Caracterización y selección de bacterias-Doris Zuñiga

(1)

Caracterización y selección de bacterias promotoras de crecimiento en el cultivo orgánico de maca(Lepidium meyenii Walpers) como herramienta

Biotecnológica para mejorar su calidad productiva Proyecto Perú Biodiverso – GTZ - CONCYTEC

Dra. Doris Zúñiga Dávila

Universidad Nacional Agraria La Molina Mayo 2010

Email: dzuniga@lamolina.edu.pe

Web: www.lamolina.edu.pe/lmt

(2)

LUGAR DE EJECUCIÓN:

Campesina San Pedro de Cajas

Provincia de Tarma – Departamento de Junín

Ensayos de laboratorio: Laboratorio de Ecología Microbiana y

(3)

EQUIPO DE INVESTIGACIÓN Biol. Katty Ogata

Bach. Minoru Matsubara Bach. Mitsuyo García Bach. Jessica Tolentino Wendy Pérez

Bach. Luder Ramos Colaboradores

Dr. Carlos Samaniego, Ecoandino S.A.C

Dr. David Campos, Instituto de Biotecnología, UNALM

Institución Internacional

(4)

Lugares de muestreo y condición del campo

Lugar Suelo Condición de campo muestras

Galpón Condorín

(MC1) Rizosférico

1er año de siembra

M1 M2 M3 M4

Blanco (C1) Sin cultivo M1_M2

Agomachay (MC2) Rizosférico

2do año de cosecha

M1 M2 M3 M4

Blanco (C2) Sin cultivo M1_M2

(5)

(6)

Análisis Microbiológicos

• Recuento de bacterias aerobias mesófilas viables (ICMSF,

1998)

• Recuento de bacterias aerobias psicrófilas (ICMSF, 1998)

• Recuento de esporogénicos mesófilos aerobios (APHA,

1992)

• Recuento de mohos y levaduras (ICMSF, 1998)

• Recuento de actinomicetos (APHA AWWA WEF – 1998)

• Enumeración de Pseudomonas (APHA AWWA WEF – 1998)

• Enumeración de bacterias fijadoras de nitrógeno de vida

(7)

Bioquímica: glucosinolatos

Contenido macronutrientes

Contenido micronutrientes

Contenido de metales pesados

Plantas

Parámetros de crecimiento, tamaño, P

Fresco, P Seco, tasa de crecimiento

Suelo

Caracterización fisico quimica de suelos:

pH, M.O, CE, Textura.

Contenido de macronutrientes

Contenido de micronutrientes

(8)

Preparación de muestras y diluciones

10-1 10-2 ₁₀-3 90 mL AP 0.1%

Muestra

1 mL 9 mL AP 0.1% AP 0.1%9 mL 10 mL/g 1 mL

(9)

Análisis Diluciones Medio de cultivo Temperatura y tiempo de _incubación Aerobias

mesófilas -4, -5, -6 Agar Plate Count

28°C por 48 horas

Hongos

totales -2, -3, -4

OGY*

22°C por 3 - 5 días. Actinomicetos -1, -2, -3, -4 Agar Almidón caseína** 28°C por 6 - 7 días.

Bacillus

(80°C) -4, -5 y -6

AgarTriptona glucosa

28°C por 48 horas Diazótrofos de

vida libre -2, -3, -4, -5, -6, -7, -8 Caldo mineral sin nitrógeno 28°C por 7 - 10 días

Pseudomonas -2, -3, -4, -5, -6, -7 Caldo Asparagina 28°C por 7 - 10 días

Medios de cultivo y condiciones de incubación para la determinación de la microflora analizada

*Suplementado con Oxitetraciclina al 0.1% **Suplementado con Fluconazol al 0.25%

(10)

Medición de la actividad microbiana

Pesar 25g de suelo tamizado Adicionar 0.5mL de sol. glucosa 25% Vial con 3.5mL NaOH 1N

Incubar a 28°C por 24 horas

Trasvasar el contenido del vial a un matraz

Adicionar 3.5mL de BaCl₂+ fenoftaleína HCl

0.25N

Titular el NaOH no combinado (hasta el viraje de rosa grosella a transparente)

Calcular la tasa de CO₂ producido: mg CO2/g*h

(11)

Lugar : San Pedro de Cajas (4100 msnm)

Temperatura registrada durante el muestreo : 9 y 10°C

(12)

Temperatura y Humedad relativa del ambiente

Campo muestreado Característica LOCALIZACIÓN T (ºC) % H

Galpón Condorín

(C1) Primer año de siembra

18L0401914

9.42 60.8

UTM8755920

Agomachay (C2) Segundo año de _cosecha 18L0401914 10 53.4

UTM8755942

Condorín (D1) 10 años de descanso 18L0399212 9.04 65.4

UTM8754983

Pampa Cima (D2) 4 años de descanso 18L0398260 10.64 50.4

UTM8754213

Pampa Cima (D3) 1 año de descanso 18L0398288 10.88 39.2

(13)

Características fisicoquímicas de los suelos y rizósfera

Parámetros MC1 C1 MC2 C2 D3 D2 D1 pH 4.25 4.27 5.08 5.08 5.26 4.59 4.48 C.E. 0.57 0.26 0.5 1.44 0.48 0.38 0.6 CaCO₃ 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 M.O. 4.84 4.4 6.4 11.94 8.1 5.5 4.7 P 67.9 60.6 61.6 64.1 61.3 65.2 65.9 K 215 176 158 554.4 210 161 231

Clase Textural Fr.A. Fr. A. Fr.A. Fr.A. Fr.A. Fr.A. Fr.A.

CIC 14.9 15.04 27.52 23.68 8.43 8.43 8.43

(14)

Parámetros _{1 año}C1 Siem. C2 2 año cosecha pH 5.2 5.21 C.E. 0.51 0.24 CaCO₃ 0.00 0.00 M.O. 7.8 8.0 P 36.7 56.1 K 162 196

Clase Textural Fr. A. Fr.A.

CIC 18.72 24.00

Características fisicoquímicas de los suelos, San Pedro de Cajas

(15)

PRIMER MUESTREO

Bacterias m esófilas Psicrófilos

Suelos aerobios* Bacillus* Mohos* Actinomicetos* Diazótrofos** Pseudomonas** mg CO2/

(gss * h) aerobios C1 6.18 4.74 5.08 5.08 5.30 3.95 0.026 4.903 C2 7.18 4.49 5.46 4.91 6.06 4.93 0.046 7.490 MC1 5.69 4.49 4.11 4.32 4.95 6.04 0.030 6.591 MC2 6.99 4.84 4.88 5.04 6.20 6.25 0.055 7.157 D1 6.41 4.52 5.26 5.78 4.95 5.38 0.034 5.903 D2 5.41 4.81 5.28 4.93 5.18 4.38 0.020 6.121 D3 5.90 4.81 5.32 5.30 5.30 3.38 0.032 6.182

Poblaciones microbianas del suelo y de la rizósfera de maca

– Junín

* Log ufc/g** NMP/g

Mohos y levaduras

Esporulados mesófilos aerobios

(16)

Poblaciones microbianas del suelo y rizósfera del cultivo de maca 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 C1 MC1 C2 MC2 D1 D2 D3 Suelos muestreados log ( uf c /g) aerobios mohos y levaduras bacillus psicrófilos actinomicetos

Poblaciones microbianas de Pseudomonas y diazótrofos en el suelo y rizófera del cultivo de maca

0 1 2 3 4 5 6 7 8 C1 MC1 C2 MC2 D1 D2 D3 Suelos muestreados log ( N M P /g) pseudomonas Azotobacter

(17)

SEGUNDO MUESTREO

Bacterias mesófilas Bacterias psicrófilas

Suelos aerobios Bacillus Actinomicetos Mohos Diazótrofos Pseudomona aerobios Bacillus Mohos mg CO2 resp/ (g suelo* h) C1 6.76 5.04 4.13 5.48 5.64 2.89 4.66 4.75 5.20 0.0302 C2 6.43 4.67 3.52 5.64 6.06 4.38 6.22 4.60 5.93 0.0447 MC1 6.42 4.86 4.77 5.00 7.12 5.03 6.84 5.01 5.20 0.0354 MC2 6.30 4.69 4.28 5.40 5.94 5.44 6.44 4.97 5.49 0.0446 D3 6.68 4.89 4.29 3.89 6.33 6.03 6.30 5.17 4.88 0.0383 Act. Microbiana

(18)

Poblaciones microbianas del suelo y rizósfera del cultivo de "maca" 0 1 2 3 4 5 6 7 8 C1 MC1 C2 MC2 D3 Suelos muestreados lo g (u fc /g ) Bacillus Psf M y L Psf. Aerobios Psf M y L Bacillus Aerobios Actinomicetos

Poblaciones Pseudomonas y diazótrofos del cultivo de "maca"

0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 C1 MC1 C2 MC2 D3 suelos muestreados lo g (N M P/ g ) Pseudomonas Diazotrofos

Población microbiana de suelos de Junín del segundo muestreo

Mc1 y Mc2, rizósferas maca

(19)

Variación de las Poblaciones microbianas en Galpón Condorín

0 1 2 3 4 5 6 7 8 0 20 40 60 80 100 120 140 lo g ( u fc /g ) tiempo (días)

log (ufc/g) vs tiempo (días) Galpón Condorín (C1) aerobios Bacillus mohos actinomicetos aerobios psf 0 1 2 3 4 5 6 0 20 40 60 80 100 120 140 lo g ( N M P /g ) tiempo (días)

log (NMP/g) vs tiempo (días) Galpón Condorín (C1)

diazótrofos Pseudomonas

(20)

0 1 2 3 4 5 6 7 8 0 20 40 60 80 100 120 140 lo g (u fc /g ) tiempo (días)

log (ufc/g) vs tiempo (días) Agomachay (C2)

aerobios Bacillus mohos actinomicetos aerobios psf

Variación de las Poblaciones microbianas en Agomachay

0 1 2 3 4 5 6 0 20 40 60 80 100 120 140 lo g (p o b la c N M P/ g ) tiempo (días)

log (NMP/g) vs tiempo (días) Galpón Condorín (C1)

diazótrofos Pseudomonas

(21)

Reacción oxidativa con el reactivo de Salkowsky

Producción de Ácido Indolacéticos

•Bacterias diazótrofas

mostraron altos niveles de AIA y de solubilización de fosfatos en comparación a los otros grupos bacterianos

(22)

a

b

(23)

0 cm

0.05 a 0.45 cm 0.5 a 1.8 cm

0 cm

0.05 a 0.45 cm 0.5 a 1.8 cm

421 241 (57.24%) 102 (24.23%) 78 (18.53%) 204 (48.46%) 160 (38%) 57 (13.54%)

Solubilización de fosfato bicálcico

Solubilización de fosfato tricálcico

Total de Bacterias

< 20 a 70 µg/ml

0 µg/ml

20 a 70 µg/ml

421 246 (58.43%)

43 (10.21%)

132 (31.36%)

Producción AIA

Total de bacterias

Bacteria

Cultivos

Pantoea agglomerans

trigo

Rahnella aquatilis

trigo, maíz

Stenetrophomonas rhizophila papa, colza

Total de bacterias que solubilizaron fosfato bi y tricálcico Total de bacterias que produjeron Ácido indolacético Bacterias relacionadas a la rizósfera de diferentes cultivos

(24)

Producción de AIA Solubilizción de fosfatos 20 a 70 µg/ml Bicálcico (0.5 a 1.8 cm) Tricálcico (0.5 a 2 cm) Cepas Bacillus 19 (4.51%) 0 (0%) 0 (0%) Actinomicetos 23 (5.46%) 1 (0.24%) 1 (0.24%) Pseudomonas 54 (12.83%) 32 (7.6%) 29 (6.89%) diazótrofos 36 (8.55%) 35 (8.31%) 29 (6.89%)

(25)

5Aa _53Aa _66Aa _B29a _{Ps 31}a

Ø Crec Halo Ø Crec Halo Ø Crec Halo Ø Crec Halo Ø Crec Halo

5Ab _0.85 ₊₊ _- _0.8 ₊ _- _0,75 ₊ _- _0.8 ₊ _- _0.8 ₊ -53Ab _0.8 ₊ _- _0.8 ₊ _- _0,85 ₊ _- _0.9 ₊₊ _- _0.85 ₊₊ -66Ab _0.9 ₊₊ _- _0.8 ₊ _- _0,75 ₊ _- _0.95 ₊₊ _- _0.85 ₊₊ -B29b _0.95 ₊₊ _- _1.1 ₊₊₊ _1.1 ₁ ₊₊₊ _- _0.95 ₊₊ _- _0.95 ₊₊₊ -Ps 31b _0.8 ₊ _- _0.9 ₊₊ _0.9 ₁ ₊₊₊ ₁ _0.85 ₊ _0.85 _0.9 ₊₊ _0.9 Ps 42b _1.55 ₊₊₊ _- _1.05 ₊₊₊ _1.05 _1,6 ₊₊₊ _- _1.05 _{+++ 1.05} ₁ ₊₊₊ ₁ Ps 88b _0.95 ₊₊ _0.95 _1.1 ₊₊₊ _1.1 _0,9 ₊₊ _0.9 _0.8 ₊ _0.8 _0.95 ₊₊₊ _0.95 12 Actc _0.9 ₊₊ _- _0.9 ₊₊ _- _0,85 ₊ _- _0.75 ₊ _1.4 _0.8 ₊ -5 Actc _0.9 ₊₊ _- _0.95 ₊₊₊ _- _0,85 ₊ _- _0.9 ₊₊ _1.5 _0.85 ₊₊

(26)

Ps 42a _{Ps 88}a _{12 Act}a _{5 Act}a

Ø Crec. Halo Ø Crec. Halo Ø Crec. Halo Ø Crec. Halo

5Ab _0.75 ₊ _- _0.85 ₊₊ _- _0.8 ₊ _- _1.05 ₊₊₊ -53Ab _0.75 ₊ _- _0.8 ₊ _- _0.8 ₊ _- _0.85 ₊ -66Ab _0.8 ₊ _- _0.9 ₊₊ _- _0.7 ₊ _- _0.8 ₊ -B29b _0.8 ₊ _- _0.9 ₊₊ _- _0.75 ₊ _- _0.85 ₊ -Ps 31b _0.85 ₊₊ _- _0.8 ₊ _- _0.7 ₊ _0.7 _0.9 ₊₊ _0.9 Ps 42b _0.8 ₊ _0.8 _0.8 ₊ _- _0.7 ₊ _- _0.9 ₊₊ _0.9 Ps 88b _0.9 ₊₊ _0.9 _0.9 ₊₊ _0.9 _0.75 ₊ _1.3 _0.9 ₊₊ _0.9 12 Actc _0.7 ₊ _- _0.8 ₊ _- _0.8 ₊ _- _0.9 ₊₊ ₂ 5 Actc _0.65 ₊ _- _0.8 ₊ _- _0.75 ₊ _0.75 _0.9 ₊₊

(27)

Porcentaje de germinación in vitro a los 8 días 0 20 40 60 80 100 120 Tratamientos P o rc e n ta je d e g e rm in a c ió n 46 56 48 44 66 45 58 87 40

A3M2 pf pp A16M2 B4 B15 st5 P2N3 H2O

B15 Ps42 Control 14A B11 6A B2 P2N3 Ps31 5A Act. M2/-4 40 72 29 33 22 43 50 62 59 71 70 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 Po r c e n ta je d e g e rm in a c ió n Tratamiento

Porcentaje de germinación in vitro a los 2 días

Pruebas de germinación en maca

Germinación usando bacterias aisladas de otros cultivos

altoandinos (8 a 10°C)

Germinación usando bacterias aisladas del

(28)

ActM2/-4 Control

(29)

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 P o rc e n ta je d e g e rm in ac ió n Cepas probadas

Porcentaje de germinación in vitro a los 2 dias

(30)

N+ A3M2 pf pp A16M2 B4 B15 st5 N- P2N3 H2O 25.00 20.00 25.00 16.67 22.50 25.00 23.33 30.00 27.50 67.50 12.50 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 P o rc e n ta je d e e m e rg e n c ia Tratamientos

Porcentaje de emergencia de "maca" a los 15 días

Emergencia de maca usando bacterias aisladas de otros

cultivos altoandinos (8 a 10°C)

(31)

Peso seco aéreo de plantas de maca de 3 meses Condiciones de laboratorio (15 a 18°C) 0 0.005 0.01 0.015 0.02 0.025 0.03 0.035 0.04 0.045 0.05

(32)

a _b

c

Sistemas a. Jarras leonard modificadas b. bandejas c. tapers

Plántulas de maca al mes de sembradas 19°C

(33)

Perfiles BOX - PCR de las cepas probadas como PGPRs

M. Marcador de ADN 1 Kb (Axygen), B. Blanco, 1. B2, 2. B11, 3. B15, 4. Ps31, 5. Ps42, 6. Ps 46, 7. 5A, 8: 6A, 9. 14A

M. Marcador de ADN 1 Kb (Axygen), B. Blanco, 1. Ps31, 2. Ps61, 3 Ps80, 4. Ps87, 5. Ps88, 6. 13Bac, 7. 4Bac, 8. 29Bac, 9. 25Bac, 10. 50A, 11. 53A, 12. 66A, 13. 64A

(34)

(35)

Árbol filogenético de secuencias del gen 16S rDNA. El método de reconstrucción filogenética fue

Neighbour-joining (NJ) y las distancias fueron calculadas de acuerdo al método de Kimura-2

parámetros. Los valores en los puntos de ramificación indican un soporte de bootstrap mayor al 60% (1000 pseudo-replicas). Los aislados de rizósfera de maca se muestran en negrita.

(36)

Ps88 Ps61 Ps87 Pseudomonas costantinii CFBP 5705T P. azotoformans IAM1603T P. poae LMG 21465T P. extremorientalis KMM 3447T P. salomonii CFBP 2022T P. proteolytica CMS 64T P. fluorescens IAM 12022T P. Antarctica CMS 35T P. putida IAM 1236T P. rhizosphaerae IH5T P. reinekei MT1T P. vancouverensis DhA-51T Ps42 Ps46 P. aeruginosa DSM 50071T_. Stenotrophomonas maltophilia LMG 981T S. acidaminiphila AMX 19T S. maltophilia IAM 12423T Ps31 S. rhizophila e-p10T

Rhizobium tropici CIAT 899T

97 88 67 62 98 100 100 88 100 0.01 Ps0

Árbol filogenético de secuencias del gen 16S rDNA. El método de reconstrucción filogenética fue

Neighbour-joining (NJ) y las distancias fueron calculadas de acuerdo al método de Kimura-2

parámetros. Los valores en los puntos de ramificación indican un soporte de bootstrap mayor al 60% (1000 pseudo-replicas). Los aislados de pseudomonaceae de rizósfera de maca se muestran en negrita.

(37)

Bacillus drentensis (T) type strain: ... Bacillus b ataviensis (T) type strain:... Bacillus soli (T) type strain: LMG 21...

Bacillus vireti (T) LMG 21834. Bacillus novalis (T) type strain: LMG... Bacillus niacini (T) IFO15566.

Bacillus pocheonensis (T) Gsoil 420. Bacillus foraminis (T) type strain: C...

Bacillus siralis (T) 171544. Bacillus circulans (T). Bacillus asahii (T) MA001.

Bacillus psychrosaccharolyticus (T) A... Bacillus sp. LMG 20238 (T).

Brevib acterium frigoritolerans (T) ty... Bacillus simplex (T) DSM 1321T. Bacillus b utanolivorans (T) K9. Bac29 Bac25 B.megaterium IAM1341I8 D16273 Bacillus litoralis (T) SW-211. Bacillus halmapalus (T) DSM 8723. Bacillus horikoshii (T) DSM8719. Bacillus luciferensis (T) LMG 18422. Bacillus cereus ATCC 14579 (T).

Bacillus sub tilis sub sp. sub tilis (T)... Bacillus marisflavi (T) TF-11.

Bacillus aquimaris (T) TF-12. Bacillus vietnamensis (T) 15-1.

Paenib acillus polymyxa IAM13419(t)

97 99 93 90 87 76 89 73 95 61 68 77 98 79 78 98 0.01 Árbol filogenético de secuencias del gen 16S rDNA. El método de reconstrucción filogenética fue Neighbour-joining (NJ) y las distancias fueron calculadas de acuerdo al método de Kimura-2 parámetros. Los valores en los puntos de ramificación indican un soporte de

bootstrap mayor al 60%

(1000 pseudo-replicas). Los aislados de Bacillus de rizósfera de maca se muestran en negrita.

(38)

Muestra N P K Ca Mg S Na Zn Cu Mn Fe B Mo Pb Cd Cr

C1 P9 3.7 0.2 1.5 1.79 0.165 0.33 0.2 77 6.5 102 582 239 3.05 17 0.5 0

C1 P12 4.5 0.2 1.8 1.85 0.17 0.39 0.1 97 10.5 119 861 149 4.88 42 0 0

C2 P2-P14 4.3 0.3 1.8 2.35 0.245 0.46 0.2 92 13 130 1133 177 2.35 21 0.8 0

C2 P15-P16 4.4 0.3 2 2.39 0.25 0.45 0.2 63 10 129 797 197 1.9 20 0 0

(39)

Muestra N P K Ca Mg S Na Zn Cu Mn Fe B Mo Pb Cd Cr C1 P9 2.44 0.21 1.23 0.64 0.08 0.33 0.17 45 7 62 2338 126 1.90 5.25 0.50 0.50 C1 P12 2.17 0.24 1.29 0.59 0.08 0.40 0.16 53 7 35 1395 137 2.28 2.00 0.00 0.00 C2 P2-P14 2.52 0.28 1.28 0.65 0.10 0.42 0.16 48 10 52 1470 165 2.10 6.25 0.00 0.25 C2 P15-P16 2.50 0.30 1.49 0.51 0.09 0.35 0.18 29 6 27 708 146 1.05 2.00 0.00 0.00

(40)

Cuantificación glucosinolatos siete meses después de la siembra

Muestra Ecotipo Concentración de glucosinolatos

µmol equi. de sinigrin/g ms

RC1P3 amarilla 9.89 ± 0.43 RC1P13 amarilla 16.99 ± 0.51 RC1P10 blanca 35.17 ± 3.39 RC2P1 morada 43.07 ± 0.51 RC2P9 morada 39.49 ± 3.81 RC2P13 RC2P10 Morada blanca 25.49 ± 4.10 38.69 5.49

(41)

(42)

(43)

Morfotipos de plantas de maca muestreados

(44)

Determinación taxonómica de la planta: Lepidium meyenii

Walpers

Flores de maca semillas de maca

(45)

CAPACITACIÓN Y DIFUSIÓN

1.- Taller biofertilizantes para la agricultura de Iberoamérica en el siglo XXI

Zúñiga, D. 2009. Presente y futuro de los biofertilizantes en Iberoamérica:

Perú. Taller de Biofertilizantes para la Agricultura de Iberoamérica en el sigo XXI. Red Biofag-CYTED. 4 mayo. La Habana, Cuba.

(46)

2.- Presentación de resúmenes y pósters

Katty Ogata*, Carlos García, Wendy Pérez, Mitsuyo García, Jessica Tolentino, Carlos Soto & Doris

Zúñiga. 2009. MICROFLORA Y ACTIVIDAD MICROBIANA DE LA RIZÓSFERA DEL CULTIVO DE

“MACA”

(Lepidium meyenii Walpers) EN LA MESETA DEL BOMBÓN – JUNÍN. XXIV RELAR IIBEMPA. La

Habana, Cuba. 4-8 Mayo.

Katty Ogata, César La Torre, Wendy Pérez & Doris Zúñiga. 2009. EFECTO

DE DIFERENTES BACTERIAS PROMOTORAS DE CRECIMIENTO (PGPR) EN LA GERMINACIÓN Y EMERGENCIA DE PLANTULAS DE “MACA” (Lepidium

(47)

Capacitación de asistentes de investigación de LEMYB en la XXIV

RELAR y I IBEMPA, La Habana Cuba.

(48)

Taller: Importancia de las PGPR en los cultivos orgánicos nativos

Katty Ogata y Carlos García con los agricultores

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CONCLUSIONES

Los contenidos de Cd, Cr están por debajo de los valores permitidos mientras que si presenta problemas de contaminación por Pb.

Conforme la temperatura del ambiente baja, las poblaciones de pseudomonas, actinomicetos y psicrófilos se incrementaron.

Los suelos de Junín son franco arenosos, con alto contenido de materia orgánica, pH ácidos, con disponibilidad de P y K, sin problemas de

carbonatos y CIC variable.

Las poblaciones de bacterias psicrófilas fueron mayores en la rizósfera de maca que en los suelos sin cultivo.

Los valores mínimos de las poblaciones aerobias estuvieron en el orden 106_{, diazótrofos 10}6_{, hongos 10}4_{, Bacillus 10}4_{, actinomicetos}

103 _{y los psicrófilos aerobio10}4_.

De 120 de cepas bacterianas (diazótrofos, pseudomonas,

actinomicetos y bacillus), todas produjeron AIA en diferentes niveles. Sin embargo, 6 cepas de diazótrofos destacaron por sus niveles de mayor producción.

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Cinco cepas aisladas de rizósfera de maca (bacillus, pseudomona, actinomicetos y diazótrofos) (de 11 seleccionadas) incrementaron significativamente el % G semillas de maca.

Dos cepas de rizobios y un Bacillus (aisladas de tara, haba y papa) incrementaron significativamente los porcentajes de germinación de semillas de maca. Cuando se probó la emergencia sólo la cepa de rizobio P2N3 incrementó significativamente la emergencia de este cultivo.

De un total de 421 cepas aisladas se encontró que 132 (31%) produjeron de 20 a 70 µg/ml de AIA.

En la prueba de solubilización de fosfatos 68 cepas de las 421 cepas aisladas presentaron halos de 0.5 a 1.8 cm cuando se utilizó el medio NBRIP – bicálcico y 59 cepas presentaron halos de solubilización entre 0.5 y 2 cm el NBRIP – tricálcico

Las cepas de pseudomona Ps42, actinomiceto 5Act y las interacciones actino-diazótrofo: 5Act+5A, diazótrofo-pseudomona 5A+Ps42 presentaron diferencias significativas respecto al control.

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El contenido de nitrógeno, potasio, calcio y magnesio en la parte aérea fue mayor que en la parte radicular. En cuanto al contenido de metales

pesados, la parte aérea tiene casi cinco veces más de contenido de plomo

que la parte radicular; mientras que el contenido de cromo fue mayor en la parte radicular.

No se observó ninguna influencia del tipo de suelo en la concentración de glucosinolatos obtenidos. Por otro lado, se encontró que las macas moradas presentaron una mayor cantidad de este principio activo en comparación con las macas amarillas.

Se encontró que una de las cepas (Ps31) corresponde a una

Stenotrophomonas rhizophila. Las demás pseudomonas caracterizadas

pertenecen al grupo de P. fluorescens y P. putida

Se encontraron también bacterias relacionadas con Rahnella aquatilis y

Pantoea agglomerans; y dos cepas de Bacillus emparentadas con B. butanolivorans

De los glucosinolatos analizados se encontró un mayor contenido de

Glucotropaeolin (benzylglucosinolato) lo que corresponde a lo encontrado en la bibliografía tanto en hipocotilo como en hojas.

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•Se presentaron 3 resúmenes y 2 pósters a la XXIV RELAR - I IBEMPA. La

Habana Cuba. 2009.

•Una ponencia en Conference 16 of the FAO Biotechnoloogy Forum,

Entitled “Learning from the past: Successes and failures with agricultural biotechnologies in developing countries over the last 20 years”. 8 junio-8 Julio 2009.

•Existe un gran interés por parte de los agricultores y de la empresa de

adquirir los conocimientos en lo que es agricultura orgánica, Utilizar las bacterias promotoras de Crecimiento vegetal y poner en práctica la

inoculación con estos microorganismos en los cultivos nativos

Altoandinos.

De todos los sistemas probados, substratos y temperaturas ambientales,

las jarras leonard, el suelo de Junín y condiciones de temperaturas frías

resultaron mejor en la emergencia, crecimiento y desarrollo de plántulas de maca.

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