Efecto de Bacillus sp nativo sobre el crecimiento de Rhizoctonia solani y Trichoderma asperellum, en condiciones de laboratorio
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(2) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AUTORIDADES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL. M. Dr. ORLANDO GONZÁLES NIEVES. UN IC. AC IÓ. N. DE TRUJILLO. IN FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. Rector de la Universidad Nacional de Trujillo. DE. Dr. RUBÉN VERA VÉLIZ. DE. SI ST. EM. AS. Vicerrector Académico de la Universidad Nacional de Trujillo. N. Dr. STEBAN ALEJANDRO ILICH ZERPA. DI. RE. CC. IO. Secretario General de la Universidad Nacional de Trujillo. ii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..
(3) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AC IÓ. N. AUTORIDADES DE LAFACULTAD DE CIENCIAS BIOLOGICAS. UN IC. Dr. JOSE MOSTACERO LEON. ÁT. IC. A. Y. CO. M. Decano de la Facultad de Ciencias Biológicas. RM. Dr. WILLIAN ZELADA ESTRAVER. EM. AS. DE. IN FO. Secretario de la Facultad de Ciencias Biológicas. SI ST. Dra. BERTHA SORIANO BERNILLA. DI. RE. CC. IO. N. DE. Director de la Escuela Académico Profesional de Microbiología y Parasitología. iii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..
(4) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DEL ASESOR El que suscribe, Asesor de la presente Tesis titulada:. AC IÓ. N. Efecto de Bacillus sp. nativo sobre el crecimiento de Rhizoctonia solani y. UN IC. Trichoderma asperellum, en condiciones de laboratorio.. CO. M. CERTIFICA. A. ÁT. IC. con las debidas orientaciones brindadas al tesista.. Y. Que ésta Tesis ha sido ejecutada de conformidad con su correspondiente proyecto y. RM. Respecto al informe, éste ha sido revisado y acoge las observaciones y sugerencias. IN FO. pertinentes, por lo que autorizo a la Br. Princess Claudia Cecilia Marcelo García. ____________________________________ Ms.C. Juan Héctor Wilson Krugg ASESOR. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. DE. continuar con los trámites correspondientes.. iv Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..
(5) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. PRESENTACIÓN SEÑORES MIEMBROS DEL JURADO DICTAMINADOR:. AC IÓ. N. En cumplimiento con las disposiciones establecidas en el Reglamento de. Grados y Títulos de la Universidad Nacional de Trujillo, ponemos a vuestra. UN IC. consideración y criterio el trabajo de investigación titulado: “Efecto de Bacillus sp.. M. nativo sobre el crecimiento de Rhizoctonia solani y Trichoderma asperellum, en. CO. condiciones de laboratorio”, con el propósito de obtener el Título Profesional de. A. Y. Biólogo – Microbiólogo.. ÁT. IC. Esperando que vuestro criterio sea de comprensión por errores u omisiones. AS. DE. IN FO. RM. cometidos en la elaboración del presente trabajo, me someto a vuestro dictamen.. ____________________________________ Princess Claudia Cecilia Marcelo García Bachiller en Ciencias Biológicas. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. Trujillo, Noviembre 2015. v Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..
(6) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. UN IC. ________________________________________. AC IÓ. N. MIEMBROS DEL JURADO. M. Ms.C. EDUARDO MUÑOZ GANOZA. IN FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. PRESIDENTE. _______________________________________. DE. Ms.C. JUAN HÉCTOR WILSON KRUGG. ____________________________________ DRA. MANUELA LUJÁN VELÁSQUEZ VOCAL. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. SECRETARIO. vi Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..
(7) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. APROBACIÓN Los profesores que suscriben, miembros del jurado dictaminador, declaran. N. que la presente tesis ha cumplido con los requisitos formales y fundamentales, siendo. CO. M. UN IC. AC IÓ. aprobada por UNANIMIDAD.. Y. ________________________________________. AS. DE. IN FO. RM. ÁT. PRESIDENTE. IC. A. Ms.C. EDUARDO MUÑOZ GANOZA. EM. _______________________________________. SECRETARIO. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. Ms.C. JUAN HÉCTOR WILSON KRUGG. ____________________________________ DRA. MANUELA LUJÁN VELÁSQUEZ VOCAL. vii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..
(8) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AC IÓ. N. DEDICATORIA. CO. M. UN IC. A Dios, por haberme permitido llegar hasta este punto, por fortalecer mi corazón e iluminar mi mente para lograr mis objetivos, además de su infinita bondad y amor.. IN FO. RM. ÁT. IC. A. Y. A mis abuelas Julia y Manuela, mis ángeles, que aunque partieron muy pronto sé que están conmigo en cada paso que doy cuidándome y guiándome desde el cielo. Esto es para orgullo de ustedes.. EM. AS. DE. A mis padres Jairo y Cecilia, quiero que sientan que el objetivo alcanzado también es de ustedes y que la fuerza que me ayudó a conseguirlo fue su gran apoyo.. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. A mis queridos hermanos Fiorella, Caroline y Kevin; por estar conmigo y apoyarme siempre, los quiero mucho.. viii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..
(9) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AC IÓ. N. AGRADECIMIENTO. IC. A. Y. CO. M. UN IC. A mis padres y hermanos, sabiendo que no existirá forma alguna de agradecer una vida de sacrificios, esfuerzos y amor.. SI ST. EM. AS. DE. IN FO. RM. ÁT. A mi asesor Juan Wilson Krugg por su esfuerzo, su dedicación, sus conocimientos, orientaciones y su paciencia que han sido fundamentales para mi formación profesional.. DI. RE. CC. IO. N. DE. A mis amigos Marita, Junior, Alonso, Walter, Luis y a la distancia Diana por el cariño, por el apoyo en la realización de la investigación y por los momentos vividos durante la etapa universitaria.. ix Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..
(10) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. RESUMEN. El uso de agentes de control biológico es una alternativa eficaz para el tratamiento de. AC IÓ. N. enfermedades en plantas, contribuyendo en la disminución del uso de pesticidas químicos. La presente investigación se evaluó el efecto de Bacillus sp. sobre el. UN IC. crecimiento de Trichoderma asperellum y Rhizoctonia solani, en condiciones de. M. laboratorio. Se aislaron bacterias del género Bacillus a partir de suelo de cultivo de. CO. camote, luego se procedió a realizarle un pre tratamiento con harina de camote y. Y. posteriormente un tratamiento térmico, sembrando luego por estría y luego de. IC. A. incubarlas por 48 horas a las colonias con características de Bacillus sp. se les realizó. RM. ÁT. tinción Gram. El enfrentamiento en placa se realizó sembrando Bacillus en cuatro. IN FO. líneas y en el centro de la placa el hongo a evaluar, y al mismo tiempo se hizo un control del crecimiento de cada uno de los hongos en placas con agar papa sacarosa.. DE. Se evaluaron los resultados de la tasa de crecimiento y porcentaje de inhibición. AS. micelial obteniéndose mediante el método estadístico de DUNCAN que si existe. EM. diferencia significativa entre los hongos enfrentados a Bacillus sp. y sus respectivos. SI ST. controles. Se concluye que Bacillus sp. inhibe el crecimiento de Trichoderma. DI. RE. CC. IO. N. DE. asperellum y Rhizoctonia solani.. x Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..
(11) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. INDICE Pág.. AC IÓ. N. AUTORIDADES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO…………ii. UN IC. DEL ASESOR……………………………………………………………………….iv. M. PRESENTACION…………………………………………………………………...v. CO. MIEMBROS DEL JURADO………………………………………………………..vi. IC. A. Y. APROBACION……………………………………………………………………..vii. RM. ÁT. DEDICATORIA……………………………………………………………………viii. IN FO. AGRADECIMIENTO……………………………………………………………...ix. DE. RESUMEN…………………………………………………………………………..x. AS. INDICE……………………………………………………………………………....xi. SI ST. EM. INTRODUCCIÓN…………………………………………………………………...1. DE. MATERIAL Y MÉTODO……………………………………………………………6. N. 1. MATERIAL DE ESTUDIO……………………………………………….....6. CC. IO. 1.1.Material biológico………………………………………………………...6. DI. RE. 2. MÉTODOS …………………………………………………………………..6 2.1.Aislamiento. de. Bacillus. sp.. y. obtención. de. cultivo. puro……………………………………………………………………….6 2.2.Reactivación del cultivo de Trichoderma asperellum y obtención de cultivo puro.………………………………………………………………7. xi Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..
(12) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 2.3. Aislamiento de Rhizoctonia solani …………………………………………..7 2.4.Determinación de género y obtención de cultivos puros de Rhizoctonia solani……………………...……………………………………………...7. AC IÓ. N. 2.5.Enfrentamiento in vitro de Bacillus sp. con R. solani y T. asperellum.………………………...……………………………………..8. UN IC. 2.6.Evaluación del efecto in vitro de Bacillus sp…………………………… 8. M. 2.7.Evaluación estadística ………………………………………………... 10. CO. RESULTADOS……………………………………………………………………..11. A. Y. DISCUSIÓN………………………………………………………………………..17. IC. CONCLUSIÓN……………………………………………………………………..19. RM. ÁT. RECOMENDACIONES……………………………………………………………20. IN FO. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS……………………………………………...21 ANEXOS…………………………………………………………………………....25. AS. bacilos gram positivos.. DE. Anexo 1. Observación microscópica (100x) de Bacillus sp., con característica de. SI ST. EM. Anexo 2. Reacción positiva a la prueba de la catalasa. Anexo 3. Placas divididas en cuatro cuadrantes.. DE. Anexo 4. Porcentaje promedio de inhibición micelial de Rhizoctonia solani y. IO. N. Trichoderma asperellum frente a Bacillus sp.. CC. Anexo 5. Análisis de varianza con un 95% de confianza (ANOVA) de la tasa de. RE. crecimiento miceliar de los controles de R. solani y T. asperellum y de los. DI. enfrentamientos con Bacillus sp. Anexo 6. Análisis estadístico (DUNCAN) de la tasa de crecimiento miceliar de los controles de R. solani y T. asperellum y de los enfrentamientos con Bacillus sp.. xii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..
(13) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. INTRODUCCIÓN. En la agricultura son cuantiosas las pérdidas económicas debido a las diversas. AC IÓ. N. enfermedades que afectan a las plantas cultivables. Los vegetales son afectados por diversas enfermedades fúngicas, presentando cada enfermedad, por lo general,. UN IC. características peculiares en cuanto a síntomas y/o signos; esto hace que para lograr. M. un efectivo control se debe disminuir la incidencia y/o severidad de los patógenos1,2.. CO. Uno de los métodos más utilizados para contrarrestar las perdidas en cultivos. Y. agrícolas por organismos o plagas causantes de enfermedades es el uso de pesticidas.. IC. A. Estas son sustancias químicas que producen innumerables efectos indeseados sobre. RM. ÁT. el ecosistema, induciendo a la generación de organismos resistentes, persistencia. IN FO. ambiental de residuos tóxicos, contaminación de suelos y recursos hídricos, lo cual altera el equilibrio ecológico.. DE. El suelo es una importante fuente de microorganismos que han sido. AS. ampliamente estudiados para procesos biotecnológicos, contándose entre estos el. EM. control biológico de enfermedades en plantas por medio de procesos naturales como. SI ST. la antibiosis y el parasitismo. Los patógenos de mayor incidencia y que más daños. DE. causan son los hongos que habitan en el suelo, destacándose entre ellos Rhizoctonia. N. solani3. La infección por Rhizoctonia es una de las enfermedades más antiguas y de. CC. IO. mayor dispersión mundial. Desde que fue reportada por primera vez ha sido. Rhizoctonia solani es un fitopatógeno polífago, que causa pérdidas en la. DI. RE. detectada en casi todas las áreas productoras de papa en el mundo4.5.. mayoría de las plantas anuales, incluyendo a las malezas, casi a todas las hortalizas y plantas florales, varios cultivos mayores y también en plantas perennes, existen formas no patógenas que eventualmente actúan como antagonistas de las formas. 1 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..
(14) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. patógenas. Los síntomas más comunes de la enfermedad que causa en la mayoría de los vegetales son el ahogamiento de las plántulas y la pudrición de la raíz, así como la pudrición y la cancrosis del tallo de las plantas adultas y en proceso de. AC IÓ. N. crecimiento. Sin embargo en algunos hospedantes, causa también la pudrición de los órganos vegetales almacenados, así como los tizones o manchas en el follaje cuando. UN IC. éste se encuentra cerca del suelo6. Para el control de los patógenos se aplican. M. fungicidas de acción protectora y también de carácter sistémico, aunque el principal. CO. método de manejo de las enfermedades ha sido el control químico generando un. A. Y. impacto negativo en el ecosistema7.. ÁT. IC. El género Trichoderma está compuesto por hongos que se encuentran. RM. presentes en forma natural en casi todos los suelos y otros hábitats del planeta.. IN FO. Destaca su actividad antagonista contra las bacterias y otros hongos Su desarrollo se ve favorecido por la presencia de altas densidades de raíces. Se ha demostrado que. DE. Trichoderma spp. es eficaz contra una amplia gama de hongos patógenos de las. AS. plantas incluyendo Pythium spp., Rhizoctonia solani, Fusarium spp., Botrytis. EM. cinerea, Phytophtora spp., Sclerotium rolfsii, Sclerotinia homoeocarpa y Alternaria. SI ST. alternata8. El éxito de las cepas de Trichoderma como agentes de control biológico. DE. es debido a su alta capacidad reproductiva, capacidad para sobrevivir en condiciones. IO. N. muy desfavorables, la eficiencia en la utilización de los nutrientes, la capacidad de. CC. modificar la rizósfera, fuerte agresividad contra hongos fitopatógenos, y la eficiencia. RE. en la promoción del crecimiento de la planta y los mecanismos de defensa9. Especies. DI. como T. harzianum, T. asperellum, T. virens y T. asperelloides, T. atroviride y T. hamatum GD12, han sido utilizadas en el control biológico10,11. Aunque los productos químicos sintéticos son aún la principal herramienta de control de enfermedades en vegetales, los agentes biológicos son una manera. 2 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..
(15) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. efectiva para proporcionar un control más rápido y más seguro, además que pueden ser incluidos dentro del control de plagas y enfermedades12. El uso de agentes de control biológico es una alternativa eficaz para el tratamiento de enfermedades en. AC IÓ. N. plantas, contribuyendo en la disminución del uso de pesticidas químicos13. Se considera mecanismo de biocontrol al uso conjunto de reacciones. UN IC. metabólicas, bioquímicas, mecánicas y/o físicas que de manera natural se desarrollan. M. articulada o individualmente y desencadenan la inhibición de la expresión de un. CO. microorganismo patógeno por parte de otro en un ambiente determinado con el fin de. A. Y. lograr la eliminación parcial o total de este sin emplear agentes químicos que causen. IC. efectos adversos. Un paso importante en los programas de control de enfermedades. RM. ÁT. implica la selección de agentes de biocontrol eficaces14.. IN FO. Un controlador biológico debe ser capaz de producir inóculo abundante en cualquier condición climática, además debe de ser genéticamente estable y poseer. DE. una alta especificidad sobre el hospedero al que se quiere controlar. También debe de. AS. infectar y destruir eficazmente al patógeno en un amplio rango de condiciones. EM. ambientales y ser inocuo para el medio ambiente y animales. Como condición final. SI ST. debe tolerar la acción de otros antagonistas14.. DE. Especies del género Bacillus son conocidas por sus propiedades antifúngicas,. IO. N. de ahí su importancia en el control biológico de enfermedades en las plantas y. CC. animales. Tres mecanismos están implicados en el biocontrol: competencia,. RE. parasitismo o depredación, y antibiosis; induciendo anormalidades morfológicas y la. DI. inhibición de la formación de conidios en hongos fitopatógenos por una bacteria antagónica15. Las especies del género Bacillus poseen características especiales que los hacen buenos candidatos como agentes de control biológico. Su utilización para el. 3 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..
(16) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. biocontrol de las enfermedades de las plantas es de gran interés, debido a la capacidad que presentan estas bacterias para producir antibióticos y otras sustancias con capacidad antibacteriana y antifúngica que impiden el establecimiento de. AC IÓ. N. patógenos vegetales16. El género Bacillus es el más utilizado para el control de fitopatógenos. UN IC. fúngicos debido a que tienen la facilidad de digerir la quitina, además de la. M. producción de antibióticos como la bacitracina, polimixina, tirocidina, gramicidina y. CO. circulina, entre otros4. El género Bacillus, pertenece a la familia Bacillaceae, una de. A. Y. las familias bacterianas con mayor actividad bioquímica referenciada en la literatura. ÁT. IC. científica que abarca tanto su utilización dentro de las actuales políticas de control. RM. biológico como el uso de los productos de su metabolismo para la industria. Son. IN FO. bacilos aerobios y anaerobios facultativos, gram positivos, son móviles por la presencia de flagelos laterales, son catalasa positiva, presentando hemólisis variable. DE. y un crecimiento activo en un rango de pH entre 5.5 - 8.514.. AS. Entre las especies más utilizadas con este propósito se encuentran B. subtilis,. SI ST. EM. B. cereus, B. pumillas y B. polymyxa. El rápido crecimiento que muestran estas bacterias en cultivo líquido, la formación de endosporas termorresistentes a agentes. DE. perjudiciales como la desecación, la radiación, los ácidos grasos, los desinfectantes. IO. N. químicos y la producción de metabolitos secundarios son características que. CC. permiten considerar a estos microorganismos como potenciales agentes de control. DI. RE. biológico17,18. Generalmente se encuentran en el suelo formando parte de la rizósfera de las. plantas, comportándose como colonizadores eficaces que impiden el establecimiento de patógenos17. En diferentes aislamientos se ha evidenciado la presencia de cepas con actividad biocontroladora sobre patógenos de plantas4.. 4 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..
(17) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Para un mejor control de fitopatógenos se podría usar simultáneamente dos controladores biológicos que disminuyan rápidamente la población de los hongos fitopatógenos, en este caso R. solani. Por tanto la presente investigación tuvo como. AC IÓ. N. objetivo determinar el efecto de Bacillus sp sobre el crecimiento de Rhizoctonia. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. DE. IN FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M. UN IC. solani y Trichoderma asperellum.. 5 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..
(18) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. MATERIAL Y MÉTODO. 1. MATERIAL DE ESTUDIO.. AC IÓ. N. 1.1. Material biológico: Cultivo de Bacillus sp, aislado de suelo de camote.. M. Fitopatología de la Universidad Nacional de Trujillo.. UN IC. Cultivo de Trichoderma asperellum proporcionado por el Laboratorio de. IC. A. Y. CO. Cultivo de Rhizoctonia solani aislado de tubérculo de papa.. ÁT. 2. MÉTODO.. Aislamiento de Bacillus sp. y obtención de cultivo puro.. RM. 2.1.. IN FO. Las bacterias del género Bacillus se aislaron de suelo de cultivo de. DE. camote procedente de la campiña de Moche. La recolección del suelo se. AS. realizó de la zona cercana al inicio de la parte aérea de la planta y con. EM. una profundidad no mayor a 10cm; la cantidad de muestra recolectada. SI ST. fue de 1 Kg en bolsa de primer uso que se colocó en un cooler para su. DE. transporte al laboratorio. Una vez en el laboratorio, la muestra de suelo se. DI. RE. CC. IO. N. colocó en una bandeja de plástico y se procedió a realizarle un pre tratamiento agregándole harina de camote y se dejó reposar por cinco días, sin dejar de mantener húmedo el suelo. Pasados los cincos días, se hizo una resuspensión de 10g de suelo de cultivo de camote en 100mL de agua destilada estéril con agitación vigorosa por 30 segundos. Después se sometió a. un tratamiento térmico de 80ºC durante 10. minutos; se tomó una asada y se sembró por estría en placas Petri con agar almidón y se incubó a 37ºC por 24-48 horas. Se tomó las colonias 6 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..
(19) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. con características de Bacillus sp. para realizarle tinción Gram y la prueba de la catalasa. Las colonias positivas para estas dos pruebas se volvieron a sembrar en agar almidón para su conservación4 (Anexo 1 y. AC IÓ. N. 2).. Reactivación del cultivo de Trichoderma asperellum y obtención de. UN IC. 2.2.. M. cultivo puro.. CO. El cultivo proporcionado se reactivó sembrándolo en placas con Agar. ÁT. IC. A. Y. Papa Sacarosa más antibiótico y se incubaron a 25ºC por 5 días.. RM. 2.3. Aislamiento de Rhizoctonia solani. IN FO. Se obtuvo tubérculos de papas que presentaron “costras negras”. Se hicieron pequeños cortes a la zona circundante a estas costras. Estos. DE. cortes se lavaron con lejía por 10 segundos y se enjuagaron con agua. AS. destilada estéril entre 2 a 3 veces. Luego en placas Petri con PDA se. SI ST. EM. colocaron los pequeños cortes y se incubaron por 5 días a 25ºC.. DE. 2.4. Determinación de género y obtención de cultivos puros de. DI. RE. CC. IO. N. Rhizoctonia solani. Luego del tiempo de incubación, las colonias fúngicas sospechosas de corresponder a Rhizoctonia solani, se observaron microscópicamente para ser confirmadas como pertenecientes a la especie Rhizoctonia solani, para esto se empleó las claves taxonómicas correspondientes como el ángulo recto que forman las hifas.. 7 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..
(20) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Las colonias cuya determinación correspondieron a Rhizoctonia solani, se sembraron en tubos de ensayo conteniendo Agar Papa Sacarosa e incubaron a temperatura ambiental (25 ± 2 °C) por cinco días, a fin de. AC IÓ. N. obtener un cultivo puro.. UN IC. 2.5. Enfrentamiento in vitro de Bacillus sp. con R. solani y T. asperellum.. M. Las placas Petri con agar papa sacarosa (APS) se dividieron en cuatro. CO. cuadrantes marcando el punto central de la placa. En cada una de las. A. Y. líneas se sembró Bacillus sp. y en el centro de la placa R. solani o T.. ÁT. IC. asperellum, según corresponda. Cada ensayo se realizó por triplicado y. RM. se incubó a temperatura ambiental (25 ± 2 °C) por 7 días y al mismo. IN FO. tiempo se hizo un control del crecimiento de cada uno de los hongos19. DE. (Anexo 3).. AS. 2.6. Evaluación del efecto in vitro de Bacillus sp.. SI ST. EM. Se evaluaron los resultados de la tasa de crecimiento micelial y el porcentaje de inhibición micelial. el radio del crecimiento micelial de la colonia fúngica mediante la expresión19:.. DI. RE. CC. IO. N. DE. Tasa de crecimiento micelial: se determinó teniendo en cuenta. 8 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..
(21) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Donde: Cf: es el crecimiento final, expresado en cm. Ci: es el crecimiento inicial (dia uno), expresado en cm.. AC IÓ. N. Ti: es el tiempo inicial (dia uno).. fórmula ]. IC. A. Y. CO. [. M. UN IC. Porcentaje de inhibición micelial: se calculó empleando la. RM. de la siguiente manera19:. ÁT. El comportamiento de inhibición mostrado por la bacteria se agrupó. IN FO. Negativo: ausencia de zona de inhibición o un porcentaje menor de. DE. 10% y crecimiento normal de la colonia fúngica, de forma similar al. AS. control.. EM. Bajo: porcentaje entre 10-39% de una disminución en el crecimiento. SI ST. de la colonia fúngica.. DE. Medio: porcentaje entre 40-60% de una disminución en el. Alto: zona de inhibición definida en un porcentaje entre 70-100% (Anexo 4).. DI. RE. CC. IO. N. crecimiento de la colonia fúngica.. 9 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..
(22) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 2.7. Evaluación estadística. A partir de los resultados obtenidos de la tasa de crecimiento micelial y el porcentaje de inhibición micelial se aplicó el análisis de varianza. AC IÓ. N. (ANOVA) para la obtención de la diferencia significativa. Para los datos. del efecto de Bacillus sp. sobre el crecimiento de R. solani y T.. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. DE. IN FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M. UN IC. asperellum se analizó mediante la prueba de DUNCAN20.. 10 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..
(23) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. RESULTADOS. AC IÓ. N. Al evaluar el efecto de Bacillus sp. sobre el crecimiento de Rhizoctonia solani y Trichoderma asperellum se obtuvo que:. UN IC. En la Figura 1, se aprecia la tasa de crecimiento micelial de R. solani frente a. M. Bacillus sp. y el crecimiento del control de R. solani. Asi mismo, en la Figura 3 se. CO. aprecia la tasa de crecimiento de T. asperellum frente a Bacillus sp. y el crecimiento. A. Y. del control de T. asperellum. Estadísticamente mediante ANOVA si existe diferencia. ÁT. IC. significativa (Anexo 5).. RM. En la Figura 5, en relación al porcentaje promedio del crecimiento micelial. IN FO. mediante el método estadístico de DUNCAN se aprecia que existe diferencia. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. DE. significativa entre los enfrentamientos y sus controles (Anexo 6).. 11 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..
(24) AC IÓ. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. UN IC. 0.35. CO IC. A. Y. 0.25. RM. ÁT. 0.2. IN FO. 0.15. DE. 0.1. AS. Tasa de crecimiento micelial (cm/día). M. 0.3. 0. SI ST. EM. 0.05. R. solani vs. Bacillus sp.. N. DE. Control R. solani. Bacillus sp.. DI. RE. CC. IO. Fig. 1. Tasa de crecimiento micelial del control de R. solani y de R. solani frente a. 12 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..
(25) AS. DE. IN FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M. UN IC. AC IÓ. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. B. SI ST. EM. A. DI. RE. CC. IO. N. DE. Fig. 2. A. Placas Petri con R. solani; B. R. solani enfrentado a Bacillus sp.. 13 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..
(26) AC IÓ. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. UN IC. 1.2. M CO Y RM. ÁT. IC. A. 0.8. IN FO. 0.6. DE. 0.4. AS. Tasa de crecimiento micelial (cm/día). 1. SI ST. Control T. asperellum. T. asperellum vs. Bacillus sp.. N. DE. 0. EM. 0.2. frente a Bacillus sp.. DI. RE. CC. IO. Fig. 3. Tasa de crecimiento micelial del control de T. asperellum y de T. asperellum. 14 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..
(27) AS. DE. IN FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M. UN IC. AC IÓ. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. B. SI ST. EM. A. DI. RE. CC. IO. N. DE. Fig. 4. A. Placas Petri con T. asperellum; B. T. asperellum enfrentado a Bacillus sp.. 15 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..
(28) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AC IÓ. N. 100. Porcentaje promedio de crecimiento micelial (%). 90. UN IC. 80. CO. M. 70. Y. 60 a. ÁT. IC. a. A. 50. RM. 40. IN FO. 30. DE. 20. AS. 10. EM. 0. SI ST. Control R. solani. a Control T. asperellum. R. solani vs. Bacillus sp.. T. asperellum vs. Bacillus sp.. asperellum frente a Bacillus sp. a: p< 0.05: si existe diferencia significativa. DI. RE. CC. IO. N. DE. Fig. 5. Porcentaje promedio de crecimiento micelial de R. solani y T.. 16 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..
(29) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DISCUSIÓN. El aumento de las preocupaciones sobre el impacto de los productos químicos. AC IÓ. N. en el medio ambiente se ha traducido en el aumento de interés en las estrategias de control biológico20.. UN IC. Es bien sabido que las bacterias comúnmente producen enzimas y metabolitos. M. secundarios que degradan la pared de las células para dificultar el crecimiento de. CO. otros microorganismos12.. A. Y. Las especies del género Bacillus han sido reportadas como efectivos. ÁT. IC. biocontroladores de múltiples fitopatógenos por su capacidad de producir varios. RM. antibióticos de amplio espectro, característica que ha permitido utilizarlos como. IN FO. fungicidas comerciales4.. Fernández-Larrea, Yoshida y Musa informan del efecto antifúngico in vitro. DE. de cepas del género Bacillus frente a hongos fitopatógenos, entre los que se. EM. AS. encuentran Fusarium solani, A. solani, Pythium ultimun y R. solani. Los resultados. SI ST. del presente trabajo coinciden con otros reportados en la literatura sobre el biocontrol de R. solani, en los que utilizan cepas de Bacillus21.. DE. Talbot y Larkin compararon la eficacia de diferentes agentes de control. IO. N. biológico para el control de R. solani, y demostraron que los tratamientos más. CC. efectivos fueron aplicaciones de una cepa de Bacillus y Trichoderma. Estos estudios. RE. sugieren que los miembros de este género pueden emplearse de forma eficaz en el. DI. control de este hongo fitopatógeno22. Por otro lado, Bacillus ha demostrado eficiencia in vitro en el control de más de 23 tipos de patógenos de plantas, la competencia frente a otros microorganismos patógenos, se da mediante la secreción de diversas sustancias que se producen que 17. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..
(30) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. inducen la elaboración de metabolitos secundarios con capacidad de suprimir el crecimiento de hongos, oomicetos y bacterias fitopatógenas. En general la actividad biocontroladora la ejerce mediante la producción de lipopéptidos cíclicos antibióticos. AC IÓ. N. (CLPS) entre los cuales se destacan el surfactin y el Iturin A; sustancias que han demostrado amplio espectro de acción sobre patógenos de plantas, en los que se. UN IC. encuentran especies de Fusarium, Pythium, Phytophthora, Rhizoctonia, Sclerotinia,. M. Septoria y Verticillium23.. CO. El efecto biocontrolador, resulta como producto de diversos mecanismos,. A. Y. entre ellos la antibiosis que ejerce Bacillus con la producción de péptidos,. IC. lipopéptidos y fosfolípidos que se utilizan como agentes terapéuticos contra bacterias. RM. ÁT. patógenas y hongos23.. IN FO. El grupo Iturin comprende una serie de compuestos clasificados de A-E. El Iturin A es un antibiótico lipopéptidico cíclico que contiene siete residuos de L-o D-. DE. α-aminoácidos y un residuo de un ácido graso β-amino24.. AS. El cultivo de Bacillus estudiado presentó un efecto inhibitorio en la prueba. SI ST. EM. contra Rhizoctonia solani y Trichoderma asperellum probablemente por la capacidad de secretar lipopéptidos antibióticos del grupo Iturin cuyo mecanismo de acción va. DE. dirigida sobre la permeabilidad de la membrana y la composición lipídica de la. N. célula fúngica, de tal forma que inhibe el crecimiento micelial y la esporulación del. DI. RE. CC. IO. hongo4.. 18 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..
(31) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. CONCLUSIÓN. Bacillus sp. tiene un efecto inhibitorio sobre el crecimiento de Rhizoctonia. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. DE. IN FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M. UN IC. AC IÓ. N. solani y Trichoderma asperellum.. 19 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..
(32) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. RECOMENDACIONES. AC IÓ. condiciones de invernadero para posteriormente aplicarlos en campo.. N. Se deben realizar estudios posteriores del efecto inhibitorio de Bacillus en. Realizar la identificación bioquímica del aislamiento de Bacillus sp. con el. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. DE. IN FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M. UN IC. fin de corroborar su especie.. 20 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..
(33) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS. 1. Mont R. Principios del control de las enfermedades de plantas. UNALM. AC IÓ. N. 1993. Lima, Perú.. 2. Chae-Gun Phae, Masayuki Sasaki, Makoto Shoda, Hiroshi Kubota.. UN IC. Characteristics of Bacillus subtilis isolated from compost supressing. M. phytopathogenic microorganisms. Soil Sci Plant Nutr 1990; 36(4): 575-586.. CO. 3. Meléndez, R., S. Ramírez y C. Peña. Comparación de la efectividad de un. A. Y. medio biológico y tres nuevos fungicidas químicos en el control de. ÁT. IC. Rhizoctonia solani en el cultivo de cebolla en la etapa de transplante. Centro. RM. Universitario Sancti Spiritus. Cuba 1997.. IN FO. 4. Lucia Constanza Corrales, MSc, Ligia Consuelo Sánchez MSc at col. Evaluación del efecto de biocontrolador de Bacillus spp., frente a Fusarium. DE. spp. , bajo condiciones de invernadero en Rosmatinus officinalis L. Nova-. AS. Publicación Científica en Ciencias Biomédicas 2011; 8(13): 63-75.. SI ST. EM. 5. Harrison MD. The Rhizoctonia disease of potatoes importance and control en report of planning conference on the control of important fungal disease of. DE. potatoes. CIP 1978:129-150. IO. N. 6. Agrios G. Fitopatología 2ª ed. Edit Limusa 2001, México D.F. México.. DI. RE. CC. 7. Yaritza Reinoso Pozo, Daymara Vaillant Flores, Luis Casadesús, Ernesto García Pérez y Victoria Pazos Álvarez-Rivera. Selección de cepas de Bacillus y otros géneros relacionados para el control biológico de hongos fitopatógenos. Fitosanidad 2007; 11(1):35-40 8. Mario Américo Lisboa Minguzzi. Efectividad de Bacillus subtilis y de una cepa nativa de Trichoderma harzianum sobre la incidencia y la severidad de 21 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..
(34) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. pudrición gris en vid vinífera. Tesis para optar el grado de ingeniero agrónomo. Chile, Universidad de Talca; 2003. 9. Benítez T, Rincón AM, Limón MC, Codón AC. Biocontrol mechanisms of. AC IÓ. N. Trichoderma strains. Int Microbiol 2004;7(4):249-260. 10. Brunner K, Zeilinger S, Ciliento R, Woo SL, Lorito M, Kubicek CP, et al.. UN IC. Improvement of the fungal biocontrol agent Trichoderma atroviride to. M. enhance both antagonism and induction of plant systemic disease resistance.. CO. Appl Environ Microbiol 2005; 71(7):3959-3965.. A. Y. 11. Studholme DJ, Harris B, Le Cocq K, Winsbury R, Perera V, Ryder L, et al.. ÁT. IC. Investigating the beneficial traits of Trichoderma hamatum GD12 for. RM. sustainable agriculture-insights from genomics. Front Plant Sci 2013; 4:258. IN FO. 12. Cesar Guigón-López, Víctor Guerrero-Prieto y col. Identificación molecular de cepas nativas de Trichoderma spp. su tasa de crecimiento in vitro y contra. hongos. DE. antagonismo. fitopatógenos. Revista Mexicana de. AS. Fitopatología 2010; 28(2):87-95.. SI ST. EM. 13. Cristian Layton, Edna Maldonado, Luisa Monroy, Lucia Constanza Corrales, Ligia Consuelo Sánchez. Bacillus spp.; Perspectiva de su efecto. DE. biocontrolador mediante antibiosis en cultivos afectados por fitopatógenos.. IO. N. Nova- Publicaciones Científica en Ciencias Biomédicas 2011; 9(15): 113-. CC. 214.. DI. RE. 14. Bhaskar Chaurasia, Anita Pandey, Lok Man S. Palni, Pankaj Trivedi at col. Diffusible and volatile compounds produced by an antagonistic Bacillus subtilis strain cause structural deformations in pathogenic fungi in vitro. Microbiol Res 2005; 160: 75-81.. 22 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..
(35) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 15. F.M. Cazorla, D. Romero, A. Pérez-García, B.J.J Lugtenberg, A. de Vicente and G. Blormberg. Isolation an characterization of antagonistic Bacillus subtilis strains from the avocado rhizoplane displaying biocontrol activity. J. AC IÓ. N. Appl Microbiol 2007; 103: 1950-1959 16. Yaritza Reinoso Pozo, Luis Casadesús Romero, Armando García Suárez,. UN IC. Jorge Gutiérrez Pérez, Victoria Pazos Álvarez-Rivera. Aislamiento, selección. M. e identificación de bacterias del genero Bacillus antagonistas de. CO. Pectobacterium carotovorum. Fitosanidad 2006; 10(3): 187-191.. A. Y. 17. Acenet I Sosa López, Victoria Pazos, Dania Torres. Aislamiento y selección. ÁT. IC. de bacterias pertenecientes al género Bacillus con potencialidades para el. RM. control biológico en semilleros de tabaco. Centro Agrícola 2005; 32(3):25-29.. IN FO. 18. Liu J, Liu M, Wang J, Yao JM, Pan RR, Yu ZL. Enhancement of the Gibberella zeae growth inhibitory lipopeptides from a Bacillus subtilis. AS. 69(2):223-228.. DE. mutant by ion beam implantation. Appl Microbiol Biotechnol 2011;. SI ST. EM. 19. Mead G, Hudson W, Hinton M. Microbiological surveyof five poultry processing plants in the UK. Br Poult Sci. 1993;34:497-503.. DE. 20. Acosta T, Avellaneda A, Cuervo J, Sánchez L. Evaluacion de microbiota de. IO. N. tomillo (thymus Vulgaris), como aporte al manejo agroecologico de. CC. aromaticas en invernaderos de la universidad nacional En: Universidad. DI. RE. Nacional de Colombia. Perspectivas del agronegocio de hierbas aromáticas culinarias y medicinales. Ed. 1. Bogotá, 2007. P. 135 – 138 13. 21. Deleu M, Paquot M, Nylander T. Fengycin interaction with lipid monolayers at the air-aqueous interface-implications for the effect of fengycin on biological membranes. J Colloid Interface Sci 2011; 283(2):358-365.. 23 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..
(36) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 22. Bautista, Gonzales, Guevara, Efecto biocontrolador de Bacillus spp., frente a Fusarium sp., bajo condiciones de invernadero en romero (Rosmarinus officinalis L.). AC IÓ. N. 23. Talbot, M.; R. Larkin: «Efficacy of Several Potential Biocontrol Organisms Against Rhizoctonia solani on Potato», Crop Protection 21:123138, 2005.. UN IC. 24. Raghavendra J, Brian B. Identification and Characterization of Novel Genetic. M. Markers Associated with Biological Control Activities in Bacillus subtilis. E-. CO. Xtra [en línea], 2005 [Revisado el 14 de Agosto de 2010]; 96 (2). Disponible. A. Y. en: http://apsjournals.apsnet.org/doi/pdf/10.1094/ PHYTO-96-0145. ÁT. IC. 25. Mizumoto S, Hirai M, Shoda M. Production of lipopeptide antibiotic Iturin A. RM. using soybean curd residue cultivated with Bacillus subtilis in solid-state. Mayo. de. 2010];. IN FO. fermentation. Appl Microbiol Biotechnol [En línea], 2006 [Revisado el 9 de 72:. 869–875.. Disponible. en:. http://. DE. www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/17476498. AS. 26. Ongena M, Duby F, Jourdan E, Beaudry T, Jadin V, Dommes J, Thonart P.. SI ST. EM. Bacillus subtilis M4 decreases plant susceptibility towards fungal pathogens by increasing host resistance associated with differential gene expression.. DE. Appl Microbiol Biotechnol 2011; 67(5):692-698.. IO. N. 27. Haggag W. Isolation of bioactive antibiotic peptides from Bacillus brevis and. CC. Bacillus polymyxa against Botrytis grey mould in strawberry. Phytopathology. DI. RE. and Plant Protection. [en línea]. 2008;41(7): 477 – 491.. 28. Yoshida, S.; S. Hiradate; T. Tsukamoto; K. Hatakeda; A. Shirata: Antimicrobial Activity of Culture Filtrate of Bacillus amyloliquefaciens RC-2 Isolated from Mulberry Leaves, Biological Control 91:181-187, 2001.. 24 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..
(37) IN FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M. UN IC. AC IÓ. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. DE. ANEXOS. 25 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..
(38) ÁT. IC. A. Y. CO. M. UN IC. AC IÓ. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. RM. Anexo 1. Observación microscópica (100x) de Bacillus sp., con característica de. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. DE. IN FO. bacilos gram positivos.. Anexo 2. Reacción positiva a la prueba de la catalasa.. 26 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..
(39) Anexo 3. Placas divididas en cuatro cuadrantes.. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. DE. IN FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M. UN IC. AC IÓ. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 27 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..
(40) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Anexo 4.. Porcentaje promedio de inhibición micelial de Rhizoctonia solani y. AC IÓ. N. Trichoderma asperellum frente a Bacillus sp.. T. asperellum vs. Bacillus sp.. 100. 94.07. ÁT. IC. A. Y. CO. M. Porcentaje de inhibición. UN IC. R. solani vs. Bacillus sp.. RM. Anexo 5. Análisis de varianza con un 95% de confianza (ANOVA) de la tasa de. Suma de. AS. Origen de las. DE. enfrentamientos con Bacillus sp.. IN FO. crecimiento miceliar de los controles de R. solani y T. asperellum y de los. cuadrados. F. Probabilidad. cuadratica. SI ST. EM. variaciones. Media gl. Entre grupos. 2,422. 3. ,807. ,009. 8. ,001. 2,431. 11. 699,769. ,000. DE. Dentro de los. IO. N. grupos. DI. RE. CC. Total. 28 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..
(41) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. N. Subconjunto para alfa = 0.05 2 3 4. 1. Control R. solani. 3. Control T. asperellum. 3. M. 3. CO. T. asperellum vs Bacillus sp. ,000000 ,066667. Y. 3. ,278000 1,125000. A. R. solani vs Bacillus sp. 1,000. 1,000. ÁT. Sig.. IC. Tratamiento. UN IC. AC IÓ. controles de R. solani y T. asperellum y de los enfrentamientos con Bacillus sp.. N. Anexo 6. Análisis estadístico (DUNCAN) de la tasa de crecimiento miceliar de los. 1,000. 1,000. RM. Se muestran las medias para los grupos en los subconjuntos homogéneos.. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. DE. IN FO. a. Usa el tamaño muestral de la media armónica = 3,000.. 29 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..
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