Caracterização de marcadores inflamatórios associados a pacientes com lúpus eritematoso sistêmico em tratamento

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w w w . r e u m a t o l o g i a . c o m . b r

REVISTA

BRASILEIRA

DE

REUMATOLOGIA

Artigo

original

Caracterizac¸ão

de

marcadores

inﬂamatórios

associados

a

pacientes

com

lúpus

eritematoso

sistêmico

em

tratamento

Rodolfo

Pessato

Timóteo

∗

,

Douglas

Cobo

Micheli,

Reginaldo

Botelho

Teodoro,

Marlene

Freire,

Dernival

Bertoncello,

Eddie

Fernando

Candido

Murta

e

Beatriz

Martins

Tavares-Murta

UniversidadeFederaldoTriânguloMineiro,Uberaba,MG,Brasil

informações

sobre

o

artigo

Históricodoartigo:

Recebidoem13demarçode2015 Aceitoem20dedezembrode2015

On-lineem17defevereirode2016

Palavras-chave:

Lúpuseritematososistêmico Citocinas

Fagocitose Integrina CXCR2

r

e

s

u

m

o

Objetivo:Caracterizarosperfisinflamatóriosdepacientescomlúpuseritematososistêmico (LES)querecebiamotratamentopadrãoemcomparaçãocomcontrolessaudáveis.

Pacientesemétodos:Coletou-seosanguevenosoperiféricodepacientescomLES(n=14)e controles(n=18)nomomentodaentradanoestudo.Asamostrasdesangueforamusadas paraquantificação,porcitometriadefluxo,daexpressãodosantígenosdesuperfícieCD11b (integrina)eCXCR2emneutrófiloselinfócitos,enquantoascitocinasforamavaliadasem amostrasdesoro.Avaliou-seacapacidadedosneutrófilospurificadosdefagocitarzimosan opsonizadocomplasmahumano.

Resultados: Ospacientesapresentavamumapontuaçãomediana(intervalointerquartil)no Sledaide1(0-2),característicadepacientesemremissão.AsconcentraçõesséricasdeIL-6e IL-10foramsignificativamentemaioresnogrupodepacientesemcomparaçãocomos con-troles;oíndicedefagocitosedeneutrófiloscirculantesestavasignificativamentereduzido nospacientesemcomparaçãocomoscontroles.OsníveisdeIL-2,IL-5,IL-8eTNF-␣não diferiramsignificativamenteentrepacientesecontroles.Aanálisedacitometriadefluxo revelouqueosníveisdeexpressãodeCD11bestavamreduzidosnoslinfócitos(masnãonos neutrófilos)obtidosdepacientescomLES,enquantoaexpressãodoreceptordesuperfície CXCR2foisemelhanteemneutrófiloselinfócitos.

Conclusão:OspacientescomLESquerecebiamtratamentopadrãoapresentaramníveis sis-têmicoselevadosdeIL-6eIL-10,reduçãonacapacidadefagocíticadosneutrófiloseredução daexpressãodeCD11bemlinfócitos,mesmoquandoossintomasestavamemremissão. Essasalteraçõesnoscomponentesdaimunidadeinatapodemcolocaressesindivíduosem maiorriscodeadquiririnfecções.

∗ _Autor_para_{correspondência}_.

E-mail:rodolfopessa@hotmail.com(R.P.Timóteo).

http://dx.doi.org/10.1016/j.rbr.2015.12.001

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Characterization

of

inﬂammatory

markers

associated

with

systemic

lupus

erythematosus

patients

undergoing

treatment

Keywords:

Systemiclupuserythematosus Cytokines

Phagocytosis Integrin CXCR2

a

b

s

t

r

a

c

t

Objective: Tocharacterizetheinﬂammatoryproﬁlesofpatientswithsystemiclupus erythe-matosus(SLE)receivingstandardtreatmentcomparedtohealthycontrols.

Patientsandmethods: Peripheralvenousblood wascollectedfromSLEpatients(n=14) andcontrols(n=18)atenrollment.Bloodsampleswereusedforquantification,byflow cytometry,ofCD11b(integrin)andCXCR2expressionsurfaceantigeninneutrophilsand lymphocytes,whilecytokineswereassayedinserumsamples.Purifiedneutrophilswere assayedbytheirabilitytophagocytizehumanplasma-opsonizedzymosan.

Results:Patientshadamedian(interquartilerange)SLEDAIscoreof1.0(0-2.0)characteristic ofpatientsinremission.IL-6andIL-10serumconcentrationsweresignificantlyhigherin thepatientgroupcomparedtocontrolsandthephagocyticindexofcirculatingneutrophils wassignificantlyreducedinpatientscomparedtocontrols.ThelevelsofIL-2,IL-5,IL-8and TNF-␣didnotsignificantlydifferbetweenpatientsandcontrols.Flowcytometricanalysis revealedthattheCD11bexpressionlevelswerereducedinlymphocytes(butnotin neu-trophils)obtainedfromSLEpatients,whilesurfaceexpressionofthechemokinereceptor CXCR2wassimilarinbothneutrophilsandlymphocytes.

Conclusion: SLEpatientsreceivingstandardtreatmentpresentedwithelevatedsystemic levelsofIL-6andIL-10,reducedneutrophilphagocyticcapacity,andreducedlymphocyte expressionofCD11bevenwhensymptomswereinremission.Thesealterationstoinnate immunecomponentsmayputtheseindividualsatagreaterriskforacquiringinfections.

Introduc¸ão

Olúpuseritematososistêmico(LES)éumadoençaautoimune queenvolveanormalidadesnoslinfócitosTeB caracteriza-dospelaperdadetolerânciaaautoantígenosnuclearesepela produçãodeautoanticorposquecausaminflamaçãoedanos amúltiplos sistemas de órgãos.1 _Uma _crescente _variedade

deanormalidadesnascitocinastemsidoimplicadatantona patogênesedoLESquantonosmarcadoressecundáriosque reﬂetemadesregulac¸ãoimune.2,3

Uma das características da inflamação crônica é a desregulaçãodarededequimiocinas,incluindoalteraçõesnos perfisdeexpressãodoCXCR2eCXCR3.OCXCR2éum recep-toracopladoàproteínaGpertencenteàfamíliadequimiocina

CXCqueatuacomoumreceptorparaaIL-8(CXCL8)eCXCL1, medeiaorecrutamentodeneutróﬁlos,aproliferac¸ãocelulare aangiogênese.4,5

AintegrinaCD11b/CD18(Mac-1,receptordecomplemento 3) é um receptor de superfície expresso por monócitos, macrófagos,neutrófilos,célulasdendríticasesubconjuntosde linfócitosBqueseligaadiversosligantes,incluindo mem-brosdafamíliaICAM,eaofatordocomplementoiC3b.Está envolvidaemprocessosimunológicosessenciais,incluindoo extravasamentodeleucócitoseafagocitose.Umpolimorfismo de úniconucleotídeo no domínio extracelular da integrina queresultaemumaalteraçãodeaminoácidosrepresentaum dosmaisfortes fatoresde risco genéticoassociado ao LES humano.6,7

Aforma varianteestá associada à adesão celular redu-zida a ICAM-1, ICAM-2 e iC3b e à fagocitose prejudicada. Isso sugere que esse polimorﬁsmo (que afeta a remoc¸ão

eficientedecélulasapoptóticas)estáassociadoàpatologiada doença.Alteraçõesnaeficáciadafagocitosenãoestãorestritas aosmacrófagosCD11b+/CD18+,mastambémaoutrascélulas fagocíticas,comoosmonócitoseosneutrófilos.7_Além_disso,

essepolimorfismoestáassociadoàregulaçãodeficientedas redesdecitocinasinflamatóriaspossivelmenteassociadasà progressãodadoençanoLES.6,8

Oprejuízonafunçãoleucocitária(i.e.,monócitose neutró-filos) observadoempacientescomLESoscoloca emmaior riscodeadquiririnfecçõesbacterianasassociadasaelevadas taxasdemorbidadeemortalidade.9_Além_da_redução_na

fago-citosedepatógenosmicrobianos,aremoçãoprejudicadade células apoptóticas impactanegativamente nahomeostase tecidual,atravésdaexposiçãodosistemaimunea componen-tesintracelularesquesãopró-inflamatórioseimunogênicose contribui,assim,paraodesenvolvimentodeinflamação crô-nicaedoençasautoimunes.10

O tratamento com prednisolona falhou em modiﬁcar a expressãodeCD11bemneutróﬁlosdosangueperiféricode pacientescomcoliteulcerativacomparadocomcontroles.11

Entretanto, adexametasonafoicapazdeinibiraexpressão demembrana,masnãointracelular,deCD11bemeosinófilos de camundongos,associadaaumareduçãonaquimiotaxia dessascélulas.12_Considerando_o_{polimorfismo}_em_CD11b_em

pacientescomLESeumpossívelprejuízoinduzidopelos cor-ticoidesnaatividadefuncionaldosleucócitos,pacientescom LESsobtratamentopodemestarsuscetíveisaumadeﬁciência funcionalnascélulasimunescirculantes.

Opresenteestudotevecomo objetivocaracterizarainda maisarespostainﬂamatóriaapresentadaporpacientescom LES em tratamento e comparar os níveis sistêmicos de

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citocinas,acapacidadefagocíticadosneutrófiloseosperfis deexpressãodeCD11beCXCR2emneutrófiloselinfócitosde pacientesecontroles.

Material

e

métodos

Pacientes

Mulheresencaminhadas pelosistema público de saúdeao Ambulatório do Serviço de Reumatologia da Universidade FederaldoTriânguloMineiro(UFTM)foramprospectivamente diagnosticadascomLESdeacordocomasdiretrizes estabele-cidaspeloColégioAmericanodeReumatologiaeincluídasno estudo.Aspacientestinhamdiferentestemposdeiníciodo LESeeramtratadascomcorticoidese/ouhidroxicloroquina e/ouazatioprina.Determinou-seagravidadedadoençacom osistemadepontuaçãoSledai.Voluntáriassaudáveis consti-tuíramogrupocontrole.Oprotocolodoestudofoiaprovado peloComitêdeÉticaemPesquisadaUFTMefoiobtidoum consentimentoinformadoporescritodetodosospacientese controles.

Coletadesangue

Foram coletadas amostras de sangue venoso periférico de pacientesecontrolesnoatodaentradanoestudo.Emcada coletaeramretiradasduasamostras(5mLcada)(comesem 100Ul/mLdeheparina).Ossorosforamobtidospormeioda centrifugac¸ão(180×g)dosanguedurante15min.As respecti-vasamostrasdesoroforamentãocoletadasearmazenadas a -70◦C até o uso. Os ensaios foram feitosno Laboratório daDisciplinadeFarmacologiaenoInstitutodePesquisaem Oncologia(IPON)/DisciplinadeGinecologiaeObstetrícia.

Quantiﬁcac¸ãodosníveisdecitocinasséricas

Os níveis séricos de TNF-␣, IL-2, IL-5, IL-6, IL-8 e IL-10 foram determinados por Elisa. Resumidamente, placas de microtitulação de 96 poços de fundo plano foram revesti-dascomanticorpos(1a3␮g/mLem50␮L/poços)específicos paracadacitocinaemtampãodeligaçãoeincubadosdurante anoite (4◦ C). Asplacas foram então lavadas com solução salinatamponadacomfosfatoeTween-20(PBST)eligações não específicas foram bloqueadas com a incubação dos poços com PBS que continham 1% de albumina de soro bovino(BSA)(100␮L/poço)durante120mina37◦C.As amos-tras eospadrões foramadicionadosaos respectivospoços (50␮L/poços)eincubados durante anoite (4◦ C). Asplacas foramlavadas com PBST, seguidapelaadição doanticorpo monoclonalbiotiniladoanticitocinaapropriado.Depoisde1h, asplacasforamlavadasefoiadicionadaavidinaperoxidase (diluídaem1:5.000)acadapoço.Após30min,asplacasforam lavadasefoiadicionadosubstrato(100␮Lo-fenilenodiamina [OPD, Sigma, St. Louis, MO]). As placas foram subsequen-tementeincubadasàtemperaturaambientedurante15min antesdeseadicionarH2SO4(50␮L,1M)acadapoçopara inter-romperareação;mensurou-seadensidadeópticaa490nm comumleitordeplacas(MultiskanMCC340MKII,Flow Labora-tories).Osdadossãoexpressosempicogramasdecitocina/mL

desoro.Asconcentrac¸õesdecitocinasnasamostrasdesoro foramdeterminadasapartirdascurvaspadrãogeradas.

ExpressãodeCD11beCXCR2porneutróﬁloselinfócitos

Os níveis de expressão de CD11b e CXCR2 foram quanti-ﬁcados com o citômetro de ﬂuxoFACSCalibur e o software

CellQuestTM(BectonDickinson,SanJosé,CA).Foramusados oanticorpoanti-CD11bconjugadocomPE,oanticorpo anti--CXCR2conjugadocom PE/Cy5(BD Pharmingen,SanDiego, CA)eanticorposcontrole(IgG2bconjugadacomPEou PECy-5; BD Pharmingen, San Diego, CA). Foi feita aquisic¸ão de 10.000 eventos em todos os experimentos. Os dados são expressoscomonúmeroabsolutoouapercentagemde neu-tróﬁlos e linfócitos positivos para a expressão de CD11be expressãodeCXCR2.

Testedefagocitose

Oíndicedefagocitosedeneutróﬁlos(2×106_/mL)_coletados

depacientescomLESoucontrolessaudáveisfoiavaliadopela suacapacidadedefagocitarzimosanopsonizadocomplasma humano(10partículas/célula)durante1ha37◦C(CO25%).O índicefagocíticoéexpressocomosesegue:porcentagemde célulasfagocíticas×númerodepartículasinteriorizadas.

Análiseestatística

FoifeitacomosoftwareSigmaStat2.03.Adistribuiçãofoi avali-adapelotestedeKolmogorov-Smirnoveasdiferençasentreos doisgruposnãopareados(pacientescomLESversuscontroles) foramdeterminadascomotestetdeStudentouotesteUde Mann-Whitney,deacordocomadistribuiçãonormalounão normaldosdados,respectivamente.Asignificânciaestatística foifixadaemp≤0,05.

Resultados

Populac¸ãodeestudo

Foramincluídasnoestudo14mulheresdiagnosticadascom LES(tempomédiodedoenc¸a±DPde7,1±4,3anos),média deidade(±DP)de40,6±9,6anos(variac¸ãode24a55anos) e18 mulheressaudáveis, médiadeidade (±DP)de 35,3 ±

9,8anos(variaçãode26a55anos)(tabela1).Aidadenão dife-riuentrepacientesecontroles(p=0,132,testetdeStudent). Amediana(e intervalointerquartil)doSledaifoide1(0-2), oqueindicaqueoLESestavaemremissãoclínica.Emoito pacientes(57,2%),oescorenoSledaifoizero,trêspacientes (21,4%)tiveramumapontuaçãode2,duaspacientes(14,3%) tiveram uma pontuação de 4 (atividade moderada) euma paciente(7,1%)teveumapontuaçãode9(atividademoderada) (tabela1).

O tratamento recebido pelas pacientes com LES no momentoda entradanoestudoédescritonatabela1.Três pacientes (21,4%)foram tratadas apenascom corticosteroi-des (prednisona ou prednisolona), 2/14 (14,3%) receberam hidroxicloroquina, 6/14 (42,9%) receberam corticoides e

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Tabela1–Característicaseparâmetrosdadoenc¸a

depacientescomLES

Númerodepacientes 14

Médiadeidade±DP,anos 40,6±9,6

Intervalodeidade 24-55

Sexo(feminino/masculino),n 14/0

Durac¸ãodadoenc¸a(média±DP),anos 7,1±4,3

Tempodedoenc¸a,anos 1-15

Sledai,mediana(25-75%) 1,0(0-2,0) Sledain(%) Zero 8(57,2%) 2 3(21,4%) 4 2(14,3%) 9 1(7,1%) Tratamento,n(%) Corticoides 3(21,4%) Hidroxicloroquina 2(14,3%) Corticoidesmaishidroxicloroquina 6(42,9%) Corticoidesouhidroxicloroquinamaisazatioprina 3(21,4%)

Tabela2–Concentrac¸õesséricasdecitocinas(pg/mL)

depacientescomLESecontroles

Citocinas(pg/mL) Controles(n=18) Pacientes(n=14) IL-2 9,6(5,3-19,1) 7,3(6,5-12,8) IL-5 11,6(4,5-25,1) 4,4(2,8-7,7) IL-6 3,9(2,6-5,2) 6,8(5,2-8,5)a IL-8 13,2(11,5-23,6) 21,3(17,2-31,3)b IL-10 0,0(0,0-4,5) 13,5(0-17,2)c TNF-␣ 0,0(0,0-3,5) 1,3(0,2-3,1)

Osdadosestãoexpressoscomomedianas(intervalointerquartil). a _p_<_0,01.

b _p₌_0,115_em_{comparac¸ão}_com_o_grupo_controle _(teste_U_de Mann-Whitney).

c _p_<_0,05.

hidroxicloroquinae3/14(21,4%)ﬁzeramusode azatioprina alémdecorticoidesouhidroxicloroquina.

Concentrac¸õesséricasdecitocinas

Osníveisséricosdecitocinasforamquantificadosem pacien-tesecontroles.OsníveisséricosemmedianasdeTNF-␣,IL-2 eIL-5nãodiferiramsignificativamenteentreosdoisgrupos (tabela2).OsníveisdeIL-8estavamaumentadosem pacien-tescomLESemcomparaçãocomoscontroles,masosvalores nãoforamestatisticamentesignificativos(p=0,115).Contudo, asconcentrações séricasdeIL-6(p<0,01)eIL-10(p<0,05) estavamsignificativamentemaiselevadasempacientescom LESnaentradanoestudoemcomparaçãocomoscontroles (tabela2).

ExpressãodeCD11beCXCR2porneutróﬁloselinfócitos

AexpressãodesuperfíciedoCD11beCXCR2pelos neutrófi-loselinfócitoscoletadosdepacientes(n=14)econtroles(n= 16)foiavaliadapelacitometriadefluxo.Onúmeroabsoluto de linfócitos coletados de pacientes com LES que expres-sam CD11b foi inferior em comparação com os níveis de

expressão observados nos controles (fig. 1C). Não houve diferençanaexpressãodeCD11bporneutrófilos(fig.1AeB).O númerodecélulaspositivasparaCXCR2nãodiferiunos neu-trófilos(fig.2AeB)nemlinfócitos(fig.2CeD)coletadosde pacientesecontroles.

Ensaiodefagocitose

Avaliou-se acapacidade dos neutrófiloscoletados de paci-entes (n = 14) e controles (n = 18) de fagocitar zimosan opsonizado. Os neutrófilos de pacientes com LES apre-sentaram um valor de mediana (intervalo interquartil) significativamente maisbaixo noíndice de atividade fago-cítica, 178(49-304) emcomparaçãocom os neutrófilosdos controles,577(209-1.131)(p=0,017,MannWhitney).

Discussão

O presenteestudoidentificouoperfildecitocinas inflama-tóriasdepacientescomLESsubmetidasatratamento.Como esperado,todosospacientesincluídoserammulheres,jáque o LESénove vezes maiscomum emmulheresdoqueem homens.1_Foram_detectados_níveis_séricos_aumentados_de_IL-6

eIL-10empacientescomLESemcomparac¸ãocomos contro-les,emboraosníveisdeTNF-␣,IL-2,IL-5eIL-8nãotenham diferidoentreosgrupos.

O nucleossoma é umdos principais autoantígenos que podemserdetectadoscomoumcomplexonosorode paci-entes com LES, com o potencial de ativar diretamente os neutrófilos.13_Isso_foi_confirmado_ao_se_incubarem_{neutrófilos}

deindivíduossaudáveiscomplasmaobtidodepacientescom LES,quereagiramproduzindoníveisaumentadosdecitocinas pró-inﬂamatórias,comoTNF-␣,IL-6eIL-8.14

AIL-6ésusceptíveldeestarenvolvidanaproduc¸ãode auto-anticorpos empacientes com LES.3 _Os _dados_apresentados

nesteestudodemonstraramníveisséricossigniﬁcativamente elevadosdeIL-6empacientescomLESemcomparac¸ãocom oscontroles,oqueconcordacomoutrosestudos.15,16_Foi

rela-tadoqueosníveisdeIL-6secorrelacionamcomosníveisde IL-12eIL-23observadosnomomentododiagnósticodeLESe apósotratamentocomprednisonatersidoiniciado.15

OsníveisséricosdeIL-8estavam elevadosempacientes comlúpus,masnãodemodoestatisticamentesignificativo. OspacientescomLEScomdoençaativaouinativaapresentam níveis elevados de proteínas quimioatrativas, incluindo IL-8,emcomparaçãocomoscontroles,independentementedo regimedetratamentofarmacológicousadoedograudedanos teciduais.17_Os_autores_sugerem_que_o_tratamento_em_longo

prazodoLEScomfármacos imunomoduladores convencio-naisfalhamemnormalizarosníveisdasprincipaisproteínas quimioatrativasrelacionadascomaimunidadeinataequeum estadopró-inﬂamatório debasepersiste empacientes com LES.17

Concentraçõessistêmicaselevadasdequimiocinas,como aIL-8,têmopotencialdeinduziràdessensibilizaçãodo recep-tor e de tornaros leucócitos não responsivos à exposição subsequente.18_Os_dados_do_presente_estudo_não_{identificaram}

diferenc¸asnosníveisdeexpressãodeCXCR2nosneutróﬁlos oulinfócitoscirculantes,talvez, emparte,porqueosníveis

(5)

0 2.000 4.000 6.000 8.000

A

Controles (n = 16) Pacientes (n = 14) Número absoluto de neutrófilos positivos

0 5 10 15 20 25

*

C

Número absoluto de linfócitos positivos

0 20 40 60 80 100

B

Número percentual de neutrófilos positivos

0 1 2 3 4

D

Número percentual de linfócitos positivos

Figura1–AnálisedaexpressãodeCD11b.Osneutróﬁlosobtidosdecontroles(n=16)epacientescomLES(n=14)sob

tratamentoforamanalisadosporcitometriadeﬂuxo.Mostram-seosnúmerosabsolutos(painéisAeC)easporcentagens

(painéisBeD)deneutróﬁlos(painéisAeB)elinfócitos(painéisCeD)positivosparaCD11b.Ospercentis25e75são

representadosporumabarracentradaemtornodamediana.Osvaloresmínimoemáximosãorepresentadosporbarrasde

erro.

*p<0,05emcomparac¸ãocomorespectivocontrole(testetdeStudent).

0 2.000 4.000 6.000 8.000 10.000

A

Controles (n = 16) Pacientes (n = 14) Número absoluto de neutrófilos positivos

0 100 200 300 400 C

Número absoluto de linfócitos positivos

0 50 100 150

B

0 5 10 15

D

Figura2–AnálisedaexpressãodeCXCR2.Osneutróﬁlosobtidosdecontroles(n=16)epacientescomLES(n=14)sob

tratamentoforamanalisadosporcitometriadeﬂuxo.Mostram-seosnúmerosabsolutos(painéisAeC)easporcentagens

(painéisBeD)deneutróﬁlos(painéisAeB)elinfócitos(painéisCeD)positivosparaCXCR2.Ospercentis25e75são

representadosporumabarracentradaemtornodamediana.Osvaloresmínimoemáximosãorepresentadosporbarras

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séricosdeIL-8nãoalcançaramníveissignificativos superio-resnospacientesemcomparaçãocomoscontroles.Contudo, outrosestudosdemonstraramqueosneutrófilosde pacien-tescomLEStinhamníveisdeexpressãodogenedoCXCR2 diminuídosemcomparaçãocom oscontroles,oquelevaà hiporresponsividadedosneutrófilosàIL-8invitro.5_Os_níveis

deexpressãodoCXCR2noslinfócitosTestavamaumentados empacientescomLESativoemcomparac¸ãocompacientes comdoenc¸ainativaecontrolessaudáveis.4

OpapeldaIL-10noLESéumtantocontroverso.AIL-10 geralmenteéconsiderada umacitocina anti-inﬂamatóriae imunossupressora.Noentanto,ésuperexpressadaem paci-entes com lúpus e, em alguns casos, relata-se que atua comoumamoléculaquepromoveolúpus.2_Diversos_estudos

demonstraramque osníveisdeIL-10no soro/plasma esta-vamsigniﬁcativamente aumentadosempacientescom LES emcomparac¸ãocomoscontroles,19_como_encontrado_no

pre-senteestudo.

Níveis aumentados de IL-10 têm sido correlacionados à atividade da doenc¸a ou àproduc¸ão de autoanticorpos que podemcontribuir paraapatogênesedoLES19 _e/ou_modular

adiferenciaçãoeafunçãodascélulasdendríticas.Ascélulas dendríticasderivadasdemonócitosativadosporsorode paci-entescomLES,ouapósaexposiçãoàIL-10exógena,tinham níveis reduzidos de expressão de antígenos leucocitários humanos(HLA)-DReapresentavamcapacidadeprejudicada deestimularaproliferaçãodelinfócitosTalogênicos.20

As células que expressam um polimorfismo em CD11b apresentamaumento naprodução de IL-6 emcomparação comascélulassempolimorfismo;essepolimorfismogenético resultouemumaisoformadaintegrinaincapazdemediara adesãocelularviainteraçõescomICAMsouiC3b.6_Os_dados

dopresenteestudomostraramqueoperfildeexpressãodo CD11bnosneutrófilosfoisemelhanteentrepacientescomLES econtroles;noentanto,ummenornúmeroabsolutode linfó-citosdepacientescomLESexpressouCD11b.Essadeficiência podelevaraomaufuncionamentodosistemaimunológicoe contribuirparaodesenvolvimentodeLES.6

Opresenteestudotambémdetectouqueoíndice fagocí-ticodosneutrófilosestava reduzidoempacientescom LES emcomparaçãocomoscontroles;esseachado, associadoà reduçãonaexpressãode CD11b,podecolocar esses indiví-duosemumriscomaiordedesenvolverinfecções.Aexposição contínuaanucleossomospodeexplicar,emparte,aredução observadanaatividadefuncionaldePMNsisoladosde paci-entescomLES,bemcomonascontagensdePMNreduzidase noestadogeraldeinflamaçãoobservadonessesindivíduos.14

Foirelatadoqueospacientescomlúpusqueapresentavam neutrófiloscirculantesdebaixadensidadetêmumpotencial fagocíticoalterado, apesardeseu fenótipopró-inflamatório (definidoporseuperfildecitocinas).21

Umestudoquecomparouafunçãodosneutrófilosentre pacientescom LESdeiníciopediátrico eindivíduos saudá-veismostrouque,independentementedoestadodainfecção, medicação e gravidade da doença, os pacientes com LES tinhamumacapacidadediminuídadefagocitar lipopolissa-carídeos específicos da Salmonella em comparação com os controles.9_Além_disso,_macrófagos_isolados_de_pacientes_com

LESnãotratadofagocitaramneutrófilosapoptóticosdemodo menos eficazdo que os neutrófilos coletados de doadores

saudáveis,10 _o_que_pode_contribuir _para_o_{desenvolvimento}

deinﬂamac¸ãocrônicaeautoimunidade.

Éimportantecitarqueosresultadosdopresenteestudo mostram, em um mesmo momento no tempo, alterações associadasnosparâmetrosdarespostaimuneinata,mesmo quando os pacientes com LES tinham majoritariamente doençainativa,oqueapontaparaumpotencialmecanismo paraasusceptibilidadeainfecções.Masumalimitaçãodo pre-sente estudoéo pequenonúmero depacientes estudados. Alémdisso,emboraamaioriadospacientestivessedoençaem remissão,odesenhodoestudonãoavaliouopapelespecífico daatividadedadoençanoperfilinflamatóriodospacientes. Outras pesquisas, com uma amostra maiorde pacientes e com grupos de pacientes com o mesmo grau de atividade dadoença,possibilitariamumacomparaçãomaisprecisados resultados.

Em conclusão, os pacientes com LES que recebiam tra-tamento imunossupressor apresentaram níveis sistêmicos elevadosdeIL-6eIL-10,reduçãonacapacidadefagocíticados neutrófilosereduçãonaexpressãodeCD11bpeloslinfócitos. Essesachadosassociadosestavampresentesmesmoquando ossintomas estavammajoritariamenteemremissão,oque sugerequeessasalteraçõesnoscomponentesimunológicos inatospodemcolocaressesindivíduosemumriscomaiorde desenvolverinfecções.

Financiamento

Financiadora de Estudos e Projetos (Finep), Fundação de AmparoàPesquisadoEstadodeMinasGerais(Fapemig), Con-selhoNacionaldeDesenvolvimentoCientíficoeTecnológico (CNPq)eFundaçãodeEnsinoePesquisadeUberaba(Funepu).

Conﬂitos

de

interesse

Osautoresdeclaramnãohaverconﬂitosdeinteresse.

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s

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