UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO
UNT
FACULTAD DE CIENCIAS AGROPECUARIAS
ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE INGENIERÍA AGROINDUSTRIAL
Efecto de la temperatura de secado convectivo en el contenido total de penicilina y capacidad antifúngica de Tocosh de papa (Solanum tuberosum) variedades Huayro y
Yungay
(Effect of convective drying temperature on total penicillin content and antifungal capacity of potato Tocosh (Solanum tuberosum) varieties Huayro and Yungay)
TESIS
PARA OPTAR EL TÍTULO PROFESIONAL DE:
INGENIERO AGROINDUSTRIAL
AUTOR: Br. Varas Rojas, Lucia
ASESOR: Dr. Vegas Niño, Rodolfo Moisés
TRUJILLO – PERÚ
2020
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DEDICATORIA
A mi madre Dionicia Rojas Toribio y mi padre Nicolás Varas Llajaruna por que supieron orientarme y darme su apoyo económico para concluir mi carrera.
La Autora
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Sustentado y aprobado ante el honorable jurado:
Efecto de la temperatura de secado convectivo en el contenido total de penicilina y capacidad antifúngica de Tocosh de papa (Solanum tuberosum) variedades Huayro y Yungay Presentado por:
Varas Rojas Lucia Aprobado por:
____________________________________
PRESIDENTE
Dra. Carmen Rosa Rojas Padilla
____________________________________
SECRETARIO
Dr. Viviano Paulino Ninaquispe Zare
____________________________________
MIEMBRO VOCAL
Dr. Rodolfo Moisés Vegas Niño
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AGRADECIMIENTOS
A la Universidad Nacional de Trujillo y la Facultad de Ciencias Agropecuarias, que han sido los formadores e instructores de mi
conocimiento y mi formación académica.
Al Dr. Rodolfo Moisés Vegas Niño, por ser la parte fundamental en la formulación y ejecución logrando concretizar el presente trabajo de
investigación.
Al Ing. Lubberto Marceliano Sánchez, por orientarme durante la ejecución del presente trabajo en la parte experimental.
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ÍNDICE
DEDICATORIA ... i
AGRADECIMIENTOS ... iii
RESUMEN ... v
ABSTRACT ... vi
1. INTRODUCCIÓN ... 1
1.1. Tocosh ... 1
1.2. Penicilinas ... 3
2. MATERIALES Y MÉTODOS ... 6
2.1. Materia prima ... 6
2.2. Esquema experimental ... 7
2.3. Diseño estadístico ... 8
2.4. Análisis estadístico ... 9
3. RESULTADOS ... 10
3.1. Análisis fisicoquímico del Tocosh en estado fresco y harina ... 10
3.2. Análisis estadístico ... 11
4. DISCUSIÓN ... 13
5. CONCLUSIONES ... 21
6. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS ... 22
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RESÚMEN
La presente investigación tuvo como objetivo general evaluar el efecto de la temperatura de secado convectivo (35, 45 y 55 °C) en el contenido de total de penicilina y en la capacidad antifúngica de Tocosh en las variedades de papa (Solanum tuberosum) Huayro y Yungay. Para lo cual se trabajo con un diseño completamente aleatorizado con tres repeticiones en cada uno.
La determinación de penicilina fue por espectrofotometría, mientras que la actividad antifúngica fue determinada en agar glucosa y cloranfenicol. Los resultados obtenidos indicaron que el contenido de penicilina total (expresado como penicilina G) en el Tocosh de papa en estado fresco fue de 6.94 y 7.47 µg/ml para las variedades Huayro y Yungay respectivamente.
Se encontró que el aumento en la temperatura de secado produce la disminución en el contenido de penicilina total en ambas variedades, es así que en la variedad Huayro disminuyó desde 13.811 a 12.596 µg/ml y en la variedad Yungay disminuyó desde 14.408 a 13.009 µg/ml correspondiente a 35 y 55 °C respectivamente. Además, se encontró que tanto en estado fresco como en seco y a la misma temperatura, la variedad Huayro posee una menor concentración de penicilina total respecto a la variedad Yungay. Por otro lado, la capacidad antifúngica en el Tocosh de ambas variedades de papa no se ve influenciada por la temperatura de secado. El análisis de varianza indica una diferencia estadísticamente significativa (p < 0.05) en el contenido de penicilina total en función a la temperatura de secado de ambas variedades de Tocosh de papa.
Palabras clave: Tocosh, Huayro, Yungay, penicilina, capacidad antifúngica.
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ABSTRACT
The objective of this research was to evaluate the effect of convective drying temperature (35, 45 and 55 °C) on the total content of penicillin and the antifungal capacity of Tocosh in potato (Solanum tuberosum) varieties Huayro and Yungay. For which we work with a completely randomized design with three repetitions in each. The determination of penicillin was by spectrophotometry, while the antifungal activity was determined in glucose agar and chloramphenicol. The results obtained indicated that the total penicillin content (expressed as penicillin G) in the potato Tocosh in the fresh state was 6.94 and 7.47 µg/ml for the Huayro and Yungay varieties respectively. It was found that the increase in the drying temperature produces the decrease in the total penicillin content in both varieties, so in the Huayro variety it decreased from 13,811 to 12,596 µg/ml and in the Yungay variety it decreased from 14,408 to 13,009 µg/ml corresponding to 35 and 55 °C respectively. In addition, it was found that both fresh and dry and at the same temperature, the Huayro variety has a lower concentration of total penicillin compared to the Yungay variety. On the other hand, the antifungal capacity of both potato varieties in Tocosh is not influenced by temperature of drying. The analysis of variance indicates a statistically significant difference (p < 0.05) in the total penicillin content as a function of the drying temperature of both varieties of potato Tocosh.
Key words: Tocosh, Huayro, Yungay, penicillin, antifungal capacity.
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1. INTRODUCCIÓN
1.1. Tocosh
La fermentación doméstica de alimentos tiene una larga y muy importante tradición en los países latinoamericanos (Londoño et al., 2017; Tamang et al., 2016). Las comunidades andinas han logrado preservar los cultivos nativos, así como su producción, cosecha y almacenamiento durante siglos. Entre ellos, la papa, que se originó hace aproximadamente 8000 años en los Andes Sudamericanos. El Perú, alberga uno de los yacimientos más importantes de variedades y parientes silvestres (Goldner et al., 2012; Mosso et al., 2016). Se han desarrollado numerosas formas de conservar las papas, como el secado al sol o la liofilización natural para obtener chuño blanco o negro y la fermentación para obtener Tocosh (Jiménez et al., 2017).
El Tocosh recibe por nombre la papa (Solanum tuberosum) que es procesada y fermentada de manera natural y empleado con fines curativos y alimenticios. Su procesamiento implica someter el tubérculo (protegido por paja o mallas) a una corriente de agua por un periodo entre 6 y 8 meses, al cabo del cual está listo para su consumo (Diario Correo, 2017). Es ampliamente conocido en los Andes como un producto que refuerza el sistema inmunológico. En su composición, se encuentra un antibiótico natural (penicilina natural) (Singh y Kaur, 2016), era considerado como un regalo del Dios sol por los Incas. Además, en su composición figuran componentes como alcaloides, aminoácidos y antimicrobianos. Asimismo, es usada para tratar enfermedades estomacales como las úlceras, gastritis en su nivel crónico, enfermedades renales, hemorroides, enfermedades respiratorias, refuerza el sistema óseo evitando la osteoporosis, incrementa la flora intestinal y mejora la digestión. La harina es, además, empleada como un cicatrizante para heridas (Portal Perú, 2015).
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La Sociedad Química del Perú, indica que de la papa (Solanum tuberosum), el Tocosh que se procesa em un intervalo de pH entre 5 – 6 y una temperatura del agua de 12 °C, presenta un color blanco crema, con un sabor acido, además de un olor característico de la fermentación con una textura semidura. En su composición destaca un elevado contenido de carbohidratos (80%), mientras que el contenido de proteínas es menor (3.91%). Debido al elevado contenido de carbohidratos, su nivel energético también lo es (343.42 kcal/100 g) (Belitz et al., 2012;
Alarcón y Chavarry, 2010).
Las variedades de papa con las que generalmente se prepara en Tocosh son la Huayro y Yungay, de las cuales la variedad Huayro se fermenta en menor tiempo comparado con la Yungay. No obstante, esta última posee mejore efecto en el alivio de síntomas de malestares mencionados.
Pese a ello, los pobladores de la sierra norte prefieren consumir Tocosh de la variedad Huayro por poseer un mejor sabor (Pesantes, 2015; Horkheimer, 2010).
En la medicina tradicional, se considera que Tocosh es una fuente de penicilina, gracias a lo cual es empleado en terapia natural antimicrobiana. Silva et al. (2011) reportaron que en Tocosh de papa contiene esteroides, compuestos fenólicos, flavonoides, taninos y aminoácidos.
Además, presenta actividad antimicrobiana en contra de E. coli, S. aureus.
Vilca (2014) determinó la población de Penicillum en Tocosh de papa (Solanum tuberosum L.) variedad Yungay, a los 30, 60 y 90 días de proceso fermentativo a temperatura ambiente. Los resultados reportan que a los 30 días de fermentación no existe ningún tipo de microorganismo.
A los 60 días de fermentación reporta un contenido promedio de Penicillium de 21.67 UFC/g y de 340 UFC/g a los 90 días. Reporta, además, un contenido de Streptomyces sp. de 5.7x105 UFC/g, hongos totales de 4.45x104 UFC/g y levaduras totales de 1.8x105 UFC/g.
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1.2. Penicilinas
Las penicilinas son compuestos antibióticos con efecto bactericida, lo que implica que dentro de su acción exista la destrucción de las bacterias. Su modo de acción está centrado en interrumpir la actividad enzimática como la de la transpeptidasa, la cual se encarga de convertir en monómeros estables las moléculas de glucopéptidos de la pared celular (Castillo, 1980).
En la producción de penicilina, el enlace beta-lactámico presenta una fuerte sensibilidad a medios básicos y ácidos, temperatura y en general a situaciones rápidas de reacción; con lo que es necesario el uso de reactivos específicos que activen sitios en la reacción de manera selectiva.
Además, deben ser de fácil eliminación y su reacción debe darse a temperaturas más bajas posibles (Ortega, 1995).
Estudios, como el reportado por Vilca (2014) indican un contenido importante de Penicillum sp. en el Tocosh, convirtiéndolo en una importante fuente de penicilina de origen natural.
A nivel mundial, nuestro país cuenta con la mayor diversidad en cuanto a papas. Pues posee 8 especies de papas nativas domesticadas y más del 50% de las variedades existentes en Latinoamérica. Posee también, el 45% de las 200 especies silvestres de nuestro continente (normalmente no son comestibles) (Vilca, 2014).
Dentro de las técnicas de conservación de la papa se encuentra su transformación en el Tocosh, que pasa por un proceso de fermentación bacteriana produciendo propiedades nutritivas, terapéuticas y medicinales debido a la presencia de penicilina que le confieren importancia cultural y ancestral en el tratamiento de diversas enfermedades. El Tocosh es un alimento probiótico que ayuda a incrementar el número de bacterias buenas en el intestino. Estas a su vez mejoran la digestión, previenen el estreñimiento y las hemorroides. La harina de Tocosh
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por su parte es utilizada para curar las heridas de las hemorroides al ser un poderoso cicatrizante (Portal Perú, 2015).
En Sánchez Carrión, el Tocosh es un postre tradicional consumido ancestralmente. La gastronomía local la presenta como un plato típico de la sierra en las ferias gastronómicas realizadas en la provincia. Uno de sus consumos tradicionales se da en las madres antes y después de dar a luz, para prevenir infecciones posparto.
En la bibliografía no existe información profundizada sobre el estudio de la penicilina en el Tocosh, lo que hace necesario la iniciativa de lograr determinar la concentración de este antibiótico, ya que para su consumo es necesario su secado interviniendo la temperatura, además, de acuerdo a Ortega (1995) la aplicación de temperaturas superiores a 15 °C sobre las penicilinas puede ocasionar la desnaturalización de la molécula afectando su capacidad antibiótica.
Por otro lado, en un estudio realizado por Yepéz et al. (2017) reportan que las bacterias ácido lácticas aisladas de chicha y Tocosh, dos productos vegetales tradicionales andinos fermentados, demostraron alta efectividad para inhibir hongos toxigénicos y no toxigénicos como Aspergillus, Penicillium y Fusarium, así como patógenos de los alimentos.
Ante ello la presente investigación buscó evaluar la concentración de penicilinas y la capacidad antifúngica de Tocosh de papa (Solanum tuberosum) variedad Huayro y Yungay en función a la temperatura de secado convectivo. Para lo cual se formuló el siguiente problema: ¿Cuál será el efecto de la temperatura de secado convectivo (35, 45 y 55 °C) en el contenido total de penicilina y capacidad antifúngica de harina de Tocosh de papa (Solanum tuberosum) variedad Huayro y Yungay?.
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Como objetivo general se planteó evaluar el efecto de la temperatura de secado convectivo (35, 45 y 55 °C) en el contenido de total de penicilina y en la capacidad antifúngica de Tocosh en las variedades de papa (Solanum tuberosum) Huayro y Yungay.
Asimismo, se establecieron los siguientes objetivos específicos:
Determinar el contenido de penicilina total en Tocosh de dos variedades de papa (Huayro y Yungay) en su estado húmedo.
Evaluar el efecto de la temperatura de secado convectivo en el contenido de penicilina total en Tocosh de dos variedades de papa (Huayro y Yungay).
Determinar la variedad de papa (Huayro y Yungay) que posee mayor contenido de penicilina a una misma temperatura de secado convectivo.
Determinar el efecto de la temperatura de secado convectivo en la capacidad antifúngica del Tocosh en dos variedades de papa (Huayro y Yungay).
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2. MATERIALES Y MÉTODOS
2.1. Materia prima
El Tocosh húmedo de las variedades de papa (Solanum tuberosum) Huayro y Yungay se obtuvo en el mercado Municipal de Huamachuco. La Figura 1 presenta las etapas que se llevan a cabo para la obtención de la harina de Tocosh. En la presente investigación se trabajó a partir de la extracción del proceso fermentativo.
Figura 1. Diagrama de flujo para la obtención de harina de Tocosh de papa (Solanum tuberosum)
Papa fresca
Lavado
Acondicionado Envoltura de paja
Inmersión Agua estancada o corriente
Fermentación 7 meses
Extracción
Limpieza Restos de paja y tierra
Descascarado
Triturado De forma manual con licuadora Cáscara (de forma manual)
Secado 35, 45 y 55 °C x 48 horas
Molienda
Tamizado Haz de luz < 1.0 mm (Malla 16 escala Tyler)
Harina de Tocosh
Con mortero
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2.2. Esquema experimental
El esquema experimental de esta investigación se detalla en la Figura 2.
Figura 2. Esquema experimental del trabajo de investigación
La caracterización de la harina de Tocosh se realizó de acuerdo a las marchas analíticas detalladas en los Anexos del 1 al 6:
Determinación del contenido de humedad y sólidos totales (ISO 638:2008) (Anexo 1)
Determinación del contenido de cenizas (ISO 776:1982) (Anexo 2)
Determinación de la acidez titulable (NTP 203:070 1997) (Anexo 3)
Determinación del pH (AOAC, 1990) (Anexo 4)
Contenido de azúcares reductores (NMX-F-312-1978) (Anexo 5)
Contenido de penicilina total (Kesava et al., 2014) (Anexo 6)
La determinación de la capacidad antifúngica se detalla en el Anexo 7, mientras que el recuento de hongos mesófilos viables se presenta en el Anexo 8.
SECADO (35, 45 y 55 °C) Pasta de Tocosh
Caracterización fisicoquímica
- Contenido de Humedad y Sólidos Totales - Contenido de Cenizas
- Acidez Titulable - pH
- Contenido de Azúcares Reductores - Contenido de Penicilina Total
X1: Temperatura de secado
Y1: Contenido de penicilina total Y2: Capacidad antifúngica Tocosh
seco Determinación del contenido de
Humedad y Sólidos Totales Variable independiente
Variables dependientes
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2.3. Diseño estadístico
El diseño estadístico fue un diseño aleatorio simple como el que se muestra en la Tabla 1. En la que se analizaron las dos muestras de Tocosh (Huayro y Yungay) a 3 temperaturas de secado (35, 45 y 55 °C) cada una con tres repeticiones por análisis.
Tabla 1. Diseño experimental para evaluar el contenido de penicilina total en el Tocosh y su efecto inhibitorio sobre hongos.
Tocosh ariedad
Temperatura de
secado (°C) Repetición Contenido de Penicilina (µg/ml)*
Efecto inhibitorio (-), (+), (++), (+++)
Huayro
35 °C
R1 R2 R3
45 °C
R1 R2 R3
55 °C
R1 R2 R3
Yungay
35 °C
R1 R2 R3
45 °C
R1 R2 R3
55 °C
R1 R2 R3
* µg de penicilina por ml de solución de Tocosh al 10% p/p.
- : no hay, + : bajo, ++: medio, +++: alto
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2.4. Análisis estadístico
Luego para determinar si existe diferencia significativa, se realizó un análisis de varianza ANVA como se muestra en la Tabla 2 para cada parámetro evaluado, verificando si existe diferencia significativa (p<0.05 y R2).
Tabla 2. Análisis de varianza para la respuesta Y (Contenido de penicilina).
Fuente
Suma de cuadrados
gl Cuadrado medio
Razón – F Valor-p Entre grupos
Intra grupos
Total
gl: grados de libertad
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3. RESULTADOS
3.1. Análisis fisicoquímico del Tocosh en estado fresco y harina
La Tabla 3 se presenta la caracterización fisicoquímica del Tocosh en su estado fresco y harina de las dos variedades de papa (Huayro y Yungay).
Tabla 3. Características fisicoquímicas del Tocosh (Fresco y seco) de papa.
Parámetro
Variedad Huayro Variedad Yungay
Fresco Seco
(45 °C) Fresco Seco (45 °C) Humedad (% p/p) 79.94 ± 0.53 11.56 ± 0.13 77.79 ± 0.31 11.33 ± 0.45 Cenizas* (% p/p) 0.84 ± 0.04 2.58 ± 0.06 1.01 ± 0.03 3.4 ± 0.14 Acidez titulable (% ác. láctico) 0.06 ± 0.01 0.43 ± 0.01 0.15 ± 0.01 0.29 ± 0.02
pH 3.39 ± 0.05 4.11 ± 0.08 3.62 ± 0.03 3.52 ± 0.29
Azúcares reductores** (%) 1.46 ± 0.06 2.62 ± 0.13 1.72 ± 0.16 2.97 ± 0.03 Penicilina total (µg/ml) *** 6.94 ± 0.02 13.62 ± 0.06 7.47 ± 0.09 13.72 ± 0.13
* Expresado en base húmeda
** Expresado como equivalente de glucosa
*** Expresado como penicilina G. La concentración es calculada en µg por ml de solución de Tocosh al 10% p/p.
La Tabla 4 presenta el contenido de penicilina y efecto inhibitorio sobre hongos por parte del Tocosh. La muestra fúngica fue mayoritariamente Penicillium digitatum (de color verdusco) y Penicillum italicum (de color azul) obtenidas de la superficie de naranjas con presencia fúngica.
La concentración inicial de mohos en la naranja fue de 5.2 x 106 unidades formadoras de colonia (UFC)/ml. La metodología para el recuento de hongos mesófilos viables se presenta en el Anexo 8.
En la Figura 3 (Anexo 9) se presenta la curva de calibración construida para la cuantificación de la concentración de penicilina total, tomando como base la penicilina G. Los datos de absorbancia (520 nm) y la curva de calibración se presenta en el Anexo 9.
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Tabla 4. Concentración de penicilina en harina de Tocosh y su efecto inhibitorio en función a la temperatura y variedad de papa.
Variedad de papa
Temperatura de secado
(°C)
Contenido de penicilina
(µg/ml)*
Efecto inhibitorio**
Tocosh 20% Tocosh 30% Tocosh 60%
Huayro
35 13.811 ± 0.207 - - +
45 13.620 ± 0.058 - - +
55 12.596 ± 0.350 - - +
Yungay
35 14.408 ± 0.265 - - +
45 13.720 ± 0.132 - + +
55 13.009 ± 0.192 - - +
* Expresado como penicilina G. La concentración es calculada en µg por ml de solución de Tocosh al 10% p/p.
** Efecto inhibitorio sobre mohos: No hay ( - ), bajo ( + ), medio ( ++ ) y alto ( +++ )
3.2. Análisis estadístico
La Tabla 5 presenta el análisis de varianza (ANVA) para el contenido de penicilina total en Tocosh en función a la temperatura de secado y variedad de papa. La Tabla 6 presenta la comparación de rangos múltiples para cada variedad de papa.
Tabla 5. Análisis de varianza para el contenido de penicilina total según variedad de papa y temperatura se secado.
Variedad
de papa Fuente Suma de
Cuadrados Gl Cuadrado
Medio Razón-F Valor-P
Huayro
Entre grupos 2.563 2 1.281 22.8 0.0016
Intra grupos 0.337 6 0.056
Total (Corr.) 2.900 8
Yungay
Entre grupos 2.937 2 1.469 35.34 0.0005
Intra grupos 0.249 6 0.042
Total (Corr.) 3.187 8
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Tabla 6. Prueba de comparaciones múltiples para el contenido de penicilina total en función a la temperatura de secado.
Variedad Nivel Casos Media Grupos
Homogéneos Contraste Sig. Diferencia +/- Límites
Huayro
55 °C 3 12.596 X 35 – 45 °C 0.1910 0.4736
45 °C 3 13.620 X 35 – 55 °C * 1.2153 0.4736 35 °C 3 13.811 X 45 – 55 °C * 1.0243 0.4736
Yungay
55 °C 3 13.009 X 35 – 45 °C * 0.6883 0.4073
45 °C 3 13.720 X 35 – 55 °C * 1.3993 0.4073
35 °C 3 14.408 X 45 – 5 5 °C * 0.7110 0.4073
* Indica una diferencia estadísticamente significativa con un 95.0 % de confianza.
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4. DISCUSIÓN
En la Tabla 3 se presenta la composición fisicoquímica del Tocosh fresco y seco. De tal manera, el contenido de humedad (% p/p) fue de 79.94 ± 0.53 y 11.56 ± 0.13 para el Tocosh de papa variedad Huayro, fresco y seco (45 °C) respectivamente, mientras que para la variedad Yungay fue de 77.79 ± 0.31 y 11.33 ± 0.45 para el Tocosh fresco y seco respectivamente. Los resultados indican que el Tocosh de la variedad Yungay es la que contiene mayor cantidad de sólidos tanto fresco como seco, comparado con la variedad Huayro. Vilca (2014) reporta valores de 77.92 y 10.34% para papa fresca y harina de papa respectivamente, además para Tocosh fresco y seco reporta valores de 79.66 y 12.69% respectivamente. Ramírez (2015) reporta valores de humedad de papa fresca entre 69.93 – 72.50 % p/p, inferior a lo determinado para el Tocosh fresco, lo que indica que en el proceso de fermentación se llega a perder sólidos. En lo referente a la humedad del Tocosh seco, los valores se encuentran entre los 10.9% y 14.8% reportado por Reyes et al. (2017) para harina de papa y papa seca respectivamente.
El contenido de cenizas (% en base húmeda) fue de 0.84 ± 0.04 y de 2.58 ± 0.06 para el Tocosh fresco y seco respectivamente en la variedad Huayro; en tanto que en la variedad Yungay este fue de 1.01 ± 0.03 y 3.4 ±0.14 respectivamente para el Tocosh fresco y seco. Cabe señalar que el Tocosh seco hace referencia a 45 °C (condiciones intermedias de proceso). Al respecto, Collazos et al. (1996) reporta valores de cenizas de 1.28% y 4.76% en base húmeda y seca para el Tocosh de papa (no indica variedad). Por su parte, Tenorio (2014) reporta un contenido de cenizas de 1.37 % en Tocosh de papa en estado seco y de 0.28% en estado fresco. En comparación con la papa fresca, Vilca (2014) reporta que el contenido de cenizas disminuye al transformarlo en Tocosh, probablemente debido a la lixiviación con agua.
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El contenido de acidez (expresado como porcentaje de ácido láctico) fue de 0.06 ± 0.01 y 0.43
± 0.01% para el Tocosh de papa Huayro en estado fresco y seco (45°C) respectivamente. No obstante, para la variedad Yungay fue de 0.15 ± 0.01 y 0.29 ± 0.02 % respectivamente en estado fresco y seco (45 °C). Rosales y Arrigo (2010) reportan valores entre 0.0263 – 0.1263 % en Tocosh en estado fresco (expresado como ácido sulfúrico). Vilca (2014) reporta valores de acidez de 0.26 y 0.3% (expresado como ácido sulfúrico) para Tocosh de papa variedad Hualash en estado fresco y seco respectivamente.
El pH del Tocosh fue de 3.39 ± 0.05 y 4.11 ± 0.08 para el Tocosh fresco y seco respectivamente de la variada Huayro, mientras que en la variedad Yungay se obtuvo valores de 3.62 ± 0.03 y 3.52 ± 0.29 en estado fresco y seco respectivamente. El incremento en la acidez en el Tocosh, comparado con la papa fresca, se atribuye al incremento en la carga microbiana de bacterias acidolácticas. Abdel et al. (2013) indica que las bacterias ácido lácticas representa un diverso grupo de bacterias Gram positivas, cuyo desarrollo se encuentra en un intervalo de pH entre 3.5 – 10.0 con una temperatura entre 5 – 45°C. Durante el proceso fermentativo, el pH de la papa varía disminuyendo su valor (a causa de la incrementación de su acidez), pues de 5.5 en papa fresca, al primer y octavo mes de fermentación alcanza valores de 3.8 y 4.2 respectivamente (Jiménez et al., 2017), en tanto que la acidez se incrementa homogéneamente durante los primeros 60 días (Yábar y Reyes, 2017). Rosales y Arrigo reportan (2010) que el valor del pH varía entre 3.77 – 4.64 en función a la variedad de papa y condiciones de elaboración del Tocosh.
El contenido de azúcares reductores (expresado como equivalente de glucosa) fue de 1.46 ± 0.06 y 2.62 ± 0.13% en el Tocosh de papa variedad Huayro fresco y seco respectivamente, en tanto que en la variedad Yungay fue de 1.72 ± 0.16 y 2.97 ± 0.03% en fresco y seco
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respectivamente. Al respecto, Rosales y Arrigo (2010) reportan que el contenido de azúcares reductores (expresado como % de glucosa) varía entre 1.705 – 4.982%. Tenorio (2014) reporta valores de azúcares reductores entre 0.79 – 0.90% para el Tocosh seco y entre 0.16 – 0.18% en Tocosh fresco. Por su parte Gutiérrez (2010) reporta componentes con estructura y naturaleza polar en Tocosh, también reporta presencia de componentes como azúcares azúcares reductores, aminoácidos, alcaloides y esteroides.
El contenido de penicilina en el Tocosh de papa variedad Huayro fue de 6.94 ± 0.02 y 13.62 ± 0.06 µg/ml en estado fresco y seco respectivamente, mientras que para la variedad Yungay fue de 7.47 ± 0.09 y 13.72 ± 0.13 µg/ml en estado fresco y seco respectivamente. Adams (2009) señala que, durante el proceso de elaboración de Tocosh, la papa sufre una reducción de tamaño, genera un olor característico a la fermentación que lo confiere un aspecto un poco desagradable.
Pese a ello es utilizado en el tratamiento de enfermedades como asma, tos y gripe. Sus propiedades también ayudan al tratamiento de enfermedades digestivos y óseos. Lo cual es atribuible al contenido de penicilina de manera natural, lo que permite reforzar el sistema inmunológico y protege al cuerpo por su propiedad antimicrobiana. Tocosh se usa como alimento y medicina natural que se cree que contiene penicilina. La composición bioquímica de Tocosh y papa seca aún no se ha investigado profundamente (de Haan y Rodríguez, 2016).
La Tabla 4 presenta el contenido de penicilina total (expresado como penicilina G) encontrado en cada tratamiento de secado del Tocosh de las dos variedades. Es así que en el Tocosh de variedad Huayro se obtuvo concentraciones de 13.811 ± 0.207, 13.620 ± 0.058 y 12.596 ± 0.350 µg/ml para las temperaturas de secado de 35, 45 y 55 °C respectivamente. En tanto que para la variedad Yungay a las mismas temperaturas se obtuvo 14.408 ± 0.265, 13.720 ± 0.132 y 13.009
± 0.192 µg/ml respectivamente. El incremento en la temperatura de secado influye
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negativamente en la concentración de penicilina, puesto que en la variedad Huayro hubo una reducción de 8.8% desde 35 a 55 °C, siendo la pérdida mayor en la variedad Yungay con 9.7%
en el mismo cambio de temperatura.
En un estudio de degradación de penicilina G en leche, Haagsma (1993) reportó una destrucción del 60% a una temperatura de 2 °C por 48 horas, y del 75% a 22 °C, lo que indica que la penicilina se ve afectada incluso a temperaturas de refrigeración. Por su parte, la Dirección General de Medicamentos, Insumos y Drogas del Perú, indica que, a temperaturas superiores a 30 °C, la penicilina pierde levemente su actividad. Comercialmente, la penicilina es un antibiótico de primera elección contra infecciones causadas por cocos Gram (+) con excepción de Estafilococos y algunos Enterococos. Para el tratamiento de Streptococcus pneumoniae se aplica teniendo en cuenta las resistencias locales. En el tratamiento de cocos Gram (-) se emplea en aquellos sensibles como Meningococos y Gonococos. También demuestra alta efectividad en la mayoría de espiroquetas (DIGEMID, 2017).
Por su olor desagradable, el Tocosh no es muy aceptado por el consumidor, puesto que según la medicina tradicional presenta grandes capacidades curativas contra múltiples enfermedades.
Sin embargo, en un reciente estudio en la Universidad Nacional Mayor de San Marcos se presentó un producto de Tocosh sin el color característico logrando una mayor aceptabilidad para el consumidor. Este producto presento un alto valor gastroprotector y gastroregenerador de mucosa gástrica (UNMSM, 2019).
En lo referente al efecto inhibitorio, contra Penicillum digitatum y Penicillum italicum (provenientes de naranjas en descomposición) en una concentración del 20% de harina de Tocosh no hubo efecto inhibitorio positivo; no obstante, en una concentración del 30%, el efecto
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fue bajo (≤ 1.0 cm en el halo de imbibición) y en una concentración del 60% fue medio (1 – 3 cm en el halo de imbibición). Ciertos antibióticos proceden de más de un microorganismo, como sucede con las distintas penicilinas que se obtienen incorporando ciertos precursores afines al medio de cultivo o bien puede suceder que un mismo microorganismo produzca dos o más antibióticos, como es el caso de Bacillus brevis, productor de tirotricina, sustancia que ha resultado ser una mezcla de gramicidina y tirocidina; Streptomyces lavendulae elabora estreptomicina, lavendulina, estreptolina y cloromicetina (Pérez, 1959).
En la tipificación de microbiota en Tocosh de papa mediante la técnica de secuenciación de próxima generación, Jiménez y Bernardi (2019) reportan una gran variedad de especies bacterianas, destacando por su cantidad los siguientes: Bacteroidetes gramnosus, Clostridium saccharoperbutylacetilicum, Alkaliphilus crotonoxidants y Clostridium akagii. Asimismo, se
lograron identificar en las muestras, filos bacterianos productores de antibióticos, principalmente del género Actinomicetales, así como también familias (Lactobacillaceae y Vellonillaceae) y géneros (Lactobacillus y Pediococcus) con efectos probióticos y protectores frente a la proliferación de patógenos.
Los Actinomycetaceae son una familia diversa de bacterias filamentosas que producen una gran cantidad de productos naturales relevantes para la agricultura, la biotecnología y la medicina, incluida la mayoría de los antibióticos utilizados en régimen hospitalario. En lugar de ser bacterias de vida libre, muchos actinomicetos han evolucionado para vivir en simbiosis, entre otras plantas, hongos e insectos. van der Meij et al. (2017) afirman que los géneros pertenecientes a la familia Actinomycetaceae son productores de metabolitos secundarios que representan dos tercios de todos los antibióticos que se conocen con capacidad anticancerígena y antifúngica.
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Jiménez et al. (2017) investigaron las bacterias acidolácticas (BAL) asociadas a la producción de Tocosh de papa mediante enfoques de cultivo y secuenciación de alto rendimiento (HTS).
Para ello estudiaron tres muestras (papas recién cosechadas, producción de un mes y ocho meses). El estudio identificó algunas especies de Lactobacillus (Lb) (Lb. sakei, Lb. casei, Lb.
farciminis, Lb. brevis y Lb. fermentum) y Leuconostoc mesenteroides. Además, mostró que las
LAB predominan en papas frescas, mientras que Clostridium, Zymophilus y Prevotella fueron el género más abundante en muestras de Tocosh de 1 y 8 meses. Cuando se investigaron las características biotecnológicas, varias Lb. exhibieron la capacidad de degradación de la amilasa, así como la producción de vitamina B del grupo B (riboflavina y folato). El estudio indica que los rasgos de las principales especies de BAL de Tocosh muestran capacidad antimicrobiana, antifúngica y antibiótica, así como la capacidad de producción de aminas con características biogénicas cuya formación proviene principalmente de la descarboxilación de aminoácidos (ten Brink et al., 1990).
Varias especies del género Bacillus producen antibióticos peptídicos que se sintetizan a través de un mecanismo ribosómico o no ribosómico. Los antibióticos gramicidina, tirocidina y bacitracina se sintetizan de manera no ribosómica por el mecanismo de tiotemplato multienzimático (caracterizado por la presencia de un gran complejo de subunidades enzimáticas, conocidas como multienzimas o polienzimas organizadas en módulos, capaz de catalizar una serie de reacciones bioquímicas, incluida la activación de aminoácidos por reacciones de hidrólisis y adenilación de ATP y la formación de enlaces peptídicos a través de las reacciones de condensación, completando un ciclo de alargamiento de la cadena). La surfactina y la micobacilina también se sintetizan de forma no ribosómica, pero por un mecanismo que, aparentemente, es distinto del tiotemplato multienzimático. Otros antibióticos
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como la subtilina están codificados por genes y se sintetizan ribosómicamente. El análisis genético molecular y de secuencias de ADN ha demostrado que los genes de biosíntesis para algunos antibióticos se agrupan en unidades de transcripción policistrónicas (se transcribe en forma continua originando varios polipéptidos) y están bajo el control de sistemas reguladores globales que gobiernan la expresión de genes que se inducen cuando las células de Bacillus entran en la fase estacionaria de crecimiento (Nakano y Zuber, 1990).
Dentro del Tocosh cocido y seco se ha identificado también, una gran cantidad del género Streptomyces (Jiménez et al., 2017). Estos constituyen la gran mayoría de los taxones dentro
de la familia Streptomycetaceae, y son un componente predominante de la población microbiana en los suelos de todo el mundo y han sido objeto de extensos esfuerzos de aislamiento y cribado a lo largo de los años porque son una importante fuente de metabolitos secundarios comerciales y médicamente importantes, siendo responsables de la mitad de antibióticos actualmente conocidos (Labeda et al., 2011). El mecanismo por el cual refieren la producción de estos metabolitos sucede cuando existe escases de nutrientes se activa un proceso de esporulación, el cual está ligado a la formación de metabolitos de carácter secundario como los antibióticos (Flärdh y Buttner, 2009).
Por otro lado, Polpas et al. (2014) reportan que los géneros Actinokineospora (Tocosh fresco, Tocosh cocido) y Saccharopolyspora (Tocosh cocido) son populares productores de antibióticos dentro de la familia Actinomycetaceae. Los estudios demuestran alta efectividad contra enfermedades de origen bacteriano Gram (+) y Gram (-), incluyendo Staphylococcus resistente a los medicamentos, con una concentración inhibitoria mínima (MIC) que varía de 0.5 a 16.0 g/ml. Las características estructurales del antibiótico se determinaron mediante espectroscopía FTIR y NMR identificándose que el antibiótico era un compuesto rico en
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estructuras alifáticas con diferencias significativas con respecto a los antibióticos conocidos informados por miembros del género, Nonomuraea.
El análisis de varianza de la Tabla 5 muestra una diferencia estadísticamente (p < 0.05) significativa en el contenido de penicilina (expresada como penicilina G) en función a la temperatura de secado, tanto en el Tocosh de papa variedad Huayro como Yungay. La prueba de múltiples rangos (Tabla 6) indica que, si existe diferencia estadísticamente significativa en el contenido de penicilina total entre todos los tratamientos del Tocosh de variedad Yungay, no obstante, en el Tocosh de variedad Huayro no existe diferencia significativa entre las temperaturas de secado de 35 y 45 °C, en cambio entre los demás pares, si existe.
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5. CONCLUSIONES
El contenido de penicilina total (expresado como penicilina G) en el Tocosh de papa (Solanum tuberosum) en estado fresco fue de 6.94 y 7.47 µg/ml para las variedades Huayro y Yungay respectivamente.
El incremento de temperatura de secado convectivo ocasiona una disminución en el contenido de penicilina total en la variedad Huayro (8.8% desde 35 a 55 °C), en tanto que en la variedad Yungay fue de 9.7% en el mismo intervalo de temperatura.
Tanto en estado fresco como en seco y a la misma temperatura, la variedad Huayro posee una menor concentración de penicilina total respecto a la variedad Yungay. Llegando a una concentración de 13.811 y 12.596 µg/ml a las temperaturas de 35 y 55 °C respectivamente, mientras que en Yungay se obtuvo 14.408 y 13.009 µg/ml en las mismas temperaturas respectivamente.
La temperatura de secado convectivo no influye en la capacidad antifúngica en el Tocosh de ambas variedades de papa, cosa que, si se ha evidenciado en la concentración de Tocosh, pues en concentraciones de 60% se logra recién una inhibición. Lo contrario sucede en concentraciones inferiores.
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6. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
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ANEXOS
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ANEXO 1
DETERMINACIÓN DEL CONTENIDO DE HUMEDAD Y SÓLIDOS (ISO 638:2008) Fundamento:
El fundamento de la determinación del contenido en sólidos es el secado en estufa a 105ºC, lo que elimina únicamente el agua de la materia prima a evaluar y nos permite cuantificar su peso remanente que constituiría los sólidos no volátiles.
Procedimiento experimental:
Se dispuso una cantidad conocida de muestra en un recipiente de peso conocido (previamente secado en estufa hasta a 105 °C aproximadamente por 4 h). Se colocó el recipiente con la muestra en una estufa a 105 ºC hasta peso constante (normalmente 48 h). Posteriormente se enfrió en un desecador conteniendo gel de sílice y se pesó.
Cálculos:
El porcentaje de humedad (en gramos de agua por cada gramo de materia prima húmeda) se determinó usando la siguiente ecuación:
% de sólidos = (1 – H) x 100 H: Humedad de la muestra (g H2O/g materia prima)
PRMH: Peso en gramos del recipiente seco con la muestra húmeda inicial.
PRS: Peso en gramos del recipiente seco.
PRMS: Peso en gramos del recipiente con la muestra seca.
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ANEXO 2
DETERMINACIÓN DEL CONTENIDO EN CENIZAS (ISO 776:1982) Fundamento:
Las materias primas vegetales contienen cenizas en cantidad variable que se determinan mediante incineración en un horno de mufla a 605 ºC, calcinándose la materia orgánica.
Procedimiento experimental:
En un crisol de peso seco conocido se dispuso una cantidad de materia prima (aproximadamente 10 g) con humedad conocida. El crisol se llevó al horno de mufla y se mantuvo la temperatura a 605 ºC hasta alcanzar peso constante (normalmente a las 6 h). Para conseguir una combustión lenta y controlada, la materia prima se introdujo en el horno de mufla a baja temperatura (unos 100 ºC), incrementándolo poco a poco, a intervalos de 50 ºC, hasta llegar a 605 ºC. Si la materia prima vegetal se introduce en el horno a 605 ºC puede producirse su deflagración y la pérdida de material. Posteriormente se enfrió en un desecador conteniendo gel de sílice y se pesó.
Cálculos:
El contenido en cenizas CC (en gramos de cenizas/100 gramos de muestra) se determinó mediante la siguiente ecuación:
∗ 1 ∗ 100
PRC: Peso en gramos del recipiente con las cenizas.
PRS: Peso en gramos del recipiente seco.
PRMH: Peso en gramos del recipiente seco con la muestra húmeda inicial.
H: Humedad de la muestra.
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ANEXO 3
DETERMINACIÓN DE LA ACIDÉZ TITULABLE (NTP 203.070:1977)
Se preparó una solución al 10% del Tocosh. A la mezcla, de volumen y peso conocido, se adicionó 4 gotas de fenolftaleína y se tituló con solución de NaOH 0.01N hasta que ocurra el cambio de color del indicador. La acidez se determinó con la siguiente ecuación:
% ó
, , ó
Se utilizó el valor del peso miliequivalente del ácido láctico (0.09008).
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ANEXO 4
DETERMINACIÓN DE LA CONCENTRACIÓN DE IONES HIDRONIO (pH) (AOAC, 1990)
Fundamento:
Se determina la concentración de iones hidrógeno con un pH-metro calibrado.
Procedimiento:
Se lavó bien el electrodo del pH-metro con agua destilada, secándose con papel absorbente. Se calibró el pH-metro a pH 7.0 y 4.0 con las correspondientes soluciones tampón. Se lavó el electrodo con agua destilada y finalmente se secó con papel absorbente. Se preparó una solución al 10% de harina de Tocosh con agua destilada. Se introdujo el electrodo en la solución y se procedió a medir el pH.
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ANEXO 5
DETERMINACIÓN DE AZÚCARES REDUCTORES (Método Lane Eylon) (NMX-F- 312-1978)
Fundamento:
Este método se basa en determinar el volumen de la solución de prueba que se requiere para precipitar totalmente todo el cobre presente en una cantidad de solución de Fheling.
Procedimiento:
Preparación de la muestra. Se preparó una solución de Tocosh con agua destilada al 10%. La muestra constituyó la solución que se dispondrá en una bureta de 50 ml.
Se dispuso de 10 ml de solución de Fheling (5 ml de Fheling A y 5 ml Fheling B) en un matraz.
Se adicionó 15 ml de agua destilada, se mezcló y se llevó a ebullición por 2 min. Transcurrido ese tiempo se adicionó 4 gotas de azul de metileno al 1% dando una coloración azul. Se tituló la mezcla hasta viraje (color rojo ladrillo) con la solución de Tocosh y se anotó el gasto.
Cálculos:
Azúcares reductores
% . . 10 ó
∗ 100
f = Factor de Fehling (g glucosa/ml Fheling) Determinación del factor de Fehling (f)
Se dispuso 5 ml de solución Fheling A y 5 ml de solución Fheling B en un matraz de 250 ml, añadiendo posteriormente 20 ml de agua destilada y algunas perlas de vidrio (por triplicado).
La solución preparada se llevó a ebullición durante 2 min (recipiente 1). En una bureta de 50 ml se añadió una solución de glucosa al 0.5% p/v dejando caer dicha solución en el recipiente 1. Se tituló con la glucosa hasta que se observe un precipitado rojo y el líquido sobrenadante
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sea prácticamente incoloro. Se tomó en cuenta el volumen de solución de glucosa gastado en la titulación final y se determinó el título del licor (f) expresado en mg de glucosa anhidra/ml de licor de Fehling.
Cálculos:
f = (ml de sol. gastados * % sol. glucosa * 10 ml de sol. Fehling) / 1000
Al realizar esta determinación por triplicado se tomó el valor promedio de los valores obtenidos.
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ANEXO 6
DETERMINACIÓN DEL CONTENIDO DE PENICILINA – MÉTODO ESPECTROFOTOMÉTRICO (Kesava et al., 2014)
Preparación de reactivos
1. Solución DMPD (0.05%): se preparó disolviendo 50 mg de dicloridrato de N,N-Dimetil-p- fenilendiamina de calidad analítica en 100 ml de agua destilada.
2. Solución de metaperyodato de Sodio (0,2%): se preparó disolviendo 200 mg del reactivo de calidad analítica en 100 ml de agua.
3. Solución de iodato sódico (9.3 x 10-3 M): se preparó disolviendo 185 mg de yodato sódico en 100 ml de agua.
4. Solución de molibdato sódico (4.9 x 10-2 M): se preparó disolviendo 1,0 g de molibdato sódico en 100 ml de agua.
5. Solución de sulfanilamida (1.2x10-2 M): se preparó disolviendo 200 mg de sulfanilamida recristalizada en 100 ml de agua.
6. Solución de tampón (pH 3,0): se preparó mezclando 50 ml de biftalato ácido de potasio (KHP) (0,2 M) y 40,8 ml de ácido clorhídrico (0,1 M) y 109,2 ml de agua.
7. Penicilina: Se preparó soluciones de penicilina G potásica con concentraciones de 25, 50, 100, 140, 180 y 240 μg/ml.
Instrumentación
Las mediciones espectrales y de absorbancia se realizaron en el espectrofotómetro UV – con celdas de cuarzo de 1 cm.
Curva de absorbancia
La curva de absorbancia del yodato en presencia de reactivos apropiados se escaneó en el espectrofotómetro en el intervalo de 400 – 600 nm frente al blanco de reactivo.
Curva de calibración
A unos matraces estándar de 25 ml que contienen 0.2 – 2.0 ml de soluciones de penicilina, se añadió 1.0 ml de ácido clorhídrico 1 M y se calentó durante 1 hora. A continuación, se añadió 1.0 ml de solución de hidróxido sódico 1 M y 1.0 ml de solución de metaperyodato sódico y se
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mantuvo el pH en el intervalo de 7.0 – 7.5. Luego se añadió 1.5 ml de solución de molibdato de sodio. Después de 10 minutos, se añadió 15 ml de tampón de pH 3.0 y 1.5 ml de soluciones de DMPD. Después de 2 minutos, se añadió 1.5 ml de solución de sulfanilamida y se calentó durante 2 minutos a 70 °C. Se enfrió, se rellenó hasta la marca con agua destilada y se midió la absorbancia a 520 nm frente a un blanco de reactivo. Se preparó la curva de calibración de manera similar a diversas concentraciones de penicilinas. Con ello se tuvo una línea recta de calibración.
Medición de penicilina en Tocosh
Se preparó una solución al 10% de harina de Tocosh de la cual se tomó 1 ml, se añadió 1.0 ml de ácido clorhídrico 1 M y se calentó durante 1 hora. A continuación, se añadió 1.0 ml de solución de hidróxido sódico 1 M y 1.0 ml de solución de metaperyodato sódico y se mantuvo el pH en el intervalo de 7.0 – 7.5. Luego se añadió 1.5 ml de solución de molibdato de sodio.
Después de 10 minutos, se añadió 15 ml de tampón de pH 3.0 y 1.5 ml de soluciones de DMPD.
Después de 2 minutos, se añadió 1.5 ml de solución de sulfanilamida y se calentó durante 2 minutos a 70 °C. Se enfrió, se aforó con agua destilada hasta 25 ml y se midió la absorbancia a 520 nm en el espectrofotómetro.
Resultados
El contenido de penicilinas (µg/g) se determinó mediante la siguiente ecuación:
Donde “y” representa la absorbancia calculada a 520 nm, “a” es la intersección de la curva de calibración y “b” es la pendiente de la curva de calibración.
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ANEXO 7
DETERMINACIÓN DE LA CAPACIDAD ANTIFÚNGICA – MODIFICADA (Yepez et al., 2017; Allaert y Escolá, 2002)
El método se basa en medir el efecto inhibidor del antibiótico en hongos.
Obtención de la muestra fúngica
La muestra fúngica fue mayoritariamente Penicillium digitatum (de color verdusco) y Penicillum italicum (de color azul) obtenidas de la superficie de naranjas con presencia fúngica (Tecnicoagrícola, 2011).
Se lavó una naranja mediana para 250 ml de agua destilada. Se realizó un recuento de hongos mesófilos viables (UFC/ml) para saber su concentración inicial (Anexo 8).
Preparación del medio de cultivo
El medio de cultivo fue agar glucosa y cloranfenicol (CGA).
El medio contiene extracto de levadura y glucosa, que favorecen el crecimiento de las levaduras y mohos. La presencia del clorafenicol, que es un antibiótico estable al calor, inhibe el crecimiento de bacterias.
Se disolvió 40.1 g de medio deshidratado en 1 litro de agua destilada. Se llevó a ebullición durante 1 – 2 minutos hasta conseguir una completa disolución. Se dispuso en frascos de 250 ml con cierre hermético resistentes a temperaturas y presiones altas y se sometió a esterilización en autoclave a 120 °C durante 15 minutos. Posteriormente se enfrió hasta 45 – 47 °C.
Se repartió en las placas Petri previamente esterilizadas y se dejó solidificar.
Preparación del medio inhibidor
El medio inhibidor fue la harina de Tocosh a concentraciones de 20, 30, y 60 % p/p en agua destilada. Se preparó círculos de papel filtro estéril con un diámetro de 1 cm y se sumergió en las soluciones de harina de Tocosh por un tiempo de 10 minutos para impregnarse de penicilina.
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Sembrado de las placas
Una vez el medio de cultivo esté solidificado y frio, se procedió a sembrar la dilución del hongo en una cantidad de 1 ml por cada placa. Se extendió con cuidado por toda la superficie de la placa. Posteriormente con la ayuda de una pinza estéril se colocó el papel filtro remojado en el centro de la placa Petri. Se tapó y se dejó en incubación a 22 °C que es el valor promedio para el crecimiento de Penicillum digitatum y Penicillum italicum (Tecnicoagrícola, 2011) por 5 días.
Expresión de resultados
Los resultados fueron expresados de acuerdo al tamaño la zona de inhibición formado alrededor del papel filtro remojado colocado y empleando la siguiente tabla:
Tamaño de la zona de
inhibición Calificación Efecto inhibitorio
Sin inhibición – No hay
≤ 1cm + Bajo
1 – 3 cm ++ Medio
> 3 cm +++ Alto
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ANEXO 8
RECUENTO DE HONGOS MESÓFILOS VIABLES (Allaert y Escolá, 2002) El medio de cultivo fue el mismo utilizado para la determinación de la capacidad antifúngica (Anexo 7).
Siembra
Una vez se tuvo la muestra microbiológica en agua destilada se sembró por duplicado 1 ml. Se repetió el procedimiento hasta 4 diluciones decimales. Luego se dejó incubar por 5 días a 22
°C. Posteriormente se contó las colonias de cada placa a los 3, 4 y 5 días de incubación.
Expresión de resultados
Después de 5 días de incubación, se retuvo las placas que contenían un máximo de 150 colonias, si es posible a nivel de dos diluciones sucesivas. El número de colonias (N) por ml de calculó con la siguiente ecuación:
∑
0.1
Donde N representa el número de hongos aerobios mesófilos viables; ∑ la sumatoria de todos los recuentos; n1 el número de placas retenidas en la primera dilución; n2 el número de placas retenidas en la segunda dilución y d es nivel de dilución correspondiente a la primera dilución retenida.
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ANEXO 9
CURVA DE CALIBRACIÓN PARA LA DETERMINACIÓN DE PENICILINA TOTAL
Figura 3. Curva de calibración para determinar la concentración de penicilina total en Tocosh de papa.
y = 0.0044x - 0.0067 R² = 0.9943
0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8 0.9 1 1.1
0 30 60 90 120 150 180 210 240
Absorbancia (nm)
Concentración de penicilina G (µg/ml)
