TC-EDC/Jan13/25 ORIGINAL: Inglés DATE: 29 de noveimbre de 2012 UNIÓN INTERNACIONAL PARA LA PROTECCIÓN DE LAS OBTENCIONES VEGETALES Ginebra

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Texto completo

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TC-EDC/Jan13/25 ORIGINAL: Inglés

DATE: 29 de noveimbre de

2012

UNIÓN INTERNACIONAL PARA LA PROTECCIÓN DE LAS OBTENCIONES VEGETALES

Ginebra

COMITÉ DE REDACCIÓN AMPLIADO

Ginebra, 9 y 10 de enero de 2013

REVISIÓN PARCIAL DE LAS DIRECTRICES DE EXAMEN DEL TOMATE (DOCUMENTO TG/44/11)

Documento preparado por la Oficina de la Unión

1. En su cuadragésima quinta sesión, celebrada en Monterrey (Estados Unidos de América) del 25 al 29 de julio de 2011, el Grupo de Trabajo Técnico sobre Hortalizas (TWV) convino en proponer al Comité Técnico (TC) que apruebe la revisión parcial de las directrices de examen del tomate (documento TG/44/11) a fin de incluir:

a) un formato revisado para los caracteres de resistencia a las enfermedades con arreglo a las explicaciones relativas a los caracteres de resistencia a las enfermedades en las directrices de examen, que figuran en la sección 2.4 del documento TGP/12/2 Draft 2 “Orientación sobre ciertos caracteres fisiológicos”; y

b) un método de marcador genético específico para el examen de la resistencia al virus del bronceado del tomate (TWS) – Raza 0.

2. En su cuadragésima octava sesión, celebrada en Ginebra del 26 al 28 de marzo de 2012, el TC señaló que, en respuesta a algunas preguntas relativas a la resistencia a las enfermedades planteadas por expertos interesados tras la sesión del TWV, el Presidente del TWV, el anterior Presidente del TWV y el Experto Principal decidieron examinar, en la cuadragésima sexta sesión del TWV, un nuevo borrador de la revisión parcial de las directrices de examen del tomate (véase el párrafo 147 del documento TC/48/22, “Informe sobre las conclusiones”).

3. En su cuadragésima sexta sesión, celebrada cerca de la ciudad de Venlo (Países Bajos) del 11 al 15 de junio de 2012, el TWV examinó el documento TWV/46/19 y convino en proponer la revisión parcial de las directrices del tomate (documento TG/44/11) como se expone en los Anexos del presente documento:

ANEXO I Propuesta de corrección de los nombres de las enfermedades en los capítulos: 5.3, 7, 8 y 10;

ANEXO II Inclusión de un formato revisado para los caracteres de resistencia a las enfermedades con arreglo a las explicaciones relativas a los caracteres de resistencia a las enfermedades en las directrices de examen, que figuran en la sección 2.4 del documento TGP/12/2 Draft 2 “Orientación sobre ciertos caracteres fisiológicos” (el texto actual y el nuevo texto propuesto se exponen en páginas opuestas);

ANEXO III Adición de referencias bibliográficas en el capítulo 9: Bibliografía.

4. La revisión parcial del documento TG/44/11 se aprobará como documento TG/44/11 Rev.

(2)

Propuesta de corrección de los nombres de las enfermedades en los capítulos: 5.3, 7 ,8 y 10. TQ

Texto actual:

English français deutsch español

Example Varieties Exemples Beispielssorten Variedades ejemplo Note/ Nota 49. (+) VG Resistance to Fusarium oxysporum f. sp. radicis lycopersici (Forl) Résistance à Fusarium oxysporum f. sp. radicis lycopersici (Forl) Resistenz gegen Fusarium oxysporum f. sp. radicis lycopersici (Forl) Resistencia a Fusarium oxysporum f. sp. radicis lycopersici (Forl) Propuesta: 49. (+) VG Resistance to Fusarium oxysporum f. sp. radicis-lycopersici (Forl) Résistance à Fusarium oxysporum f. sp. radicis-lycopersici (Forl) Resistenz gegen Fusarium oxysporum f. sp. radicis-lycopersici (Forl) Resistencia a Fusarium oxysporum f. sp. radicis-lycopersici (Forl) Texto actual:

English français deutsch español

Example Varieties Exemples Beispielssorten Variedades ejemplo Note/ Nota 51. (+) VG Resistance to Tomato Mosaic Tobamovirus (ToMV) Résistance au virus de la mosaïque de la tomate (ToMV)

Resistenz gegen das Tomatenmosaikvirus, Tobamovirus (ToMV)

Resistencia al virus del mosaico del tomate (ToMV)

Propuesta:

51. (+)

VG Resistance to Tomato mosaic virus (ToMV)

Résistance au virus de la mosaïque de la tomate (ToMV)

Resistenz gegen das Tomatenmosaikvirus (ToMV)

Resistencia al virus del mosaico del tomate (ToMV)

Texto actual:

English français deutsch español

Example Varieties Exemples Beispielssorten Variedades ejemplo Note/ Nota 54. (+) VG Resistance to Stemphylium Résistance à Stemphylium Resistenz gegen Stemphylium Resistencia a Stemphylium Propuesta: 54. (+) VG Resistance to Stemphylium spp. (Ss) Résistance à Stemphylium spp. (Ss) Resistenz gegen Stemphylium spp. (Ss) Resistencia a Stemphylium spp. (Ss)

(3)

English français deutsch español Example Varieties Exemples Beispielssorten Variedades ejemplo Note/ Nota 57. (+) VG Resistance to Tomato Yellow Leaf Curl Begomovirus (TYLCV)

Résistance au bégomovirus des feuilles jaunes en cuillère de la tomate (TYLCV) Resistenz gegen gelbes Tomatenblatt-rollvirus, Begomovirus (TYLCV) Resistencia a Begomovirus del rizado amarillo de la hoja del tomate (TYLCV)

Propuesta:

57. (+)

VG Resistance to Tomato yellow leaf curl virus (TYLCV)

Résistance au virus des feuilles jaunes en cuillère de la tomate (TYLCV)

Resistenz gegen gelbes Tomatenblatt-rollvirus (TYLCV)

Resistencia a virus del rizado amarillo de la hoja del tomate (TYLCV)

Texto actual:

English français deutsch español

Example Varieties Exemples Beispielssorten Variedades ejemplo Note/ Nota 58. (+) VG Resistance to Tomato Spotted Wilt Tospovirus (TSWV) - Race 0 Résistance au virus de la tache bronzée de la tomate (TSWV) – Pathotype 0

Resistenz gegen das Tomatenbronzen-fleckenvirus, Tospovirus (TSWV) - Pathotyp 0 Resistencia a Tospovirus del bronceado de tomate (TSWV) – Raza 1 Propuesta: 58. (+) VG Resistance to Tomato spotted wilt virus (TSWV) - Race 0 Résistance au virus de la tache bronzée de la tomate (TSWV) – Pathotype 0

Resistenz gegen das Tomatenbronzen-fleckenvirus (TSWV) - Pathotyp 0

Resistencia a virus del bronceado de tomate (TSWV)

– Raza 1

Texto actual:

English français deutsch español

Example Varieties Exemples Beispielssorten Variedades ejemplo Note/ Nota 61. (+) VG Resistance to Tomato Torrado Virus (ToTV)

Résistance au virus Tomato Torrado (ToTV)

Resistenz gegen Tomato Torrado Virus (ToTV)

Resistencia al virus del torrado del tomate (ToTV)

Propuesta:

61. (+)

VG Resistance to Tomato torrado virus (ToTV)

Résistance au virus tomato torrado (ToTV)

Resistenz gegen Tomato Torrado Virus (ToTV)

Resistencia al virus del torrado del tomate (ToTV)

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Propuesta de inclusión de un formato revisado para los caracteres de resistencia a las enfermedades (el texto actual y el nuevo texto propuesto se exponen en páginas opuestas)

Texto actual:

Ad. 46: Resistencia a Meloidogyne incognita (Mi) Método

Mantenimiento de las cepas

Tipo de medio: en raíces de variedades susceptibles

Condiciones especiales evítese la pudrición de las raíces Ejecución del ensayo

Temperatura: no superior a 28 C

Método de cultivo: preferiblemente en invernadero

Método de inoculación: las plantas se siembran en suelo infestado Duración del ensayo

- desde la siembra a la inoculación: inoculación antes de la siembra, - desde la inoculación a la evaluación: 30 a 45 días

Número de plantas examinadas: 10 a 20

Observaciones: evítese la pudrición de las raíces, evítense las altas

temperaturas

Notación: número de nudos de la raíz contaminados con huevos y

deformación de la raíz

Variedades estándar: susceptibles: Clairvil, Casaque Rouge moderadamente resistentes: Madyta, Vinchy

(5)

Ad 46: Resistencia a Meloidogyne incognita (Mi)

1. Agentes patógenos ... Meloidogyne incognita 3. Especies huéspedes ... Solanum lycopersicum

4. Fuente del inóculo ... Naktuinbouw1 (NL) o GEVES2 (FR) 5. Aislado ... no capaz de superar la resistencia

6. Establecimiento de la identidad del aislado ... utilizar variedades estándar de tomate o portainjertos 7. Establecimiento de la capacidad patógena ... utilizar una variedad estándar susceptible de tomate o

portainjertos 8. Multiplicación del inóculo

8.1 Medio de multiplicación ... planta viva

8.2 Variedad para la multiplicación ... preferiblemente resistente al oídio 8.3 Estado de desarrollo en el momento

de la inoculación ... véase 10.3 8.5 Método de inoculación ... véase 10.4

8.6 Cosecha del inóculo ... el sistema radicular se corta con unas tijeras en trozos de 1 cm de longitud aproximadamente

8.7 Comprobación del inóculo cosechado ... comprobación visual de la presencia de nudos radiculares 8.8 Período de conservación/viabilidad del inóculo... 1 día

9. Formato del examen

9.1 Número de plantas por genotipo ... 20 plantas 9.2. Número de réplicas ... No aplicable 9.3 Variedades de control

Susceptibles: ... Clairvil, Casaque Rouge

Moderadamente resistente... “Anahu x Monalbo” Campeon, Madyta, Vinchy Altamente resistente ... Anahu, Anabel

9.4 Diseño del ensayo ... incluir variedades estándar 9.5 Instalación del ensayo ... invernadero o sala climatizada 9.6 Temperatura ... no superior a 28°C

9.7 Luz ... 12 horas al día como mínimo 10. Inoculación

10.1 Preparación del inóculo... trozos pequeños de raíces enfermas mezclados con tierra y trozos de raíces infestadas

10.2 Cuantificación del inóculo... relación tierra/raíz = 8:1, o en función de la experiencia 10.3 Estado de desarrollo en el momento

de la inoculación ... semillas o cotiledones

10.4 Método de inoculación ... las plantas se siembran en tierra infestada o contaminación de la tierra después de la siembra cuando las plántulas están en estado de cotiledones

10.7 Observaciones finales ... de 28 a 45 días después de la inoculación 11. Observaciones

11.1 Método ... inspección de las raíces 11.2 Escala de observación ... Síntomas:

. formación de agallas, deformación de las raíces, . reducción del crecimiento, muerte de la planta

11.3 Validación del ensayo ... la evaluación de la resistencia de la variedad deberá calibrarse en variedades estándar con los resultados de los controles

resistentes y susceptibles. 12. Interpretación de los datos en función de los niveles de los caracteres de la UPOV:

Tener en cuenta que las variedades resistentes pueden presentar algunas agallas. Estas no se consideran como plantas fuera de tipo.

ausente (susceptibles): ... [1] gran reducción del crecimiento, gran cantidad de agallas intermedio (moderadamente resistente) ... [2] reducción moderada del crecimiento, cantidad

moderada de agallas

presente (altamente resistente) ... [3] sin reducción del crecimiento, ausencia de agallas 13. Puntos de control esenciales:

Evítese la pudrición de las raíces; las altas temperaturas provocan la quiebra de la resistencia.

1

Naktuinbouw; resistentie@naktuinbouw.nl

2

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Ad. 47: Resistencia a Verticillium sp. (Va y Vd) Método

Mantenimiento de las cepas

Se utiliza la raza 0 representada por cepas Toreilles 4-1-4-1. La raza 0 es la raza común definida por su capacidad para infectar plantas con el gen Ve.

Almacenamiento a largo plazo de las cepas: conidias suspendidas en solución de glicerol a -80°C. La cepa puede subcultivarse en el medio Agar–Papa–Dextrose (PDA) Ejecución del ensayo

Estado de desarrollo de las plantas

Las plantas se cultivan en invernadero o en cámaras de cultivo. La inoculación puede efectuarse desde la fase de cotiledón (brote de las primeras hojas) hasta la fase de desarrollo de dos hojas.

Como controles pueden utilizarse las siguientes variedades. Como mínimo, en el ensayo debería haber un control resistente y un control susceptible. La variedad heterocigótica contribuirá a interpretar los resultados en el caso de un ensayo agresivo. Podría ser interesante añadir la variedad Clarion en los controles susceptibles, ya que es menos susceptible y podría además ayudar a comprobar la presión de inoculación del ensayo. Estas 2 variedades son optativas.

Variedad estándar Vd:0

_______________________________

Marmande verte, Flix S

Clarion s Monalbo x Marmande verte RH

Monalbo, Elias R

_______________________________ R resistencia presente; sin síntomas

RH resistencia presente; a veces síntomas muy débiles s resistencia ausente; síntomas débiles

S resistencia ausente; síntomas evidentes Temperatura:

Examen efectuado bajo condiciones controladas a una temperatura comprendida entre 20 y 22°C. Inoculación:

Verticillium sp. se cultiva en los medios líquidos Czapek Dox Broth o S de Messiaen, durante un período de 3 a 7 días a oscuras, a una temperatura de entre 20 y 25°C con aireación. Las esporas se cosechan y ajustan a 106sp/ml.

Método de inoculación

Las plántulas se cosechan, las raíces se cortan e impregnan de 5 a 15 minutos en la suspensión del inóculo. Las plántulas se trasplantan en suelo.

Duración del ensayo

33 días como mínimo desde la siembra hasta la notación. Número de plantas examinadas

20 plantas como mínimo. Notación:

De 25 a 30 días después de la inoculación.

Escala de la notación e interpretación de los resultados: R: sin síntomas

S: clorosis en las hojas inferiores, desarrollo reducido y vasos marrones o desarrollo no reducido y vasos marrones. El análisis de los resultados debe calibrarse con los resultados de los controles de R y S.

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Ad 47: Resistencia al Verticillium sp (Va y Vd)

1. Agentes patógenos ... Verticillium dahliae o Verticillium albo-atrum 3. Especies huéspedes ... Solanum lycopersicum

4. Fuente del inóculo ... Naktuinbouw3 ((NL) o GEVES4 (FR) 5. Aislado ... Raza 0 (p.ej., cepa Toreilles 4-1-4-1) 8. Multiplicación del inóculo

8.1 Medio de multiplicación ... papa-dextrosa-agar, medio agar “S” de Messiaen

8.4 Medio de inoculación... agua para raspar las placas de agar, o caldo Czapek-Dox (cultivo aireado de 3 a 7 días a 20-25°C, en la oscuridad)

8.6 Cosecha del inóculo ... filtrar a través de una capa doble de muselina 8.7 Comprobación del inóculo cosechado ... recuento de esporas (ajustar a 106 por ml) 8.8 Período de conservación/viabilidad

del inóculo ... un día a 4°C 9. Formato del examen

9.1 Número de plantas por genotipo ... 35 semillas para 24 plantas 9.2. Número de réplicas ... No aplicable

9.3 Variedades de control

Susceptibles... Flix, Marmande verte, Clarion, Santonio, Anabel

Resistentes: ... Monalbo, Elias, Monalbo x Marmande verte, Daniela, Marmande VR

9.4 Diseño del ensayo... 20 plantas inoculadas como mínimo, 2 controles como mínimo 9.5 Instalación del ensayo... invernadero o sala climatizada

9.6 Temperatura... óptima 20 a 25°C, 20 a 22°C tras la inoculación 9.7 Luz ... 12 horas como mínimo

10. Inoculación

10.1 Preparación del inóculo... cultivo líquido aireado (8.4)

10.2 Cuantificación del inóculo... recuento de esporas (ajustar a 106 por ml) 10.3 Estado de desarrollo en el momento

de la inoculación ... de cotiledón a tercera hoja

10.4 Método de inoculación ... sumergir las raíces durante 4 a 15 minutos en la suspensión de esporas

10.7 Observaciones finales ... de 14 a 33 días después de la inoculación 11. Observaciones

11.1 Método ... visual

11.2 Escala de observación ... retraso del crecimiento, marchitez, clorosis y pardeamiento de los vasos

11.3 Validación del ensayo ... la evaluación de la resistencia de la variedad deberá calibrarse con los resultados de los controles resistentes y susceptibles. 12. Interpretación de los datos en función de los niveles de los caracteres de la UPOV:

ausentes ... [1] síntomas intensos

presentes ... [9] síntomas ausentes o leves 13. Puntos de control esenciales:

En las variedades resistentes pueden presentarse todos los síntomas, pero con una intensidad claramente menor que en las variedades susceptibles. El retraso del crecimiento suele ser notablemente menor en las variedades resistentes que en las susceptibles. La observación del pardeamiento de los vasos es importante para el diagnóstico. Por lo general, el pardeamiento de los vasos no se extiende a la primera hoja en las variedades resistentes. Muchas variedades híbridas son heterocigóticas y parecen tener síntomas leves en el bioensayo.

Nota: La resistencia a V. dahliae que confiere el gen Ve también es eficaz frente a V. albo-atrum. Para evaluar el carácter de la UPOV “Resistencia a V. dahliae” o V. albo-atrum, se pueden utilizar aislados de ambas especies de hongos siempre que pertenezcan a la raza 0, que no es capaz de superar la resistencia del gen Ve. En ambas especies se han descrito aislados capaces de superar la resistencia.

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Naktuinbouw; resistentie@naktuinbouw.nl

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Ad. 48.1 + 48.2 + 48.3: Resistencia a Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici (Fol), raza 0 (ex 1), raza 1 (ex 2) y raza 2 (ex 3)

Método

Mantenimiento de las cepas

Almacenamiento a largo plazo de las cepas: a -80°C en 20% de glicerol.

Se utiliza la raza 0 (ex 1), representada por cepas Orange 71 o PRI 20698 o Fol 071, y la raza 1, representada por cepas 4152 (más agresivas) o PRI40698 o RAF 70 (menos agresivas).

Las cepas pueden reproducirse en los medios PDA o S de Messiaen. Ejecución del ensayo

Estado de desarrollo de las plantas

Las plantas se cultivan en invernadero o en cámaras de cultivo durante un período de 10 a 18 días (cotiledones hasta la fase de la primera hoja).

Como controles se utilizan las siguientes variedades. Cada línea estará representada por una variedad como mínimo, que puede elegirse de entre las variedades indicadas; se indica el fenotipo de resistencia a los dos patotipos de Fol. La variedad heterocigótica tiene un fenotipo de resistencia normalmente más débil que las líneas homocigóticas. Esta resistencia débil puede utilizarse para calibrar el límite entre la resistencia y la susceptibilidad. El control heterocigótico para Fol:1 es opcional.

Controles para el ensayo de resistencia a Fol:0

Fol:0 Fol:1*

Marmande, Marmande verte, Resal S S

Marporum x Marmande verte (heterocigótico) R S

Marporum, Larissa R S

Motelle, Gourmet, Mohawk R R

* Para información

Controles para el ensayo de resistencia a Fol:1

Fol:0* Fol:1

Cherry Belle, Roma, Marmande verte S S

Ranco**, Marporum R S

Motelle x Marmande verte R R

Tradiro, Odisea R R

* Para información

** Para Ranco: débil resistencia a Fol:0 con varios escapes R = resistencia presente

S = resistencia ausente Temperatura:

Examen efectuado en cámaras climatizadas o en invernadero a una temperatura de 24 a 28°C. En caso de que sea un ensayo agresivo, la temperatura puede disminuirse de 20 a 24°C.

Inoculación:

La variedad Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici se cultiva en los medios PDA o S de Messiaen o en cultivos líquidos Czapek-Dox aireados durante un período de 7 a 10 días. Las esporas se cosechan y ajustan a 106sp/ml para cepas cultivadas en medios. En los casos de aislamiento muy agresivo, puede disminuirse la concentración del inóculo.

Método de inoculación

Inmersión de las raíces (la sección de las raíces es opcional) y del eje de hipocotilo durante un período de 5 a 15 minutos en la suspensión del inóculo y transplante, tras la inoculación, de las plántulas en suelo.

Duración del ensayo

28 días como mínimo desde la siembra hasta la notación. Número de plantas examinadas:

20 plantas como mínimo. Notación:

21 días como mínimo tras la inoculación. Escala de la notación:

4 clases:

 0: sin síntomas,

 1: aspecto externo de la planta sano (sin reducción del desarrollo) con vasos marrones (a veces extendidos por encima de los cotiledones, generalmente situados debajo los cotiledones),

 2: reducción del desarrollo y vasos marrones por encima de los cotiledones,  3: planta muerta.

Interpretación de la escala:

Generalmente, 0 y 1 equivalen a resistentes, 2 y 3 son susceptibles, pero el análisis de los resultados debería calibrarse con los resultados de los controles R y S.

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Ad 48: Resistencia a Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici (Fol)

1. Agentes patógenos ...Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici 3. Especies huéspedes...Solanum lycopersicum

4. Fuente del inóculo...Naktuinbouw5 (NL) y GEVES6 (FR)

5. Aislado ...Raza 0 (ex 1) (p. ej., cepas Orange 71 o PRI 20698 o Fol 071 1 (ex 2) (p. ej., cepas 4152 o PRI40698 o RAF 70 y 2 (ex 3)

.La capacidad patógena puede variar de una cepa a otra 6. Establecimiento de la identidad del aislado...utilizar variedades diferenciales (véase 9.3)

7. Establecimiento de la capacidad patógena ...en variedades de tomate susceptibles 8. Multiplicación del inóculo

8.1 Medio de multiplicación...papa-dextrosa-agar, medio “S” de Messiaen

8.4 Medio de inoculación ...agua para raspar las placas de agar o medio de cultivo Czapek-Dox (cultivo aireado de 7 días)

8.6 Cosecha del inóculo ...filtrar a través de una capa doble de muselina 8.7 Comprobación del inóculo cosechado ...recuento de esporas (ajustar a 106 por ml) 8.8 Período de conservación/viabilidad

del inóculo...de 4 a 8 horas (mantener a baja temperatura para evitar la germinación de las esporas)

9. Formato del examen

9.1 Número de plantas por genotipo ...20 como mínimo 9.2. Número de réplicas...No aplicable 9.3 Variedades de control para el ensayo con la raza 0 (ex 1)

Susceptibles ...Marmande, Marmande verte, Resal

Resistentes únicamente a la raza 0 ...Marporum, Larissa, “Marporum x Marmande verte”, Marsol, Anabel Resistentes a las razas 0 y 1...Motelle, Gourmet, Mohawk

Variedades de control para el ensayo con la raza 1 (ex 2)

Susceptibles ...Marmande verte, Cherry Belle, Roma Resistentes únicamente a la raza 0 ...Marporum, Ranco

Resistentes a las razas 0 y 1...Tradiro, Odisea

Observación: ...Ranco es ligeramente menos resistente que Tradiro Variedades de control para el ensayo con la raza 2 (ex 3)

Susceptible a las razas 0, 1 y 2...Marmande verte, Motelle, Marporum Resistente a las razas 0, 1 y 2 ...Tributes, Murdoch, Marmande verte x Florida

9.4 Diseño del ensayo ...>20 plantas; p. ej., 35 semillas para 24 plantas (incluidas 2 de control) 9.5 Instalación del ensayo ...invernadero o sala climatizada

9.6 Temperatura ...de 24 a 28°C (ensayo severo, con aislado moderado) de 20 a 24°C (ensayo moderado, con aislado severo) 9.7 Luz ...12 horas por día o más

9.8 Estación ...cualquier estación

9.9 Medidas especiales ...una tierra de turba ligeramente ácida resulta óptima; mantener la tierra húmeda pero evitar el estrés hídrico

10. Inoculación

10.1 Preparación del inóculo ...Messiaen aireado o PDA o medio Agar S de Messiaen o cultivo Czapek Dox o raspado de placas

10.2 Cuantificación del inóculo ...recuento de esporas (ajustar a 106 por ml). Una concentración más baja para un aislado muy agresivo

10.3 Estado de desarrollo en el momento

de la inoculación ...de 10 a 18 días (de cotiledón a primera hoja)

10.4 Método de inoculación ...inmersión de las raíces y los hipocótilos en una suspensión de esporas durante 5 a 15 minutos; opcionalmente se pueden trocear las raíces 10.7 Observaciones finales...de 14 a 21 días después de la inoculación

11. Observaciones

11.1 Método ...visual 11.2 Escala de observación...Síntomas:

.retraso del crecimiento, marchitez, amarilleo, pardeamiento de los vasos extendido por encima del cotiledón

11.3 Validación del ensayo ...la evaluación de la resistencia de la variedad deberá calibrarse con los resultados de los controles resistentes y susceptibles. Las variedades estándar cercanas al límite entre la resistencia y la susceptibilidad serán útiles para las comparaciones entre laboratorios.

12. Interpretación de los datos en función de los niveles de los caracteres de la UPOV ausentes...[1] síntomas intensos presentes ...[9] síntomas leves o ausentes 13. Puntos de control esenciales:

Los resultados de los ensayos pueden variar ligeramente en cuanto a la presión del inóculo debido a las diferencias relativas a los aislados, la concentración de esporas, la humedad de la tierra y la temperatura.

5

Naktuinbouw; resistentie@naktuinbouw.nl

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Ad. 49: Resistencia a Fusarium oxysporum f. sp. radicis lycopersici (Forl) Método

Mantenimiento de la raza

Tipo de medio: en medio PDA o sintético (según Messiaen)

Condiciones especiales: en frigorífico a 4 C Ejecución del ensayo

Estado de desarrollo de las plantas: aparición de la tercera hoja

Temperatura: diurna: 22 C, nocturna: 16 C

Luz: 14 horas

Método de cultivo: en sala climatizada o invernadero

Método de inoculación: inmersión de las raíces y del eje del hipocotilo durante cinco minutos en la solución de inóculo

Duración del ensayo

- desde la siembra a la inoculación: 18 a 20 días - desde la inoculación a la evaluación: 10 días Número de plantas examinadas: 10 a 20 plantas

Observaciones: se precisa una renovación frecuente de las razas debido a la pérdida de la capacidad patógena

Variedades estándar: - susceptibles: Motelle

- resistentes: - Momor (homocigótica)

- F1 Momor x Motelle (heterocigótica)

(11)

Ad 49: Resistencia a Fusarium oxysporum f. sp. radicis-lycopersici (Forl)

1. Agentes patógenos ... Fusarium oxysporum f. sp. radicis-lycopersici 3. Especies huéspedes ... Solanum lycopersicum

4. Fuente del inóculo ... Naktuinbouw7 (NL) y GEVES8 (FR) 5. Aislado ... -

7. Establecimiento de la capacidad patógena ... síntomas en tomates susceptibles Multiplicación del inóculo 8.1 Medio de multiplicación ... papa-dextrosa-agar o medio agar “S” de Messiaen

8.4 Medio de inoculación... agua para raspar las placas de agar o medio de cultivo Czapek-Dox (cultivo aireado de 7 días) 8.6 Cosecha del inóculo ... filtrar a través de una capa doble de muselina 8.7 Comprobación del inóculo cosechado ... recuento de esporas (ajustar a 106 por ml) 8.8 Período de conservación/viabilidad

del inóculo ... de 4 a 8 horas (mantener a baja temperatura para evitar la germinación de las esporas)

9. Formato del examen

9.1 Número de plantas por genotipo ... 20 como mínimo 9.2. Número de réplicas ... No aplicable 9.3 Variedades de control

Susceptibles: ... Motelle, Moneymaker Resistentes: ... Momor, “Momor x Motelle”

Observación: ... la resistencia de “Momor x Motelle” es ligeramente menor que la . de Momor

9.4 Diseño del ensayo... >20 plantas; p.ej., 35 semillas para 24 plantas (incluidas 2 de control)

9.5 Instalación del ensayo... invernadero o sala climatizada

9.6 Temperatura... de 24 a 28°C (ensayo severo, con aislado moderado) . de 17 a 24°C (ensayo moderado, con aislado severo) 9.7 Luz ... 12 horas al día como mínimo

9.8 Estación ... cualquier estación

9.9 Medidas especiales... una tierra de turba ligeramente ácida resulta óptima; mantener la tierra húmeda pero evitar el estrés hídrico 10. Inoculación

10.1 Preparación del inóculo... cultivo aireado o raspado de placas 10.2 Cuantificación del inóculo... recuento de esporas (ajustar a 106 por ml) 10.3 Estado de desarrollo en el momento

de la inoculación ... de 12 a 18 días (de cotiledón a tercera hoja)

10.4 Método de inoculación ... inmersión de las raíces y los hipocótilos en una suspensión de esporas durante 5 a 15 minutos

10.7 Observaciones finales ... de 10 a 21 días después de la inoculación 11. Observaciones

11.1 Método ... visual; al final del ensayo se recogen algunas plantas 11.2 Escala de observación ... Síntomas:

muerte de la planta, retraso del crecimiento a causa de la degradación de las raíces, degradación de las raíces, puntos necróticos y lesiones necróticas en los tallos

11.3 Validación del ensayo ... la evaluación de la resistencia de la variedad deberá calibrarse con los resultados de los controles resistentes y susceptibles. 12. Interpretación de los datos en función de los niveles de los caracteres de la UPOV

ausentes ... [1] síntomas presentes ... [9] ausencia de síntomas

13. Puntos de control esenciales: La temperatura no debe superar nunca los 27°C durante el período de ensayo; puede ser necesario renovar frecuentemente las razas debido a la pérdida de la capacidad patógena. 7 Naktuinbouw; resistentie@naktuinbouw.nl 8 GEVES; Valerie.GRIMAULT@geves.fr

(12)

Ad. 50.1 – 50.6 Resistencia a Fulvia fulva (Ff) (ex Cladosporium fulvum) Método

Mantenimiento de las razas

Tipo de medio: medio PDA o sintético

Condiciones especiales: subcultivo de aislados

Ejecución del ensayo

Estado de desarrollo de las plantas: 3 hojas desarrolladas

Temperatura: diurna: 24 C, nocturna: 16 C

Luz: 12 horas

Método de cultivo: en sala climatizada, con el mayor nivel de humedad posible, reducir el crecimiento pocos días antes de la inoculación regando las raíces con ALAR 85 (daminazoide), o en invernadero con alto nivel de humedad, por ejemplo, bajo una cobertura de polietileno.

Método de inoculación: pulverizar una solución con los hongos sobre las hojas. Duración del ensayo

- desde la siembra a la inoculación: 22 a 25 días - desde la inoculación a la evaluación: 20 a 25 días Número de plantas examinadas: 30 plantas

Observaciones: el nivel de expresión de los síntomas puede variar entre las plantas debido a la complejidad de la genética de la resistencia

Variedades estándar:

- susceptibles: Monalbo

- resistentes: deben escogerse con los alelos pertinentes. cf1: Stirling Castle cf2: Vetomold cf3: V 121 cf4: Purdue 135 cf5: IVT 1149 cf2 cf4: Vagabond cf2 cf5: F1 “Vetomold x IVT 1149” cf2 cf4 cf5: F1 “Vagabond x IVT 1149” cf6: F 77-38 cf9: IVT 1154

Raza 0: Angela, Estrella, Sonatine, Sonato, Vemone Grupo A: Angela, Estrella, Sonatine, Sonato

Grupo B: Angela, Estrella, Sonatine, Sonato, Vemone Grupo C: Angela, Estrella, Sonatine

Grupo D: Estrella, Sonatine, Vemone Grupo E: Sonatine

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Ad 50: Resistencia a Fulvia fulva (Ff) (ex Cladosporium fulvum)

1. Agentes patógenos ... Fulvia fulva (ex Cladosporium fulvum) 3. Especies huéspedes ... Solanum lycopersicum

4. Fuente del inóculo ... Naktuinbouw9 (NL) o GEVES10 (FR) 5. Aislado ... Grupos de razas 0, A, B, C, D y E

6. Establecimiento de la identidad del aislado... con variedades diferenciales genéticamente definidas procedentes de GEVES (FR)

. A supera la resistencia de Cf-2, B la de Cf-4, C la de Cf-2 y Cf-4, D la de Cf-5, E la de Cf-2, Cf-4 y Cf-5

7. Establecimiento de la capacidad patógena ... síntomas en tomates susceptibles 8. Multiplicación del inóculo

8.1 Medio de multiplicación ... papa-dextrosa-agar, o malta agar o un medio sintético 8.8 Período de conservación/viabilidad

del inóculo ... 4 horas (mantener a baja temperatura) 9. Formato del examen

9.1 Número de plantas por genotipo ... más de 20 9.2. Número de réplicas ... No aplicable 9.3 Variedades de control

Susceptibles: ... Monalbo, Moneymaker

Resistentes a la raza 0: ... Angela, Estrella, Sonatine, Sonato, Vemone, Vagabond, IVT 1149, Vagabond × IVT 1149, IVT 1154

Resistentes al grupo de razas A: ... Angela, Estrella, Sonatine, Sonato

Resistentes al grupo de razas B: ... Angela, Estrella, Sonatine, Sonato, Vemone Resistentes al grupo de razas C: ... Angela, Estrella, Sonatine

Resistentes al grupo de razas D: ... Estrella, Sonatine, Vemone

Resistentes al grupo de razas E: ... Sonatine, Jadviga, Rhianna, IVT 1154 9.5 Instalación del ensayo... invernadero o sala climatizada

9.6 Temperatura... día: 22° C, noche: 20° o día: 25°C, noche 20°C 9.7 Luz ... 12 horas como mínimo

9.9 Medidas especiales... en función del local y del clima, puede ser necesario aumentar la humedad, p. ej., campana de humedad cerrada 3 a 4 días después de la inoculación y después de esto, 66% hasta 80% cerrada durante el día hasta el final

10. Inoculación

10.1 Preparación del inóculo... preparar placas colonizadas de manera uniforme (una por cada 36 plantas); extraer las esporas de las placas raspando con agua desmineralizada con Tween20; filtrar a través de una capa doble de muselina

10.2 Cuantificación del inóculo... recuento de esporas (ajustar a 105 por ml o más) 10.3 Estado de desarrollo en el momento

de la inoculación ... de 19 a 20 días (incluidos 12 días a 24°C), 2 a 3 hojas 10.4 Método de inoculación ... pulverizar sobre hojas secas

10.7 Observaciones finales ... 14 días después de la inoculación 11. Observaciones

11.1 Método ... inspección visual de la cara abaxial de las hojas inoculadas 11.2 Escala de observación ... Síntoma: manchas blancas y aterciopeladas

11.3 Validación del ensayo ... la evaluación de la resistencia de la variedad deberá calibrarse con los resultados de los controles resistentes y susceptibles. 12. Interpretación de los datos en función de los niveles de los caracteres de la UPOV

ausentes ... [1] síntomas presentes ... [9] ausencia de síntomas

Una humedad excesivamente alta puede producir manchas marrones acentuadas en todas las hojas. Estas no se consideran como plantas fuera de tipo.

13. Puntos de control esenciales:

El tamaño y la forma de las esporas Ff son variables. Las esporas pequeñas también son viables.

Las placas con los cultivos fúngicos se hacen gradualmente estériles en el transcurso de 6 a 10 semanas. Los cultivos de buena calidad deben conservarse a -80°C.

No es posible mantener las plantas más de 14 días dentro de una campana por razones prácticas.

9

Naktuinbouw: resistentie@naktuinbouw.nl

10

(14)

Ad. 51.1 – 51.3: Resistencia al virus del mosaico del tomate (ToMV), Cepas 0, 1 y 2 Método

Mantenimiento de las cepas

Las cepas se almacenan a largo plazo como hojas deshidratadas a una temperatura inferior a 10°C.

Se utiliza la raza 0 representada por aislado INRA Avignon 6-5-1-1 (cepa mosaico aucuba). Los virus deberían reproducirse en el control susceptible antes de utilizarlos para la inoculación del examen.

Ejecución del ensayo

Estado de desarrollo de las plantas

Las plantas se cultivan en invernadero o en cámaras de cultivo desde la aparición de los cotiledones (brote de las primeras hojas) hasta la aparición de dos hojas desarrolladas.

En cada ensayo se incluye al menos una variedad estándar resistente y una variedad estándar susceptible.

Como controles se utilizan las siguientes variedades: cada línea estará representada por un fenotipo de resistencia como mínimo que pueden elegirse de entre las variedades indicadas; se indica el fenotipo de resistencia a los 3 patotipos de ToMV. Las variedades Mobaci y Moperou permitirán comprobar la identificación del patotipo del virus. Las variedades Monalbo x Momor contribuirán a interpretar los distintos fenotipos de resistencia con necrosis.

Variedad Fenotipo de resistencia

ToMV:0 ToMV:1 ToMV:2

____________________________________________________________________ Marmande, Monalbo S S S Mobaci R S R Moperou R R S Monalbo x Momor RN RN RN Momor, Gourmet R R R ____________________________________________________________________ R = resistencia presente; sin síntomas.

RN = resistencia presente; una proporción variable de plantas muestra algo de necrosis o mucha necrosis; todas las demás plantas no presentan síntomas.

S = resistencia ausente; síntomas del mosaico. Temperatura:

El examen se efectúa en cámaras climatizadas o en invernadero a una temperatura de 24 a 26°C. A temperaturas más altas, la resistencia puede quebrantarse.

Inóculo y método de inoculación

Inoculación mecánica por frotación de cotiledones (brote de las primeras hojas) o de dos hojas desarrolladas con una solución de inóculo consistente en hojas sintomáticas molidas en un amortiguador con carborundo añadido. Las hojas pueden lavarse después de la inoculación. La luz es importante para la expresión del síntoma.

Duración del ensayo

De 24 a 42 días desde la siembra hasta la notación. Número de plantas examinadas:

20 plantas como mínimo. Notación:

De 12 a 21 días después de la inoculación, cuando los síntomas están bien desarrollados en el control susceptible. Escala de notación e interpretación de los resultados:

R: sin síntomas o con necrosis (la necrosis puede observarse en plantas heterocigóticas; para genes de resistencia, estas plantas se anotan como resistentes).

(15)

Ad 51: Resistencia al virus del mosaico del tomate (ToMV)

1. Agentes patógenos ... Virus del mosaico del tomate 3. Especies huéspedes ... Solanum lycopersicum

4. Fuente del inóculo ... Naktuinbouw11 (NL) o GEVES12 (FR)

5. Aislado ... Cepa 0 (p.ej., aislado INRA Avignon 6-5-1-1) 1 y 2

6. Establecimiento de la identidad del aislado... variedades estándar de tomate genéticamente definidas Mobaci (Tm1), Moperou (Tm2), Momor (Tm22)

7. Establecimiento de la capacidad patógena ... en plantas susceptibles 8. Multiplicación del inóculo

8.1 Medio de multiplicación ... planta viva

8.2 Variedad para la multiplicación ... p. ej., Moneymaker, Marmande

8.7 Comprobación del inóculo cosechado ... opcionalmente: en Nicotiana tabacum “Xanthi”; comprobar las lesiones al cabo de 2 días

8.8 Período de conservación/viabilidad

del inóculo ... fresco, más de 1 día; desecado, más de 1 año 9. Formato del examen

9.1 Número de plantas por genotipo ... 20 como mínimo 9.2. Número de réplicas ... No aplicable 9.3 Variedades de control

Susceptibles... Marmande, Monalbo Resistentes al ToMV: 0 y 2 ... Mobaci

Resistentes al ToMV: 0 y 1 ... Moperou

Resistentes con necrosis ... “Monalbo x Momor” Resistentes ... Gourmet

9.4 Diseño del ensayo... tratamiento de control con PBS y carborundo, o tampón similar 9.5 Instalación del ensayo... invernadero o sala climatizada

9.6 Temperatura... de 24 a 26°C

9.7 Luz ... 12 horas como mínimo

9.8 Estación ... los síntomas son más notorios en verano 10. Inoculación

10.1 Preparación del inóculo... 1 g de hojas con síntomas y 10 ml de PBS, o tampón similar. Homogeneizar y añadir carborundo al tampón (1 g/30 ml) 10.3 Estado de desarrollo en el momento

de la inoculación ... cotiledones o 2 hojas 10.4 Método de inoculación ... frotar suavemente

10.7 Observaciones finales ... de 11 a 21 días después de la inoculación 11. Observaciones

11.1 Método ... visual

11.2 Escala de observación ... Síntomas de susceptibilidad: mosaico apical, deformación de las hojas; síntomas de resistencia (debida a hipersensibilidad): necrosis local, necrosis apical, necrosis sistémica

11.3 Validación del ensayo ... la evaluación de la resistencia de la variedad deberá calibrarse con los resultados de los controles resistentes y susceptibles. Observación: En algunas variedades heterocigóticas, es posible que una proporción variable de plantas presenten una intensa necrosis sistémica o algunas manchas necróticas y otras plantas no presenten síntomas. Dicha proporción puede variar de un experimento a otro.

12. Interpretación de los datos en función de los niveles de los caracteres de la UPOV ausente ... [1] síntomas de susceptibilidad

presente... [9] sin síntomas, o con síntomas de resistencia por hipersensibilidad

13. Puntos esenciales de control:

La temperatura y la luz pueden influir en el grado de necrosis. Cuanta más luz, mayor sera el grado de necrosis. A temperaturas por encima de los 26°C la resistencia puede quebrantarse.

En las variedades heterocigotas resistentes puede haber plantas sin síntomas y plantas con necrosis intensa; a pesar de esta aparente segregación, la muestra puede considerarse homogénea con respecto a la resistencia.

Observación: Para el ToMV: 0 se recomienda la cepa INRA Avignon 6-5-1-1. Dicha cepa produce un llamativo mosaico Aucuba de color amarillo.

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Naktuinbouw; resistentie@naktuinbouw.nl

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Ad. 52: Resistencia a Phytophthora infestans (Pi) Método

Mantenimiento de la raza

Tipo de medio: medio en agar

Condiciones especiales: 18 C

Ejecución del ensayo

Estado de desarrollo de las plantas: 10 hojas desarrolladas Temperatura: 18 C

Luz: tras la inoculación, oscuridad durante 24 horas, a partir de ese

momento, 10 horas de oscuridad por día Método de cultivo: en sala climatizada o invernadero

Método de inoculación: pulverizar una suspensión de esporas, aislado tomado recientemente de las hojas

Duración del ensayo

- desde la cosecha hasta la inoculación: 6 a 7 semanas - desde la inoculación a la evaluación: 7 a 8 días

Humedad: muy alta durante los cuatro primeros días después de la

inoculación (cubrir las plantas con una cobertura de polietileno) Observaciones: los heterocigotos pueden mostrar un nivel de expresión de

resistencia inferior Variedades estándar:

- susceptibles: Saint Pierre, Heinz 1706

- resistentes: Pieraline, Heline, Pyros

(17)

Ad 52: Resistencia a Phytophthora infestans (Pi)

1. Agentes patógenos... Phytophthora infestans

3. Especies huéspedes ... Solanum lycopersicum

4. Fuente del inóculo ...-

5. Aislado ... altamente patógeno en el tomate 6. Establecimiento de la identidad

aislado ... bioensayo 7. Establecimiento de la capacidad

patógena... bioensayo 8. Multiplicación del inóculo ...

8.1 Medio de multiplicación ... V8 Agar o PDA o medio agar de malta 8.2 Variedad para la multiplicación... variedad susceptible de tomate 8.3 Estado de desarrollo en el momento

de la inoculación ... 4 semanas 8.4 Medio de inoculación ... agua

8.5 Método de inoculación... pulverización

8.6 Cosecha del inóculo ... se retiran las esporas de las placas mojadas 8.7 Comprobación del inóculo

cosechado ... contabilización de las esporangiosporas 8.8 Periodo de conservación o

viabilidad del inóculo ... 4 horas tras refrigeración a 8-10°C 9. Formato del examen...

9.1 Número de plantas por genotipo ... 20

9.2 Número de réplicas……… . no aplicable 9.3 Variedades de control………

Susceptibles ... Saint Pierre, Heinz 1706

Resistentes ... Pieraline, Heline, Pyros, “Pieraline x Pieralbo”, Fline

Observación: ... las variedades heterocigóticas pueden presentar un nivel de expresión de resistencia ligeramente inferior.

9.5 Instalación del ensayo ... invernadero 9.6 Temperatura ... 18°C

9.7 Luz ... tras la inoculación, oscuridad durante 24 horas, a partir de ese momento, 10 horas de oscuridad por día (24h) 9.9 Medidas especiales ... campana de humedad durante 4 días después de la

inoculación 10. Inoculación...

10.1 Preparación del inóculo ... retirar las esporas de las hojas, refrigerar a 8-10°C la refrigeración producirá la liberación de zoosporas

Observación ... utilizar esporas frescas a partir de la repetición de los ciclos de infección en la planta del tomate durante 3 semanas antes de la inoculación

10.2 Cuantificación del inóculo... contabilización de las esporangiosporas; ajustar a 104 esporas por ml

10.3 Estado de desarrollo en el

momento de la inoculación... 10 hojas desarrolladas (6 a 7 semanas) 10.4 Método de inoculación... pulverización

10.7 Observaciones finales ... 5-7 días tras la inoculación 11. Observaciones...

11.1 Método... visual

11.2 Escala de observación ... síntomas: lesiones impregnadas, amarilleo y muerte

11.3 Validación del ensayo... la evaluación de la resistencia de la variedad debe calibrarse a partir de los resultados de los controles de resistencia y susceptibilidad

12. Interpretación de los datos en función de los niveles de los caracteres de la UPOV ausentes ... [1] síntomas severos

presentes ... [9] ausencia de síntomas o síntomas leves

13. Puntos esenciales de control:... la resistencia sólo se manifiesta adecuadamente en la planta adulta

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Ad. 53: Resistencia a Pyrenochaeta lycopersici (Pl) Método

Mantenimiento de la raza: método 1: en raíces obtenidas de plantas cultivadas en invernadero o en suelo contaminado de manera natural (o con contaminación natural inducida)

método 2: inóculo cultivado en tierra o mantillo, mezclado con harina de avena y esterilizado en el autoclave (infección artificial)

Ejecución del ensayo:

Estado de desarrollo de las plantas: método 1: en plantas adultas aproximadamente en la época de madurez del fruto

método 2: 4 a 6 semanas después de la siembra (primera inflorescencia floral)

Temperatura: diurna: 24 C, nocturna: 14 C

Luz: 12 horas como mínimo

Método de cultivo y método de inoculación:

método 1: las plantas se plantan en suelo contaminado mezclado con raíces cortadas contaminadas

método 2: las plantas se siembran en mantillo desinfectado al vapor mezclado con inóculo Duración del ensayo

- desde la siembra a la inoculación: método 1: 6 semanas

método 2: en el momento de la siembra - desde la inoculación a la evaluación: método 1: 3 a 4 meses

método 2: 4 a 6 semanas Número de plantas examinadas: 10 como mínimo

Observaciones: método 1: es más eficaz separar claramente las plantas

susceptibles de las plantas resistentes

método 2: la capacidad patógena de las cepas debe comprobarse antes de la inoculación en las raíces de plantas jóvenes

Variedades estándar: susceptibles: Montfavet H 63.5 resistentes: Kyndia, Moboglan, Pyrella

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Ad 53: Resistencia a Pyrenochaeta lycopersici (Pl)

1. Agentes patógenos...Pyrenochaeta lycopersici 3. Especies huéspedes ...Solanum lycopersicum 4. Fuente del inóculo ...-

5. Aislado ...-

7. Establecimiento de la capacidad patógena ...bioensayo 8. Multiplicación del inóculo

8.1 Medio de multiplicación ...V8 agar

8.2 Variedad para la multiplicación...variedad susceptible de tomate 8.3 Estado de desarrollo en el momento

de la inoculación ...semilla

8.4 Medio de inoculación ...mezcla de tierra (70%), arena (20%) e inóculo (10.1) (10%) o tierra mezclada con raíces enfermas cortadas en trozos pequeños

8.5 Método de inoculación...siembra, o transplante del fruto en estado de madurez 8.6 Cosecha del inóculo ...las raíces enfermas se recogen al cabo de 2 a 4 meses 8.7 Comprobación del inóculo cosechado...inspección visual de las lesiones en las raíces

8.8 Período de conservación/viabilidad

del inóculo...el hongo no muere rápidamente, pero puede perder su capacidad patógena en el transcurso de una semana tras su aislamiento en agar

9. Formato del examen

9.1 Número de plantas por genotipo ...20

9.2. Número de réplicas...No aplicable 9.3 Variedades de control

Susceptibles: ...Montfavet H 63.5

Resistentes: ...Kyndia, Moboglan, Pyrella

9.5 Instalación del ensayo ...invernadero o cámara climatizada 9.6 Temperatura ...diurna: 24°C, nocturna: 14°C 9.7 Luz ...12 horas como mínimo 10. Inoculación

10.1 Preparación del inóculo ...p. ej., mezcla de tierra y un 10% de harina de avena, esterilizada dos veces en autoclave p. ej., incubar durante 10 a 14 días a 20°C, volteando varias veces ocasionalmente

10.3 Estado de desarrollo en el momento

de la inoculación ...6 semanas

10.4 Método de inoculación...trasplantar a la mezcla de tierra, arena e inóculo (8.4) o a tierra mezclada con raíces enfermas cortadas en trozos pequeños, o tierra infectada de forma natural

10.7 Observaciones finales ...6 a 8 semanas después del trasplante (planta en floración) 11. Observaciones

11.1 Método...visual

11.2 Escala de observación ...Síntomas: lesiones de color pardo en las raíces 11.3 Validación del ensayo...la evaluación de la resistencia de la variedad deberá

calibrarse con los resultados de los controles resistentes y susceptibles.

12. Interpretación de los datos en función de los niveles de los caracteres de la UPOV ausentes ...[1] síntomas

presentes ...[9] ausencia de síntomas 13. Puntos de control esenciales:

El hongo pierde rápidamente su capacidad patógena tras su aislamiento en agar. Es aconsejable mantener el aislado vivo en plantas vivas.

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Ad. 54: Resistencia a Stemphylium Método

Mantenimiento del aislamiento

Tipo de medio: en medio PDA o sintético

Condiciones especiales: frigorífico a 4 C sin luz Ejecución del ensayo

Estado de desarrollo de las plantas: tres hojas desarrolladas

Temperatura: constante, diurna: 24 C, nocturna: 24 C

Luz: 12 horas

Método de desarrollo: invernadero o sala climatizada Método de inoculación: pulverización sobre las hojas Duración del ensayo

- desde la siembra a la inoculación: 20 a 22 días - desde la inoculación a la evaluación: 10 días Número de plantas examinadas: 30 plantas

Observaciones: producción del inóculo en medio V8 bajo la luz Variedades estándar: susceptibles: Monalbo

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Ad 54: Resistencia a Stemphylium spp. (Ss)

1. Agentes patógenos...Stemphylium spp. p.ej. Stemphylium solani 3. Especies huéspedes ...Solanum lycopersicum

4. Fuente del inóculo ...GEVES (FR) 5. Aislado ...-

7. Establecimiento de la capacidad patógena ...bioensayo 8. Multiplicación del inóculo

8.1 Medio de multiplicación ...PDA (12 horas al día bajo luz del ultravioleta cercano para inducir la esporulación) o V8

9. Formato del examen

9.1 Número de plantas por genotipo ...20 como mínimo 9.2. Número de réplicas...No aplicable 9.3 Variedades de control

Susceptibles: ...Monalbo

Resistentes: ...Motelle, F1 Motelle x Monalbo 9.5 Instalación del ensayo ...invernadero o cámara climatizada 9.6 Temperatura ...24°C

9.7 Luz ...12 horas como mínimo

9.9 Medidas especiales ...incubación en túnel con una humedad relativa del 100% o campana de humedad cerrada 5 días después de la inoculación, después de ello, 80% hasta el final 10. Inoculación

10.1 Preparación del inóculo ...Las placas de esporulación (8.1) se raspan y se dejan secar al aire durante la noche.

.Al día siguiente, las placas se sumergen en un vaso de precipitados con agua desmineralizada y se remueven durante 30 minutos, o las placas de esporulación se raspan con agua con Tween

.La suspensión de esporas se filtra a través de una capa doble de muselina.

10.2 Cuantificación del inóculo...5,103 – 105 esporas por ml 10.3 Estado de desarrollo en el momento

de la inoculación ...de 20 a 22 días (tres hojas desarrolladas) 10.4 Método de inoculación...pulverización

10.7 Observaciones finales ...de 4 a 10 días después de la inoculación 11. Observaciones

11.1 Método...visual

11.2 Escala de observación ...Síntomas: lesiones necróticas en los cotiledones y hojas; amarilleo de las hojas

11.3 Validación del ensayo...la evaluación de la resistencia de la variedad deberá calibrarse con los resultados de los controles resistentes y susceptibles.

12. Interpretación de los datos en función de los niveles de los caracteres de la UPOV ausentes ...[1] síntomas (11.2)

presentes ...[9] sin síntomas o con menos que la variedad

estándar resistente

13. Puntos de control esenciales:...8.1 y 10.1

Nota: Algunos aislados de Stemphylium no pueden clasificarse fácilmente como Stemphylium solani o una especie relacionada. No obstante, dichos aislados de Stemphylium pueden resultar útiles para determinar la resistencia a Stemphylium solani.

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Ad. 55: Resistencia a Pseudomonas syringae pv. tomato (Pst) Método

Mantenimiento de las razas

Tipo de medio: en medio King B

Condiciones especiales: 20 a 22 C a oscuras, efectuando un transplante cada 10 días Ejecución del ensayo

Estado de desarrollo de las plantas: tres hojas desarrolladas

Temperatura: diurna: 22 C, nocturna: 16 C

Luz: 12 horas

Método de cultivo: sala climatizada en verano, invernadero en invierno Método de inoculación: pulverización sobre las hojas

Duración del ensayo

- desde la siembra a la inoculación: 20 a 22 días - desde la inoculación a la evaluación: 8 días Número de plantas examinadas: 30 plantas

Observaciones: las razas deben renovarse cada año

Variedades estándar: susceptibles: Monalbo

(23)

Ad 55: Resistencia a Pseudomonas syringae pv. tomato (Pst)

1. Agentes patógenos... Pseudomonas syringae pv. tomato

3. Especies huéspedes ... Solanum lycopersicum

4. Fuente del inóculo ... GEVES13 (FR) o Naktuinbouw14 (NL) 5. Aislado ...

6. Establecimiento de la identidad aislado 7. Establecimiento de la capacidad

patógena ... bioensayo 8. Multiplicación del inóculo ...

8.1 Medio de multiplicación ... medio King’s B agar, oscuridad 8.2 Multiplicación de la variedad ... variedad susceptible

8.4 Medio de inoculación ... agua 8.8 Periodo de conservación o

viabilidad del inóculo ... las placas envejecen al cabo de 10 días 9. Formato del examen...

9.1 Número de plantas por genotipo ... 20 como mínimo 9.2 Número de réplicas……….. no aplicable 9.3 Variedades de control...

Susceptible: ... Monalbo

Resistente: ... Ontario 7710, “Monalbo x Ontario 7710”, Tradiro, Hypeel 45 9.5 Instalación del ensayo ... invernadero o cámara de cultivo

9.6 Temperatura ... día: 22 C, noche: 16 C o 20°C 9.7 Luz ... 12 horas

9.9 Medidas especiales ... campana de humedad necesaria durante 3 días o más 10. Inoculación...

10.1 Preparación del inóculo ... retirar las esporas de la placa. La placa no debe tener más de 2-4 días

10.2 Cuantificación del inóculo... dilución en placas, densidad de 106 unidades que forman colonias por ml

10.3 Estado de desarrollo en el

momento de la inoculación ... tres hojas desarrolladas (20-22 días)

10.4 Método de inoculación... pulverizar una suspensión de bacterias en las hojas 10.7 Observaciones finales ... 8 días a partir la inoculación o más

11. Observaciones...

11.1 Método... visual

11.2 Escala de observación ... mancha bacterial, apariencia grasa con clorosis marginal lesiones identificadas < 1.0 mm

11.3 Validación del ensayo... la evaluación de la resistencia de la variedad debe calibrarse a partir de los resultados de los controles de resistencia y susceptibilidad

12. Interpretación de los datos en función de los niveles de los caracteres de la UPOV ausente ... [1] mancha bacterial

presente... [9] ausencia de síntomas o de lesiones identificadas 13. Puntos esenciales de control:... las cepas pueden perder virulencia en el almacenamiento

13

GEVES; Valerie.GRIMAULT@geves.fr

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Ad. 56: Resistencia a Ralstonia solanacearum (Rs), raza 1 Método

Mantenimiento de la raza : dos razas pueden afectar al tomate: raza 1 (activa entre 25 y 30 C) y raza 3 (activa entre 20 y 23 C)

Tipo de medio: congelación a -80 C; cultivo en PYDAC inmerso en aceite; suspensión en agua destilada estéril

Condiciones especiales: conservación a 15 C en agua destilada estéril Ejecución del ensayo

Estado de desarrollo de las plantas: tres a cuatro hojas bien desarrolladas Temperatura (en sala climatizada): diurna: de 26 a 30 C, nocturna: 25 C

Luz: 10 a 12 horas

Método de cultivo: 2 posibilidades: - en cámara climatizada: ensayo rápido

- en campo abierto: ensayo largo (aplicable solamente en clima tropical)

Método de inoculación: depositar al menos 2 ml de inóculo, a 107 colonias por ml, en el pie de cada plántula antes de plantarlas

Duración del ensayo

- desde la siembra a la inoculación: 3 a 4 semanas

- desde la inoculación a la evaluación: - 3 semanas para el ensayo rápido - 2 meses para el ensayo largo Número de plantas examinadas: 30 como mínimo

Observaciones: mantener un nivel elevado de humedad

Variedades estándar: - susceptibles: Floradel - resistentes: Caraïbo

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Ad 56: Resistencia a Ralstonia solanacearum, raza 1 (Rs)

1. Agentes patógenos... Ralstonia solanacearum (ex Pseudomonas solanacearum)

2. Quarantine status ... sí

3. Especies huéspedes ... Solanum lycopersicum

4. Fuente del inóculo ...

5. Aislado ... la raza 1 tiene una amplia gama de huéspedes, incluido el tomate

la raza 3 tiene una pequeña gama de huéspedes, también incluido el tomate

8. Multiplicación del inóculo ...

8.1 Medio de multiplicación ... Yeast Peptone Glucose (YPG) Agar o PYDAC Condiciones especiales: ... 25-30°C (la raza 3 necesita normalmente 20-23°C) 8.5 Método de inoculación... 2 ml del inóculo en el pie de cada plántula antes de

plantarlas 8.8 Periodo de conservación o

viabilidad del inóculo ... suspensión en agua destilada estéril 15°C (<1 de un año) 9. Formato del examen...

9.1 Número de plantas por genotipo ... 20

9.2 Número de réplicas……….. No aplicable 9.3 Variedades de control...

Susceptible: ... Floradel Resistente... Caraibo 9.5 Instalación del ensayo ... .... sala climatizada

9.6 Temperatura ... día: 26-30 C; noche: 25 C 9.7 Luz ... 10 - 12 horas

9.9 Medidas especiales ... alta humedad 10. Inoculación...

10.2 Cuantificación del inóculo... densidad de 107 unidades que forma colonias por ml 10.3 Estado de desarrollo en el

Momento de la inoculación... de 3 a 4 hojas bien desarrolladas (3 semanas) 10.4 Método de inoculación...

10.7 Observaciones finales ... 3 semanas tras la inoculación

11. Observaciones... en variedades de resistencia intermedia, la parte inferior de la planta podría presentar bacterias

11.3 Validación del ensayo... la evaluación de la resistencia de la variedad debe calibrarse a partir de los resultados de los controles de resistencia y susceptibilidad

12. Interpretación de los datos en función de los niveles de los caracteres de la UPOV ausente ... [1] síntomas

presente... [9] sin síntomas, o menos que la variedad estándar

resistente

13. Puntos de control esenciales:

Ralstonia solanacearum tiene un estado de cuarentena en algunos países y está en la lista de alertas de la

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Ad. 57: Resistencia a Begomovirus del rizado amarillo de la hoja del tomate (TYLCV) Método

Ejecución del ensayo: las plantas se examinan en condiciones de cultivo a campo abierto respetando los periodos de plantación y lugares en que se haya demostrado que existe la enfermedad. Se cultiva el 100% de plantas contaminadas de variedades locales susceptibles, a fin de garantizar la transmisión natural por medio del insecto Bemisia y la reproductibilidad de los resultados

Estado de desarrollo de las plantas: en plantas adultas de cultivos a campo abierto Método de inoculación: inoculación natural por Bemisia

Duración del ensayo

- desde la siembra a la inoculación: 6 semanas como mínimo - desde la inoculación a la evaluación: 2,5 meses como máximo Número de plantas examinadas: 20 plantas como mínimo Observaciones:

Variedades estándar: - susceptibles: variedades locales

- resistentes: TY 20 o accesiones de L.pimpinellifolium y L.

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Ad 57: Resistencia al virus del enrollamiento del bronceado de la hoja (TYLCV)

1. Agentes patógenos...Virus del enrollamiento del bronceado de la hoja (TYLCV) 2. Estado de cuarentena ...sí

3. Especies huéspedes ...Solanum lycopersicum 4. Fuente del inóculo ...-

5. Aislado ...- 8. Multiplicación del inóculo

8.6 Cosecha del inóculo ...las hojas con síntomas pueden conservarse a -70°C 9. Formato del examen

9.1 Número de plantas por genotipo ...20.

9.2. Número de réplicas...No aplicable 9.3 Variedades de control

Susceptibles: ...Montfavet H 63.5

Resistentes: ...TY 20, Anastasia, Mohawk

9.5 Instalación del ensayo ...campo con presión natural de la enfermedad 9.9 Medidas especiales ...evitar la propagación de moscas blancas 10. Inoculación

10.3 Estado de desarrollo en el momento

de la inoculación ...de 6 a 12 semanas (plantas adultas)

10.4 Método de inoculación...vector (moscas blancas Bemisia portadoras del TYLCV) 10.7 Observaciones finales ...de 1 a 2 meses después de la inoculación

11. Observaciones

11.1 Método...visual

11.2 Escala de observación ...Síntomas: amarilleo y rizado de las hojas

11.3 Validación del ensayo...la evaluación de la resistencia de la variedad deberá calibrarse con los resultados de los controles resistentes y susceptibles.

12. Interpretación de los datos en función de los niveles de los caracteres de la UPOV ausentes ...[1] síntomas intensos

presentes ...[9] síntomas ausentes o leves 13. Puntos de control esenciales:

El TYLCV es endémico en muchas zonas tropicales y subtropicales y está sujeto a cuarentena en muchos países de clima templado. El TYLCV figura en la lista de alertas de la EPPO. Algunas variedades resistentes al TYLCV pueden ser susceptibles a otro virus estrechamente relacionado, el de la hoja en cuchara de Cerdeña (TYLCSV).

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Ad. 58: Resistencia a Tospovirus del bronceado de tomate (TSWV), raza 0 Método

Mantenimiento de las razas

Tipo de medio: en plantas de tomate o congelación a –70 C Condiciones especiales:

Ejecución del ensayo

Estado de desarrollo de las plantas: una o dos hojas desarrolladas

Temperatura: diurna: 20 C, nocturna: 20 C

Luz: luz adicional en invierno

Método de cultivo: en invernadero

Método de inoculación: mecánica, frotando los cotiledones con carborundo, suspensión del inóculo a < 10 C

Duración del ensayo

- desde la siembra a la inoculación: 20 días - desde la inoculación a la evaluación: 14 a 20 días Número de plantas examinadas: 15 a 30 plantas

Observaciones: téngase cuidado con los thrips

Variedades estándar: - susceptibles: Monalbo

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Ad 58: Resistencia al virus del bronceado del tomate (TSWV)

1. Agentes patógenos...Virus del bronceado del tomate 2. Estado de cuarentena ...sí

3. Especies huéspedes ...Solanum lycopersicum

4. Fuente del inóculo ...Naktuinbouw15 (NL) o GEVES (FR)

5. Aislado ...raza 0, preferiblemente una variante no transmisible por tisanópteros (trips)

7. Establecimiento de la capacidad patógena ...bioensayo 8. Multiplicación del inóculo

8.6 Cosecha del inóculo ...las hojas con síntomas pueden conservarse a -70°C 9. Formato del examen

9.1 Número de plantas por genotipo ...20

9.2. Número de réplicas...No aplicable 9.3 Variedades de control

Susceptibles: ...Monalbo, Momor, Montfavet H 63.5 Resistentes: ...Tsunami, Bodar, Mospomor, Lisboa 9.5 Instalación del ensayo ...invernadero o sala climatizada 9.6 Temperatura ...20°C

9.7 Luz ...12 horas como mínimo 9.9 Medidas especiales ...prevenir o combatir los trips 10. Inoculación

10.1 Preparación del inóculo ...presionar las hojas con síntomas en un tampón helado a PBS 0,01 M, pH 7,4, con sulfito de sodio 0,01 M o tampón similar

.Opcionalmente: filtrar la savia de las hojas a través de una capa doble de muselina

10.3 Estado de desarrollo en el momento

de la inoculación ...una o dos hojas desarrolladas

10.4 Método de inoculación...mecánica, frotando los cotiledones con carborundo, suspensión de inóculo <10C

10.7 Observaciones finales ...de 7 a 21 días después de la inoculación 11. Observaciones

11.1 Método...visual

11.2 Escala de observación ...Síntomas: mosaico apical, bronceado, diversas deformaciones, necrosis

11.3 Validación del ensayo...la evaluación de la resistencia de la variedad deberá calibrarse con los resultados de los controles resistentes y susceptibles.

12. Interpretación de los datos en función de los niveles de los caracteres de la UPOV ausentes ...[1] síntomas

presentes ...[9] ausencia de síntomas 13. Puntos de control esenciales:

El TSWV está sujeto a cuarentena en algunos países. El TSWV se transmite mediante Thrips tabaci y el trips occidental de las flores (Frankliniella occidentalis). El patotipo 0 se caracteriza por su incapacidad para superar la resistencia en variedades de tomate portadoras del gen de resistencia Sw-5.

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Ad. 59: Resistencia a Leveillula taurica (Lt) Método

Mantenimiento de las razas

Tipo de medio: plantas de tomate

Condiciones especiales: Ejecución del ensayo

Estado de desarrollo de las plantas: en plantas adultas de cultivos en campo abierto Método de inoculación: infección natural

Duración del ensayo

- desde la siembra a la inoculación: infección posible desde el momento de la plantación hasta el pleno desarrollo de las plantas

- desde la inoculación a la evaluación: antes de la cosecha Número de plantas examinadas: 20 plantas

Observaciones: manchas cloróticas amarillas en el haz de las hojas; micelio en el envés de las hojas

Observar el cleistotecio en el microscopio para determinar si se relaciona realmente con la Leveillula y no con otro oidio

Variedades estándar: - susceptibles: Monalbo - resistentes: Atlanta

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Ad 59: Resistencia a Leveillula taurica (Lt)

1. Agentes patógenos... Leveillula taurica

3. Especies huéspedes ... Solanum lycopersicum

4. Fuente del inóculo ... no se dispone del método de almacenamiento a largo plazo 5. Aislado ...

8.1 Medio de multiplicación ... hojas separadas de una planta huésped susceptible 9. Formato del examen...

9.1 Número de plantas por genotipo ... 20

9.2 Número de réplicas……… no aplicable 9.3 Variedades de control...

Susceptible: ... Monalbo, Montfavet H 63.5 Resistente:... Atlanta

10. Inoculación... 10.3 Estado de desarrollo en el

momento de la inoculación... plantas adultas

10.4 Método de inoculación... infección natural, principalmente por dispersión de las esporas causada por el viento

10.7 Observaciones finales ... antes de la cosecha 11. Observaciones...

11.1 Método... visual

Observación: ... observar el cleistotecio en el microscopio para confirmar la presencia de la Leveillula y no de otro oidio

11.3 Validación del ensayo... la evaluación de la resistencia de las variedades debe calibrarse a partir de los resultados de los controles de resistencia y susceptibilidad

12. Interpretación de los datos en función de los niveles de los caracteres de la UPOV ausente ... [1] síntomas

presente... [9] sin síntomas, o menos que la variedad estándar 13. Puntos de control esenciales:

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Ad. 60: Resistencia a Oidium neolycopersici (On) (ex Oidium lycopersicum (Ol) Método

Mantenimiento de las razas

Tipo de medio: en plantas de tomate

Condiciones especiales: en sala climatizada Ejecución del ensayo

Estado de desarrollo de las plantas: 3 semanas

Temperatura: diurna: 24°C, nocturna: 18°C

Luz: 12 horas

Método de inoculación: - pulverizando 104 conidia/ml sobre las hojas

- espolvoreando (inóculo incontrolado) sobre las hojas Ejecución del ensayo

Duración del ensayo

- desde la siembra a la inoculación: 18 a 20 días - desde la inoculación a la evaluación: 15 a 18 días

Número de plantas examinadas: 30 plantas por parcela Observaciones:

Escala de notas: - no esporulación }

- esporulación con extensión }Resistentes

(puntos necróticos) }

- esporulación moderada }

- esporulación abundante }Susceptibles Variedades estándar: - susceptibles: Momor (L. esculentum).

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