Congreso Nacional del Laboratorio Clínico 2015

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Análisis de HbA1c en Presencia de Hemoglobinas Variantes

Eloísa Urrechaga, PhD Consultor en Análisis Clínicos eloisa.urrechagaigartua@osakidetza.eus 43 N 3 W

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Controvertida molécula……..

Una modificación post-traducción glicación de una proteína Hemoglobina en un tejido sangre

se relaciona con una enfermedad Diabetes Mellitus

su síntesis se produce como si el sistema fuera inerte

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 Eritrocitos mantienen un metabolismo residual

 Glucosa penetra en la célula por difusión facilitada

 La glicación de Hb es un proceso espontáneo no mediado por enzimas y acumulativo

 Es proporcional a la glucemia media y otros factores

la vida media de los eritrocitos cinética de la reacción

HbA1c una molécula única Congreso Nacional del Laboratorio Clínico 2015

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Medicina basada en al Evidencia gold standard control metabólico DM

DCCT Study Group. The effect of intensive treatment of diabetes on

the development and progression of long-term complications in insulindependent diabetes mellitus: the Diabetes Control and Complications Trial

N Eng J Med 1993; 329: 977–986

UK Prospective Diabetes Study Group. UKPDS 33: intensive blood glucose control with sulphonylureas or insulin compared with conventional treatment and risk of complications in patients with Type 2 diabetes Lancet 1998; 352 : 837–853

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Hemoglobinas

Familia de moléculas

 Fisiológicas

 Patológicas

 Modificadas químicamente

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Amenaza

otras Hb químicamente modificadas Amenaza pero Oportunidad

Hb variantes Oportunidad HbA2

Detección de portadores de β talasemia

Hb A1c y otras Hemoglobinas:

amenaza y oportunidad

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Durante la vida embrionaria, fetal y post-natal

varios son los genes que codifican las diferentes globinas

Cr.11

e Gg ^Ag ^d ^b

Embrional Fetal Post-natal

0.5%

= Pseudo (y) genes sin expresión

3’

z₂ yz₁ ya₂ ya₁ ^a2 a₁

e Gg ^Ag ^yb ^d ^b

Cr.16

Hb Grower-1 y -2

z₂e²

z₂e² a₂e² a₂e²

Hb Portland

z₂g z₂g

HbF 80-90%

a₂g² a₂g²

HbA₂

2.5%

a₂d² a₂d²

HbA

97%

a₂b² a₂b²

Fuente: presentación Prof P C Giordano

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• HbA1c lábil esta formada por la unión inestable de glucosa al grupo amino N-terminal de las cadenas β (aldimina)

La mayoría libera rápidamente la glucosa volviendo al estado no glicado, tras la reagrupación de Amadori se forma la cetoamina estable

La carbamilación de forma muy acentuada en pacientes con función renal reducida y niveles elevados de urea en suero

La acetilación in vivo del grupo N-terminal de las cadenas de globina tiene lugar en pacientes alcohólicos, mujeres embarazadas y en pacientes con altas dosis de aspirina

La acetilación tiene lugar principalmente en las cadenas γ (HbF)

Interferencia analítica es el error sistemático producido por una sustancia distinta de la que se pretende medir en un procedimiento analítico

Hb modificadas químicamente son potencialmente interferentes debido a la separación incompleta de HbA1c

Hb modificadas químicamente

Imagen tomada de presentación Sr M. Castellet. Sebia

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Diabetes y hemoglobinopatías

World Health Organization 2008 IDF 2010

Las Hemoglobinopatías es la enfermedad autosómoca recesiva más prevalente en el mundo 7 % de la población mundial son portadores de genes de Hb mutados

Cada año nacen más de medio millón de niños afectados

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Most recent entry and update

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Hb C β 6 Glu → Lys Hb D β 121 Glu → Gln Hb E β 26 Glu → Lys

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Sacks D, Clin Chem 2003; 49(8): 1245-7

Sistemas analíticos basados en la separación de Hbs

Normal A1c/A0 A1c/A0 + A1c

HbX

Aglic + Xglic / Anoglic + Xnoglic

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Más que interferencia analítica: metodológica + biológica

Factores que interfieren con la medida de HbA1c

La presencia de Hbs modificadas químicamente, variantes genéticas o Hb F elevada pueden afectar a la exactitud de la cuantificación de HbA1c

El efecto final sobre el valor de HbA1c varía dependiendo del tipo de Hb variante y del método utilizado

Factores que afectan a la interpretación de los resultados de HbA1c

Cualquier condición que afecte a los eritrocitos y/o acorte su vida media va a rendir valores falsamente bajos

Sangrados y hemólisis suelen ser tenidos en cuenta, pero otros factores pasan desapercibidos en nuestra práctica diaria

o Las Hbs variantes reducen la vida media de los eritrocitos

o No hay evidencia de que la cinética de la reacción de glicación sea equivalente a la de Hb A0

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Hb Vida media RBC (días)

HbA 120

HbS 93

HbC 87

HbD 115

HbE ?

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Prevalencia de Diabetes Mellitus en regiones donde las Hb variantes son más habituales

Rhea JM et al. Impact of Hemoglobin variants on HbA1c interpretation: Do we assume too much? Med Lab Obser 2012; 6: 8-14

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Clin Chem & Lab Med 2015; 53 (9):e207-e210.

Indirect evidence that the glycation rate in Hb S, C, D, and E is the same as in Hb A

Hb J and G interpretation is more complicated In fact no definite conclusions can be made

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Año Determinaciones HbA1c

2002 18461

2003 20505

2004 23960

2005 27036

2006 29984

2007 31306

2008 32826

2009 35806

2010 39667

2011 40447

2012 43944

2013 46627

2014 48035

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Hb variante/Talasemia Número de pacientes

Beta talasemia 618

Alfa talasemia 173

Hb AS 128

Hb Lepore 44

Hb AC 30

Delta beta talasemia 13

Hb AD 9

Hb AE 4

Hb AJ 2

Hb Shelby 1

Hb SC 1

Hb X 1

1024

COMARCA INTERIOR DE VIZCAYA

Area que comprende el Este de Vizcaya y el Norte de Alava

300000 habitantes nivel socioeconómico medio, divididos entre medio rural y pequeñas villas de 10000-30000 habitantes

No hay datos oficiales de la prevalencia de hemoglobinopatías en el País Vasco

Se considera un área “libre de Hbpatías”

……….

Nuestra experiencia en el período 2002-septiembre 2015 ……….

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2002 Una propuesta audaz Congreso Nacional del Laboratorio Clínico 2015

(25)

Nuestra rutina diaria Congreso Nacional del Laboratorio Clínico 2015

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Menasoft

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HA8160 vs HA8180V

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Incidental detection of haemoglobin (Hb) variants during high performance liquid chromatography (HPLC) analysis of HbA1c: is it time for a standardised approach to reporting?

J. Reeve et al Ir J Med Sci 2015; 184(2):353-5

BACK GROUND:

Haemoglobin (Hb) variants are genetic variations in the globin genes that code for an abnormal globin protein structure. The prevalence of Hb variants has increased in Ireland due to the number of emigrants from Africa and Southeast Asia. The rate of incidentally detected Hb variants, in laboratories employing HPLC to measure HbA_1c, has increased in parallel. The presence of a Hb variant can compromise HbA_1cmeasurement and interpretation. In such cases, HbA_1c cannot be used to diagnose diabetes or to assess concordance with glycaemic targets.

AIM:

To establish the number of incidentally identified Hb variants during 10 months of routine HbA_1c analysis, and the percentage of HbA_1c reports alerting the requesting clinician to the presence of a Hb variant.

METHODS:

The laboratory database was interrogated to extract all records of HbA_1c requests and incidentally identified Hb variants from March to December 2012.

RESULTS:

A total of 32,636 HbA_1c analyses were performed during the evaluation period. Seventy-three Hb variants were identified in a total of 46 patients. In 32.6 % (15 of 46) the haemoglobinopathy status was known prior to testing and 97 % of HbA_1c reports communicated the presence of the Hb variant to the requesting clinician.

CONCLUSION :

Hb variants may invalidate the results of HbA1c analysis and could result in a missed diagnosis or a misdiagnosis of diabetes or mismanagement of a patient with diabetes mellitus. It is, therefore, imperative that a comment alerting the requesting clinician to the presence of the Hb variant is appended to the HbA1c result.

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