Comparison of hematology reference values of strain wistar/uis (Rattus norvergicus) with parameters established in standards laboratories

(1)

hematológicos en ratas wistar/UIS (Rattus norvergicus) con parámetros establecidos en laboratorios de altos estándares

Víctor Hernán Arcila Quiceno MVZ, Esp.*

* Docente-investigador. Comité de Investigación en Ciencias Animales (CICA). Grupo de investigación en ciencias animales, Universidad Cooperativa de Colombia. Correo electrónico: victor.arcila@correoucc.edu.co

Carlos Arturo Conde Cotes MD, Ph. D**

** Docente-investigador, Universidad Industrial de Santander. Director Bioterio UIS. Director Grupo de Neurociencias y Comportamiento UIS-UPB. Correo electrónico: cconde@uis.edu.co

Javier Eduardo Nieto Pico MVZ***

*** Universidad Cooperativa de Colombia. Comité de Investigación en Ciencias Animales. Auxiliar de Investigación.

Laboratorio de Neurociencias y Comportamiento UIS, Universidad Industrial de Santander.

Correo electrónico: javimvz@gmail.com Fredy Humberto García Prada MVZ****

**** Universidad Cooperativa de Colombia. Comité de Investigaciones en Ciencias Animales (CICA).

Correo electrónico: fredygapra@hotmail.com

Abstract: in the world, many research laboratories public and private, have totally characterized the colonies of animals maintained, this data recorded include: the microbiological environment of the animal facilities, the organs weight, microbiological quality of biomodels, genetic status, growth charts, among others, which has enabled researchers to produce animals with specific characteristics to the needs of each area of research. The aim of this study was to determine the hematology reference values for strain wistar/UIS, the results allow us to see differences in different variables, both within the wistar/UIS determined by sex and age, and also significant differences with the strain used for comparison.

Keywords: animal housing facilities, strain, hematology, rat.

Resumen: en el contexto mundial, muchos laboratorios y centros de investigación, tanto públicos como privados, han caracterizado totalmente las colonias de animales que mantienen, teniendo registrados datos que incluyen: el ambiente microbiológico de los bioterios, el peso de los órganos, la calidad microbiológica de los biomodelos, su condición genética, curvas de crecimiento, entre otros, lo que ha permitido obtener animales con características específicas para la necesidad de cada área de investigación. El objetivo de este trabajo fue determinar los valores de referencia hematológicos de la cepa wistar/UIS. Los resultados permiten observar diferencias en diferentes variables dentro de la cepa wistar/UIS, determinadas por sexo y edad, y también diferencias significativas con respecto a la cepa utilizada para comparación.

Palabras clave: bioterio, cepas, hematología, ratones.

Recibido: 30 de septiembre del 2009 Aceptado: 30 de noviembre del 2009

Comparison of hematology reference values of strain wistar/UIS (Rattus

norvergicus) with parameters established in standards laboratories

(2)

Introducción

La hematología comprende el estudio del paquete celular, el perfil o el estado sanguíneo. Específicamen- te, los estudios de cambios hematológicos hacen par- te de una primera aproximación para la caracteriza- ción de un biomodelo, determinando características morfológicas y químicas, permitiendo así establecer valores alrededor de las condiciones y el manejo de los animales de experimentación (1, 2), teniendo en cuenta:

• Recuento de eritrocitos (y valor hematocrito)

• Recuento de leucocitos

• Determinación de hemoglobina

• Fórmula leucocitaria (recuento diferencial de leucocitos)

• Determinación de las plaquetas

• Índices eritrocíticos de Wintrobe (VCM, HCM, CHCM)

Los eritrocitos, también denominados hematíes o glóbulos rojos, son células redondeadas, bicónca- vas y anucleadas (excepto en aves y reptiles). Están formados por un 60% de agua, 35% de hemoglobina y 5% de matriz orgánica; se caracterizan por ser alta- mente deformables, propiedad que les permite pasar a través de capilares estrechos. Son producidos en la médula ósea a nivel del compartimiento hematopo- yético. La biometría hemática o hemograma es uno de los procedimientos de rutina a nivel de labora- torio con requerimientos mínimos de equipo y de mayor importancia, ya que la información obtenida proporciona una idea muy confiable del estado ge- neral de la salud del paciente (3, 4). La determina- ción de la fórmula roja se compone de los siguientes parámetros:

• Conteo eritrocítico: consiste en la cuantificación del número de glóbulos rojos por volumen. El re- cuento de los eritrocitos se puede hacer mediante métodos manuales o automatizados (en la actuali- dad, los métodos manuales no son muy utilizados).

Se realiza en un hemocitómetro o cámara de Neu- baüer. Su variación en los resultados es alta (± 20%) y hay mayor gasto de tiempo.

• Volumen corpuscular medio (VCM): (Hto. x 10/

eritrocitos): se trata del volumen promedio de una célula individual; es una forma de conocer el volu- men ocupado por un eritrocito dentro del hema- tocrito.

• Concentración de hemoglobina corpuscular media (CHCM): (Hb. x 100 / Hto. %): es la cantidad de hemoglobina que está relacionada directamente con el eritrocito. Corresponde al índice más preciso, ya que no requiere del conteo total de eritrocitos cir- culantes. Esta ecuación indica cuál es la cantidad de hemoglobina presente en la masa globular, y se expresa en gr / dL. La CHCM estaría señalando si los glóbulos rojos poseen una cantidad adecuada de hemoglobina (normocrómicos), según la especie, o, por el contrario, si esta es baja (hipocrómicos) (5).

• Hemoglobina corpuscular media (HCM): (Hb. x 10 / eritrocitos): señala cuál sería la cantidad de he- moglobina que contiene en promedio un eritroci- to. Se expresa en picogramos (pg = 10-12 gr) y se obtiene al dividir la concentración de hemoglobina por el recuento de glóbulos rojos. La información obtenida con este índice es similar a la que entrega la CHCM, por lo que ofrece poca información adi- cional (5).

La denominada “línea blanca” determina los pa- rámetros relacionados con los leucocitos (también llamados glóbulos blancos), conjunto heterogéneo de células sanguíneas que son los efectores celulares de la respuesta inmune, de manera que intervienen en la defensa del organismo contra sustancias extrañas o agentes infecciosos (antígenos). Se originan en la médula ósea y en el tejido linfático. Son células con núcleo, mitocondrias y otros orgánulos celulares. Son capaces de moverse libremente mediante seudópo- dos. Su tamaño oscila entre los 8 y 20 μm (6).

Materiales y métodos

Para el desarrollo de este trabajo se tomaron mues- tras de sangre de 100 ratas wistar/UIS (Rattus norvegicus), 50 machos y 50 hembras mayores de 8 semanas, provenientes del bioterio de la Facultad de Salud de la Universidad Industrial de Santander.

Los animales fueron mantenidos bajo ciclos de luz-oscuridad controlada (12 horas c/u, luz encen- dida a las 7 a.m. y apagada a las 7 p.m.) y en todos los casos se suministraron 15 gramos de alimento/

animal/día. Además, estuvieron bajo temperatura

controlada (21 ± 2 ºC) y humedad relativa prome-

dio de 65% a 75%. La toma de las muestras sanguí-

neas en todos los casos fue realizada entre las 6 a.m.

(3)

y las 8 a.m. por el método de punción de la vena lateral caudal. Todos los procedimientos llevados a cabo con los animales se hicieron con la aprobación del comité de bioética, y bajo los lineamientos para el uso y cuidado de animales de laboratorio (7, 8, 9, 10).

Procesamiento de las muestras

Para el recuento total de glóbulos rojos, se hizo una dilución 1/200 de la sangre. Posteriormente, se depo- sitó la dilución en la cámara de Neubaüer, leyendo 5 de los 25 cuadrantes del centro (los 4 extremos y el centro). El conteo se realizó en un microscopio de luz con el objetivo de 40x y el resultado fue multiplicado por 10.000, lo que representa un número de eritroci- tos por milímetro cúbico (106/mm3) de sangre.

El hematocrito se determinó por el método de microhematocrito, que consiste en un tubo capilar de calibre estrecho, de aproximadamente 1 mm de diámetro y de 60 mm de longitud, que se llena casi completamente de sangre, cerrado en uno de sus extremos (para lo cual se usa con regularidad plas- tilina), y se centrífuga a 10.000 RPM durante 5 mi- nutos. Transcurrido este tiempo, se hace la lectura en una tabla especial graduada de 0 a 100.

La determinación de la hemoglobina se realizó por colorimetría, mediante el método de la ciano- metahemoglobina. El resultado se expresa en g/dl.

Los índices de eritrocitos fueron determinados mediante cálculos matemáticos, por medio de los índices eritrocíticos de Wintrobe.

El recuento total de glóbulos blancos se realizó utilizando un hemocitómetro de Neubaüer, la pipeta para dilución de leucocitos y la solución de Turk. El recuento diferencial se realizó por medio de un ex- tendido de sangre en una lámina portaobjetos con tinción de Wright y se examinaron al microscopio de luz con el objetivo de 100x, usando aceite de in- mersión y contando hasta 100 células, las cuales se clasificaban de acuerdo con sus características mor- fológicas.

Para el recuento plaquetario se utilizó un hemo- citómetro de Neubaüer, la pipeta para dilución y so- lución de oxalato.

Análisis estadístico

Para la elaboración del análisis de este estudio se dividieron los animales en 4 grupos, considerando sexo y edad. Esta división se realizó con base en el criterio de adultos jóvenes y adultos mayores, con el fin realizar la comparación con datos de otras publi- caciones, como las de Charles River (11, 12).

tabla 1. Cuantificación del número de animales de acuerdo con los grupos de edad

Grupo n

Hembras menores de 16 semanas 21

Hembras mayores de 16 semanas 29

Machos menores 16 semanas 10

Machos mayores 16 semanas 40

Fuente: los autores

Para todos los sujetos de este estudio se registra- ron y analizaron las siguientes variables:

• Sexo (machos-hembras), fecha de nacimiento y fecha de análisis, como criterio para precisar la edad en semanas.

• Volumen y concentración de glóbulos rojos: he- matocrito (Hto. %), hemoglobina (Hb gr/dL), re- cuento total de glóbulos rojos (RTGR 106/mm3), volumen corpuscular medio VCM fL (μm3), concen- tración de hemoglobina corpuscular media CHCM (g/dL), hemoglobina corpuscular media HCM (pg).

• Valores relativos y absolutos respectivamente para los leucocitos: segmentados (%), segmentados (103/mm3), linfocitos (%), linfocitos (103/mm3), eo- sinófilos (%), eosinófilos (103/mm3), monocitos (%), monocitos (103/mm3), cayados (%), cayados (103/

mm3), basófilos (%), basófilos (103/mm3), recuento total de glóbulos blancos (RTGB 103/mm3).

• Conteo total de plaquetas (103/mm3): para el

análisis estadístico se realizó ANOVA de dos vías,

tomando como factores el sexo y la edad, junto con

comparaciones múltiples corregidas (Bonferroni

test) para cada una de las variables. Posteriormente

se utilizó la prueba de valor de hipótesis (hypothesis

test) para hacer la comparación con los parámetros

de referencia (mean vs. hipothesized value). El nivel

de significancia fijado para las pruebas estadísticas

utilizadas fue de P < 0,05. Se utilizaron los recursos

de planillas de Excel (Microsoft Office) y el Sig-

maStat v. 3.5 para los análisis estadísticos.

(4)

Resultados

El primer análisis tenía como propósito evaluar si había diferencias significativas entre machos y hem- bras por grupos de edades en cada una de las varia- bles. Un análisis con ANOVA de dos vías (sexo y edad) con cada una de las variables mostró los si- guientes resultados:

Las variables Hto. % (F 1,96 = 6,013 p = 0,016), Hb gr/dL (F 1,96 = 4,709 p = 0,032) y RTGR 106/mm3 (F 1,96 = 12,425 p = < 0,001) mostraron una dife- rencia significativa determinada por el sexo, siendo mayor en los machos que en las hembras la variable VCM fL, que también mostró una diferencia signi- ficativa por el sexo (F 1,96 = 4,092 p = 0,0459), pero que fue mayor en hembras que en machos. Las varia- bles RTGR 103/mm3 (F 1,96 = 0,268 p = < 0,001), linfocitos % (F 1,96 = 0,451 p = < 0,001), plaquetas 103/mm3 (F 1,96 = 3,531 p = 0,008), linfocitos 103/mm3 (F 1,96 = 0,305 p = 8,60 E-05) y RTGR 106/mm3 (F 1,96 = 64,88 p = < 0,001) mostraron una diferencia significativa determinada por la edad, siendo mayor en los anímales menores de 16 semanas. Las varia- bles segmentados % (F 1,96 = 0,531 p = < 0,001), HCM pg (F 1,96 = 0,464 p = 1,57 E-05) y VCM fL (F 1,96 = 4,092 p = 1,43 E-09) muestran tam- bién una diferencia significativa determinada por la edad, pero siendo mayores en los animales de más de 16 semanas.

Con el tercer abordaje estadístico se pretendió realizar una comparación con los datos obtenidos para el mismo linaje de animales y los mismos inter- valos de edades reportados en marzo del 2008 por Charles River Laboratories Preclinical Services, Ra- leigh, NC 26. El análisis de los datos mostró dife- rencias significativas para cada uno de los grupos, en algunas de las variables consideradas, esto es, valores de hematocrito, recuento total de glóbulos rojos, re- cuento total de glóbulos blancos y recuento plaque- tario. Las figuras 1, 2, 3 y 4 muestran la comparación de los valores de hematocrito (Hto. %), recuento total de glóbulos blancos (TRGB 103/mm3), re- cuento total de glóbulos rojos (RTGR 106/mm3) y plaquetas (plaquetas 103/mm3), respectivamente, determinados tanto en machos como en hembras, en las diferentes edades, en ambos laboratorios ( UIS

- Charles River).

Hembras Machos Hembras - C Machos - C

40 42 44 46 48 52 50 54

%

Hto %-

CHARLES RIVER

UIS **

** **

***

*

<=16S >16S <=16S >16S <=16S >16S <=16S >16S

FiguRa 1. Representa los promedios ± EEM de los valores de hematocrito (Hto. %) de los grupos de la muestra estudiada y de los valores reportados por Charles River. * Machos mayores que hembras dentro de la muestra UIS (ANOVA dos factores p < 0,05). ** Valores de la muestra UIS mayores que valores de Charles River (Prueba t, p < 0,05).

Fuente: los autores

0 2 4 6 8 12 14 10 16

103/MM3

RTGB 10³/MM³

CHARLES RIVER UIS

<=16S >16S <=16S >16S <=16S >16S <=16S >16S

F^iguRa 2. Representa los promedios ± EEM de los valores de Recuento total de glóbu- los blancos (RTGB 103/mm3) de los grupos de la muestra estudiada y de los valores reportados por Charles River. * Mayor en los anímales menores de 16 semanas dentro de la muestra UIS (ANOVA dos factores p < 0,05). ** Valores de la muestra UIS mayores que valores de Charles River (Prueba t, p < 0,05).

Fuente: los autores

5 5,5 6 6,5 7 8 8,5 7,5 9

103/MM3

RTGB 10³/MM³

CHARLES RIVER UIS

<=16S >16S <=16S >16S <=16S >16S <=16S >16S

FiguRa 3. Representa los promedios ± EEM de los valores de recuento total de glóbulos rojos (RTGB 106/mm3) de los grupos de la muestra estudiada y de los valores reportados por Charles River. * Machos mayores que hembras dentro de la muestra UIS (ANOVA dos factores p < 0,05). ** Valores de Charles River mayores que valores de la muestra UIS (prueba t, p < 0,05). *** Mayor en animales menores de 16 dentro de la muestra UIS (ANOVA dos factores p < 0,05)

Fuente: los autores

(5)

Hembras Machos Hembras - C Machos - C 200

100 0 300 400 500 600 800 900 700 1000

103/MM3

Plaquetas 10³/MM³

<=16S >16S <=16S >16S <=16S >16S <=16S >16S

FiguRa 4. Representa los promedios ± EEM de los valores de plaquetas (plaquetas 103/

mm3) de los grupos de la muestra estudiada y de los valores reportados por Charles River. * Mayor en animales menores de 16 semanas dentro de la muestra UIS (ANOVA dos factores p < 0,05). ** Valores de Charles River mayores que los valores de la muestra UIS (Prueba t, p < 0,05)

Fuente: los autores

tabla 2. Valores de referencia hematológicos en ratas macho wistar/UIS

Parámetro Unidad Promedio SD Rango Promedio S.D. Rango Hematocrito % 51,3 1,42 49-54 49,80 3,60 40-55 Hemoglobina g/dL 15,24 1,32 13,20-17,10 14,72 2,44 10,22-23,52 Total glóbulos

rojos 106 /mm3 8,23 0,29 7,80-8,65 6,07 1,19 3,85-9,20 Total glóbulos

blancos 103/mm3 13,32 2,13 10,45-16,45 10,50 2,18 7,30-15,6 Neutrófilos 103/mm3 1,05 0,57 0,16-1,95 1,45 0,77 0,11-3,74 Linfocitos 103/mm3 12,09 2,29 9,41-15,13 8,82 2,02 5,93-12,96 Monocitos 103/mm3 0,09 0,15 0-0,47 0,10 0,19 0-1,09 Eosinófilos 103/mm3 0,07 0,1 0-0,24 0,12 0,14 0-0,67

Basófilos 103/mm3 0 0 0,00 0,00 0,03 0

Cayados 103/mm3 0,02 0,05 0-0,16 0,01 0,03 0-0,14 VCM fL 62,38 1,42 60-64,20 84,67 15,14 58,4-117,52 CHCM g/dL 29,69 2,22 25,88-32,88 29,72 5,63 20,86-52,27 HCM Pg 18,52 1,49 15,53-20,05 25,28 7,88 17,04-61,09 Neutrófilos % 8,2 4,85 1 a 16 13,90 6,27 1 a 29 Linfocitos % 90,5 5,04 82-96 83,88 7,30 64-99

Monocitos % 0,6 0,97 0-3 0,95 1,41 0-7

Eosinófilos % 0,6 0,84 0 -2 1,18 1,36 0-7

Basófilos % 0 0 0,00 0,00 0,00 0

Cayados % 0,10 0,32 0-1 0,08 0,27 0-1

Plaquetas 103/mm3 422,9 92,68 270-584 361,80 181,25 102-662 Machos menores de 16 semanas Machos mayores de 16 semanas

Fuente: los autores

tabla 3. Valores de referencia hematológicos en ratas hembra wistar/UIS

Parámetro Unidad Promedio SD Rango Promedio S.D. Rango Hematocrito % 48,38 3,47 37-53 46,21 3,33 40-52 Hemoglobina g/dL 13,90 1,02 12,5-15,8 13,98 2,37 10,40-18,50 Total glóbulos

rojos 106 /mm3 7,12 1,20 5,12-8,50 5,53 0,74 4,44-7,27 Total glóbulos

blancos 103/mm3 12,92 3,09 9,25-19,55 10,11 4,81 5,55-26,50 Neutrófilos 103/mm3 1,30 0,58 0,39-2,58 1,24 0,46 0,45-2,13 Linfocitos 103/mm3 11,41 2,79 7,96-17,40 8,69 4,74 3,72-24,65 Monocitos 103/mm3 0,05 0,10 0-0,37 0,05 0,10 0-41 Eosinófilos 103/mm3 0,13 0,11 0-0,39 0,12 0,13 0-0,54 Basófilos 103/mm3 0,02 0,09 0-0,39 0,01 0,03 0-0,13 Cayados 103/mm3 0,01 0,03 0-0,13 0,05 0,10 0-0,41 VCM fL 69,8 13,2 57,8-92,1 90,0 14,9 63,02-114,86 CHCM g/dL 28,89 2,98 24,53-36,22 28,61 4,32 21,76-36,27 HCM Pg 19,99 3,08 15,29-25,39 25,68 5,37 17,48-41,01 Neutrófilos % 10,10 4,17 4 a 20 14,03 7,33 5 a 30 Linfocitos % 88,33 4,66 77-96 84,00 7,41 67-94

Monocitos % 0,38 0,67 0-2 0,66 1,23 0-5

Eosinófilos % 1,00 0,77 0-2 1,14 1,19 0-4

Basófilos % 0,10 0,44 0-2 0,10 0,03 0-1

Cayados % 0,05 0,22 0-1 0,03 0,19 0-1

Plaquetas 103/mm3 387,76 121,22 228-656 279,59 74,46 176-460 Hembras menores de 16 semanas Hembras mayores de 16 semanas

Fuente: los autores

Discusión

Varios reportes han revelado que el sexo, la edad, la especie, la cepa, las condiciones ambientales, el es- tado sanitario, el estrés, la alimentación, la forma de obtención (13, 14) y el procesamiento de la muestra influyen en las grandes diferencias reportadas para estos parámetros. Ciertamente los valores reportados en cada una de estas investigaciones pueden ser limi- tados, ya que las variables aquí mencionadas pueden influenciar los resultados obtenidos. Así mismo, mu- chos datos han sido reportados en los trabajos citados, y existen diferencias significativas entre los reporta- dos en cada uno de ellos. Todos estos resultados no son, desde luego, directamente comparables entre sí, ya que han sido producto del trabajo con diferentes cepas (15) y fueron obtenidos en laboratorios dife- rentes, con condiciones ambientales distintas, usando una variedad de técnicas, durante determinado nú- mero de años (16). Sin embargo, se han llevado a cabo discusiones en torno a los resultados de cada uno de estos trabajos (17), teniendo en cuenta, por ejemplo, que algunas de las variaciones en los diferentes pará- metros pueden ser provocadas directamente por las diferencias genéticas de cada una de las cepas (18) y, por lo tanto, los datos allí reportados no pueden considerarse patológicos o anormales (19). Además, las diferencias en los parámetros para animales de la misma cepa mantenidos bajo las mismas condiciones pueden ser atribuibles a la fluctuación en el ambiente durante el curso del experimento (20).

Como un primer abordaje a la discusión de los da- tos obtenidos en este trabajo, se pueden mencionar las grandes diferencias en los valores del hematocrito (Hto. %) de los sujetos de este estudio, comparados con los valores de la referencia, como se mostró en los resultados (figura 1), los cuales pueden ser influen- ciados por la altura sobre el nivel del mar y la presión parcial de O2 (21), teniendo en cuenta que hay una diferencia de ± 900 msnm entre la ubicación del bio- terio del Laboratorio de Neurociencias y Comporta- miento UIS y la ubicación del bioterio de la referencia.

A pesar de que el recuento total de glóbulos rojos fue

significativamente mayor en la referencia, una posible

explicación de esta situación podría ser que el volu-

men corpuscular medio y la hemoglobina corpuscular

media se encontraban elevados como respuesta com-

pensatoria a los pocos glóbulos rojos en la sangre, sin

(6)

negar que estos resultados también pueden ser atri- buibles a las características genéticas propias de cada cepa, como lo han discutido otros investigadores (20).

Adicionalmente, se notó una diferencia significa- tiva en el recuento total de glóbulos rojos entre los animales de este estudio. Los valores de este paráme- tro fueron significativamente mayores para animales menores de 16 semanas que para los mayores, hecho que podría ser atribuido a la disminución de la capa- cidad hematopoyética de la médula ósea del adulto, en la que la médula celular activa, conocida como mé- dula roja, se convierte en médula inactiva infiltrada con grasa, que se conoce como médula amarilla. Por lo tanto, ya no hay tanta actividad hematopoyética en la médula de las cavidades de los huesos largos, ex- cepto en la porción superior del húmero y del fémur.

De igual forma, lo anteriormente mencionado puede explicar el hecho de que se haya encontrado este mis- mo comportamiento en el recuento de plaquetas y en el recuento total de glóbulos blancos (21).

Con respecto a las diferencias encontradas para las variables hematocrito (Hto. %), hemoglobi- na (Hb gr/dL) y recuento total de glóbulos rojos (RTGR 106/mm3), que se muestran significativa- mente mayores en los machos que en las hembras de este estudio, cabría mencionar que se puede atribuir este efecto a la testosterona y los esteroides andro- génicos relacionados (22), que demostraron poseer acciones eritropoyéticas (23). Ha sido postulado que su mecanismo de acción se relaciona con un incre- mento de la producción renal de eritropoyetina o con un efecto directo sobre los progenitores celulares eri- troides, ya que todo parece indicar que la testosterona, al menos parcialmente, estimula la eritropoyesis vía incremento de la producción renal de eritropoyetina (24). Sin embargo, este no sería el único mecanismo en juego. Ha sido también demostrado que los este- roides androgénicos actúan, aparentemente en forma directa, sobre los progenitores eritroides medulares, estimulando su proliferación (25).

Por otra parte, las grandes diferencias encontradas en otra variable como el recuento total de glóbulos blancos podrían ser atribuidas a las condiciones de las barreras sanitarias en las cuales son mantenidas las dos colonias (22), ya que en el bioterio donde se alo- ja la colonia objeto de este estudio no se cuenta con sistema de filtrado de alta eficiencia (filtros HEPA o

filtros ULPA); el tamo utilizado como cama para los animales y el alimento no son esterilizados, el agua de bebida no recibe un tratamiento dentro del bioterio y no se mantienen separadas las salas de lavado de jau- las de la zona de mantenimiento de los biomodelos, condiciones que hacen que en este bioterio las car- gas microbiológicas de hongos y bacterias sean altas, como se pudo demostrar (25). En consecuencia, po- dría decirse que un recuento total de glóbulos blancos elevado es quizá producto de la exposición constante de los biomodelos de este estudio a factores de riesgo de enfermedad, como bacterias, hongos, virus, parási- tos, entre otros, que mantienen en permanente acti- vidad los mecanismos involucrados con la respuesta inmune.

Con respecto a otra variable que mostró diferen- cias altamente significativas, como lo fue el recuento plaquetario, podemos mencionar que no se puede afirmar que los animales objeto de este estudio son trombocitopénicos de manera patológica, debido a que una de las manifestaciones clínicas de este esta- do patológico es el sangrado anormal, el cual no se ha reportado en la colonia hasta el momento. Ge- neralmente, la trombocitopenia aparece como con- secuencia de los cuatro mecanismos siguientes: a) producción insuficiente; b) destrucción o utilización;

c) distribución o almacenamiento inadecuados en el organismo (secuestro plaquetario) y d) pérdida acele- rada (1). Pero sería imposible decir que los resultados arrojados por este estudio con respecto a la variable en discusión son producto de alguno de estos mecanis- mos, ya que la metodología y los objetivos del trabajo no estuvieron encaminados a esto.

Además, puede considerarse nuevamente que di- chas diferencias pueden estar siendo influenciadas por las características genéticas propias de la cepa. Es importante resaltar también que ninguno de los artí- culos citados contiene una discusión sobre esta varia- ble. De hecho, el valor del recuento de plaquetas fue reportado sólo en dos investigaciones, incluyendo la referencia utilizada para comparar los datos de este estudio.

Agradecimientos

Los autores quieren agradecer a la Facultad de Medi-

cina Veterinaria y Zootecnia de la Universidad Coope-

rativa de Colombia, al Laboratorio de Neurociencias y

(7)

Comportamiento de la Facultad de Salud UIS y a los señores Jesús María Rodríguez Hernández y Jesús Oc- tavio Mantilla (encargados del bioterio UIS ).

Referencias

1. Arcila VH. Patología y diagnostico clínico en pequeños y grandes animales. Bogotá: Universidad Cooperativa de Colombia; 2005.

2. Benjamín M. Manual de patología clínica en veterina- ria. México D.F.: Editorial Limusa; 1991.

3. Coles E. Diagnóstico y patología en veterinaria. 4.ª ed.

México D.F.: Interamericana, McGraw-Hill; 1989.

4. Doxey DL. Patología clínica y procedimientos de diag- nóstico en veterinaria. México D.F.: Editorial Manual Moderno; 1987.

5. González VE. Determinación de la hemoglobina, in- tegración de tecnologías de la información y la comu- nicación a la docencia. Universidad de Antioquia [sitio de internet] [acceso mayo del 2009]. Disponible en:

http://aprendeenlinea.udea.edu.co/lms/moodle/mod/

resourceview.php

6. Schalm OW, Jain NC, Carroll EJ. Hematología veteri- naria. 1.ª ed. Buenos Aires: Editorial Hemisferio Sur, S.A.; 1981.

7. Conybeare G et ál. An Improved Simple Technique for the Collection of Blood Samples from Rats and Mice.

Laboratory Animals. 1988; 22: 177-182.

8. Diehl K et ál. A Good Practice Guide to the Adminis- tration of Substances and Removal of Blood, Including Routes and Volumes. Journal of Applied Toxicology.

2001; 21: 15-23.

9. Herck H et ál. Blood Sampling from the Retro-Orbital Plexus, The Saphenous Vein and The Tail Vein in Rats:

Comparative Effects on Selected Behavioural and Blood Variables. Laboratory Animals. 2001; 35: 131- 139.

10. Luzzi MB et ál. Collecting Blood from Rodents: a Discussion by the Laboratory Animal Refinement and Enrichment Forum, Animal Technology and Welfare. 2005; 4(2): 99-102.

11. Turtoni JA, Hawkey CM, Hart MG, Wynne J, Hicks RM. Age-Related Changes in the Haematology of Female F344 Rats. Laboratory Animals. 1989; 23:

295-301.

12. Van H et ál. Orbital Sinus Blood Sampling in Rats as Performed by Different Animal Technicians: the In- fluence of Technique and Expertise. Lab Anim. 1998;

32: 377-386.

13. Aleman CL et ál. Reference Database of the Main Physiological Parameters in Sprague-Dawley Rats from 6 to 32 Months. Laboratory Animals. 1998; 32:

457-466.

14. Schnell MA, Hardy C, Hawley M, Propert KJ, Wilson JM. Effect of Blood Collection Technique in Mice on Clinical Pathology Parameters, Human Gene Thera- py. 2002; 13(1): 155-161.

15. Aleman CL et ál. Reference Data for the Principal Physiological Indicators in Three Species of Labo- ratory Animals. Laboratory Animals. 2000; 34: 379- 385.

16. Matsuzawa T, Nomura M, Unno T. Clinical Patholo- gy Reference Ranges of Laboratory Animals. J. Vet.

Med. Sci. 1993; Jun, 55(3): 351-62.

17. Wolford ST et ál. Reference Range Data Base for Serum Chemistry and Hematology Values in La- boratory Animals. J. Toxicol. Environ Health. 1986;

18(2): 161-88.

18. Archer RK, Festing MF, Riley J. Haematology of Conventionally-Maintained Lac: P Outbreed Wistar Rats During the 1st Year of Life. Laboratory Ani- mals. 1982; 16: 198-200.

19. Haley TJ. Retrospective Analysis of Control Animal Data - the Rat. Clin. Toxicol. 1978; Feb., 12(2): 2492-63.

20. Lovell DP, Archer RK, Riley J, Morgan RK. Variation in Haematological Parameters among Inbred Strains of Rat. Laboratory Animals. 1981; 15: 243-249.

21. Ganong WF. Fisiología médica. 20ª ed. México D.F.:

Editorial Manual Moderno; 2006.

22. Malgor LA, Fisher JW. Effects of Testosterone on Erythropoietin Production in Isolated Perfused Kid- neys. Am. J. Physiol. 1970; 218: 1732-1736.

23. Malgor LA, Barrios L, Blanc CC. Effects of Testos- terone on Bone Marrow Erythroid Cells of Normal and Nephrectomized Rats. Acta Physiol. Latinoam.

1975; 25: 179-187.

24. Fisher JW, Samuels AI, Malgor LA. Androgens and Erythropoiesis. Israel J. Med. Sci. 1971; 7: 892-900.

25. Malgor LA, Valsecia ME. Farmacología de la hema- topoyesis [sitio en Internet] [acceso abril del 2009].

Disponible en: http://med.unne.edu.ar

26. Charles River Laboratories. Baseline Hematology and Clinical Chemistry Values for Charles River Wistar Rats (CRL: (WI) BR) as a Function of Sex and Age.