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Original: francés Mayo de 2001
INFORME DE LA REUNIÓN DEL GRUPO AD HOC DE LA OIE SOBRE LAS TRIPANOSOMOSIS NO TRANSMITIDAS POR GLOSINAS
Paris, 27 de mayo de 2001 _____
La reunión del Grupo ad hoc de la OIE sobre las tripanosomosis animales no transmitidas por glosinas (TANTG) tuvo lugar en la sede de dicha organización el 27 de mayo de 2001. El orden del día y la lista de los participantes figuran en los Anexos I y II, respectivamente.
En ausencia del Dr. B. Vallat, Director General de la OIE, que asistía a la sesión inaugural de la 69ª Conferencia General del Comité Internacional de la OIE, el Dr. J.E. Pearson, Jefe del Servicio Científico y Técnico de la OIE, acogió en su nombre a los participantes y les comunicó un mensaje de bienvenida del Dr. Vallat, dando luego la palabra al Dr. H.M. Solomon, Chief Livestock Project Officer de la OUA/BIRA1. El Secretario General del Grupo, Dr. L. Touratier, fue designado relator.Después de la presentación del informe provisional por el Secretario General del Grupo varios participantes disertaron sobre los diversos puntos inscritos en el orden del día.
1. Informe provisional del Secretario General
1.1. Reuniones científicas sobre las tripanosomosis y los medios para combatirlas
e 3ª Conferencia en Internet sobre las tripanosomosis salivales y otras Trypanosomatidae (Tryplink-l@cenargen.embrapa.br, organizado por FIOCRUZ, Brasil, 17-18 de octubre de 2000;
Contacto: A. Dávila)
Entre los numerosos documentos enviados sobre los diversos puntos del orden del día (biología y ultraestructura, bioquímica y desarrollo de medicamentos, biología molecular, inmunología y patología, epidemiología, vectores, filogenia y evolución), pueden mencionarse:
- estudio farmacocinético de la suramina en bovinos de Indonesia de razas Ongole y Madu;
- análisis filogenético de protozoarios parásitos basado en la elongación de factores génicos;
- purificación parcial de anticuerpos específicos de sueros de ovinos contra cepas de Trypanosoma evansi;
- inmunización de bovinos con cisteínas proteasas de T. congolense: focalización en la enfermedad más bien que en el parásito;
- eficacia de la melarsomina (Cymelarsan) en el ratón infectado por cepas de T. Evnnsi aisladas en la Argentina;
- ¿qué prueba hay que usar para la vigilancia de T. evansi en Australia y en Nueva Guinea?
1 OUA/BIRA: Organización de la Unidad Africana/Oficina Interafricana de Recursos Animales
e Coloquio Internacional sobre los Parásitos, resistencia y acceso a los medicamentos (Instituto de Medicina Tropical de Amberes, Bélgica, 4-6 de diciembre de 2000)
Gran parte de este coloquio estuvo dedicada al estudio de los problemas relacionados con la enfermedad del sueño. Pero las tripanosomosis humanas y las animales tienen muchos aspectos comunes: resistencia a los tripanocidas, falta de nuevos productos específicos, disponibilidad de los medicamentos existentes... Varias ponencias ilustraron estos puntos:
- vigilancia de la resistencia a los tripanocidas en la enfermedad del sueño;
- escasez de los medicamentos para el tratamiento de las enfermedades “olvidadas”: ¿agotamiento de existencias inevitable o problema resoluble de salud pública?
- desarrollo preclínico y clínico de nuevos tripanocidas: el punto de vista de la industria;
- disponibilidad y suministro de medicamentos contra la enfermedad del sueño;
- demostración de la actividad del melanoprol por una prueba de sensibilidad in vitro con el suero del enfermo;
- resistencia al megazol en T. Brucei.
e Reunión de la Sociedad Francesa de Parasitología (Universidad de Versalles, Francia, 21-23 de febrero de 2001)
Se presentó una ponencia producto de una amplia cooperación internacional entre el CIRDES2, Burkina Faso, la Universidad Libre de Berlín (Alemania), la Universidad de Guelph (Canadá), la Universidad de Glasgow (Reino Unido), el ILRI3 y la OUA/BIRA (Kenia) sobre “Las tripanosomosis del ganado y las resistencias a los tripanocidas en los bovinos de la provincia de Kenedougou (Burkina Faso)”.
e 3ª Reunión Bienal de Parasitología del CNRS/DGA/DCSSA/MENESR4: “De los genes al terreno”
Se presentaron más de 100 ponencias y/o paneles en esta reunión de ciencia fundamental, algunos de ellos referentes al estudio de los tripanosomas en general:
- desarrollo de una red y de instrumentos de bioinformática para los parasitólogos;
- componentes de un mecanismo de segregación mitocondrial en los tripanosomas;
- caracterización de una familia de genes que codifican las fumarato-reductasas en T. brucei;
- afinidad de una tiol-transferasa de tripanosoma por una familia de moléculas tripanocidas y de actividad quimiotáctica de dicho tripanosoma in vitro.
e 4º Congreso COST-B95 sobre la quimioterapia antiprotozoarios (Lisboa, Portugal, 6-9 de mayo de 2001)
Numerosas ponencias mostraron la aportación de la biología molecular al estudio de la genómica de los tripanosomas.
La estrecha cooperación entre el Instituto de Investigaciones en Medicina Tropical y la Facultad de Ciencias Veterinarias de la Universidad de Jartún (Sudán), que tomaron T. evansi como modeo de estudio de la resistencia a la suramina, tripanocida usado en la enfermedad del sueño y en la surra de los camélidos, dio lugar a una ponencia sobre “la caracterización de cepas de T. evansi resistentes a la suramina”.
Esta caracterización se obtuvo mediante el análisis molecular del cariotipo para comparar los aislados de 16 cepas de T. evansi por electroforesis en gel de campo pulsado. Los aislados provenían de las regiones oriental, central y occidental de Sudán. Se mostró que la enzima málica de tipo XII es un indicador de la resistencia a la suramina en T. evansi.
2 CIRDES: Centro Internacional de Investigación para el Desarrollo de la Ganadería en Zonas Húmedas y Subhúmedas
3 ILRI : International Livestock Research Institute (Instituto Internacional de Investigaciones Agropecuarias)
4 CNRS/DGA/DCSSA/MENESR : Centro Nacional de Investigaciones Científicas/Dirección General del Armamento/Dirección Central del Servicio de Sanidad de las Fuerzas Armadas/Ministerio de Educación Nacional, Enseñanza, Ciencia e Investigación
5 COST: Cooperación Europea en el campo de la Investigación Científica y Técnica, financiada por la Unión Europea (DGXII) y patrocinada por la Organización Internacional de las Ciencias Químicas para el Desarrollo (IOCD)
Merecen mención otras contribuciones:
- terapéutica de la enfermedad del sueño (6 tripanocidas se emplean actualmente: melarsoprol, suramina (cuya producción se ha abandonado), dimetridazol.(usado habitualmente en animales), nifurtimox, difluorometilornitina o DFMO);.en recientes discusiones con la OMS6, dos firmas farmacéuticas se han comprometido a donar cantidades importantes de melarsoprol (Arsobal de Aventis) y de suramina (Naganol de Bayer) para el tratamiento de los 300.000 enfermos registrados actualmente en África, condenados a una muerte segura en ausencia de tratamiento;
- la genómica funcional y la validación del objetivo por ARNi7. El ARNi es un fenómeno descrito recientemente, en el cual la presencia de un ARN de doble cadena lleva a la degradación específica del ARNm8 homólogo;
- metabolismo de la pterina y resistencia a los medicamentos antifolatos en las trypanosomidae;
- absorción, distribución y metabolismo del DB289, promedicamento activo por vía oral para el tratamiento de las tripanosomosis africanas;
- molécculas de tipo pentamidina como medicamento antitripanosómico y antileishmaniano: una nueva mirada a un viejo agente terapéutico.
Las dos últimas ponencias mencionadas dan cuenta de un estudio de los metabolitos (y sus derivados) de la pentamidina que se empleaba hasta hace poco como quimioprofiláctico de las tripanosomosis. Las mismas pueden abrir una nueva pista de investigaciones y son actualmente estudiadas en la Universidad de Carolina dl Norte por un grupo de investigadores estadounidenses, con una amplia colaboración internacional estadounidense-africano-europea. Las investigaciones son financiadas por una fundación internacional (William and Melinda Gates Foundation), y los primeros resultados parecen prometedores en el mono infectado por T. rhodesiense.
1.2. Datos bibliográficos
Existen muchos artículos dedicados al estudio de T. evansi en varios países :
- expresión general del antígeno de tipo variable RoTat1.2 en aislados de T. evansi de diversos orígenes;
- prevalencia de la tripanosomosis por T. evansi en los camellos jóvenes del oeste del Níger;
- prevalencia de la tripanosomosis por T. evansi en chamelons del distrito de Likipia (Kenia);
- infección por T. evansi en el dromedario en Jordania;
- detección de T. evansi en el cerebro de ciervos-cerdos (hog deer) de Tailandia naturalmente infectados mediante la inmunoquímica con biotina-estreptavidina;
- la tripanosomosis del dromedario en las Canarias: determinación y seroprevalencia mediante el uso del CATT9/T. evansi y de las pruebas parasitológicas;
- la salud de los rebaños de camellos y la productividad en Etiopía Oriental;
- caracterización biológica y bioquímica de aislados de T. evansi del Pantanal de Mato-Grosso (Brasil);
- estudio comparativo en Vietnam de los métodos de diagnóstico de la tripanosomosis en búfalos infectados experimentalmente;
- diez años de actividades de investigación sobre la parasitología tropical de dromedarios, bovinos y pequeños rumiantes en Mauritania;
- comparación de pruebas serológicas en las infecciones naturales por T. evansi en los búfalos de arrozales de Vietnam Septentrional;
- evaluación comparativa de pruebas parasitológicas y de una PCR10 para el diagnóstico de T. evansi en búfalos infectados experimentalmente;
- interacción entre infecciones debidas a T. evansi y a H. contortus en cabras en India.
6 OMS: Organización Mundial de la Salud
7 ARNi: ácido ribonucleico de interferencia
8 ARNm: ácido ribonucleico mensajero
9 CATT: Card Agglutination Trypanosome Test (método de aglutinación de tripanosomas en tarjeta)
10 PCR reacción en cadena de la polimerasa
2. Informaciones comunicadas a la OIE por los Países Miembros
Entre los documentos suministrados a la 69ª Conferencia General por los Países Miembros acerca de su situación zoosanitaria figuran las siguientes indicaciones relativas a las TANTG:
Durina (T. equiperdum)
África del Sur (18 focos, 46 casos, 4 sacrificados).
Botsuana (11 focos, 13 casos).
Kirguizistán (4 focos, 94 casos, 94 caballos sacrificados).
Lituania (1.131 examinados, 2 positivos a la prueba de FC11, ningún signo clínico observado).
Namibia (4 focos, 10 casos).
Pakistán (presencia).
Perú (295 sueros fueron sometidos a la prueba de FC en los departamentos de Cuzco, Cajamarca, Piura, Ayacucho, Lima, Ica y Apurina, con resultado negativo. Las tomas correspondientes se efectuaron a partir de caballos de diversos orígenes, de asnos y de mulas, mostrando que el país está indemne con respecto a la enfermedad.
Rusia (50 focos, 910 casos, 8 muertos, 902 sacrificados).
Surra (T. evansi)
Argentina (presencia circunscrita a zonas determinadas).
Brasil (presencia circunscrita a zonas determinadas: 1 foco, 1 caso en equinos) Egipto (2 casos en búfalos).
Eritrea (presencia en equinos).
India (3 focos, 15 casos en camélidos).
Indonesia (presencia en equinos).
Irán (9 focos, 26 casos en camélidos).
Jordania (2 focos, 6 casos en equinos).
Pakistán (presencia en bovinos y equinos).
Túnez (3 focos, 59 casos en camélidos).
Nota: añadiendo a los datos suministrados por las administraciones centrales de los 10 países mencionados las informaciones extraídas de publicaciones científicas (ver punto 1.2.), se comprueba que en 2000 se señalaban infecciones por T evansi en los 17 países siguientes: Argentina, Brasil, Canarias (España), Egipto, Eritrea, Etiopía, India, Indonesia, Jordania, Kenia, Mauritania, Níger, Pakistán, Tailandia, Túnez y Vietnam.
Infección por T. vivax (en ausencia de glosinas)
Sudán: encuestas epidemiológicas recientemente efectuadas en la zona indemne de glosinas que se comprende Jartún y el centro de Sudán han revelado una infección por T. vivax con un índice del 2 % en vacas lecheras.
Durante la encuesta se capturaron tabánidos y “moscas de los establos”. Se comprobó la presencia de la enfermedad en dos distritos.
3. Durina y diferenciación de T. equiperdum y T. evansi
3.1. Pruebas comparativas en el Laboratorio de Referencia de la OIE para la durina (VIEV, Moscú, Rusia) de los reactivos empleados para el diagnóstico de la enfermedad por el método de fijación del complemento en siete países
El Dr. Solomon da la palabra al Dr. Touratier, quien presenta el cuadro de resultados ya completado.
11 FC: Fijación del complemento
Table 1
Resultados de las pruebas comparativas de fijación del complemento empleados en siete países para el diagnóstico de la durina
Antígeno de T. equiperdum Origen del suero China
título 1:16 EE.UU.
título 1:64 Rusia
título 1:50 Francia
título 1:20 Alemania
título 1:32 Italia
título 1:40 África del Sur título 1:125 EE. UU positivo título 1:20 1:10 2+ 1:20 2+ 1:20 3+ Ningún
resultado 1:20 2+ 1:10 3+ 1:10 2+
EE. UU. Positivo
título 1:20-1:40 1:40 3+ 1:80 2+ 1:80 3+ 1:20 2+ 1:80 2+ 1:80 2+ 1:40 2+
EE. UU. Positivo high título 1:320 3+ 1:160 2+ 1:320 2+ 1:80 2+ 1:160 2+ 1:160 2+ 1:160 2+
Rusia positive título 1:10 1:10 2+ 1:10 2+ 1:10 2+ Ningún
resultado 1:10 2+ 1:10 2+ 1:10 2+
Rusia positivo título 1:40 1:40 2+ 1:40 2+ 1:80 2+ 1:20 2+ 1:40 2+ 1:40 2+ 1:40 2+
Francia positivo título 1:10 1:40 2+ 1:20 2+ 1:40 2+ 1:5 3+ 1:20 2+ 1:40 2+ 1:20 3+
Alemania positivo título 1:80 1:40 2+ 1:80 2+ 1:80 2+ 1:10 2+ 1:40 3+ 1:40 2+ 1:40 2+
Alemania positivo título 1:320 1:80 3+ 1:160 3+ 1:160 3+ 1:20 3+ 1:160 2+ 1:80 3+ 1:80 2+
Italia positivo título 1:96 1:40 3+ 1:80 2+ 1:160 3+ 1:5 3+ 1:40 2+ 1:20 3+ 1:20 2+
África del Sur positivo
título 1:32 4+ 1:40 2+ 1:80 3+ 1:80 3+ 1:20 2+ 1:40 2+ 1:40 2+ 1:80 2+
USA negativo negativo negativo negativo negativo negativo negativo negativo
Alemania negativo negativo negativo negativo negativo negativo negativo negativo
Rusia negativo negativo negativo negativo negativo negativo negativo negativo
Italia negativo negativo negativo negativo negativo negativo negativo negativo
África del Sur negativo negativo negativo negativo negativo negativo negativo negativo (Fuente: V.T. Zablotsky, Ch. Georgiu, The All-Russian Research Institute of Experimental Veterinary Medicine, Laboratory of Protozoology, 109472, Moscou, Kuzminki, Viev)
En este cuadro, elaborado en su mayor parte en mayo de 2000, no figuraba África del Sur. Los reactivos enviados por dicho país (Instituto Veterinario de Onderstepoort) habían sido inutilizados por una transporte y un almacenaje defectuosos, y el segundo envío sólo llegó al VIEV en el otoño de 2000.
El Dr Devols estima que tales resultados son satisfactorios. Pero en los caballos de carrera importados en 1998 se observan reacciones transitorias a la prueba de fijación del complemento (TFC), ora positivas, ora negativas, durante un período de seis meses. Es posible que lo mismo acontezca con todo otro método de diagnóstico actualmente disponible.
Filip Claes observa que la TFC es un diagnóstico de grupo: sólo puede establecer el diagnóstico del grupo brucei que abarca tres especies de tripanosomas patógenos para los equinos (T. brucei brucei, T. evansi y T.
equiperdum), sin permitir la discriminación entre estas tres especies.
El Dr. Musiime está de acuerdo con esta observación y espera que las investigaciones complementarias logren elaborar un método de diagnóstico más preciso, pero tan seguro como la TFC.
3.2. Continuación pendiente: aislamiento de nuevas cepas de T. equiperdum y discriminación T. evansi/T.
equiperdum
El Dr. Touratier recuerda que los intentos hechos en el VIEV habían sido sugeridos por el Grupo ad hoc en su reunión anual de mayo de 1999 y que el Dr. Avilov, entonces Jefe del departamento principal de Veterinaria del ministerio de Agricultura de Moscú, había solicitado que las pruebas precedentes se realizaran como punto de partida de estudios ulteriores. En octubre de 1999 el Prof. Büscher había redactado ese proyecto de investigaciones, que fue sometido al Presidente de la OIE y, en espera de su financiación, el Instituto de Medicina TROPICAL DE Amberes había orientado a un estudiante, Filip Claes, hacia una tesis de doctorado cuyas líneas directrices coincidían con las del proyecto de investigaciones. Ya en mayo de 2000 se habían expuesto las primeras realizaciones de este plan: consistían en la presentación del estado actual de nuestros conocimientos sobre la investigación en materia de durina (pequeño número de cepas de T.
equiperdum disponibles en el mundo, intento de identificación de los tipos de antígenos variables de dichas cepas, determinación de las técnicas de biología molecular para tratar de identificar con precisión las dos especies de tripanosomas).
El Dr. Solomon da entonces la palabra al Dr. Filip Claes para que exponga los resultados obtenidos durante la ejecución del programa de investigaciones sobre la durina y la diferenciación T. equiperdum/T. evansi.
Se han cumplido tres etapas:
(i) Extensión de la colección de cepas disponibles en el criobanco del laboratorio de Amberes
Junto a las 38 cepas de T. evansi se han podido obtener 11 cepas de T. equiperdum (1 cepa Amberes, 1 cepa Burdeos “BoTat 1.1", 1 cepa Onderstepoort “OVI”, 3 cepas de Estados Unidos, 1 cepa de Canadá, 1 cepa de Suiza y 3 cepas de Alemania).
(ii) Análisis de las reacciones serológicas cruzadas entre T. equiperdum y T. evansi
Con respecto a T. evansi, se ha podido determinar que la cepa RoTat 1.2 es un antígeno variable (VAT), precoz y “ubicuista”, cuyos anticuerpos pueden detectarse en el suero de los animales infectados (conejos, camélidos, búfalos, bovinos). De este modo se ha podido seguir la evolución de los anticuerpos en conejos infectados por esta cepa por inmunotripanólisis.
Por otra parte, se han estudiado reacciones cruzadas de la cepa RoTat 1.2 de T. evansi con la infección de conejos inoculados con diversas cepas de T. equiperdum. Las respuestas precoces a los anticuerpos contra ROTat 1.2 se analizaron mediante tres pruebas: CATT/T. evansi, ELISA12/T. evansi e inmunotripanólisis.
Todas las cepas de T. equiperdum respondieron positivamente al conjunto de las tres pruebas, excepto la cepa OVI (negativa en las tres pruebas) y la cepa BoTat 1 (negativa a la prueba de inmunotripanólisis).
En consecuencia, las demás cepas están estrechamente emparentadas con T. evansi, pero se emplean en los laboratorios nacionales para el diagnóstico de la durina con la prueba de fijación del complemento (TFC).
Se ha preparado un artículo que será publicado en los Anales de la Academia de Ciencias de Nueva York.
(iii) Biología molecular: glucoproteína variable de superficie (VSG) de la cepa RoTat 1.2 deT. evansi I,a secuencia deADN13 de VSG de RoTat 1.2 de T. evansi se usó como base de identificación de un par de cebadores de la región no homóloga de las secuencias de VSG. Luego, la amplificación por PCR dio un producto detectado en todas las cepas de T. evansi y en siete cepas sobre nueve de T. equiperdum.
También en este caso, únicamente la cepa OVI y la cepa BoTat 1 de T. equiperdum fueron negativas en PCR. Además, las PCR efectuadas empleando los ADN aislados de T. b. brucei, T. b. gambiense, T. b.
rhodesiense, T. congolense, T. vivax y T. theileri no dieron este producto de amplificación.
Los resultados de la biología molecular concuerdan con los de la serología y sugieren que hay por lo menos dos grupos de cepas de T. equiperdum en la colección del laboratorio.
12 ELISA: método inmunoenzimático
13 ADN: ácido desoxirriibonucleico
Se ha preparado un artículo para su publicación en Experimental Parasitology.
En vista de estos resultados, convendría ahora definir dos pruebas de diagnóstico:
– una prueba de detección, sensible al 100 %, fácil de realizar (por ejemplo, la prueba de aglutinación directa o indirecta),
– seguida por una prueba específica de confirmación en 100 % (por ejemplo, la PCR).
Deberían emprenderse entonces pruebas con caballos, mediante cepas disponibles y, eventualmente, cepas recién aisladas, para averiguar si las cepas de T. equiperdum almacenadas desde hace decenios en los criobancos de los laboratorios oficiales de diagnóstico no han sufrido variaciones antigénicas.
A las preguntas formuladas por los asistentes acerca de la financiación de dicho programa de investigaciones, F. Claes responde que hasta ahora el gobierno flamenco ha costeado las tareas efectuadas en el Instituto de Medicina Tropical de Amberes, pero que las pruebas con caballos deberán ser objeto de un presupuesto para el que hay que encontrar una financiación. Tales pruebas se efectuarán en el laboratorio de Onderstepoort (África del Sur), con arreglo a un presupuesto que queda por determinar.
El Dr. Jeggo sugiere que una AbELISA permitirca diferenciar las dos especies vecinas de tripanosomas. EL Dr. Touratier está de acuerdo, pero esta AbELISA debería prepararse a base de una verdadera cepa de T.
equiperdum, recién aislada de un caso de durina clínica, y su aislamiento es la piedra angular. del problema.
Desde un punto de vista general, el Dr. Desquesnes había enviado a la Secretaría un mensaje en eel que indicaba los resultados preliminares de una tarea en curso con el Dr.Dávila acerca de la “detección e identificación de tripanosomas con una única PCR”. Desgraciadamente, esta PCR fue incapaz de distinguir las especies del subgénero Trypanozoon.
En otro artículo, publicada con sus colegas del CIRDES, el Dr. Desquesnes analiza las reacciones cruzadas observadas en una AbELISA efectuada en rumiantes poliparasitados naturalmente por T. vivax, T. congolense y T. b. brucei y las compara con las resultantes de ovinos infectados experimentalmente por T. evansi, T.
vivax y T. congolense. Pero los resultados obtenidos son solamente específicos del género y no de las diferentes especies.
El Dr. Solomon pide al Dr. C.A. Monzón que presente su ponencia.
e MONZóN C.M.,MANCEBO O.A.&RUSSO A.M.– Seguimiento de los anticuerpos en caballos infectados por T. evansi después de un tratamiento con sulfato de quinapiramina analizado por una prueba ELISA indirecta
Catorce caballos infectados naturalmente por T. evansi (detectado por el método de Woo y la inoculación de la sangre en el ratón, controlada dos veces por semana durante 60 días por tomas bisemanales en la vena caudal) fueron dejados en un potrero con seis caballos reconocidos como indemnes por ELISA y examen parasitológico. Ulteriormente, todos los caballos fueron tratados con sulfato de quinapiramina (3,5 mg/kg de peso vivo por vía subcutánea) y examinados por el método ELISA y las pruebas parasitológicas 3 meses, 4 meses, 10 meses, 12 meses y 22 meses después del tratamiento. Los anticuerpos detectados por ELISA indirecta declinaron progresivamente y desaparecieron en diferentes momentos. Dos caballos recayeron al cabo de 4 y 12 meses, pero podría tratarse de reinfecciones, corrientes en zonas como la de Formosa, donde la tripanosomosis equina es endémica. La evolución de los anticuerpos se ilustra mediante curvas.
Filip Claes expresa su interés por la ponencia del Dr. Monzón, y señala que se está experimentando actualmente en el IMT de Amberes con caballos infectados por T. evansi.
El Dr. Solomon pide entonces al Dr. Touratier que presente la ponencia de los investigadores chinos del Instituto de Parasitología Animal de Shanghai.
e LIAO DANGJIN &SHEN JIE.– Aislamiento de fragmentos de ADN a partir de T. evansi implicados en la resistencia a la quinapiramina (antricida )
Mediante técnicas de biología molecular, la creación y el estudio de numerosos fragmentos de ADNc de T. evansi han permitido aislar un gen de regulación cuya inhibición es provocada por la actividad del antricida, lo cual explicaría la resistencia de T. evansi a dicho tripanocida. Pero es posible que varios genes participen en este fenómeno.
El Dr. Jeggo estima que las ponencias precedentes ilustran bien el problema creciente de las resistencias a los tripanocidas y las investigaciones que se llevan a cabo actualmente para conocer el mecanismo íntimo de su aparición. Dado el número muy reducido de tripanocidas eficaces, es muy preocupante que su eficacia sea desafiada por este fenómeno, ya que por el momento no existe ninguna posibilidad de vacunar a los animales contra los tripanosomas.
No obstante, Filip Claes señala el desarrollo de cierta inmunidad con respecto a la surra en los búfalos de Vietnam. Esta observación lleva al Dr. Solomon a llamar la atención sobre el resumen siguiente, enviado por los colegas del Instituto de Parasitología Animal de Shanghai.
e ZHOU JINLING, WANG QUAN, ZHOU YONGZHI & SHEN JIE – Un experimento preliminar sobre la inmunoprotección resultante de la regularidad de la variación antigénica (VAT) en T. evansi
Tres lotes de ratones sirvieron para verificar el efecto de un antígeno complejo que contenía los VAT de las cepas ShTat 1 y ShTat 1.2 de T. evansi. Tras la inyección de una u otra de estas cepas o de ambas a la vez, los ratones fueron puestos a prueba por infección de 100 tripanosomas ShTat 1.2. Todos los ratones inmunizados con las dos cepas subrevivieron hasta 30 días después de la prueba infectante. Parece, pues, que dicha prueba es favorecida por cierta regularidad de la variación antigénica de T. evansi para producir un efecto preventivo.
El Dr. Touratier relaciona estos resultados con las tareas emprendidas en la Universidad Simón Bolívar de Caracas (Venezuela), donde se identificó una proteína proveniente de T. evansi, denominada “evansina”, como la “congopain.” de T. congolense que actualmente se emplea en África en experimentos de prevención, no contra el tripanosoma sino contra la enfermedad provocada por éste (programa costeado por la Unión Europea con arreglo a una INCO-DG XII14 y aceptado por el FMIA15).
Parece oportuno dar cuenta aquí de un estudio sobre la infección experimental del caballo “de pura sangre”
mediante una cepa camelina de T. evansi, cuya publicación fue anunciada el 28 de mayo de 2001 por el Dr.
Tom Norton, Consejero Veterinario del Departamento de Sanidad Animal de Dubai (Emiratos Árabes Unidos) y cuyo texto fue enviado a la secretaría del Grupo ad hoc al final de la 69ª Conferencia General de la OIE. Dicho estudio ha podido ser sometido a los miembros del Grupo para recabar su dictamen.
e WERNERY U.,ZACHARIAH R.,MUMFORD J.A.&LUCKINS A.G.– Evaluación preliminar de pruebas de diagnóstico en caballos infectados experimentalmente por T. evansi
Se inoculó por vía intravenosa a siete caballos de pura sangre indemnes de la surra una dosis infectante de 3 x 106 de T. evansi de origen camelino. Un caballo sirvió de testigo. Se emplearon luego diversas pruebas de diagnóstico.
- la prueba de centrifugación de microhematocrito (MHCT) fue la más sensible, poniendo de manifiesto los parásitos entre 1 y 3 días después de la infección;
- la prueba AgELISA detectó los parásitos entre 3 y 10 días después de la infección;
- la prueba de aglutinación del látex (LAT) dio el primer resultado positivo 3 días después de la infección;
- después del tratamiento de los caballos con sulfato de quinapiramina y/o melarsomina, la PHCT y la prueba de inoculación al ratón dieron resultado negativo.
Los títulos de antígenos según la LAT disminuyeron y volvieron a la normalidad en cinco de los seis durante el período de observación (92 a 279 días).
También disminuyeron los títulos de antígeno según AgELISA, pero no volvieron a los del período anterior a la infección en ninguno de los seis caballos inoculados.
Se emplearon tres técnicas de detección de anticuerpos: AbELISA, CATT e IFAT16 detectaron anticuerpos en los site caballos infectados, pero no en el testigo.
14 INCO-DG XII: Programa de investigación y desarrollo tecnológico de la Unión Europea en cooperación con terceros países y organizaciones internacionales
15 FMIA Foro Mundial sobre la Investigación Agronómica
16 IFAT: prueba indirecta de anticuerpos fluorescentes
Sin embargo, AbELISA no logró distinguir claramente los anticuerpos entre caballos infectados y caballos que provenían directamente del Reino Unido. Los anticuerpos aumentaron después de la infección en seis caballos, pero no en el séptimo, excepto después de su recaída.
La IFAT detectó los anticuerpos 15 días después de la infección.
La CATT dio resultado positivo en los siete caballos entre siete y nuevo días después de la infección. Pero se observaron diferencias con respecto a la importancia del grado de aglutinación, que oscilaban entre bajos y muy altos.
El Profesor Büscher, del ITM de Amberes, comunicó a la Secretaría las siguientes observaciones acerca de este artículo:
i) Aunque la idea de efectuar un estudio comparativo de la eficacia de varias pruebas de diagnóstico para la detección de la infección del caballo por T. evansi es excelente, la presentación de los “materiales y métodos” es incompleta en este artículo.
ii) De hecho, con respecto a la CATT, parece que los autores incurren en una confusión entre la CATT/T.
gambiense, desarrollada por E. Magnus para la enfermedad del sueño, y la CATT/T. evansi, desarrollada por B. Songa para las infecciones de animales por T. evansi. El principio de ambas pruebas es el mismo, pero los antígenos empleados son completamente diferentes. Los autores no indican cuál de estas dos pruebas se aplicó. Esta confusión persiste en la discusión.
iii) Por otra parte, según los “materiales y métodos”, la CATT se realizó con un agitador Titertek. No es seguro que se hayan seguido las indicaciones que figuran en la nota de acompañamiento de la CATT y es posible que el Titertek no sea adecuado para la realización de esta prueba. Ello explicaría por qué sueros preinfecciosos eran positivos y por qué el grado de aglutinación no era interpretable.
iv) Los autores declaran justificadamente que los resultados de la CATT no eran interpretables. Por eso, proponemos examinar nuevamente esos sueros, si todavía están disponibles, con una CATT/T. evansi y un personal de laboratorio adiestrado antes de decidir cómo proceder para comparar las diferentes pruebas.
v) Entretanto, nuestro laboratorio ha desarrollado otras pruebas (LAT, ELISA e inmunotripanólisis) que podrían aplicarse a la colección de sueros recogidos en este estudio con caballos infectados experimentalmente.
4. Infección por Trypanosoma vivax en ausencia de glosinas: África y Sudamérica
El Dr. Solomon anuncia que se ha recibido un informe de Sudán a este respecto en la Secretaría de la 26ª reunión del CSIRLT17 que va a desarrollarse en Uagadugú (Burkina Faso) del 1º al 5 de octubre de 2001.
El Dr. Jeggo y el Dr. Musiime intervienen sucesivamente y de común acuerdo para poner de relieve que la aparición de las infecciones por T. vivax en los bovinos no es posible en ausencia de glosinas. Los casos que se han señalado en Sudán en bovinos fuera del límite de la zona infestada por glosinas (tsetse belt) se deben probablemente a la presencia de unas pocas glosinas que han escapado a las encuestas de detección o traídas por el viento. Deberían realizarse encuestas epidemiológicas detalladas. El Dr. Jeggo recuerda el éxito notable alcanzado en Zanzíbas por la acción conjunta OIEA18/FAO19 con el método de los machos estériles, que permitió desembarazar de glosinas una zona de 700 km². Ello demuestra que gracias a este método, asociado a un uso programado de insecticidas, es razonable esperar una erradicación progresiva que se extienda poco a poco a otros países de África.
Sin embargo, el Dr. Touratier recuerda los hechos que se habían señalado en las diversas reuniones del Grupo ad hoc de los años anteriores acerca de la presencia y persistencia de las infecciones de bovinos por T. vivax en zonas desembarazadas de glosinas (ver al respecto la declaración del Dr. Chizyuka sobre Zambia en 1993, el informe del Dr. Y. Chollet sobre el norte de Camerún en 1995, la ponencia del Dr. D. Cuisance sobre la República Centroafricana en 1996). También menciona las discusiones en Internet en 1999 provocadas por la aparición de numerosos casos de infección de bovinos por T. vivax en Brasil (Pantanal) y varios artículos publicados en la
17 CSIRLT: Consejo Científico Internacional para la Investigación y la Lucha contra las Tripanosomosis
18 OIEA: Organismo Internacional de Energía Atómica
19 FAO : Organización de las Naciones Unidas para la Agricultura y la Alimentación
Revue de Médecine vétérinaires des Pays tropicaux entre 1996 y 1999. Periódicamente se señalan focos en Venezuela, Colombia, Brasil y, muy recientemetne, en Bolivia. Aunque las condiciones son muy diferentes en los continentes africano y sudamericano, este problema merecería ser estudiado más detenidamente, pues es indudable que después de la eliminación de las glosinas es necesaria durante cierto tiempo una vigilancia muy atenta de las zonas consideradas, y que el ejemplo sudamericano será particularmente provechoso.
El Dr. Monzón confirma que se han observado en la Argentina infecciones por T. vivax y que su límite extremo es la región septentrional.
Entretanto llega a la Secretaría la breve ponencia siguiente:
e DELAFOSSE A. – Epidemiología de la infección de bovinos por T. vivax en una zona del lago Chad (diciembre de 1998-enero de 2000).
Se realizó un estudio epidemiológico (de prevalencia e incidencia) con dos métodos, examen parasitológico y ELISA indirecta, en una zona de Chad desprovista de glosinas, con un conjunto de un millar de bovinos. Los dos métodos arrojaron resultados muy diferentes:
- para la prevalencia: 1,5 % con el examen parasitológico y 42 % con ELISA indirecta;
- para la incidencia media:: evaluación del 15 %.
Esta disparidad entre las cifras de prevalencia y de incidencia puede explicarse por el uso masivo de tripanocidas (sobre todo de diminazen.e) por los ganaderos de la zona estudiada.
El análisis de las variaciones estacionales contribuye a explicar la existencia de la infección tripanosómica durante la estación de trashumancia en las islas del lago (estación seca) y durante el período de descanso en tierra firme (estación húmeda y comienzos de la estación seca).
La existencia de poblaciones de Glossina spp. en dicha zona es muy improbable desde la observación, hace largo tiempo (1966), de G. tachinoides a lo largo del río Chari hasta la margen meridional del lago Chad (Gruvel, 1966).
Encuestas epidemiológicas recientes (D. Cuisance, 1996) han mostrado que el área de distribución de G.
tachinoides se ha reducido notablemente. Esta especie sólo se caza eficazmente cerca de los 10º de latitud norte (más de 500 kilómetros al sur de la zona estudiada). La reducción se ha explicado por la destrucción de galerías boscosas que anteriormente se extendían a lo largo del río. Finalmente, el lago está situado en zona saheliana (e incluso en la zona sahelo-sahariana) alrededor de la isohieta 250 m/m. Este factor climático parece ser potencialmente nefasto para las poblaciones de Glossina spp.
En cuanto a la labor epidemiológica cumplida por Y. Chollet en 1994/95 en el norte de Camerún, en los alrededores del laboratorio nacional veterinario de Garoua, no hubo ningún seguimiento después de su partida. El lugar estudiado por él, en esa zona de Garoua, está muy cerca de los 10º de latitud norte. Esta zona está en contacto con el Mayo-Kebbi chadiano, infestado de Glossina spp., por lo cual pueden producirse ciertas infestaciones de proximidad.
5. Informaciones sobre el desarrollo de los programas contra las tripanosomosis africanas (PAAT y PATTEC)
El Dr. Solomon aporta precisiones sobre las actividades del PAAT20 y los objetivos de la PATTEC21.
El PAAT se creó hace cinco años bajo la égida de tres organizaciones de las Naciones Unidas: OMS, FAO y OIEA, en relación con la OUA/BIRA , para constituir un foro internacional en todos los sectores de la lucha contra las glosinas y las tripanosomosis: aportación de expertos, organización de reuniones especializadas, desarrollo duradero de las producciones animales y de la agricultura, etc.
La PATTEC fue fruto de una declaración de los jefes de Estado africanos de la OUA que se basaba ampliamente en la labor del OIEA para la erradicación de las glosinas (campaña llevada a cabo con éxito en la isla de Zanzíbar mediante la técnica de los machos estériles), con arreglo al programa conjunto OIEA/FAO y con el departamento de cooperación técnica del OIEA.
20 PAAT : Programa contra las Tripanosomiasis Africanas
21 PATTEC : Campaña Panafricana de Erradicación de la Mosca Tse-tsé y la Tripanosomiasis
La 26ª Conferencia del CSIRLT, reunida en Uagadugú (Burkina Faso) del 1º al 5 de ocubre de 2001, fue elegida para el lanzamiento oficial de la PATTEC. Se está dando su forma definitiva a los programas de aplicación, que se irán cumpliendo progresivamente, zona por zona. La primera fase cubrirá Etiopía y Uganda y tendrá por objetivo la erradicación total de las glosinas.
El Dr. Musiime indica las principales etapas que deberán cumplirse: establecimiento del programa de ejecución, reorientación eventual, financiación por la Unión Europea después de una evaluación más precisa, reintroducción de ganado en las zonas saneadas. Todo ello con la participación y la ayuda de cada uno de los gobiernos de los países beneficiarios.
6. Lucha contra las tripanosomosis animales no transmitidas por glosinas 6.1. Tripanocidas
A pesar de los esfuerzos desplegados por la investigación fundamental, pero en ausencia de una investigación aplicada debida a la falta de fondos públicos o privados, no se está desarrollando actualmente ninguna molécula en el ámbito de las tripanosomosis animales.
La Secretaría recibió dos breves ponencias que dan cuenta de resultados favorables obtenidos por una asociación de diaceturato de diminazene, antipirina y procaína (TRYPAN):
e ZHANG XICHEN, YAO LONG QUAN & BOURDICHON A.J. – Farmacocinética y residuos tisulares de diminazene-liposoma.y de TRYPAN en el conejo.
e UPPAL S.K.,JUYAL P.D.,DUA K.,CHABRA S.&RANDHAWA C.S – Effet du di-acéturate de diminazène dans la trypanosomose clinique du chien.
6.2. Foro Mundial sobre Investigación Agronómica (FMIA)
La Secretaría del Grupo ad hoc no ha recibido ninguna información particular sobre este Foro desde su creación en Desde en mayo de 2000. Dicha organización se va integrando progresivamente, en conexión con el Banco Mundial con sede en Washington (Estados Unidos), donde tiene un representante, con el ILRI en Nairobi (Kenia), con la FAO en Roma y con el CIRAD/EMVT22 en Montpellier (Francia). El tema “Lucha contra las tripanosomosis animales” ha sido objeto de una ponencia detallada en la precedente reunión del Grupo ad hoc en mayo de 2000, y se ha creado un INCO financiado por la Unión Europea (DG XII) para desarrollar el estudio de métodos de control mejorado de las tripanosomosis animales e inducir una tripanotolerancia en los bovinos receptivos.
6.3. Cooperación europea en materia de investigación científica y técnica(UE/DG XII)
Ya se ha descrito (ver 1.1.) la actividad de este programa de la Unión Europea, a propósito de su Congreso de Lisboa y de las informaciones científicas recogidas allí. En cuanto a la búsqueda de moléculas activas contra las tripanosomosis animales, la. COST puede desempeñar un papel favorable estimulando la investigación fundamental.
7. Reuniones internacionales programadas para un futuro próximo atinentes a las tripanosomosis animales no transmitidas por glosinas
– 5th COST Meeting, Londres (Reino Unido), del 21 al 25 de junio de 2002, London School of Tropical Medicine and Hygiene. Informaciones: Dr. Simon Croft.
– Xe Congreso Internacional de Parasitología, ICOPA X, Vancouver, Canada, del 4 al 10 de agosto de 2002.
– Congreso Mundial Veterinario, Túnez (Túnez), septiembre de 2002.
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.../Anexos
22 CIRAD/EMVT : Centro de Cooperación Internacional en Investigación Agronómica para el Desarrollo - Departamento de Ganadería y de Medicina Veterinaria Tropical
Anexo I REUNIÓN DEL GRUPO AD HOC DE LA OIE
SOBRE LAS TRIPANOSOMOSIS NO TRANSMITIDAS POR GLOSINAS Paris, 27 de mayo de 2001
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Orden del día
1. Informe provisional del Secretario General
2. Informaciones comunicadas a la OIE por los Países Miembros 3. Durina y discriminación entre T. equiperdum y T. evansi
4. Infección por Trypanosoma vivax en ausencia de glosinas : África y Sudamérica
5. Informaciones sobre el desarrollo de los programas contra las tripanosomosis africanas (PAAT y PATTEC) 6. Lucha contra las tripanosomosis no transmitidas por glosinas
7. Reuniones internacionales programadas para un futuro próximo atinentes a las tripanosomosis no transmitidas por glosinas
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Anexo II
REUNIÓN DEL GRUPO AD HOC DE LA OIE
SOBRE LAS TRIPANOSOMOSIS NO TRANSMITIDAS POR GLOSINAS Paris, 27 de mayo de 2001
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Lista de los participantes
Docteur H.M. Solomon (Presidente) Director, OAU/IBAR
P.O. Box 30786, Nairobi KENIA
Fax : (254) 2 22 05 46
Docteur L. Touratier (Secretario general) 228 Boulevard du Président Wilson 33000 Bordeaux
FRANCIA
Tél. : (33) 05.56.44.89.29
E-mail : louis.touratier@minitel.net Fax : 05 57 57 10 15
Argentina
Docteur C.A. Monzon CEDIVEF
P.O. Box 73 Formosa Austria
Dr Martyn H. Jeggo
Joint FAO/IAEA Division of Nuclear Techniques in Food and Agriculture Department of Nuclear Sciences and Applications
Wagramerstrasse 5 P.O. Box 100 A-1400 Wien
Tél. : (43-1) 260.02.60.53 Fax : (43-1) 260.02.60.07 Email : m.h.jeggo@iaea.org Belgica
Docteur F. Claes Tropical Medical Institute Nationalestraat 155 B-2000 Anvers
Tél : (32.3) 247 66 66/24 76 393 Fax : (32 3) 216 14 31
Francia Dr R. Devolz FRANCE GALOP 46 Place Abel Gance 92655 Boulogne Billancourt Docteur Ph. Tessier Directeur technique
Département tropical vétérinaire SANOFI Santé animale
La Ballastière B.P. 126
33501 Libourne Cedex
Email : philippe.tessier@cevavet.com Kenia
Dr J.T. Musiime Ag. Director
OUA-BIRA/OAU-IBAR Organisation for African Unity
Interafrican Bureau for Animal Resources P.O. Box 30786
Nairobi
Tél. : (254-2) 334 550
Fax : (254-2) 226 565/ 220 546 Email : jotham.musiime@oau-ibar.org
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