Asociación de gastritis y úlcera gástrica con Helicobacter ssp

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(1)Facultad de Ciencias Agropecuarias Carrera y Departamento de Biología. "Asociación de gastritis y úlcera gástrica con Helicobacter spp”.. Autora: Keylin Regla Sotolongo González. Santa-Clara 2013.

(2) Universidad Central "Marta Abreu" de Las Villas Facultad de Ciencias Agropecuarias Carrera y Departamento de Biología. Título: Asociación de gastritis y úlcera péptica con Helicobacter spp. Title: Association of gastritis and gastric ulcer with Helicobacter spp.. Autora: Keylin Regla Sotolongo González. Tutor: Einar Artiles Ortega. MSc. Dr. MVZ. Profesor Asistente. Agentes Biológicos e Inmunología, Anatomía Patológica y Diagnóstico Patológico. Carrera y Departamento de Medicina Veterinaria y Zootecnia. Facultad de Ciencias Agropecuarias. Universidad Central "Marta Abreu" de Las Villas. CP 54830 Santa Clara. Villa Clara, Cuba. Tel:(53)-(42)- 281692 E-mail: einarao@uclv.edu.cu. Santa-Clara 2013.

(3) Asociación de gastritis y úlcera gástrica con Helicobacter spp. [Association of gastritis and gastric ulcer with Helicobacter spp].. Keylin Regla Sotolongo González, tesiante de Licenciatura de Biología, fue soportado por el Departamento de Medicina Veterinaria del Matadero Porcino “Salamina” de la Empresa Porcina Villa Clara (Cuba), la Carrera y Departamento de Medicina Veterinaria, y la Carrera y Departamento de Biología de la Universidad Central “Marta Abreu” de Las Villas (Cuba).. Para referir esta tesis: Sotolongo – González, K.R., y Artiles – Ortega, E. 2013. Asociación de gastritis y úlcera gástrica con Helicobacter spp. Tesis en opción al título de Licenciatura en Biología, Departamento de Biología, Facultad de Ciencias Agropecuarias, Universidad Central “Marta Abreu” de Las Villas, Santa Clara, Cuba..

(4) ------------------------------------------------------------------------------------------------------Dedicatoria. Dedicatoria: A mi padre Sergio Sotolongo Gómez quien fue el motor impulsor de este sueño de ambos. A mi madre Hortensia González Guzmán que me ha apoyado siempre, pero ¿Qué madre no haría eso? A mi novio Yuriesky Darcourt Castellano quien ha estado ahí siempre. Y a todos aquellos que han puesto su granito de arena para que este sueño se hiciera realidad, incluyendo a Dios que nunca me ha abandonado y me ha ayudado a ser fuerte y estar hoy donde estoy..

(5) ----------------------------------------------------------------------------------------------------Agradecimientos Agradecimientos. Quiero agradecer a los directivos del IMV y el matadero porcino “Salamina” que permitieron la realización de este trabajo, en especial al Dr. MVZ. Yansy. A Miguel Angel que me ayudo con los análisis microbiológicos. También les agradezco mucho a todos aquellos profesores de la Facultad que han sido muy buenos, no solo como profesionales sino como personas y amigos. ¿Hablando de amigos? no puedo dejar de agradecerle a todos los que me han ayudado a seguir adelante con esta carrera tan dura pero muy en especial quiero agradecer a Llilian, Enma (a quienes tuve que recurrir muchas veces para que me repasaran), Mayrebis, Julio, Arturo, que no solo me ayudaron a estudiar para algunas pruebas, sino también eran mis confidentes y mis mejores amigos dentro del aula, no puedo dejar de mencionar a Jorgito porque él ha sido el que más ha tenido que soportarme y además fue el primero que me tendió la mano y quien ha estado a mi lado todos estos años (me refiero a mis compañeros de aula), por los cuales no me arrepiento de haber repetido un año porque con ellos aprendí que esto fue lo mejor que me pudo haber sucedido. Agradezco también a mis familiares, es decir, a mis padres, mi hermano, a mis suegros, mis cuñados y cuñada, a mi querido novio el cual espero que muy pronto sea mi esposo, a mis tías, tíos y primos en general, que han estado muy al pendiente de todo lo que sucede conmigo y mi carrera, al igual que todos mis vecinos tanto de Tuinucú como de aquí de Santa Clara. De igual modo quiero agradecer a la mejor amiga que tuve en primer año, Elena que aunque nos vemos poco siempre me está aconsejando, a Yumi, mi mejor amiga en la actualidad, la que va ha ser madrina de mi boda y que además es la novia de mi tutor. Por último quiero agradecer a una persona súper especial que me ha.

(6) ----------------------------------------------------------------------------------------------------Agradecimientos ayudado con todo lo de la tesis y no solo eso también ha sido mi amigo, me refiero a mi tutor Einar. A todos gracias por formar parte de mi vida..

(7) --------------------------------------------------------------------------------------------------------------Resumen.. Resumen: La presencia de Helicobacter spp., está asociada a los procesos patológicos gastroduodenales en humanos y otros mamíferos. En nuestros ambientes de crianza existen todas las condiciones para la presentación de gastritis y úlceras gástricas en cerdos de matadero y su posible transmisión a las personas que allí laboran. En este sentido nos propusimos como objetivo de este trabajo asociar al Helicobacter spp., con gastritis y úlcera gástrica en estómagos de cerdos de matadero. Para dar cumplimiento al mismo se realizó un estudio transversal con un nivel de confianza del 95% en el matadero porcino “Salamina” perteneciente a la Empresa Porcina Villa Clara (Cuba), en el cual se incluyó el examen de 383 estómagos, de estos se tomaron de manera aleatoria el 11 % de los mismos a partir de muestras de zonas con o sin lesiones macroscópicamente compatibles con úlceras y gastritis mediante hisopaje o escobillado, para luego realizar el correspondiente estudio microbiológico. Se obtuvieron aislados (26) con características morfoculturales, morfotintoriales y bioquímicas compatibles con Helicobacter helmanii like y asociarlos con las lesiones patológicas correspondientes a procesos de gastritis y úlceras pépticas con una sensibilidad del 84 % y una especificidad del 73.7 %, además de una razón de prevalencia de 3.63 con un IC del 95 %, lo que nos permitió inferir que la presencia de Helicobacter helmanii - like está asociado con procesos patológicos de gastritis y úlceras gástricas en estómagos de cerdos de matadero..

(8) --------------------------------------------------------------------------------------------------------------Abstract.. Abstract. The presence of Helicobacter spp., has become a partner of the pathological processes gastroduodenals in human and other mammalians. In our breeding environment all conditions exist for the presentation of gastritis and gastric ulcers in hogs of abattoir and possible transmission to people working there. In this sense we proposed as the objective of this work associate Helicobacter spp., with gastritis and gastric ulcer in stomaches of hogs of slaughterhouse. To give fulfillment to the same we carried out a transversal study with a Confidential Level of 95% in pigs and hogs-linked slaughterhouse “Salamina” belonging to the pigs and hogs-linked undertaking Villa Clara (Cuba), in which included the examination of 383 stomaches, of these we took in a random way of 11% of the same as of show area with or without injuries macroscopic compatible with ulcers and gastritis by means of swabs or quick tapping, to carrying out the corresponding microbiological study. Isolated we found (26) with characteristic morfoculturals, morfotintorials and biochemical compatible with Helicobacter helmanii – like and associate it with the pathological injuries correspondents to processes of gastritis and peptic ulcers with a sensibility of 84% and exclusive of 73.7%, besides a reason of prevalence of 3.63 with an CL of 95%, which permitted us to conclude the presence of Helicobacter helmanii – like is associated with pathological processes of gastritis and gastric ulcers in stomaches of hogs of slaughterhouse..

(9) --------------------------------------------------------------------------------------------------Tabla de Contenidos.. Tabla de Contenidos. Contenidos Introducción. ........................................................................................................................ 1 Capítulo 1. Revisión bibliográfica. ....................................................................................... 3 1.1. Úlceras pépticas y gastritis. ....................................................................................... 3 1.1.1. Características generales de la enfermedad. .................................................................................. 3 1.1.2. Causas de la enfermedad. ............................................................................................................... 3 1.1.3. Situación en el mundo. .................................................................................................................... 4 1.1.4. Situación en Cuba. .......................................................................................................................... 4 1.1.5. Patogenia de la úlcera péptica........................................................................................................ 4 1.1.6. Síntomas: ......................................................................................................................................... 5 1.1.7. Evolución de la úlcera péptica. ....................................................................................................... 6. 1.2. Helicobacter spp. ....................................................................................................... 7 1.2.1. Características generales del género Helicobacter. Especies. ....................................................... 7 1.2.2. Enfermedades que producen en el hombre y el cerdo..................................................................... 8 1.2.3. Situación en el mundo. .................................................................................................................... 9 1.2.4. Situación en Cuba. .......................................................................................................................... 9 1.2.5. Patogenia. ..................................................................................................................................... 10 1.2.6. Lesiones. ........................................................................................................................................ 11 1.2.7. Diagnóstico ................................................................................................................................... 12. Capítulo 2. Materiales y Métodos. ..................................................................................... 17 2.1 Selección de muestras. ....................................................................................................................... 17 2.2. Procesamiento microbiológico. ........................................................................................................ 17 2.4. Evaluación microscópica. ................................................................................................................. 18 2.5. Microfotografías. .............................................................................................................................. 18 2.6. Análisis estadístico. .......................................................................................................................... 18. Capítulo 3. Resultados. ..................................................................................................... 19 4.1. Análisis microbiológico de Helicobacter spp., en muestras de estómagos de cerdos de matadero. 24 4.2. Asociación de Helicobacter spp., con cuadros lesionales de gastritis y úlceras gástricas en estómagos de cerdos de matadero. .......................................................................................................... 28. Conclusiones: .................................................................................................................... 32 Recomendaciones:............................................................................................................ 33 Bibliografía. ....................................................................................................................... 34 Opinión del Tutor. .............................................................................................................. 43.

(10) Tesis de Diploma: "Asociación de gastritis y úlcera gástrica con Helicobacter spp”. Keylin R. Sotolongo González.. Introducción. Está demostrado que la infección por bacterias del género Helicobacter spp., desempeña un papel importante en el desarrollo de diversas enfermedades digestivas tanto en humanos como en animales (Gómez et al., 2006; Cardona et al., 2009). Las úlceras gástricas porcinas (UGP) han sido reportadas en diversos países del mundo (Robertson et al., 2002, Roosendaal et al., 2000), en donde su prevalencia varía entre 5 – 100 % y produce grandes pérdidas económicas a la industria porcina (De J et al., 2008). Esta es una enfermedad de diversa etiología en la cual múltiples factores están involucrados incluyendo el estrés y las condiciones de la dieta (De J et al., 2008a; Ayles et al., 1996), la cual ha sido asociada con el Helicobacter (H.) suis (Choi et al., 2001; Roosendaal et al., 2000), de hecho recientemente ha sido reportado la aparición de úlceras gástricas en cerdos inoculados experimentalmente con H. suis (Haesebrouck et al., 2009). El Helicobacter que coloniza el estómago del cerdo fue denominado Gastrospirillum suis (Barbosa et al., 1995), H. heilmannii (Cantel et al., 1999) y H. suis (Park et al., 2003); sin embargo, estas tres bacterias son consideradas en la actualidad como idénticas (Park et al., 2003). El principal agente causal de las gastritis crónica y úlceras péptica en humanos es el H. pylori (Dubois, 1995; Graham y Go, 1994); por lo que se cree que especies de este género que colonizan eficientemente el estómago de otros mamíferos, pueden causar lesiones gástricas de forma análoga a como sucede en los humanos (Eaton et al., 1995; Fox et al 1997; De J et al 2008). Estudios realizados en la década de los 90 del pasado siglo, describieron casos de gastritis en el hombre causadas por una bacteria Gram negativa fuertemente espirilada morfológicamente idéntica a microorganismos observados en los estómagos de mamíferos domésticos como perros, gatos y cerdos (Fox et al., 1994; Fox et al., 1995; Hill et al., 1997).. Introducción.. 1.

(11) Tesis de Diploma: "Asociación de gastritis y úlcera gástrica con Helicobacter spp”. Keylin R. Sotolongo González. Dore et al. (1999), Fox, (1995), y Thomson et al. (1994) consideran al cerdo como una fuente de infección de H. suis para el hombre mientras que los animales solo ocasionalmente se infectan con H. pylori, aunque ha sido demostrada la producción de úlceras en cerdos gnotobióticos por esta especie (Krakowka et al., 1998). Debido a que en el estómago de cerdos podemos encontrar diversas especies del género Helicobacter y además teniendo como referencia que una de ellas es considerada el principal agente causal de gastritis y úlceras pépticas en el hombre, es que nos hemos trazado en nuestro trabajo como objetivo general: Asociar Helicobacter spp., con gastritis y úlcera gástrica en estómagos de cerdos de matadero. Por lo que requerimos de los siguientes objetivos específicos: 1. Identificar Helicobacter spp. en estómago de cerdos de matadero mediante aislamiento microbiológico. 2. Establecer la asociación existente entre lesiones compatibles con gastritis y úlceras gástricas en estómagos de cerdos de matadero con la presencia de Helicobacter spp.. Introducción.. 2.

(12) Tesis de Diploma: "Asociación de gastritis y úlcera gástrica con Helicobacter spp”. Keylin R. Sotolongo González.. Capítulo 1. Revisión bibliográfica. 1.1. Úlceras pépticas y gastritis. 1.1.1. Características generales de la enfermedad. La gastritis es una inflamación de la mucosa del estómago que puede ser de tipo agudo, de aparición rápida y resolución en pocos días, o de tipo crónico, en cuyo caso puede persistir durante años y producir úlcera péptica (Clínica Indautxu, 2013; Durarte, 1996; Sierra, 2013). Una úlcera es toda lesión de la piel o membrana mucosa con forma crateriforme (forma de un cráter, al perderse parte del tejido) y con escasa o nula tendencia a la cicatrización (Wikipedia, 2013; Durarte, 1996). Una úlcera péptica o ulcus péptico es aquella que afecta la mucosa que recubre el estómago o el duodeno, por lo cual se clasifican en úlceras gástricas y úlceras duodenales. Las úlceras pueden afectar tanto a los humanos como algunos animal, tal es el caso de los gatos, perros y cerdos, entre otros (Wikipedia, 2013). 1.1.2. Causas de la enfermedad. Esta enfermedad es producida en humanos con frecuencia, por una infección causada por la bacteria Helicobacter pylori. Otras causas incluyen el consumo excesivo de alcohol y algunas transgresiones dietéticas (comidas copiosas, abuso de condimentos fuertes e irritantes), las intoxicaciones de origen alimentario, el tabaco, el estrés, el uso prolongado de ciertos medicamentos (antiinflamatorios y antirreumáticos) o tomar demasiadas aspirinas (Clínica Indautxu, 2013; Wikipedia, 2013; Sierra, 2013). En el caso del cerdo, la etiopatogénesis de la úlcera gástrica porcina (UGP) no es clara y se considera que su origen puede ser multifactorial. Según estudios experimentales y de campo, De J et al., (2008b) propusieron varios factores como causas posibles para el desarrollo de la UGP; los cuales fueron clasificados en tres grupos: factores alimenticios, factores de manejo, y otros factores.. Capítulo 1. Revisión Bibliográfica.. 3.

(13) Tesis de Diploma: "Asociación de gastritis y úlcera gástrica con Helicobacter spp”. Keylin R. Sotolongo González. Entre los factores alimenticios, se encuentra el molido fino del grano, que aunque mejora la eficiencia alimenticia, se considera un factor de alto riesgo para el desarrollo de la UGP, así como el tipo de cereal presente en la ración y la deficiencia de vitamina E. En el caso de los factores de manejo, se ha propuesto el estrés psicosomático como una posible causa de la UGP (Ayles et al., 1996), de manera análoga a lo que ocurre en el humano; sin embargo, los estudios en la especie porcina son escasos, contradictorios y no aclaran el papel de algunos factores generadores de estrés, como la restricción alimenticia y las densidades altas de alojamiento, sobre la patogenia de la úlcera. Otros factores propuestos como predisponentes para la UGP, incluye la producción excesiva de ácido, los cambios en la composición del moco y la depleción del sistema de tampón gástrico. 1.1.3. Situación en el mundo. La úlcera péptica es una anomalía muy frecuente que afecta al 10 % de la población en algún momento de su vida. Sin embargo debido a los eficaces medicamentos que existen para tratarla, la mortalidad que produce es escasa, únicamente causa entre 2 y 3 fallecimientos por 100.000 habitantes por año (Wikipedia, 2013). La prevalencia de la UGP en diferentes países varía entre 5 y 100 % y produce grandes pérdidas económicas a la industria porcina, representadas principalmente en disminución de la tasa de crecimiento, baja conversión alimenticia y muerte de animales, en ocasiones, al alcanzar su máximo crecimiento (De J et al., 2008). 1.1.4. Situación en Cuba. En estudios realizados en humanos por Martínez et al., (2008a) se determinó que la úlcera gástrica en nuestro país tiene una prevalencia del 95,8 %, mientras que la de la gastritis crónica se encuentra en 93,6 %. 1.1.5. Patogenia de la úlcera péptica. Los principales factores considerados en la patogenia de la úlcera péptica están mejor estudiados en humanos que en cerdos, donde se pueden agrupar en factores fisiopatológicos y factores genéticos (Durarte, 1996).. Capítulo 1. Revisión Bibliográfica.. 4.

(14) Tesis de Diploma: "Asociación de gastritis y úlcera gástrica con Helicobacter spp”. Keylin R. Sotolongo González. Factores fisiopatológicos: Entre ellos podemos encontrar, por una parte las condiciones que determinan un aumento absoluto o relativo de ácido clorhídrico y pepsina, como son; el aumento de la masa de células parietales y principales de la mucosa fúndica; mayor respuesta de las células G del antro productoras de gastrina, por aumento de su número o de su función; vaciamiento gástrico acelerado, con la consiguiente disminución del pH duodenal. Por otra parte tenemos las condiciones que deterioran la barrera mucosal y favorecen la retrodifusión de protones. En este sentido es importante la inflamación crónica de la mucosa: en el estómago, gastritis crónica atrófica multifocal. En el duodeno, daño de la mucosa por acción del ácido clorhídrico, reacción con metaplasia gástrica de la mucosa duodenal, colonización por H. pylori, duodenitis que hace más susceptible la mucosa a la destrucción por jugo gástrico. Otros factores considerados son: episodios de isquemia focal, por apertura de anastomosis arteriovenosas de la submucosa; menor síntesis de prostaglandinas (las cuales son inhibidas por el uso de antiinflamatorios, que favorecen la aparición de úlcera péptica) (Durarte, 1996). Factores genéticos: Estos son caracteres condicionados genéticamente que se asocian con una mayor frecuencia de úlcera duodenal, pero no de úlcera gástrica, entre los que se encuentran: tendencia familiar a la úlcera duodenal, tendencia familiar al vaciamiento gástrico acelerado, a la respuesta anormal de las células G y a la hiperpepsinogenemia, ausencia de secreción de antígenos de grupos sanguíneos en la saliva y en el jugo gástrico (Durarte, 1996). 1.1.6. Síntomas: Los síntomas característicos de las gastritis son: dolor en epigastrio, acidez, náuseas, en ocasiones vómitos, flatulencia, anorexia, malestar general y en algunos casos fiebre. Estos suelen hacer su aparición entre una y tres horas después de las comidas o por la noche durante las horas de sueño. Suele suceder tras la ingesta de alimentos, y seguir una evolución cíclica con exacerbaciones de semanas o meses de duración que se intercalan con períodos en los que no se manifiesta (Egan y O´Morain, 2007; Dehesa y Robles, 1997; Alba et al., 2006).. Capítulo 1. Revisión Bibliográfica.. 5.

(15) Tesis de Diploma: "Asociación de gastritis y úlcera gástrica con Helicobacter spp”. Keylin R. Sotolongo González. El síntoma más frecuente de las úlceras es la sensación de malestar en la zona central y superior del abdomen, en forma de “hambre dolorosa” o acidez de estómago, que calma con la toma de los alimentos y que vuelve a aparecer unas horas después. Otros síntomas menos recurrentes son las náuseas y los vómitos. Se puede complicar con hemorragia digestiva, perforación y estenosis (cicatriz que se produce en úlceras antiguas y que puede provocar una estrechez del intestino que dificulta el paso del alimento) (De Armas, 2011). Es habitual que las personas desarrollan patrones de dolor muy fijos y a menudo, por experiencia, saben cuándo es probable la reaparición de la úlcera (con frecuencia en la primavera y el otoño, y durante períodos de estrés) (Merck, 2005). 1.1.7. Evolución de la úlcera péptica. La evolución más común de la úlcera péptica, en particular si media tratamiento, es hacia la curación por reparación y regeneración. La úlcera cicatrizada y reepitelizada se aprecia como una depresión, que en general ha disminuido a algunos milímetros de diámetro por la retracción del callo, cubierta por mucosa. Pero también en esta enfermedad, estando la úlcera ya cicatrizada, existe el riesgo de que se reactive en el mismo foco o que se produzca otra úlcera en la mucosa de otra zona (Durarte, 1996). La mayoría de las úlceras pueden cursar sin problemas graves. Sin embargo, en algunos casos las úlceras pépticas pueden desarrollar complicaciones potencialmente mortales como la penetración o perforación, la hemorragia, la obstrucción y hasta pueden llegar a desarrollar carcinoma, agravándose los síntomas del paciente (Merck, 2005). La hemorragia es una complicación frecuente de la úlcera, incluso aunque no sean muy dolorosas. Los síntomas de este tipo de complicación pueden ser vómitos de sangre roja brillante o de grumos oscuros de sangre parcialmente digerida, así como la evacuación de heces negras o claramente sanguinolentas. Por otra parte la penetración o perforación se da en alguno casos, debido a que el proceso necrotizante puede atravesar la pared muscular del estómago o del duodeno y penetrar en un órgano sólido adyacente, como el hígado o el páncreas. Mientras que la obstrucción, está dada por la extensión del callo que puede determinar retracción y distorsión de la pared a nivel del píloro y, menos. Capítulo 1. Revisión Bibliográfica.. 6.

(16) Tesis de Diploma: "Asociación de gastritis y úlcera gástrica con Helicobacter spp”. Keylin R. Sotolongo González. frecuentemente, del cardias o de la porción media del estómago, provocando vómitos muy repetidos en el paciente. También se ha observado en muy pocos casos una frecuencia de desarrollo de carcinoma en el borde de las úlceras gástricas (Merck, 2005; Durarte, 1996).. 1.2. Helicobacter spp. 1.2.1. Características generales del género Helicobacter. Especies. El género Helicobacter pertenece a la subdivisión de Proteobacterias, orden Campylobacterales, familia Helicobacteraceae, la cual también incluye los géneros Wolinella, Flexispira, Sulfurimonas, Thiomicrospira y Thiovulum, y hasta la fecha, el género consta de más de 20 especies reconocidas, y muchas en espera de un reconocimiento formal (Fox, 2002; De Armas, 2011). Morfológicamente los miembros de este género pueden variar desde ligeramente curvados hasta formas helicoidales, similares a espirilos, de 0,3 a 1,0 µm de diámetro por 1,5 a 5,0 µm de largo. Son Gram negativos, microaerofílicos, móviles gracias a la presencia de flagelos envainados, que pueden variar según la especie, desde uno polar hasta un mechón mono o bipolar. Crecen preferiblemente a 37°C, aunque algunas especies pueden crecer a 42° C. Son de crecimiento lento y aún a su temperatura óptima, a los cuatro o seis días forman colonias pequeñas de menos de 1 mm de diámetro (Goodwin et al., 1989; Hernández, 1990) las cuales son transparentes, similares a las de Campylobacter (Ramos y Chocarro, 2012). Los Helicobacter spp., gástricos se pueden clasificar en dos grandes grupos basado en diferencias morfológicas, rango de hospederos y patrón de colonización dentro del estómago. Estos dos grupos son: “Helicobacter pylori-like” y “Helicobacter heilmannii-like” (Eaton et al., 1996; Valdés y Astudillo, 2007). El primer grupo de los organismos “Helicobacter pylori-like” incluye a las especies: H. pylori, H. acinonyx, H. nemestrinae y H. mustelae. Estos organismos se caracterizan morfológicamente por ser de pequeño tamaño (aproximadamente 5 µm de longitud), tener uno o dos espirales y comúnmente un flagelo unipolar. Colonizan el mucus gástrico y la. Capítulo 1. Revisión Bibliográfica.. 7.

(17) Tesis de Diploma: "Asociación de gastritis y úlcera gástrica con Helicobacter spp”. Keylin R. Sotolongo González. superficie epitelial, pero no penetran profundamente dentro de las glándulas gástricas (Fox y Lee, 1997; Valdés y Astudillo, 2007). El segundo grupo de Helicobacter spp., gástricos corresponde a los organismos “Helicobacter heilmannii-like”, representados por H. felis, H. heilmannii, H. suis y H. bizzozeronii. Este grupo de bacterias son de mayor longitud que H. pylori (aproximadamente 10 µm) con más hélices, más firmemente enrolladas y a veces con fibrillas periplásmicas que envuelven al organismo en una membrana externa. Estas bacterias “Helicobacter heilmannii-like”, a diferencia de los organismos “Helicobacter pylori-like”, son capaces de colonizar profundamente las glándulas gástricas y a veces se les ubica dentro de las células parietales, así como también en el mucus gástrico (Eaton, 1999; Valdés y Astudillo, 2007). Bioquímicamente son poco reactivos, siendo ureasa, oxidasa y catalasa positivas. No metabolizan glucosa, ni producen indol, H2S, ni hidrolizan hipurato o esculina, y no crecen en presencia de 1% de glicina, 1,5% de NaCI y 0,1% de bilis. Su patrón de sensibilidad al ácido nalidíxico y cefalotina, así como su crecimiento a 37 y 42°C y la reducción de nitratos, varía en las diferentes especies (Hernández, 1990). 1.2.2. Enfermedades que producen en el hombre y el cerdo. Desde el aislamiento inicial de la bacteria H. pylori en 1983 (Bermúdez et al., 2009), se ha propuesto a este microorganismo como el principal agente causal de gastritis crónica y úlcera péptica en el humano (Dubois, 1995; Graham y Go, 1994); por lo que se cree que especies de Helicobacter que colonizan eficientemente el estómago de mamíferos, pueden causar lesiones gástricas en los animales de forma análoga o como lo hacen en el humano (Eaton et al., 1995; Fox et al 1997; De J et al 2008). También está el caso de H. heilmannii, otra especie vista con frecuencia en gatos, perros (igual que H. bizzozeronii, H. salomonis y H. felis), primates, cerdos, y solamente eventualmente en personas (De Camargo, 2008; Alba et al., 2006). La epidemiología y la historia natural de la infección por H. pylori es aún un poco desconocida. Posiblemente existe una transmisión interpersonal mediante secreciones. Capítulo 1. Revisión Bibliográfica.. 8.

(18) Tesis de Diploma: "Asociación de gastritis y úlcera gástrica con Helicobacter spp”. Keylin R. Sotolongo González. digestivas. Hecho que ha sido avalado por diferentes trabajos, en los que se demuestra un incremento de la prevalencia de anticuerpos entre pacientes ingresados, familiares de infectados y personal sanitario que trabaja en unidades de endoscopia. También se ha demostrado un incremento de la prevalencia de la infección entre trabajadores de mataderos que manipulan vísceras de animales, lo que hace suponer que la infección por H. pylori podría tratarse de una zoonosis (Ramos y Chocarro, 2012). 1.2.3. Situación en el mundo. La infección por H. pylori afecta a más del 50% de la población mundial y aunque promueve la aparición de diferentes enfermedades gastroduodenales, la mayoría de las personas infectadas no presentan síntomas ni desarrollan esas afecciones y la incidencia de dichas enfermedades varía considerablemente entre las diferentes regiones geográficas (González y Rodríguez, 2011; Alba et al., 2006). Las variaciones geográficas de la prevalencia tienen que ver con sus factores de virulencia, pero al igual que ocurre con otras enfermedades con alta penetrancia es difícil establecer las cifras exactas (Yamaoka et al., 2008). Otros autores estiman prevalencias del 70 al 90% en países en desarrollo y del 40 al 60% en países desarrollados, indicadores que colocan a esta infección bacteriana crónica como la más común del ser humano y con una distribución heterogénea a nivel mundial (Ramírez y Gilman, 2004; De Armas, 2011). 1.2.4. Situación en Cuba. En Cuba se han detectado altas cifras de prevalencia en varios estudios. En una investigación de pacientes a partir de 15 años y con síntomas dispépticos, se encontró en muestras de mucosa gástrica para estudio histológico entre 1998 y 2003 (Martínez et al., 2008a), que de los que tenían cáncer gástrico, el 52,7% fueron H. pylori positivos y de los que tenían úlcera duodenal y úlcera gástrica el 100%, seguido de cáncer gástrico con 92% y dispepsia de 83%. En otro estudio, se encontró una prevalencia de infección de 39,5% lo que la ubica entre las que muestran los países desarrollados (Everhart, et al., 2000).. Capítulo 1. Revisión Bibliográfica.. 9.

(19) Tesis de Diploma: "Asociación de gastritis y úlcera gástrica con Helicobacter spp”. Keylin R. Sotolongo González. En otra investigación analizaron 121 pacientes que acudieron al servicio de endoscopia entre 1999 y 2000 encontrando una prevalencia de infección del 79,2% en la gastritis crónica, un 100% en los pacientes con úlcera duodenal y un 90,4% en relación con úlcera gástrica. En el 100% de los casos de adenocarcinoma gástrico y en el 60% de los casos de neoplasias de esófago se aisló el microorganismo (González et al., 2004; Martínez et al., 2008b; De Armas, 2011). 1.2.5. Patogenia. La patogénesis promovida por H. pylori está determinada por la compleja interacción de factores del hospedero, ambientales y bacterianos (Atherton, 2006). Los factores de virulencia de la bacteria pueden causar daño a las células epiteliales directamente o estimular la producción de citocinas proinflamatorias, así se produce un proceso de inflamación que también ocasiona lesiones al tejido gástrico. Este hecho depende a su vez de la predisposición genética del hospedero para dar esta respuesta inmune, así como de las condiciones ambientales en las que se desarrolla el paciente infectado (González y Rodríguez, 2011). Factores del hospedero: Un proceso patogénico clave en la infección por H. pylori es la inducción de una respuesta inflamatoria mucosal persistente, dada por la activación e infiltración de células mononucleares y neutrófilos, así como sus productos, en la mucosa gástrica infectada. Además, la estimulación de la transcripción y la síntesis de varias citocinas proinflamatorias (ej: IL-1ß, IL-2, IL-6, IL-8 y el factor de necrosis tumoral alfa (TNF-α) (De Armas, 2011) y antiinflamatorias (ej: IL-4 e IL-10), hecho relevante en la patogénesis de la enfermedad. Se plantea además que la intensidad de la misma se incrementa con el desbalance entre estos mediadores de la inflamación y, por tanto, el daño severo en el tejido gástrico (Sugimoto et al., 2010; Alba et al., 2006). De esta forma, se reconoce la existencia de una predisposición genética ante el desarrollo de atrofia gástrica y cáncer, dado fundamentalmente por la presencia de polimorfismos en los genes que codifican para algunas de estas citocinas (Kim et al., 2008). Factores ambientales: Las condiciones ambientales que rodean los individuos infectados con H. pylori también se consideran de gran importancia en el desarrollo de la infección y. Capítulo 1. Revisión Bibliográfica.. 10.

(20) Tesis de Diploma: "Asociación de gastritis y úlcera gástrica con Helicobacter spp”. Keylin R. Sotolongo González. la aparición de las diversas enfermedades. Varios factores de esta índole como: la dieta y la coinfección parasitaria han sido asociados con un incremento en el riesgo de desarrollar afecciones severas en los pacientes infectados (Cherian et al., 2010; González y Rodríguez, 2011). Factores bacterianos: El potencial patogénico de las cepas circulantes de H. pylori ha sido considerado desde el inicio de los estudios como un factor decisivo en la evolución de la infección. Esta bacteria, posee gran diversidad genética entre aislados clínicos, la presencia de determinados genotipos es considerada como una ventaja selectiva así como una herramienta importante para predecir las diferentes afecciones gástricas. Los principales genes de virulencia de H. pylori son generalmente clasificados en tres categorías: en la primera se encuentran los genes cepa-específicos, como los del islote de patogenicidad cag (cagPAI) y los localizados en las regiones de plasticidad (ej: jhp0947 y dupA); en la segunda, los genes de fase variable (ej: babA, oipA, sabA y hopZ) y en la tercera, los genes de estructura variable (ej: vacA y la región hipervariable del gen cagA) (Yamaoka, 2008; González y Rodríguez, 2011; De Armas, 2011). Los principales estudios de los factores de patogenia de H. pylori han centrado su atención fundamentalmente en aquellos que aparecen y se expresan diferencialmente en las cepas más patogénicas. Entre estos, los más estudiados han sido: las proteínas CagA y VacA; así como recientemente los genes de las zonas de plasticidad (González y Rodríguez, 2011; Martínez et al., 2008b) 1.2.6. Lesiones. La infección por H. pylori desempeña un papel relevante en un importante grupo de enfermedades gastroduodenales, las cuales se presentan con alta frecuencia (Silverstein et al., 1996). Las causas etiológicas más importantes que producen molestias gastroduodenales son: enfermedad de reflujo gastroesofágico (gastritis); enfermedad ácido péptico (úlcera péptica); cáncer gástrico y dispepsia no ulcerosa (Kroenke et al., 1990; De Armas, 2011).. Capítulo 1. Revisión Bibliográfica.. 11.

(21) Tesis de Diploma: "Asociación de gastritis y úlcera gástrica con Helicobacter spp”. Keylin R. Sotolongo González. La gastritis crónica por H. pylori es un proceso dinámico que evoluciona hacia la atrofia, afectando tanto al antro, como a la mucosa transicional y se extiende en dirección al cuerpo. También se puede asociar a metaplasia intestinal como respuesta a la agresión crónica. Con respecto a la úlcera gástrica también existe una clara relación con esta bacteria, aunque sólo se asocia un 70% con la presencia de este microorganismo, debido a que el resto de estas úlceras están producidas por consumo de antiinflamatorios no esteroidales (Alarcón et al., 2004). 1.2.7. Diagnóstico Las pruebas de diagnóstico con que se cuentan en la actualidad, son basadas en un eje diagnóstico, que es la endoscopia, a partir de la cual, los métodos que derivan de su aplicación se califican como invasivos y no invasivos a los que no dependen de ella (Torres, 2007). En el caso de las pruebas no invasivas, también llamadas indirectas o no endoscópicas, sólo requieren de una muestra de sangre, de aire espirado, saliva, heces u orina, con la ventaja de que son pruebas más accesibles, que se aplican en situaciones en que no sea fácil una endoscopía en adultos y sobre todo en niños, teniendo su máxima utilización en pacientes tratados si se desea demostrar una erradicación efectiva; en pediatría para estudiar niños con síndrome de dolor abdominal crónico y en estudios de muestreo en poblaciones muy específicas (Alarcón et al., 2004), ejemplo de ellas tenemos: Serología: Las pruebas serológicas se basan en la identificación de anticuerpos específicos enfrentados a antígenos del H. pylori, de las cuales el métodos que más se utiliza es el de Análisis Inmunoenzimático (EIA-ELISA) (De Armas, 2011). Prueba del aliento: La prueba de aliento o de aire espirado, es otro método cuya utilización y efectividad se la da la presencia del mismo H pylori, por la característica que tiene de producir ureasa y de actuar sobre un aporte de urea marcada con un radioisótopo (Alba et al., 2006).. Capítulo 1. Revisión Bibliográfica.. 12.

(22) Tesis de Diploma: "Asociación de gastritis y úlcera gástrica con Helicobacter spp”. Keylin R. Sotolongo González. Antígeno en heces fecales: Otra prueba es la del antígeno (Ag) de H. pylori en heces fecales, este método demuestra de manera directa la presencia de infección, pero no indica necesariamente, que el cuadro clínico sea por dicha infección (De Armas, 2011). Otras: Se pueden mencionar también las pruebas de detección de anticuerpos en saliva y orina; así como la Reacción en Cadena de la Polimerasa (polymerasa chain reaction PCR), técnica utilizada en el caso del H pylori, debido a su difícil cultivo (Fallone et al., 1996; Premoli et al., 2004). Por otra parte, las pruebas invasivas como lo son la endoscopía, prueba rápida de ureasa, biopsias de mucosa gástrica para estudios histológicos convencionales o muy complejos (inmunohistoquímica, técnicas moleculares) y cultivo de biopsias, se toman de preferencia del antro gástrico y citología por cepillado (Torres, 2007). Estas pruebas serán estudiadas más profundamente, debido a su importancia en este trabajo. Endoscopía: Desde la aparición de los endoscopios de fibra óptica y de gran flexibilidad, el diagnóstico de las gastritis, se basó en las observaciones macroscópicas, en los acuerdos para establecer clasificaciones y dar uniformidad a los reportes, con las ventajas de tomar biopsias para identificar a la bacteria, efectuar interpretaciones histopatológicas, seguidas también de clasificaciones y de tratar de establecer correlaciones clínicas. Gracias a dichos recursos y en pocos años, se conocieron las gastritis secundarias a la infección por H pylori. Los reportes de las interpretaciones dadas por los endoscopistas, en relación a los aspectos de las mucosas gástricas en pacientes infectados por H pylori, y basadas en la comprobación en por lo menos dos pruebas positivas, casi todos describen a las gastropatías por la bacteria como: nodular, folicular, eritematosa, erosiva, petequial, atrófica, localizada, multifocal, pangastritis, duodenitis erosiva, duodenitis con metaplasia e incluso mucosa normal hasta en el 10 % o más de las series (Díaz, 2002; Torres, 2007). Prueba rápida de ureasa: Este método se fundamenta en la detección de la enzima ureasa producida por H. pylori en grandes cantidades y de gran potencia en una pequeña muestra de mucosa gástrica. La bacteria a través de la producción de amonio a partir de. Capítulo 1. Revisión Bibliográfica.. 13.

(23) Tesis de Diploma: "Asociación de gastritis y úlcera gástrica con Helicobacter spp”. Keylin R. Sotolongo González. la descomposición de la urea presente en el estómago, neutraliza el ácido clorhídrico (HCl) y genera un pH básico. Esto se evidencia mediante el cambio de color del medio de naranja-amarillo a rosa fuerte debido a la acción del indicador de pH rojo de fenol. Este cambio de color puede ser inmediato (en 5 minutos), lo que indica mayor número de bacterias o tardío en cualquier momento de las 24 horas después de la realización de esta prueba (De Armas, 2011). En general los resultados falsos positivos con la prueba rápida de ureasa son poco frecuentes, se menciona como causas de falsos positivos la posible presencia de contaminación de las biopsias por otras bacterias productoras de ureasa especialmente estreptococos y estafilococos, sobre todo cuando el sustrato de urea se administraba por vía oral; e incluso algunas falsos positivos se atribuyen a otras bacterias de género Helicobacter como el H heilmanni que se ha considerado como agente causal de gastritis, situación muy rara (González et al., 2004; De Camargo, 2008). La sensibilidad de la técnica dependen de la densidad de las bacterias, considerando un mínimo de 10, 000 bacterias en la muestra para que el resultado sea positivo; también pueden presentarse falsos negativos, si el número de bacterias en la muestra es muy escaso, por colonización disminuida a consecuencia de tratamientos previos con inhibidores de la bomba de protones, sales de bismuto, antibióticos e incluso sucralfato; por supuesto que la sensibilidad aumenta si se toman más de una biopsia. La sensibilidad de la prueba también disminuye en forma significativa en la presencia de hemorragia digestiva y sin antecedentes de tratamiento previo de erradicación, lo que se atribuye al efecto tampón de la albúmina sobre el indicador de pH, más que por un efecto directo sobre la inhibición de la actividad de ureasa (Aguilar et al., 2004; Alba et al., 2006). Cultivo: Es el método con máxima especificidad de 100% para el diagnóstico de infección por H. pylori (Alarcón et al., 2004), lo que le confiere superioridad comparada con las otras pruebas disponibles, llegándose a considerarla como el estándar de oro, pero la sensibilidad se reporta con variaciones importantes que varían de 60 % a 90 %, lo que se debe a que su realización no es fácil; en la sensibilidad influyen la densidad bacteriana, las condiciones del transporte de las muestras, del tiempo que transcurre desde la toma y. Capítulo 1. Revisión Bibliográfica.. 14.

(24) Tesis de Diploma: "Asociación de gastritis y úlcera gástrica con Helicobacter spp”. Keylin R. Sotolongo González. el procesado, así como las condiciones de incubación y los tratamientos a los que fue sometido el paciente antes de la toma de muestra (De Armas, 2011). Como en todas las infecciones el cultivo de H. pylori, es el método válido para el diagnóstico, para poder tipificar, y por ahora es el único que permite analizar la sensibilidad a los antibióticos, permite estudiar factores de virulencia y obtener nuevos antígenos para técnicas de diagnóstico serológicos (Torres, 2007). Para efectuar el aislamiento de H. pylori se han utilizado varios medios de cultivo, entre los que se encuentran diferentes formulaciones que contienen agar, como chocolate (Ramos y Chocarro, 2012), caldo cerebro-corazón, Columbia, Mueller-Hinton (Alarcón et al., 2004), Brucella y Wilkins-Chalgren (Bermúdez et al., 2009). Todos estos medios son suplementados con 5-10 % de sangre de caballo, carnero o humana y otros aditivos, como la hemina, isovitalex, ciclodextrina y almidón; además de una combinación de al menos 4 antibióticos selectivos (Lee et al., 1997). Requiere además de los medios de cultivos especiales, condiciones de incubación microaerófila e incubación de 5 a 7 días, siendo indispensable la identificación de enzimas ureasa, oxidasa y catalasa, y no es apropiado para el estudio de muestras en los que haya otros agentes patógenos en cantidad considerable como sucede con la materia fecal o la saliva (De Armas, 2011). Histología: Este método permite el diagnóstico de la infección, es decir la identificación de la bacteria, pero además proporciona valiosa información sobre las alteraciones de la mucosa gástrica, evaluar la densidad bacteriana en el epitelio gástrico en forma semicuantitativa, la magnitud y características de la gastritis, la actividad inflamatoria aguda y crónica, la atrofia de la mucosa, la metaplasia intestinal y la presencia de folículos linfoides (Forne, 2001; Chirino et al., 1999). Las biopsias deben ser conservadas en formaldehído al 10% amortiguado antes de su procesamiento. Se utilizan varios tipos de tinciones lo que se constituye en una técnica fácil, rápida, de muy bajo costo y alta utilidad para visualizar mejor al organismo y determinar el nivel de daño hístico (Vartanian, 1998). En la actualidad se emplean las tinciones con hematoxilina-eosina (Fawcett, 2004) la de Warthin-Starry con nitrato de. Capítulo 1. Revisión Bibliográfica.. 15.

(25) Tesis de Diploma: "Asociación de gastritis y úlcera gástrica con Helicobacter spp”. Keylin R. Sotolongo González. plata (Raica et al., 1996) y la tinción con azul de metileno (Misra, 2007) aunque esta última ha sido sustituida por la tinción con Giemsa, probablemente una de las más populares, por ser fácil de realizar y económica y con buenos resultados en el diagnóstico (Trakarnvanich, 2007; De Armas, 2011). Las principales desventajas del diagnóstico histológico en el caso de H.pylori son que el resultado está muy influenciado por la experiencia del patólogo y el tipo de tinción que se emplee. La sensibilidad es variable del 85% al 90%, mientras que la especificidad es casi del 100% (De Armas, 2011). Los resultados falsos negativos por histología son raros y habitualmente obedecen a errores de muestreo, ya que la colonización bacteriana es por parches o focal, y las biopsias pueden tomarse en áreas de metaplasia intestinal y de atrofia gástrica; también por la presencia escasa de bacterias debida a medicación previa antes de la endoscopia (Torres, 2007). Citología por cepillado: Mediante el cepillado de la mucosa gástrica durante las endoscopias, y posterior observación con técnica de Papanicolau, es un método que sin duda ha permitido identificar a la bacteria, pero el mismo cepillado sobre la mucosa gástrica provoca la ruptura de la capa mucosa y lesiona directamente el epitelio, por lo que es un método que se aplica cada vez menos (Trujillo et al., 1997).. Capítulo 1. Revisión Bibliográfica.. 16.

(26) Tesis de Diploma: "Asociación de gastritis y úlcera gástrica con Helicobacter spp”. Keylin R. Sotolongo González.. Capítulo 2. Materiales y Métodos. 2.1 Selección de muestras. La investigación se realizó en el matadero porcino “Salamina” perteneciente a la Empresa Porcina Villa Clara (Cuba). Esta consistió en un estudio transversal con un nivel de confianza del 95%, en el cual se incluyó el examen de 383 estómagos, de estos se tomaron de manera aleatoria, el 11 % de los mismos para los estudios microbiológicos: 18 estómagos sin presencia de lesiones macroscópicamente compatibles con gastritis y úlceras gástricas, y 26 con lesiones compatibles con estas, de los cuales 10 presentaron ulceraciones y 16 no las presentaron; las muestras se obtuvieron post mortem de cerdos en matadero y se seleccionaron de la siguiente manera: Los estómagos se abrieron longitudinalmente por la curvatura mayor, se lavaron con agua corriente y se efectuó su inspección macroscópica con el fin de seleccionar aquellos aptos para realizar su posterior evaluación microbiológica. De todos los estómagos se tomaron muestras de zonas con o sin lesiones macroscópicamente compatibles con úlceras y gastritis mediante hisopaje (hisopos con medio de Transporte STUART [Copan Venturi Transystem. Italy.]). 2.2. Procesamiento microbiológico. Siguiendo un flujograma de trabajo elaborado para el estudio, los hisopos inoculados se transportaron en medio Stuart hasta los Laboratorios de Microbiología de la Facultad de Ciencias Agropecuarias de la Universidad Central de Las Villas. Las muestras se trabajaron según lo estipulado por Lee et al. (1997), inoculándose en Agar Cerebro – Corazón y Agar Chocolate (BIOCEN) con 7 % de sangre de carnero, incubándose a 37º C por 5 – 10 días en microaerofilia, posteriormente a las colonias compatibles con Helicobacter spp., se les realizó la tinción de Gram. A las colonias que poseían características morfoculturales y morfotintoriales de pertenecer al género Helicobacter, se las sometió al estudio bioquímico correspondiente (catalasa y ureasa) para su clasificación (Alarcón, 1994).. Capítulo 2. Materiales y Métodos.. 17.

(27) Tesis de Diploma: "Asociación de gastritis y úlcera gástrica con Helicobacter spp”. Keylin R. Sotolongo González. 2.4. Evaluación microscópica. La lectura histológica de las láminas teñidas se efectuó mediante microscopía de luz en un microscopio óptico (Modelo N – 800M) en el Laboratorio de Inmunología de la Facultad de Ciencias Agropecuarias (FCA) de la Universidad Central “Marta Abreu” de Las Villas (UCLV). La detección de los microorganismos Gram (-) con forma de espiral se realizó mediante el examen con objetivo de inmersión bajo un aumento de 1000X. 2.5. Microfotografías. Las microfotografías de los campos más representativos se tomaron con una cámara digital CANON EOS 500D y video cámara digital HDCE – 50B. 2.6. Análisis estadístico. Los resultados se evaluaron mediante la prueba de Comparación de Proporciones (Análisis de Medias - Proporciones Binomiales [Chi – Cuadrado: X2]) del paquete estadístico STATGRAPHICS® Plus para Windows versión 5.1. con un nivel de confiabilidad del 95 % donde los valores de p<0.05 se consideran significantes. Para los análisis de asociación y de desempeño de las pruebas diagnósticas se empleó el programa estadístico EPIDAT 3.1 (Xunta de Galicia – OPS, 2005) y WIN EPISCOPE 2.0 (Thrusfield et al., 2001).. Capítulo 2. Materiales y Métodos.. 18.

(28) Tesis de Diploma: "Asociación de gastritis y úlcera gástrica con Helicobacter spp”. Keylin R. Sotolongo González.. Capítulo 3. Resultados. Se analizaron externamente 383 estómagos provenientes de animales sacrificados, 218 de estos presentaron lesiones compatibles con gastritis y úlceras gástricas, 72 con gastritis muco – serosa con presencia de úlceras agudas, 146 con gastritis muco –serosa sin ulceraciones y 163 sin lesiones aparentes. En las tablas 1 y 2 se pueden observar la distribución y proporción de cada lesión en las diferentes regiones de los estómagos estudiados, apreciándose como las lesiones anatomopatológicas. principales. (gastritis. y. úlceras. gástricas). se. presentaron. significativamente con mayor frecuencia en la región fúndica al compararse con aquellas pilórica y cardial (p<0.05). Tabla 1. Distribución de las lesiones anatomopatológicas en las diferentes regiones de estómagos de cerdos de matadero. Regiones Hallazgos macroscópicos Gastritis con úlceras pépticas Gastritis Sin lesiones aparentes Total. Cardias No. % 1 20.0 2 40.0 2 40.0 5. 100. Fundus No. % 7 24.1 11 37.9 11 37.9. Píloro No. % 2 20.0 3 30.0 5 50.0. 29. 10. 100.0. 100.0. En los estómagos cuyo contenido fue fundamentalmente pienso industrial se observaron las características anteriormente expuestas, las lesiones observadas en ellos son compatibles con gastritis y procesos ulcerativos, siendo en menor medida, principalmente por la falta de ulceraciones en estómagos con alimentos industriales (pienso), miel y residuos de cocina, y en los casos de cerdos alimentados con solo residuos de cocina, de cosechas y miel (presencia de restos en estómago) no se observaron lesiones de ningún tipo.. Capítulo 3. Resultados.. 19.

(29) Tesis de Diploma: "Asociación de gastritis y úlcera gástrica con Helicobacter spp”. Keylin R. Sotolongo González. Tabla 2. Proporción (%) de cada lesión anatomopatológica en las regiones del estómago de cerdos de matadero. Regiones Hallazgos macroscópicos Gastritis con úlceras pépticas Gastritis Sin lesiones aparentes Leyenda:. A. Cardias Fundus Píloro No. % No. % No. % a b 1 10.0 7 70.0 2 20.0a 2 12.5a 11 68.8b 3 18.8a 5 27.8a 2 11.1a 11 61.1b. Total 10 16 18. Prueba de Comparación de Proporciones (Análisis de Medias - Proporciones Binomiales [Chi –. Cuadrado: X2]) del paquete estadístico STATGRAPHICS® Plus para Windows versión 5.1. Letras diferentes (a, b y c) en una misma fila denotan diferencias significativas entre regiones con una misma lesión con p < 0.01.. En la Tabla 3 se muestra la presencia de aislados que correspondían por sus características morfotintoriales y morfoculturales con el género Helicobacter, y con actividad bioquímica compatibles con dicho género bacteriano. Tabla 3. Presencia de bacterias compatibles bioquímicamente con Helicobacter spp a partir de muestras de estómagos de cerdos de matadero. Muestra Resultados G GU S. + + + -. AICC + Sangre 12 4 9 1 5 13. Microbiología A. Tinción Chocolate 12 12 4 4 9 9 1 1 4 4 14 14. Bioquímica Urea Catalasa 12 12 4 4 9 9 1 1 4 4 14 14. Leyenda: G: Gastritis; U: Úlceras; S: Sanos; GU: Gastritis + Úlceras, AICC: Agar infusión cerebro – corazón, A.: Agar.. Al observar los medios de cultivo (Agar Chocolate y Agar Infusión Cerebro – Corazón con 7 % de sangre de carnero) luego de 7 días de incubación en microaerofilia se detectó la presencia de aislados compatibles con Helicobacter spp., observándose colonias pequeñas, redondas y transparentes similares a las del Campilobacter spp., y cuyas características morfotintoriales (Tinción de Gram) fueron de un bacilo largo espirilado. Capítulo 3. Resultados.. 20.

(30) Tesis de Diploma: "Asociación de gastritis y úlcera gástrica con Helicobacter spp”. Keylin R. Sotolongo González. Gram (-) con apariencia de tirabuzón compatible con H. heilmannii – like (Figuras 1 y 2) en el 75 % (12) de las muestras de estómagos afectados con gastritis, en el 90 % (9) de los casos de estómagos afectados con gastritis y necrosis ulcerativa y en el 27.8 % y 22.2 % (5 y 4 en AICC y A. Chocolate respectivamente) de los estómagos sin lesiones aparentes.. Figura 1. Aislados compatibles con Helicobacter spp., en Agar Chocolate y Agar Infusión Cerebro – Corazón con 7 % de sangre de carnero.. Figura 2. Bacteria Gram (-) intensamente espirilada como Helicobacter heilmannii like. Tinción de Gram. Al realizarles las pruebas bioquímicas de ureasa y catalasa se demostró que en el 100 % de los aislados compatibles con H. heilmanni – like el resultado fue positivo a las mismas (Figura 3).. Capítulo 3. Resultados.. 21.

(31) Tesis de Diploma: "Asociación de gastritis y úlcera gástrica con Helicobacter spp”. Keylin R. Sotolongo González.. Figura 3. Resultados bioquímicos de la prueba de ureasa. Los microorganismos como H. heilmannii – like o H. suis se encontraron distribuidos en todas las regiones gástricas (véase Tabla 4), pero su presentación fue significativamente más frecuente en la región fúndica al compararse con aquellas pilórica y cardial (p<0.05). Tabla 4. Distribución de aislados de Helicobacter spp., por las regiones de estómagos de cerdos de mataderoA. Con Helicobacter Sin Helicobacter Regiones Gástricas. Leyenda:. A. Total. No.. %. No.. %. Cardias Fundus Píloro. 2 19 4. 8.00a 76.0b 16.0c. 3 10 6. 15.8a 52.6b 31.6a. 5 29 10. Total. 25. 100. 19. 100. 44. Prueba de Comparación de Proporciones (Análisis de Medias - Proporciones Binomiales [Chi –. Cuadrado: X2]) del paquete estadístico STATGRAPHICS® Plus para Windows versión 5.1. Letras diferentes (a, b y c) en una misma columna denotan diferencias significativas entre regiones de los estómagos con p < 0.05.. En la tabla 5 podemos apreciar un resumen del diagnóstico microbiológico de los estómagos muestreados, observándose la presencia de bacterias del género Helicobacter en un por ciento elevado (80.8 %) de los casos con gastritis y úlceras gástricas, pudiendo ser la etiología principal de estas lesiones en estómagos de cerdos de matadero.. Capítulo 3. Resultados.. 22.

(32) Tesis de Diploma: "Asociación de gastritis y úlcera gástrica con Helicobacter spp”. Keylin R. Sotolongo González. Tabla 5. Resumen de la presencia de Helicobacter spp en muestras de estómagos de cerdos de matadero.. Lesiones G+GU. Helicobacter spp. (+) (-) 21 5. Total 26. S. 4. 14. 18. Total. 25. 19. 44. Al efectuarles un estudio transversal para examinar la asociación entre la presencia de lesiones patológicas de gastritis y úlceras gástricas con la presencia de bacterias compatibles con Helicobacter spp., se pudo constatar una prevalencia de la enfermedad en positivos de 0.84, en negativos de 0.26 y una razón de prevalencia de 3.19, y una prevalencia de exposición en casos con gastritis y úlcera de 0.80, en sanos de 0.22 y una razón de prevalencia de 3.63, ambas con un Intervalo de Confianza (IC: 1.8 – 7.1) del 95 %. Otro análisis realizado fue para conocer el grado de sensibilidad, especificidad y los valores predictivos de esta técnica diagnóstica para detectar la presencia de Helicobacter spp., asociado a procesos inflamatorios gástricos y que terminan en procesos necróticos de tipo ulcerativo. En este sentido se verificó una sensibilidad de 84.0 y una especificidad de 73.7 con un valor predictivo (+) de 80.8 % y un valor predictivo (–) de 77.8 %, una prevalencia aparente de 56.8 %, una prevalencia verdadera de 59.1 %, una Fracción Etiológica (Atribuible entre Expuestos) de 68.7 % y una Fracción Atribuible a la Población de 55.5 % con un IC del 95 %.. Capítulo 3. Resultados.. 23.

(33) Tesis de Diploma: "Asociación de gastritis y úlcera gástrica con Helicobacter spp”. Keylin R. Sotolongo González.. Capítulo 4. Discusión. 4.1. Análisis microbiológico de Helicobacter spp., en muestras de estómagos de cerdos de matadero. Los estómagos con gastritis presentaban abundante exudado sero - mucoso de color blanco amarillento, principalmente en zonas fúndica y pilórica, siendo seroso y transparente en la zona cardial; este al ser removido permite observar la mucosa congestiva, con amplias zonas hiperémicas, con presencia de petequias dispersas y con engrosamiento de los pliegues gástricos (fundus y píloro) donde se asientan las glándulas gástricas fúndicas y pilóricas, con presencia o no de formaciones crateriformes circulares de 1 – 3 cm de diámetro de necrosis ulcerativa con bordes solevantados, rodeadas de un halo hiperémico y con el interior blanco – amarillento, lo cual coincide con lo planteado por Durarte (1996) que define a la gastritis aguda con lesiones de mucosa gástrica hiperémica, edematosa, con petequias dispersas, erosiones e incluso úlceras, y De J (2008a) que relaciona la presencia de gastritis y úlceras gástricas en las regiones fúndicas. Al realizarse la inspección macroscópica de los estómagos de cerdos, se podía observar no solo las lesiones, sino también el tipo de alimentación que se les daba, por lo que nos pudimos percatar que los cerdos que no presentaban lesiones compatibles con gastritis péptica y necrosis ulcerativa (sanos) estaban siendo alimentados con residuos de comida, los cerdos que presentaron lesiones compatibles morfológicamente con gastritis muco – serosas fueron alimentados con residuos de comida, pienso industrial y miel B, mientras que por otra parte, los que tenían lesiones ulcerativas y gastritis eran alimentados con piensos industriales con molinado fino, demostrando que el factor alimenticio, como ya propusieran Ayles et al., (1996) y De J et al., (2008a) constituye una de las causas más frecuente del desarrollo de úlceras gástricas porcinas, y que además es el alimento que más utilizan los porcicultores para lograr una mayor eficiencia en la ceba en el menor tiempo posible, dígase una menor conversión alimenticia con una mayor ganancia de peso vivo.. Capítulo 4. Discusión.. 24.

(34) Tesis de Diploma: "Asociación de gastritis y úlcera gástrica con Helicobacter spp”. Keylin R. Sotolongo González. Cada día se acumulan más pruebas que fortalecen el papel etiológico del Helicobacter en la gastritis y las úlceras pépticas; así, como previamente habíamos revisado, otras de las pruebas que se citan son la significancia estadística de su aislamiento en relación con la clínica, la identificación de factores de virulencia capaces de dañar la mucosa gástrica y finalmente las inoculaciones en voluntarios (Hernández y Rivera, 1989). Para la realización del cultivo de Helicobacter spp., existen múltiples criterios acerca de cuál es el mejor medio y el que más se utiliza para lograr el aislamiento de la bacteria. Por ejemplo, tenemos la opinión de Ramos y Chocarro (2012), que reconocen la fácil contaminación de los medios no selectivos, por lo que entre ellos aconsejan la utilización de Agar chocolate para el aislamiento de Helicobacter pylori y entre los selectivos recomiendan el medio Campylobacter pylori de Dent, porque es el que permite un crecimiento más rápido de la bacteria, y el medio Agar-pylori que permite la recuperación de la bacteria en un alto porcentaje. Existen medios selectivos comerciales (preparados con los antibióticos) como los antes mencionados y otros que se hacen selectivos al añadirles antibióticos como la vancomicina, sulfametoxazol, trimetoprim, cefsulodina y polimixina B, entre otros, los cuales no afectan en nada la viabilidad del medio y sin embargo evitan el sobrecrecimiento de contaminantes (Alarcón et al., 2004). En el presente trabajo se logró el aislamiento de bacterias compatibles con el género Helicobacter en Agar chocolate y Agar Infusión Cerebro – Corazón, que son medios de cultivo selectivos, coincidiendo también con la opinión de autores como Bermúdez et al., (2009) en que lo más aconsejable es la utilización de medios de cultivos selectivos y no selectivos. Los medios de cultivo para lograr el aislamiento de Helicobacter spp., son suplementados comúnmente con sangre o derivados de ellas, aunque existen otros suplementos como el suero de caballo, lisado de eritrocitos y hemina, extracto de levadura y peptona entre otros (Alarcón et al., 2004), este autor considera sumamente importante (con respecto a la sangre) el tipo de sangre utilizada y la cantidad con que se suplementa al medio, ya que un aumento en la proporción del 7-10% mejora significativamente el crecimientos en comparación con el 5%. Los medios de cultivo utilizados en nuestro trabajo fueron. Capítulo 4. Discusión.. 25.

(35) Tesis de Diploma: "Asociación de gastritis y úlcera gástrica con Helicobacter spp”. Keylin R. Sotolongo González. suplementados con 7 % de sangre de carnero, observándose un buen crecimiento bacteriano. Todos los Helicobacter spp., se definen por su morfología colonial. Las colonias de estas bacterias al ser observadas en las placas de cultivo, van a presentar un tamaño de aproximadamente 1 mm de diámetro, grisáceas y brillantes (Alarcón et al., 2004; Bermúdez et al., 2009) lo que coincidió con los resultados obtenidos (Tabla 3 y Figura 1). Los resultados de crecimiento positivo que se obtuvieron en algunas de las muestras que no presentaban lesiones aparentes, pueden ser debido a que estas bacterias se pueden encontrar presentes en la mucosa normal del estómago, coincidiendo con autores como Díaz, (2002) y Torres, (2007) que reconocen la presencia de Helicobacter pylori en un 10% de los casos de pacientes con la mucosa normal. Desde el punto de vista microbiológico se pueden utilizar tinciones tales como la de Gram, carbolfuchina/azul,. Genta. y. Giemsa,. entre. otras. muchas. para. identificar. el. microorganismo a partir de la microbiología. Autores como Ramos y Chocarro (2012) recomiendan la tinción de Gram por lo sencilla que es de realizar y porque con ella se obtienen excelentes resultados. Aunque otros autores prefieren la tinción de Giemsa por su alta sensibilidad (100%) respecto al cultivo, esta técnica sustituyó la tinción con azul de metileno y ha alcanzado gran popularidad debido a los buenos resultados de la misma en el diagnóstico de Helicobacter pylori (Bermúdez et al., 2009). Muchos autores describen morfológicamente a los Helicobacter spp., como organismos espiralados, Gram negativos, curvados en forma de bacilos (Alba et al., 2006; Alarcón et al., 2004; Valdés y Astudillo, 2007). Los resultados obtenidos con la tinción de Gram coinciden con otras investigaciones en cuanto a la morfología (Figura 2). Morfológicamente podemos identificar a la bacteria por sus características morfoculturales y morfotintoriales como Helicobacter heilmannii – like logrando el cultivo de una bacteria a partir de estómagos de cerdos de matadero, coincidiendo con De J et al., (2008) en que esta es una bacteria que cuyos aislados no se han reportado hasta la fecha en medios. Capítulo 4. Discusión.. 26.

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Tabla 1. Distribución de las lesiones anatomopatológicas en las diferentes regiones  de estómagos de cerdos de matadero

Tabla 1.

Distribución de las lesiones anatomopatológicas en las diferentes regiones de estómagos de cerdos de matadero p.28
Tabla 3. Presencia de bacterias compatibles bioquímicamente con Helicobacter spp  a partir de muestras de estómagos de cerdos de matadero

Tabla 3.

Presencia de bacterias compatibles bioquímicamente con Helicobacter spp a partir de muestras de estómagos de cerdos de matadero p.29
Tabla 2. Proporción (%) de cada lesión anatomopatológica en las regiones del  estómago de cerdos de matadero

Tabla 2.

Proporción (%) de cada lesión anatomopatológica en las regiones del estómago de cerdos de matadero p.29
Figura 1. Aislados compatibles con Helicobacter  spp., en Agar Chocolate y Agar  Infusión Cerebro – Corazón con 7 % de sangre de carnero

Figura 1.

Aislados compatibles con Helicobacter spp., en Agar Chocolate y Agar Infusión Cerebro – Corazón con 7 % de sangre de carnero p.30
Figura 2. Bacteria Gram (-) intensamente espirilada como Helicobacter heilmannii -  like

Figura 2.

Bacteria Gram (-) intensamente espirilada como Helicobacter heilmannii - like p.30
Tabla 4. Distribución de aislados de Helicobacter spp., por las regiones de  estómagos de cerdos de matadero A

Tabla 4.

Distribución de aislados de Helicobacter spp., por las regiones de estómagos de cerdos de matadero A p.31
Figura 3. Resultados bioquímicos de la prueba de ureasa.

Figura 3.

Resultados bioquímicos de la prueba de ureasa. p.31
Tabla 5. Resumen de la presencia de Helicobacter spp en muestras de estómagos  de cerdos de matadero

Tabla 5.

Resumen de la presencia de Helicobacter spp en muestras de estómagos de cerdos de matadero p.32

Referencias

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