GUÍA PARA TOMA DE MUESTRAS PATOLOGÍA CLÍNICA
Consideraciones Generales
Confirmar ayuno de sólidos y líquidos de 12 horas antes del muestreo Aguja de calibre adecuado al tamaño del vaso sanguíneo y al volumen de la jeringa (evitar vacío violento) Conservar antisepsia Torniquete máximo 10 segundos Retirar la aguja y depositar la muestra en el tubo resbalándola por las paredes Identificar la muestra correctamente: nombre, especie, fecha/hora de muestreo, si hay sospecha de zoonosis
I. Hematología
SANGRE ENTERA CON ANTICOAGULANTE ‐Conservar proporción sangre/anticoagulante (llenar tubo hasta la marca) ‐Si se centrifuga se obtiene plasma útil en algunas pruebas bioquímicas EDTA (tubo con tapón morado) *Hemograma Llenar hasta la capacidad marcada y homogeneizar 10 veces suavemente. Después de atemperarse (15 min), mantener la muestra en refrigeración ¡nunca congelar! Si la muestra para hemograma va a tardar en analizarse más de dos horas, hacer 2 frotis y fijarlos al aire Inadecuada proporción de anticoagulante EDTA (poca sangre en el tubo) ocasiona un falso incremento de sólidos totales, deshidratación de eritrocitos (equinocitos). La presencia de coágulos (sin importar su tamaño) puede subestimar los conteos celulares por lo que dichas muestras no serán procesadas. *Determinación de amoniaco Utilizamos plasmaLlenar tubo con EDTA hasta la capacidad marcada, homogeneizar 10 veces suavemente y colocar en agua con hielo. *Pruebas de compatibilidad Sanguínea *Tipificación sanguínea *Citometría de flujo *Prueba de Coombs *Panel inmune canino *Perfil CID *Hemoglobina glicosilada *Etilenglicol *Plomo en sangre *Cardiopet proBNP *Coronavirus felino *PCR *IFA *Mycoplasmas hemotrópicos felinos *Hemocultivo general Llenar hasta la capacidad marcada y homogeneizar 10 veces suavemente. Después de atemperarse mantener la muestra en refrigeración ¡nunca congelar! CITRATO DE SODIO 3.8% (tubo con tapón azul)
*Perfil CID
*Brucella canis Hemocultivo
Utilizamos 1 ml de plasma o 2‐3 ml sangre entera con citrato (conservar proporción sangre/anticoagulante 9:1), mezclar suavemente 10 veces. Se debe trabajar en un tiempo máximo de 4 horas. HEPARINA (tubo verde) *Amoniaco *Calcio Ionizado *Etilenglicol *Zinc en sangre Jeringa heparinizada de 1 a 3 mL de sangre completa venosa o arterial, utilizamos plasma *Gasometría Jeringa heparinizada de 1 a 3 mL de sangre completa venosa o arterial, utilizamos plasma No presionar el vaso sanguíneo por más de 20 segundos para evitar alteraciones Evitar generar burbujas o eliminarlas dejando salir una gota de sangre Colocar tapón de goma en punta de aguja Procesar inmediatamente. *Hemograma/Bioquímica en especies exóticas Jeringa heparinizada de 1 a 3 mL de sangre completa venosa.
II. Bioquímica
SANGRE ENTERA SIN ANTICOAGULANTE (SUERO) Tubo rojo o amarillo *Bioquímica Clínica *ANA *Brucella canis Aglutinación en placa *Toxoplasma Esperar formación de coágulo a temperatura ambiente (30 min) Separar el coágulo de las paredes del tubo con palillo de madera y centrifugar a 3000 rpm por 10 min, separar el suero en otro recipiente Analizar de inmediato o conservar en refrigeración (una vez separado se puede congelar) Evitar exposición a la luzIII. Orina
ORINA (recipiente limpio hermético)
*Urianálisis
Colección por micción espontánea (más común), cistocentesis (orina estéril), cateterismo, compresión vesical. Colectar en un recipiente de plástico o vidrio limpio y hermético (micción), recipiente estéril (sospecha de infección). Evitar exposición a la luz Trabajar la orina dentro de las primeras cuatro horas, conservar en refrigeración *Relación Cortisol/creatinina 4 ml de la primera orina de la mañana Se sugiere obtención por el propietario mediante micción espontánea *Urocultivo Obtención de la muestra por cistocentesis, conservación en recipiente estéril, mantener en refrigeración.
IV. Citología
Información clínica Además de la reseña, anamnesis y examen físico de rutina, se requiere de una descripción detallada de la lesión a muestrear que incluya:•
Distribución anatómica de la(s) lesión(es)•
Planos anatómicos afectados (cutánea, subcutánea o tejidos profundos)•
Superficie, textura y forma (lisa, rugosa, alopécica, nodular, pediculada, sésil o ulcerada)•
Color (negro, eritematoso, violáceo, etc.)•
Únicos o múltiples•
Calidad (seca, húmeda (exudado), hemorrágica)•
Dimensiones (tres: largo, ancho y profundidad)•
Características a la palpación: consistencia (dura, blanda, mixta, turgente), rugosa o lisa (subcutáneas o profundas), delimitación, fijo o móvil, dolorosa o no. Técnicas de muestreo (obtener de 3‐5 laminillas por sitio) Aspiración con aguja delgada: La más común en lesions nodulares.Delimitar y sujetar la masa con la mano libre, introducir la aguja y mantener la presión negativa al mismo tiempo que se rota la aguja para obtener más material. Suspender la presión negativa una vez que se observe muestra al inicio de la jeringa, ya que indicaría hemodilución.
Si lo que se aspira es líquido (lesión quística), continuar aspirando y remitirlo. Evitar la aspiración en tejido u órgano muy irrigado; preferir solo punción.
Punción con aguja delgada:
Se utiliza solo la aguja sin jeringa, la cual se introduce y retira varias veces (al menos 10 veces) al mismo tiempo que se va rotando. Impresión: Lesiones ulceradas: Tomar impresiones antes y después de limpiar la úlcera. Biopsias: secar tejido en toallas de papel e imprimir varias veces en la laminilla. Raspado: En lesiones duras (mesenquimatosas), en epidermis, necropsias/biopsias. Utilizar una hoja de bisturí o laminilla hasta que la muestra sea evidente y untar la muestra sobre la laminilla En raspados conjuntivales utilizar la base de la hoja del bisturí y proteger el filo con cinta.
Hisopado: Para lesiones fistulosas y órganos tubulares (vagina, útero, conducto auditivo, fosas nasales, cavidad oral, recto). Verificar que el hisopo este fijo al palillo de madera Introducir hisopo, rotar y retirar evitando la contaminación con otros tejidos Rotar hisopo sobre la laminilla ejerciendo ligera presión en forma lineal Aspirado/punción en cavidades corporales: Remitir como evaluación de líquidos corporales para su examen físico, químico y citológico. (torácico, abdominal, LCR, articulaciones)
Efusiones pleurales, peritoneales pericárdicas colectar en tubo EDTA (morado) y tubo sin anticoagulante LCR y sinovial en tubo sin anticoagulante El LCR debe ser procesado en los primeros 30 minutos posteriores al muestreo debido a que sufre rápida degeneración celular lo cual interfiere en su identificación y diagnóstico. Preparación de muestras Depende de la consistencia de la muestra, como se va a preparar para su observación en una laminilla.
•
Frotis terminal: muestras con consistencia como sangre.•
Squash o aplastamiento: Muestras espesas y/o viscosas.•
Frotis lineal: muestras muy líquidas con poca celularidad. Envío de muestras Una vez que las muestras se han fijado al aire, proteger el lado de la muestra con la parte limpia de otra laminilla y enviar dentro de contenedor rígido con material inmovilizador para evitar que se rompan. Las muestras con material oleoso no secarán por lo que las laminillas deben remitirse por separado para evitar que se pierda la muestra. Incluir todos los datos de reseña, anamnesis y descripción de la lesión.Los líquidos obtenidos de masas deberán ser remitidos como “citología” no es necesario remitirla como “evaluación de líquidos”
V. Endocrinología
*Hemoglobina Glicosilada *PTHr Tubo con EDTA: Llenar hasta la capacidad marcada y homogeneizar 10 veces suavemente. Después de atemperarse mantener la muestra en refrigeración ¡nunca congelar! *ACTH endógenaTubo con EDTA: Utilizar pipeta/tubo de plástico. Llenar hasta la capacidad marcada y homogeneizar 10 veces suavemente. Después de atemperarse mantener la muestra en refrigeración ¡nunca congelar!
*Relaxina
Citrato de Sodio: Utilizamos 1 ml de plasma o 2‐3 ml sangre (conservar proporción sangre/anticoagulante 9:1), mezclar suavemente 10 veces. Heparina: Jeringa heparinizada de 1 a 3 mL de sangre completa venosa. *Cortisol *Insulina *PTH *Progesterona *Estradiol *Testosterona Sin anticoagulante: Esperar formación de coágulo a temperatura ambiente (30 min) Separarlo de las paredes del tubo con palillo de madera y centrifugar a 3000 rpm por 10 min Separar el suero en otro recipiente y analizar de inmediato o conservar en refrigeración Evitar exposición a la luz *T4 Total/T4 Libre Tubo sin anticoagulante, SIN gel separador
VI. Histopatología
De manera general, seccionar los tejidos con cuidado de no lastimar y alterar la arquitectura tisular.
Abarcar siempre tejido sano y lesionado.
Colocar el tejido recién cortado en el fijador (formol/formalina al 10%), procurando tener una proporción mínima de 10:1 (mililitros de formol/gramos de tejido)
Para evitar la retracción del tejido, las biopsias de piel (sin tumor/masa) deberán colocarse en una superficie plana (por ejemplo, cartón o abatelenguas) inmediatamente después de su obtención y depositarlas en el formol . No colocar entre dos superficies y comprimir.
Cualquier órgano tubular (por ejemplo, esófago, intestino, vesícula biliar o vejiga) no deberán ser incididos, lo recomendado es incrementar la cantidad de ml de formol.
En el caso de tumor/masa, no deberán ser cortados por la mitad, es mejor incrementar la cantidad de ml de formol.
En caso de múltiples lesiones cutáneas similares y en diferentes sitios anatómicos, se recomienda muestrear al menos 2 sitios incluyendo tejido sano y afectado. Verificar que la muestra contenga tejido profundo.
Para el caso de neoplasias, se sugiere considerar retirar/remitir linfonodos regionales. Para muestras obtenidas por endoscopía se sugiere consultar la siguiente referencia http://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1111/j.1939‐1676.2009.0443.x/pdf
Considerar que los tejidos aumentarán su volumen conforme pasen los días en el formol por lo que se sugiere que el tejido abarque 2/3 partes del contenedor.
En el caso de necropsias se recomienda remitir el cadáver lo antes posible (2 horas), la refrigeración es admisible máximo 24 horas y nunca debe congelarse.