibióticos, obteniéndose resultados de sensibilidad por parte de éstas a la miel; por otro lado, ésta ha sido utilizada en el tratamiento de heridas que no responden a los antibióticos convencionales, con resultados esperados. Actualmente se conoce que la efectividad de la miel en aplicaciones médicas, se debe muy probablemente a su amplia actividad antimicrobiana contra diversas bacterias y hongos 1,3.. 1 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(12) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. La miel de abeja consiste en una solución concentrada de azúcares, principalmente glucosa (31.3%) y fructosa (38.2%), que constituyen el mayor porcentaje de la miel, así como pequeñas cantidades de aminoácidos (Lisina, Arginina, Tireonina, Acido Glutámico, Glicina, Cisteina, Metionina, Leucina, Fenilalanina, Histidina, Ácido Aspártico, Serina, Prolina, Alanina, Valina, Isoleucina, Tirosina, Triptófano; siendo el más importante en cantidad la Lisina que suele estar presente con 0.4 hasta 38.2 mg/100g de miel); ácidos orgánicos (ácidos Glucónico, Acético, Cítrico, Láctico, Succínico, Maleico, Piroglutámico, Glicólico, Pirúvico, Fosfoglicérico, Butírico,. IC A. Fórmico, Oxálico, Alfa Cetoglutárico, Tartárico); vitaminas (Riboflavina (B12), Niacina; Piridoxina (B6), Acido Pantoténico (B5), Tiamina (B1), Ácido ascórbico. UI M. (Vit.C), y en menor cantidad; Acido Nicotínico, Vitamina k, Acido Fólico y Biotina);. Q. minerales (potasio, cloro, calcio, fosforo, azufre, sodio); lípidos (Glicéridos, Esteroles,. BI. O. Fosfolípidos, Ácido Oleico, Ácido Mirístico, Ácido Linoleico, Ácido Palmítico, Ácido. Y. Láurico, Ácido Estearico) y flavonoides (Quercetina, Isoramnetina, Kampferol, entre. IA. otros). Contiene además cinco enzimas: invertasa, glucosa-oxidasa, amilasa, catalasa y. AC. fosfatasa ácida. La miel tiene un pH ácido (3.5 - 4.5); esta acidez se debe a la presencia. RM. de ácidos orgánicos y representa un importante factor antimicrobiano. El principal ácido. FA. orgánico presente en la miel es el ácido glucónico, producto de la acción de la. DE. glucosaoxidasa 1,2.. CA. Los hongos constituyen un grupo muy numeroso de organismos (se han descrito. TE. aproximadamente 500.000, pero se estima que pueden existir entre 1 y 1,5 millones de. IO. especies) que presentan una amplia distribución en la naturaleza, contribuyendo a la. BI BL. descomposición de la materia orgánica y participando en los ciclos biológicos. Un pequeño número son patógenos de animales y plantas14.. Los mohos del género Aspergillus se encuentran ampliamente distribuidos en la naturaleza, los cuales causan el deterioro de muchos productos alimenticios. Estos hongos producen una alta cantidad de conidios que están muy bien adaptadas para la diseminación aérea, siendo habitualmente inhaladas por el ser humano y otros hospedadores. La inhalación de conidios de Aspergillus por el ser humano no suele producir manifestaciones clínicas, pero en determinados pacientes puede asociarse con una amplia variedad de presentaciones clínicas que van desde el aspergiloma a la aspergilosis invasiva, pasando por varios tipos de cuadros alérgicos como la aspergilosis 2 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(13) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. broncopulmonar alérgica, la rinitis alérgica, la sinusitis alérgica y la alveolitis alérgica extrínseca. Estos mohos tienen la capacidad para crecer a diferentes temperaturas sobre substratos con diverso contenido de humedad15. El Penicillium es un género grande, y es el que más abunda en suelos. La ocurrencia común de la especie del Penicillium en los alimentos es un problema particular, unas ciertas especies producen toxinas y pueden hacer el alimento no comestible o aún peligroso16.. IC A. La dermatofitosis, así se denomina a la infección de los tejidos queratinizados (piel,. UI M. pelos y uñas) ocasionada por un grupo de hongos queratinofílicos, taxonómicamente relacionados, a los que se ha denominado dermatofitos. La infección puede estar. O. Q. limitada a la capa córnea o llegar a estratos más profundos, sin invasión linfática. Estas. BI. micosis cutáneas se encuentran entre las infecciones de mayor prevalencia en el mundo. Y. y, dado que producen lesiones fácilmente observables, su presencia en el ser humano. AC. IA. está documentada a o largo de la historia17.. y Epidermophyton. Estos hongos parasitan las zonas cornificadas y. FA. Trichophyton. RM. Los agentes etiológicos se clasifican en tres géneros diferentes: Microsporum,. DE. tienen dificultad para multiplicarse intracelularmente. La invasión del estrato córneo está favorecida por las condiciones específicas de este hábitat: células muertas,. CA. temperatura inferior a 37 °C, humedad adecuada y aporte suficiente de hierro y otros. TE. nutrientes. Los dermatofitos poseen potentes queratinasas capaces de hidrolizar diversos. IO. tipos de queratina, proteína de elevado peso molecular con gran cantidad de puentes. BI BL. disulfuro. No todas las queratinas son iguales, incluso dentro de un mismo individuo existen diferencias según sean de piel, pelo o uñas. La queratina del pelo es rica en cisteína, mientras que la de la piel lo es en metionina. Estas diferencias podrían ser una de las explicaciones del distinto tropismo que presentan ciertas especies por colonizar determinados tejidos. La incidencia de estas micosis varía notablemente de unos países a otros y también las especies que las producen17. En el estudio realizado por Betts J, en el 2003 3, reporta que la miel es un agente antimicrobiano potente, ya que en ensayos con mieles que fueron diluidas diez veces o incluso más, mostraron capacidad para inhibir las especies de microorganismos que a menudo infectan las heridas. 3 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(14) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Parte de los beneficios atribuidos a la miel se deben a la gran cantidad de azúcares presente en su composición. En un estudio realizado por Efem y col, en el 2004. 5. , se utilizaron preparaciones con miel y jarabe de azúcar a diferente. concentración, éstas fueron colonizadas por varios tipos de hongos y bacterias, siendo la miel sin procesar capaz de inhibir a la mayoría de ellos, excepto Pseudomona y Clostridium, con una inhibición moderada de Streptococcus Pyogenes. El jarabe de azúcar no inhibió ninguno de los microorganismos, demostrándose así que la miel es superior a cualquier solución azucarada hipertónica. Así mismo se reporta la actividad. IC A. antifúngica de diversas mieles sin procesar contra especies de Aspergillus y Penicillium que se encontraban en heridas quirúrgicas. Sin embargo, no todas las mieles que han. Q. UI M. presentado buena actividad antibacteriana han sido efectivas como antifúngicas.. BI. O. Otro de los proyectos recientemente financiados por la industria de miel, era. Y. determinar si tiene alguna actividad contra una variedad de dermatofitos, es decir,. IA. hongos que causan infecciones de la piel tales como tiña y pie de atleta. Todas las. AC. especies de hongos probados fueron inhibidos por las bajas concentraciones de peróxido. FA. RM. de hidrógeno contenidos en la miel6.. El estudio realizado por Molan P, en el 2002 7, indica que la miel en. DE. concentraciones tan bajas como 0,1%, puede. estimular la actividad del sistema. CA. inmunológico, mediante la proliferación en sangre periférica de linfocitos B y linfocitos. TE. T. Además, la miel en una concentración de 1% se ha informado que estimula a los. IO. monocitos, y la liberación de citoquinas TNF-1, IL-1, e IL-6, que son intermediarios en. BI BL. los mecanismos inmunes responsables. Así mismo se informó la estimulación de leucocitos, la miel tiene el potencial para aumentar aún más la respuesta inmune mediante el suministro de la glucosa. Esto es esencial para la "explosión respiratoria" en los macrófagos que genera peróxido de hidrógeno, el elemento dominante de las bacterias que destruyen la actividad de estas células. Los azúcares en la miel también proporcionan sustratos para glucólisis, el principal mecanismo para la producción de energía en los macrófagos. Esto les permitiría funcionar en tejidos dañados y exudados cuando el suministro de oxígeno es a menudo pobre.. 4 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(15) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. En la investigación. “Efecto del pH y del H2O2 sobre la transformación. linfoblástica en Cavia porcellus antigenizados con preparados de Tripanosoma cruzi” 8, realizada por López C. y León M, se demostró que el pH ácido y el peróxido de hidrógeno incrementan el proceso de reconocimiento y sensibilización inmunológica; de la misma manera incrementan la capacidad del organismo para reconocer antígenos. En el estudio realizado por Tem M, en el 2002 9, Se concluye que los parámetros típicos de las diferentes zonas (precipitación, temperatura y humedad) influye sobre los factores que se analizaron (acidez, porcentaje de humedad y porcentaje de sólidos. UI M. IC A. totales solubles) de la miel de abeja.. En nuestro medio no se ha reportado estudios relacionados sobre el efecto. O. Q. antifúngico de la miel de abeja y por las virtudes que se le atribuye a este producto, nos. BI. estimuló iniciar la investigación de su actividad antifúngica, con la finalidad de validar. Y. su uso en medicina tradicional y aprovecharla ya que ofrece ventajas por su bajo costo y. IA. disponibilidad. Por lo tanto nuestro interés se traduce en la siguiente. AC. su fácil. RM. interrogante:. FA. ¿Cuál es el efecto de la miel de Apis mellifera L. sobre hongos ambientales y. CA. DE. dermatofitos patógenos?. TE. HIPÓTESIS. IO. La miel de Apis mellifera L. por presentar naturaleza ácida, elevada. BI BL. concentración de azucares, metabolitos secundarios; así como por la liberación de oxigeno atómico a partir de H2O2, tiene efecto antifúngico “in Vitro” sobre hongos dermatofitos y ambientales.. 5 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(16) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. OBJETIVOS:. -. Demostrar el efecto antifúngico “in Vitro” de la miel de Apis mellífera L., frente a hongos ambientales (Aspergillus sp., Penicillium sp.) y dermatofitos patógenos (Epidermophyton floccosum, Microsporum canis y Trichophyton rubrum). -. Determinar la composición química de las muestras de miel, a fin de establecer los rangos de valores de algunos de sus componentes principales como son pH, las cuales indican su estabilidad. IC A. azúcares, acidez, humedad y. BI BL. IO. TE. CA. DE. FA. RM. AC. IA. Y. BI. O. Q. UI M. microbiológica.. 6 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(17) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. II. MATERIAL Y METODO. 1.-MATERIAL 1.1. Material de estudio:. -500g. de Miel de Apis mellifera L. obtenida de la provincia de Contumazá, departamento de Cajamarca;. recolectada en el mes de. IC A. Junio – 2008 (A).. UI M. -500g. de Miel de Apis mellifera L. obtenida de la provincia de Otuzco,. O. Q. departamento de La Libertad; recolectada en el mes de Julio – 2008 (B).. IA. Y. BI. 1.2.- Cepas de microorganismos:. AC. - Cepas de hongos ambientales (Aspergillus sp., Penicillium sp.).. RM. - Cepas de hongos dermatofitos patógenos (Epidermophyton floccosum,. FA. Microsporum canis y Trichophyton rubrum).. CA. DE. 1.3.- Material de Laboratorio:. TE. a.- Material de Vidrio y Otros:. BI BL. IO. Los de uso común en el Laboratorio de Investigación.. b.- Reactivos: - Na OH 0.1N - Biftalato de potasio - Sol. De Fehling A y B - Azul de metileno - Fenolftaleína. c.- Medio de Cultivo: - Agar Glucosado de Sabouraud con cloranfenicol. 7 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(18) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. d.- Equipos: - Balanza Analitica OHAUS-GA200 - Estufa Electrica THELCO - Autoclave WISCONSIN ALUM - Cocina Electrica INDUCOR - Olla a Presión RECORD. IC A. - Refractómetro. e.- Productos Farmacéuticos:. UI M. - Clotrimazol al 1%.. Q. - Fluconazol 150 mg.. IA. Y. BI. O. - Itraconazol 100 mg.. RM. AC. 2.- METODOS:. FA. 2.1.- Recolección de la muestra:. DE. -500g. de Miel de Apis mellifera L. obtenida de la provincia de Contumazá,. TE. CA. departamento de Cajamarca; recolectada en el mes de Junio – 2008 (A).. IO. -500g. de Miel de Apis mellifera L.. obtenida de la provincia de Otuzco,. BI BL. departamento de La Libertad; recolectada en el mes de Julio – 2008 (B).. Las muestras se recolectaron en envases estériles, herméticamente cerrados, conservados a temperatura ambiente y protegidas de la luz.. 2.2.- Ensayo Físico - Químico:. a.- Porcentaje de Azucares reductores ( Fehling): Se realizó el ensayo de identificación (reacción de Fehling) para azúcares reductores Procedimiento: 8 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(19) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Se midió 10 ml de Sol “A” y 10 ml de Sol “B”, en un vaso de precipitación y se añadió agua destilada en cantidad suficiente. Llevamos a ebullición y dejamos caer de una bureta la solución de miel de abeja, previamente añadimos III gotas de Azul de metileno, hasta que de un precipitado rojo ladrillo.. b.- Determinación de la humedad:. IC A. Mediante el índice de refracción a 20ºC, usando el refractómetro.. c.- Determinación de la acidez:. UI M. Pesamos 10 grs. de miel, diluimos con 75 ml. de agua destilada y titulamos. BI. O. Q. con NaOH 0.1N usando fenolftaleína como indicador.. Y. d.- Determinación del pH:. IA. Se llevó a Baño María ambas muestras de miel de abeja y se introdujo las. RM. AC. tiras reactivas para determinar el pH respectivo.. FA. 2.3.- ENSAYO MICROBIOLOGICO 10, 11. CA. TE. Bauer.. DE. Se realizó por el método de Difusión en Discos – Método de Kirby. IO. Tratamiento de la muestra:. BI BL. Se empleó dos muestras de mieles de diferentes lugares. de. procedencia, las cuales fueron identificadas como (A y B). Se sometió a los grupos control y problema en cada placa con el microorganismo seleccionado (DISEÑO1).. 2.3.1. PREPARACIÓN DEL INOCULO ANTIFUNGICO 12.. Se obtuvieron del Instituto de Medicina Tropical 4 cultivos puros de los siguientes microorganismos: -Hongos ambientales (Aspergillus sp., Penicillium sp.), se incubaron a temperatura ambiente. 9 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(20) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. -Hongos dermatofitos patógenos (Epidermophyton floccosum, Microsporum canis. y Trichophyton rubrum), se incubaron a 37ºC por 72 h.. 2.3.2. PREPARACION DEL MEDIO DE CULTIVO 10, 13. De los cultivos de hongos previamente identificados se resembraron. microorganismos. es. Agar. Glucosado. de. Sabouraud. con. BI. O. Q. UI M. cloranfenicol.. IC A. en el medio de cultivo. El medio de cultivo para estas cepas de. IA. Y. Preparación del medio de cultivo. RM. AC. Agar Glucosado de Sabouraud con cloranfenicol. Es un medio de cultivo sólido, específico para hongos, compuesto. DE. FA. por:. CA. -Peptona de caseína............ 5,0 g/l. IO. TE. -Peptona de carne............... 5,0 g/l. BI BL. -D (+) Glucosa................... 40,0 g/l -Cloranfenicol...................... 0,5 g/l -Agar - agar...................... 15,0 g/l -pH del medio:. 5,6 aproximadamente. Se suspendió 65,5 g de la mezcla en un litro de agua destilada y se llevó a ebullición. Se esterilizó al autoclave durante 15 minutos a 121ºC.. 10 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(21) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.3.3. PRUEBA ANTIFUNGICA 2.3.3.1. Preparación de los discos 11: -Se obtuvo discos de 4mm. de diámetro de papel de filtro Whatman Nº 2, se esterilizó en olla a presión durante 20 minutos, se conservó en frascos cerrados. Se empapó los discos en la miel de abeja y se desecaron los discos ya preparados, manteniéndose asépticamente,. UI M. 2.3.3.2. Inoculación de las cepas en las placas 10, 11:. IC A. usados luego en la Prueba Antifúngica.. Q. -Se realizó la suspensión del microorganismo (incubado por 72h) en. O. suero fisiológico. Se tomó 1ml de suspensión y se vertió en placas. BI. estériles; se distribuyó en toda la placa. Se llevó a incubar por 2h a. IA. Y. 37ºC. Se aplicó los discos con antimicóticos alrededor y los discos de. AC. miel de abeja en el centro, equidistantes previamente marcados en la. RM. superficie de las placas que se incubaron a 37ºC por 72 h. para dermatofitos y para hongos ambientales la incubación fue a. DE. FA. temperatura ambiente.. CA. 2.3.4. LECTURA DE LOS RESULTADOS. IO. TE. Control del efecto antifúngico:. BI BL. - Mediante la medición con regla milimetrada de los diámetros de la zona de inhibición del crecimiento antifúngico, de cada disco de sensibilidad y para cada microorganismo. -Y mediante el Control Fotográfico.. 11 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(22) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. DISEÑO1 Diseño de Contrastación del Efecto Antifúngico “ in Vitro” de la miel de Apis mellifera L.. Aspergillus sp.. Epidermophyton. GRUPO. floccosum. PROBLEMA. Microsporum canis. Medida del. DEL. Halo de. IC A. CONTROL. OBSERVACION. CRECIMIENTO. Inhibición. FUNGICO. (Fotografía). UI M. Penicillium sp.. Q. GRUPO. IA. Y. BI. O. Trichophyton rubrum. AC. LEYENDA. FA. RM. GRUPO CONTROL:. DE. Discos de sensibilidad. TE. CA. GRUPO PROBLEMA:. BI BL. IO. Se realizó el Ensayo con las muestras A y B.. A:. Miel de Apis mellifera L. obtenida de la provincia de Contumazá,. departamento de Cajamarca; recolectada en el mes de Junio – 2008 (A).. B:. Miel de Apis mellifera L.. obtenida de la provincia de Otuzco,. departamento de La Libertad; recolectada en el mes de Julio – 2008 (B).. 12 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(23) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. III.- RESULTADOS: 1.- ENSAYO QUIMICO: CUADRO Nº1: Resultados de los ensayos físicos químicos realizados para el control de calidad de la miel de Apis mellifera L. MUESTRA “A”. MUESTRA “B”. pH. 4. 3.5. Acidez. 0.174 %. 0.178 %. Humedad. 19.9 %. % de A.R. (Fehling). 37.5%. IC A. DETERMINACIONES. 41%. BI. O. Q. UI M. 20.65%. IA. Y. 2.- PRUEBA ANTIFUNGICA:. AC. CUADRO Nº2: Resultados de las medidas de los Halos de inhibición. RM. antimicótica producidas por exposición de las muestras de miel de Apis. FA. mellifera L. y los discos de sensibilidad frente a las cepas tratadas. de. X. Aspergillus ssp.. CA. Sensibilidad. Medidas de Diámetro de Halos de Inhibición (mm). DE. Discos. 13. 15. 17. 25. 24. 18. 16. 14. 17. 17. R. R. 10.7. Itraconazol. 15. 15. 15. 16. 5. 6. 12. Muestra A. 18. 16. 15. 18. 8. 7. 13.7. Muestra B. 12. 13. 16. 16. 10. 9. 12.7. 14. TE. Fluconazol. BI BL. IO. Clotrimazol. Penicillum ssp.. Fluconazol. 16. 19. 20. 40. 30. 29. 25.7. Clotrimazol. 18. 14. 12. R. R. R. 7.3. Itraconazol. 15. 15. 13. 10. 8. 7. 11.3. Muestra A. 15. 13. 14. 8. 9. 11. 11.7. Muestra B. 12. 12. 11. 9. 9. 10. 10.5. Epidermophyton floccosum. 13 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(24) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Fluconazol. 17. 18. 18. 20. 19. 17. 18.2. Clotrimazol. 6. 8. 10. 12. 13. 10. 9.8. Itraconazol. 14. 15. 23. 25. 20. 15. 18.7. Muestra A. 12. 10. 12. 13. 12. 10. 11.5. Muestra B. 10. 9. 13. 12. 13. 11. 11.3. 7. 6. 7. R. R. 8. 4.7. Clotrimazol. R. R. R. R. R. R. R. Itraconazol. 8. 7. 9. R. R. 8. 5.3. Muestra A. 10. 11. 10. 9. 10. 9. 9.8. Muestra B. 11. 10. 12. 11. 10. UI M. 11. 10.8. 7. 7. 8.2. 8. 9. 10. 7.3. 10. 7. 7. 8.7. 11. 10. 10. 11. 11. 10. 10. 10. 12. 10.7. IC A. Fluconazol. O. Microsporum canis. Q. Trichophyton rubrum.. 9. Clotrimazol. 8. 9. R. Itraconazol. 9. 10. 9. Muestra A. 12. 12. Muestra B. 11. 11. 8. BI. 10. Y. 8. DE. FA. RM. AC. IA. Fluconazol. TE. CA. Leyenda:. BI BL. IO. R: Resistente. 14 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(25) CA. DE. FA. RM. AC. IA. Y. BI. O. Q. UI M. IC A. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. BI BL. IO. TE. Grafico 1: Diámetro de los halos de inhibición producidas por exposición de la miel de Apis mellifera L y los discos de sensibilidad frente a Aspergillus spp.. 15 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(26) DE. FA. RM. AC. IA. Y. BI. O. Q. UI M. IC A. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. BI BL. IO. TE. CA. Grafico 2: Diámetro de los halos de inhibición producidas por exposición de la miel de Apis mellifera L y los discos de sensibilidad frente a Aspergillus spp.. 16 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(27) DE. FA. RM. AC. IA. Y. BI. O. Q. UI M. IC A. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. BI BL. IO. TE. CA. Grafico 3: Diámetro de los halos de inhibición producidas por exposición de la miel de Apis mellifera L y los discos de sensibilidad frente a Aspergillus spp.. 17 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(28) CA. DE. FA. RM. AC. IA. Y. BI. O. Q. UI M. IC A. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. BI BL. IO. TE. Grafico 4: Diámetro de los halos de inhibición producidas por exposición de la miel de Apis mellifera L y los discos de sensibilidad frente a Aspergillus spp.. 18 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(29) TE. CA. DE. FA. RM. AC. IA. Y. BI. O. Q. UI M. IC A. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. BI BL. IO. Grafico 5: Diámetro de los halos de inhibición producidas por exposición de la miel de Apis mellifera L y los discos de sensibilidad frente a Aspergillus spp.. 19 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(30) CA. DE. FA. RM. AC. IA. Y. BI. O. Q. UI M. IC A. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. BI BL. IO. TE. Grafico 6: Diámetro de los halos de inhibición producidas por exposición de la miel de Apis mellifera L y los discos de sensibilidad frente a Aspergillus spp.. 20 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(31) CA. DE. FA. RM. AC. IA. Y. BI. O. Q. UI M. IC A. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. BI BL. IO. TE. Grafico 7: Diámetro de los halos de inhibición producidas por exposición de la miel de Apis mellifera L y los discos de sensibilidad frente a Penicillium spp.. 21 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(32) DE. FA. RM. AC. IA. Y. BI. O. Q. UI M. IC A. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. BI BL. IO. TE. CA. Grafico 8: Diámetro de los halos de inhibición producidas por exposición de la miel de Apis mellifera L y los discos de sensibilidad frente a Penicillium spp.. 22 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(33) DE. FA. RM. AC. IA. Y. BI. O. Q. UI M. IC A. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. BI BL. IO. TE. CA. Grafico 9: Diámetro de los halos de inhibición producidas por exposición de la miel de Apis mellifera L y los discos de sensibilidad frente a Penicillium spp.. 23 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(34) TE. CA. DE. FA. RM. AC. IA. Y. BI. O. Q. UI M. IC A. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. BI BL. IO. Grafico 10: Diámetro de los halos de inhibición producidas por exposición de la miel de Apis mellifera L y los discos de sensibilidad frente a Penicillium spp.. 24 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(35) CA. DE. FA. RM. AC. IA. Y. BI. O. Q. UI M. IC A. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. BI BL. IO. TE. Grafico 11: Diámetro de los halos de inhibición producidas por exposición de la miel de Apis mellifera L y los discos de sensibilidad frente a Penicillium spp.. 25 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(36) CA. DE. FA. RM. AC. IA. Y. BI. O. Q. UI M. IC A. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. BI BL. IO. TE. Grafico 12: Diámetro de los halos de inhibición producidas por exposición de la miel de Apis mellifera L y los discos de sensibilidad frente a Penicillium spp.. 26 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(37) CA. DE. FA. RM. AC. IA. Y. BI. O. Q. UI M. IC A. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. BI BL. IO. TE. Grafico 13: Diámetro de los halos de inhibición producidas por exposición de la miel de Apis mellifera L y los discos de sensibilidad frente a Epidermophyton floccosum. 27 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(38) CA. DE. FA. RM. AC. IA. Y. BI. O. Q. UI M. IC A. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. BI BL. IO. TE. Grafico 14: Diámetro de los halos de inhibición producidas por exposición de la miel de Apis mellifera L y los discos de sensibilidad frente a Epidermophyton floccosum. 28 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(39) CA. DE. FA. RM. AC. IA. Y. BI. O. Q. UI M. IC A. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. BI BL. IO. TE. Grafico 15: Diámetro de los halos de inhibición producidas por exposición de la miel de Apis mellifera L y los discos de sensibilidad frente a Epidermophyton floccosum. 29 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(40) TE. CA. DE. FA. RM. AC. IA. Y. BI. O. Q. UI M. IC A. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. BI BL. IO. Grafico 16: Diámetro de los halos de inhibición producidas por exposición de la miel de Apis mellifera L y los discos de sensibilidad frente a Epidermophyton floccosum. 30 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(41) TE. CA. DE. FA. RM. AC. IA. Y. BI. O. Q. UI M. IC A. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. BI BL. IO. Grafico 17: Diámetro de los halos de inhibición producidas por exposición de la miel de Apis mellifera L y los discos de sensibilidad frente a Epidermophyton floccosum. 31 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(42) TE. CA. DE. FA. RM. AC. IA. Y. BI. O. Q. UI M. IC A. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. BI BL. IO. Grafico 18: Diámetro de los halos de inhibición producidas por exposición de la miel de Apis mellifera L y los discos de sensibilidad frente a Epidermophyton floccosum. 32 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(43) TE. CA. DE. FA. RM. AC. IA. Y. BI. O. Q. UI M. IC A. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. BI BL. IO. Grafico 19: Diámetro de los halos de inhibición producidas por exposición de la miel de Apis mellifera L y los discos de sensibilidad frente a Microsporum canis. 33 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(44) TE. CA. DE. FA. RM. AC. IA. Y. BI. O. Q. UI M. IC A. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. BI BL. IO. Grafico 20: Diámetro de los halos de inhibición producidas por exposición de la miel de Apis mellifera L y los discos de sensibilidad frente a Microsporum canis. 34 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(45) TE. CA. DE. FA. RM. AC. IA. Y. BI. O. Q. UI M. IC A. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. BI BL. IO. Grafico 21: Diámetro de los halos de inhibición producidas por exposición de la miel de Apis mellifera L y los discos de sensibilidad frente a Microsporum canis. 35 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(46) FA. RM. AC. IA. Y. BI. O. Q. UI M. IC A. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. BI BL. IO. TE. CA. DE. Grafico 22: Diámetro de los halos de inhibición producidas por exposición de la miel de Apis mellifera L y los discos de sensibilidad frente a Microsporum canis. 36 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(47) CA. DE. FA. RM. AC. IA. Y. BI. O. Q. UI M. IC A. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. BI BL. IO. TE. Grafico 23: Diámetro de los halos de inhibición producidas por exposición de la miel de Apis mellifera L y los discos de sensibilidad frente a Microsporum canis. 37 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(48) DE. FA. RM. AC. IA. Y. BI. O. Q. UI M. IC A. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. BI BL. IO. TE. CA. Grafico 24: Diámetro de los halos de inhibición producidas por exposición de la miel de Apis mellifera L y los discos de sensibilidad frente a Microsporum canis. 38 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(49) FA. RM. AC. IA. Y. BI. O. Q. UI M. IC A. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. BI BL. IO. TE. CA. DE. Grafico 25: Diámetro de los halos de inhibición producidas por exposición de la miel de Apis mellifera L y los discos de sensibilidad frente a Trichophyton rubrum. 39 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(50) FA. RM. AC. IA. Y. BI. O. Q. UI M. IC A. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. BI BL. IO. TE. CA. DE. Grafico 26: Diámetro de los halos de inhibición producidas por exposición de la miel de Apis mellifera L y los discos de sensibilidad frente a Trichophyton rubrum. 40 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(51) FA. RM. AC. IA. Y. BI. O. Q. UI M. IC A. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. BI BL. IO. TE. CA. DE. Grafico 27: Diámetro de los halos de inhibición producidas por exposición de la miel de Apis mellifera L y los discos de sensibilidad frente a Trichophyton rubrum. 41 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(52) DE. FA. RM. AC. IA. Y. BI. O. Q. UI M. IC A. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. BI BL. IO. TE. CA. Grafico 28: Diámetro de los halos de inhibición producidas por exposición de la miel de Apis mellifera L y los discos de sensibilidad frente a Trichophyton rubrum. 42 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(53) DE. FA. RM. AC. IA. Y. BI. O. Q. UI M. IC A. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. BI BL. IO. TE. CA. Grafico 29: Diámetro de los halos de inhibición producidas por exposición de la miel de Apis mellifera L y los discos de sensibilidad frente a Trichophyton rubrum. 43 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(54) DE. FA. RM. AC. IA. Y. BI. O. Q. UI M. IC A. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. BI BL. IO. TE. CA. Grafico 30: Diámetro de los halos de inhibición producidas por exposición de la miel de Apis mellifera L y los discos de sensibilidad frente a Trichophyton rubrum. 44 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(55) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. IV. DISCUSION. Es importante caracterizar de forma físico-químico a la miel, con el fin de establecer rangos de valores de algunos de sus componentes principales como azúcares, humedad, acidez y pH las cuales indican su estabilidad microbiológica18. Para definir la composición química de las muestras de miel “A” y “B” se determinaron los. UI M. IC A. parámetros recién mencionados.. Q. En el cuadro N°1 se presenta los datos del análisis físico químico realizado a. O. ambas muestras de miel de abeja, donde el pH de la muestra “A” es de 4 mientras que. BI. de la muestra “B” es de 3.5, lo cual indica que ambas muestras de miel están dentro del. IA. Y. rango de pH acido normal (3.5 - 4.5); esta acidez se debe a la presencia de ácidos. AC. orgánicos, siendo el ácido glucónico el principal ácido orgánico presente en la miel, y. FA. RM. representa un importante factor antimicrobiano1, 2.. Los ácidos orgánicos son más efectivos que los inorgánicos en la acidificación. DE. del medio intracelular; se supone que esto ocurre porque es más fácil su difusión a. CA. través de la membrana celular en su forma no disociada (lipofílica) y posteriormente se. TE. disocian en el interior de la célula de los microorganismos y afectando directamente al. IO. pH intracelular microbiano. Esto puede afectar gravemente a su metabolismo, ya que. BI BL. afecta al gradiente de protones y de carga con el exterior, e interfiere con los sistemas de transporte de aminoácidos y fosfatos. Además, muchas enzimas esenciales para el metabolismo microbiano se inactivan a pHs ácidos22.. De acuerdo a las pruebas bromatológicas que debe tener una miel de abeja en buenas condiciones, se establece que una acidez de más de 0.25% expresada en acido oleico, indica que la miel está alterada. 19. ; y ambas muestras de miel analizadas no. sobrepasan este porcentaje. La acidez depende del tipo de néctar utilizado por la abeja para su conversión en miel. El mismo varía de acuerdo con la flora existente, y ésta varía a su vez de acuerdo a la altitud del lugar, que se relaciona directamente con la temperatura y la precipitación fluvial 9. 45 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(56) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Con respecto a la humedad de la miel, está establecido que una proporción de agua mayor del 21% permite deducir la adición de agua, o que la miel no está madura, además la precipitación fluvial representa un factor típico, y es de esperarse que donde ésta sea elevada, también aumente la humedad relativa; lo que influye en el contenido de humedad de la miel madura, este valor puede ser alto; debido a que las abejas tienen dificultad en evaporar el agua frente a la alta humedad relativa en el aire.9 Tanto la muestra “A” como la muestra “B” de miel de abeja tienen un porcentaje menor a 21%. IC A. de humedad, y la diferencia entre ambas muestras no es significativa.. UI M. La miel es una solución concentrada de azúcares, es una mezcla de fructosa y. Q. glucosa, debido a esto tiene una osmolaridad suficiente para inhibir el crecimiento. O. microbiano, ya que la fuerte interacción de las moléculas de azúcares con moléculas de. IA. Y. BI. agua deja muy pocas moléculas de agua disponible para los microorganismos20.. AC. Otra de las principales propiedades antimicrobianas de la miel, es su capacidad. RM. de generar peróxido de hidrógeno. Esto se debe a que derivados de la glucosa oxidasa. FA. en la miel convierten la glucosa en ácido glucónico, y al hacerlo genera peróxido de hidrógeno como subproducto, el cual es eficaz como un agente antimicrobiano3. La. DE. acción antimicrobiana del peróxido de hidrogeno se debe a dos motivos: La producción. CA. de iones hidroxilo y radicales libres, que actúan oxidando componentes esenciales del. TE. microorganismo (lípidos, proteínas y DNA) y la liberación de O2 por las catalasas, que. BI BL. IO. actúa impidiendo la germinación de esporas21.. En el cuadro Nº2 se presentan los diámetros de los halos de inhibición tanto para los hongos ambientales y patógenos, lo que nos permiten observar la actividad antifúngica tanto de los fármacos como de la miel de abeja frente a los hongos en estudio. Así tenemos que tanto para hongos ambientales y dermatofitos patógenos, tienen sensibilidad a la miel de Apis mellifera L.. De la medición realizada a los halos de inhibición de hongos ambientales, se obtiene que el diámetro del halo de inhibición promedio para Aspergillus sp. fue de 13.7 46 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(57) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. mm para la muestra A y 12.7 mm para la muestra B, y para Penicillum sp. fue de 11.7 mm y 10.5 mm correspondientemente. Con respecto a los dermatofitos patógenos para cada muestra se obtiene que el diámetro del halo de inhibición promedio para Epidermophyton floccosum fue de 11.5 mm para la muestra “A” y 11.3 mm para la muestra “B”, mientras que para Microsporum canis fue de 9.8 mm y 10.8 mm para la muestra “A” y “B” respectivamente, y para Trichophyton rubrum fue de 11 mm para la muestra “A” y 10.7 mm para la muestra “B”. Infiriendo de esto, que los hongos ambientales y dermatofitos patógenos son sensibles a la miel de abeja y los valores. IC A. muestran que esta tiene mayor acción inhibitoria en el crecimiento de Epidermophyton. UI M. floccosum que en el de Microsporum canis y Trichophyton rubrum.. Q. Al comparar los halos de inhibición con los antimicóticos de uso convencional,. BI. O. en el caso de Aspergillus ssp., el diámetro del halo de inhibición promedio producido. Y. por Fluconazol (18mm) fue mayor al de Clotrimazol (10.7mm), así como al de. AC. IA. Itraconazol (12mm) y a las dos muestras de miel de abeja (A=13.7mm y B=12.7mm).. RM. Para Penicillum ssp., se observó similar efecto ya que Fluconazol tenía mayor. FA. diámetro de halo de inhibición promedio (25.7mm), que Itraconazol (11.3mm), y así mismo que Clotrimazol (7.3mm) y a las dos muestras de miel de abeja (A=11.7mm y. CA. DE. B=10.5mm).. TE. En el caso de Epidermophyton floccosum resultó que las muestras de miel de. IO. abeja presentaron menor diámetro de halo de inhibición promedio que los antimicóticos. BI BL. Itraconazol (18.7mm) y Fluconazol (18.2mm), siendo además la muestra “A” (11.5mm) la que tuvo mayor diámetro de halo de inhibición promedio que la muestra “B” (11.3mm), y que Clotrimazol (9.8mm). Los resultados para Microsporum canis indican que con las muestras “A” y “B” presentaron sensibilidad, siendo los halos de inhibición promedio de 9.8 mm y 10.8mm, correspondientemente; pero a su vez resultó mayor que Itraconazol (5.3mm), Fluconazol (4.7mm) y resistente a Clotrimazol.. Y por último Trichophyton rubrum presentó un diámetro de halo de inhibición promedio de 11mm para la muestra “A” y 10.7mm para la muestra “B”, además mostró 47 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(58) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. una menor sensibilidad a Fluconazol con un diámetro de halo de inhibición promedio de 8.2mm y para Clotrimazol e Itraconazol, presentó diámetros de halos de inhibición promedio de 7.3 y 8.7 mm respectivamente.. Si bien en el presente el trabajo se utilizo un número limitado de aislamientos, los resultados indican que estos son sensibles a la miel de abeja, pero existe una necesidad de intensificar la investigación del efecto antifúngico de la miel de abeja para. BI BL. IO. TE. CA. DE. FA. RM. AC. IA. Y. BI. O. Q. UI M. IC A. hallar estrategias alternativas en el tratamiento de las micosis superficiales.. 48 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(59) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. V. CONCLUSIONES. El análisis de los resultados nos permite concluir en lo siguiente:. 1.- En el análisis físico químico de la miel de abeja se encontraron valores normales de sus componentes principales.. IC A. 2.- La miel de abeja tiene menor efecto antifúngico “in Vitro” sobre cultivos de Aspergillus ssp. y Penicillum ssp, frente a Fluconazol y mayor efecto antifúngico frente. Q. UI M. a Clotrimazol.. BI. O. 3.- La miel de abeja tiene menor efecto antifúngico “in Vitro” sobre cultivos de mayor efecto. Y. Epidermophyton floccosum, frente a Itraconazol y Fluconazol, pero. AC. IA. antifúngico frente a Clotrimazol.. RM. 4.- La miel de abeja tiene mayor efecto antifúngico “in Vitro” sobre cultivos de. FA. Microsporum canis y Trichophyton rubrum, frente a Itraconazol, Fluconazol y. BI BL. IO. TE. CA. DE. Clotrimazol.. 49 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(60) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. VI.- REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS. 1. Estrada H y Col. Evaluación de la actividad antimicrobiana de la miel de abeja contra. Staphylococcus. aureus,. Staphylococcus. epidermidis,. Pseudomonas. aeruginosa, Escherichia coli, Salmonella enteritidis, Listeria monocytogenes y Aspergillus niger. Evaluación de su carga microbiológica. [monografía en Internet]. Universidad de Costa Rica, Facultad de Microbiología; 2005 [acceso 3 de abril de 2008]. Disponible en:. IC A. http://www.culturaapicola.com.ar/apuntes/miel/137_Evaluacion_actividad_antimicr. Q. UI M. obiana_miel.pdf. O. 2. Mohammad F, Mohammad H. Estudio sobre el efecto curativo de la miel en. BI. heridas por fractura infectadas. Pakistan Journal of Medical Sciences [revista en. IA. Y. Internet]. 2007. [acceso 3 de abril de 2008]. Disponible en:. RM. AC. http://www.pjms.com.pk/issues/aprjun207/article/article5.html. FA. 3. Betts O. Todo Sobre La Miel. [monografía en Internet]. Apiterapia hoy en Argentina y Cuba; 2003 [acceso 3 de abril de 2008]. Disponible en:. CA. DE. http://www.culturaapicola.com.ar/apuntes/miel/131_Todo_sobre_miel. TE. 4. Cimolai N. Sweet success? Honey as a topical wound dressing. BC Medical. IO. Journal. [revista en Internet]. 2007 [acceso 3 de abril de 2008]. Disponible en:. BI BL. http://www.bcma.org/public/bc_medical_journal/bcmj/2007/march_07/honey.asp. 5. - Efem y col. Actualización sobre el uso de miel en el tratamiento de úlceras y heridas. Enfermería Global Revista Electrónica Semestral. [revista en Internet]. 2004. [acceso 28 de abril de 2008]. Disponible en: http://www.um.es/ojs/index.php/eglobal/article/view/577/599. 50 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

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(63) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 20.-AbuSara F. Honey as antimicrobial Agent. [monografía en Internet]. Master thesis at Jordan University of Science and Technology.2004 [ acceso 10 de octubre de 2008]. Disponible en: www.geneinfo.net/downloads/applied/Honey.doc. 21.-Martir N. Terapia Bioxidativa con peróxido de hidrogeno [monografía en Internet].2005 [acceso 10 de octubre de 2008]. Disponible en:. IC A. http://medicinabiologica.blogspot.com/2005/07/terapia-bioxidativa-con-perxidode.html. UI M. 22.- Rodríguez P. Mecanismos de acción del pH a los microorganismos [monografía. BI BL. IO. TE. CA. DE. FA. RM. AC. IA. Y. BI. O. http://www.etsia.upm.es/fedna/capitulos/00CAP8.pdf. Q. en Internet].2006 [acceso 10 de enero de 2009]. Disponible en:. 53 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(64) Y. BI. O. Q. UI M. IC A. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. BI BL. IO. TE. CA. DE. FA. RM. AC. IA. ANEXOS. 54 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

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