CBS
Procedimiento
de
Verificación deMétodos
Nro
de
P.O.E.:
POE-003
Nro. Versión: 01,
19set2018
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Elaboró:
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Aprobó:
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1- Objetivo:
Evaluar la Precisión, Veracidad, Linealidad, Límite de Detección (LOD), y Límite de Cuantificación (LOQ) del método para cada mensurando evaluado.
2- Responsabilidad:
Bioquímicos, los técnicos de laboratorio.
3- Frecuencia:
una única vez o cuando haya cambios de las condiciones del método.
4- Definiciones:
LOD: límite de detección.
LDQ: límite de cuantificación.
CV%: coeficiente de variación porcentual.
S: desvío estándar.
S2: varianza.
ETa: error total aceptable.
5- Materiales:
5.1 un instrumento de medición
5.2 tubos o copas
5.3 reactivos
5.4 controles para cada mensurando a evaluar
5.5 calibradores para cada mensurando a evaluar
5.6 agua de calidad analítica
5.7 diluyente
5.8 pipetas de vidrio de doble aforo de 1 ml, 5 ml
5.9 micropipeta automatica
5.10 tips de volumen adecuado
5.11 tubos para microcentrifuga (tipo eppendorf) de volumen adecuado.
5.12 computadora
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5.14 freezer
5.15 heladera
5.16 programa Excel
5.17 gradillas
5.18 marcador indeleble
5.19 calculadora
5.20 guantes de latex
6- Desarrollo:
Consideraciones antes de iniciar:
- Evaluar que la cantidad de muestra sea suficiente para realizar el ensayo. - Fraccionar en alícuotas las muestras y congelarlas.
- Establecer las condiciones en la que se procesan las muestras y repetir con cada alícuota. (Ejemplo poner todos las muestra el mismo tiempo a descongelar en el mismo lugar, etc)
6.1 Precisión y veracidad:
6.1.1 Seleccionar 2 muestras con concentraciones diferentes del mensurando; por
ejemplo:
Controles de tercera parte, Controles del fabricante con valor asignado, Controles externos con valores de consenso, Controles externos con valores de referencia asignado, Pool de sueros que un laboratorio metrológicamente superior valoro.6.1.2 Registrar las especificaciones operativas del fabricante y las especificaciones clínicas. 6.1.3 Registrar el valor asignado a las muestras ensayadas.
6.1.4 Calibrar el método, se revisa que todo el sistema se encuentre en óptimas condiciones (pipetas, equipo, etc.)
6.1.5 Correr los controles diarios
6.1.6 Si se cumplen los puntos 6.1.3 y 6.1.4 se avanza al punto 6.1.7. 6.1.7 Analizar durante 5 días las dos muestras por quintuplicado.
6.1.8 Registrar los resultados obtenidos en la planilla de Excel (ver planilla de Excel de Precisión y Veracidad).
6.1.9 Evaluar si hay algún valor discordante con test de Grubbs (ver planilla de Excel de Precisión y Veracidad).
6.1.10 Calcular el CV% entre corridas e intra corridas.
6.1.11 Comparar con las especificaciones indicadas por el fabricante
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6.1.13 Calcular el promedio de los valores obtenidos y calcular el sesgo %.6.1.14 Calcular el sigma y el error crítico, con ellos elegir una regla control para un 90% de garantía de detección de errores y menos de 5 % de falsos rechazos.
6.1.15 Documentar la evaluación del método para Precisión y Veracidad. 6.2 Linealidad
6.2.1 Obtener una muestra, que denominaremos A, que tenga una concentración suficientemente alta como para satisfacer el rango en el cual el método es usado; el volumen debe ser de por lo menos 15 veces el volumen de ensayo.
6.2.2 obtener una muestra, que denominaremos E, que tenga una concentración
suficientemente baja como para satisfacer el rango en el cual el método es usado, el volumen debe ser de por lo menos 15 veces el volumen de ensayo.
6.2.3 obtener un diluyente apropiado para el mensurando, el volumen debe ser de por lo menos 15 veces el volumen de ensayo.
6.2.4 Registrar las especificaciones que entrega el fabricante. 6.2.5 Mezclar partes iguales de A y E para generar la muestra C. 6.2.6 Mezclar partes iguales de A y C para generar la muestra B. 6.2.7 Mezclar partes iguales de E y C para generar la muestra D.
6.2.8 Analizar las muestras por quintuplicado idealmente, por triplicado por lo menos en un solo día.
6.2.9 Registrar los resultados obtenidos del instrumento en la planilla de Excel de Linealidad. 6.2.10 Realizar una gráfica de concentración vs respuesta.
6.2.11 Realizar un análisis de regresión.
6.2.12 Evaluar si el coeficiente de correlación es superior al informado por el fabricante. 6.2.13 calcular la mayor diferencia en la recta entre el valor obtenido y el valor esperado. 6.2.14 Obtener el sesgo % y comparar con las especificaciones del fabricante.
6.2.15 Comparar con los requisitos de calidad seleccionados. 6.2.16 Documentar la evaluación del método para linealidad. 6.3 Límite de Detección (LOD)
6.3.1 Obtener dos muestras con una concentración de mensurando cercana al límite de detección informado por el fabricante en el inserto.
6.3.2 Realizar los ensayos en condiciones de repetibilidad, utilizar el mismo instrumento, mismo operador, mismo lote de reactivos, de ser posible la misma curva de calibración, etc.
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6.3.3 Analizar por cuadriplicado cada muestra durante tres días consecutivos,6.3.4 Obtener 24 datos como máximo. En el caso de registrar algún inconveniente en el procesamiento de alguna réplica, registrar el inconveniente y descartar dicho valor, se debe contar con 20 datos como mínimo.
6.3.5 Calcular el porcentaje de resultados que cumplen con la especificación del fabricante. 6.3.6 Comparar con tabla (en el punto 6.3.6.) donde según el número de ensayos está previsto
el porcentaje de datos que deben cumplir con la especificación. Para ver si el porcentaje de resultados que cumple es superior al indicado, en ese caso se verifica la
característica, de lo contrario no.
6.4 Límite de Cuantificación (LOQ)
6.4.1 Obtener dos muestras con una concentración de mensurando cercana al límite de cuantificación informado por el fabricante en el inserto.
6.4.2 Realizar los ensayos en condiciones de repetibilidad, utilizar el mismo instrumento, mismo operador, mismo lote de reactivos, de ser posible la misma curva de calibración, etc.
6.4.3 Analizar por cuadruplicado cada muestra durante tres días consecutivos, obtener 24 datos como máximo. En el caso de registrar algún inconveniente en el procesamiento de alguna réplica registrar el inconveniente y descartar dicho valor, se debe contar con 20 datos como mínimo.
6.4.4 Calcular el porcentaje de resultados que cumplen con la especificación del fabricante. 6.4.5 Comparar con tabla (en el punto 6.4.6.) donde según el número de ensayos está previsto
