HIPORREACTIVIDAD DEL PLASMA RICO EN PLAQUETAS FREN- TE AL COLÁGENO: UN POSIBLE MARCADOR DE LA ATEROSCLEROSIS

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Rev Cubana Angiol y Cir Vasc 2001;2(1):68-72

Instituto Nacional de Angiología y Cirugía Vascular

HIPORREACTIVIDAD DEL PLASMA RICO EN PLAQUETAS

FREN-TE AL COLÁGENO: UN POSIBLE MARCADOR DE LA

ATEROSCLEROSIS

Dra. Milagros García Mesa,1_{Dr. Arquímedes Díaz Batista}2_{y José I. Fernández Montequín}3

RESUMEN:

Las plaquetas tienen una participación importante en la aterogénesis y la forma-ción del trombo arterial, de ahí que el estudio de su funcionalidad parezca potencialmente útil como marcador de aterotrombosis. Con el objetivo de evaluar la reactividad plaquetaria en sujetos con diferentes manifestaciones clínicas de aterosclerosis, se compararon 63 pacientes con macroangiopatía diabética, 54 pacientes no diabéticos con diferentes manifestaciones clínicas de aterosclerosis y 68 voluntarios sanos con respecto a la agregación plaquetaria inducida en el plasma rico en plaquetas por diferentes concentraciones de difosfato de adenosina (ADP) y de colágeno. No hubo diferencia entre los grupos con respecto a la reactividad plaquetaria al ADP, pero la respuesta al colágeno estuvo de forma significativa disminuida en ambos grupos de pacientes. Los resultados sugieren que la hiporrespuesta del plasma rico en plaquetas frente al colágeno pudiera ser útil como marcador de aterosclerosis.

DeCS: AGREGACION PLAQUETARIA/efectos de drogas; ATEROSCLEROSIS; COLAGENO; ADENOSINA

DIFOSFATO.

1_{Doctora en Ciencias Biológicas. Investigadora Titular.} 2_{Doctor en Ciencias Médicas. Investigador Titular.}

3_{Especialista de II Grado en Angiología. Investigador Auxiliar.}

No existe ninguna duda de la partici-pación de las plaquetas en la aterogéne-sis y los eventos trombóticos arteriales, prueba de ello es el incremento de los niveles de constituyentes de los gránu-los plaquetarios en gránu-los plasmas de suje-tos con manifestaciones clínicas de

aterosclerosis.1_{Esto sugiere la posibilidad}

de emplear la reactividad plaquetaria como marcadora de la ateros-clerosis.

El cumplimiento de este propósito, sin embargo, ha tenido dificultades, ya que se trata de un tipo de célula susceptible a la activación por el contacto con

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cies o por agitación, por lo que la presencia en el plasma de los productos de la reac-ción de liberareac-ción plaquetaria, no es un in-dicador lo suficientemente específico como para ser utilizado en la práctica clínica como marcador de aterosclerosis.2

La detección de plaquetas circulantes portadoras de P selectina en su superficie pudiera tener valor diagnóstico,3_{pero se}

trata de una metodología costosa accesible sólo a un número reducido de laboratorios. El método turbidimétrico de Born4_se ha utilizado durante mucho tiempo en los laboratorios de Hemostasia para medir la funcionalidad de las plaquetas así como para caracterizar el comportamiento de es-tas células en pacientes con las manifesta-ciones clínicas de la aterosclerosis.5-9_Estas

investigaciones han tenido resultados di-versos, de los cuales resulta difícil extraer conclusiones. En esto puede haber influi-do el hecho de que se han empleainflui-do dife-rentes niveles de concentración de los agonistas de la agregación plaquetaria y/o a factores genéticos.

Hace algunos años en nuestro labora-torio se realizó la evaluación de la reactividad plaquetaria de los plasmas ri-cos en plaquetas de pacientes ateros-cleróticos,10_{sin embargo, en esa ocasión}

no se evaluó la respuesta al colágeno y se utilizó una concentración única de difosfato de adenosina (ADP). El presente trabajo fue realizado con el objetivo de evaluar la reactividad del plasma rico en plaquetas de pacientes ateroscleróticos diabéticos y no diabéticos frente a diferentes concentracio-nes de ADP y colágeno.

Métodos

Participaron en este estudio 63 pacien-tes diabéticos tipo II con macroangiopatía y sin lesiones externas (22 hombres y 41

mujeres, edad 53,1 ± 58 años), provenien-tes del servicio de Macroangiopatía Diabé-tica del Instituto Nacional de Angiología y Cirugía Vascular (INACV) y 54 pacientes no diabéticos con historia de diferentes ma-nifestaciones de aterotrombosis (21 hom-bres y 33 mujeres, 59,6 ± 61 años) prove-nientes de la consulta de hipercoagulabi-lidad del INACV.

Los controles fueron 68 sujetos sanos (23 hombres y 45 mujeres, 60,8 ± 71 años), que participaban en chequeo médico laboral. Los sujetos dieron su consentimiento a participar en el estudio después de conocer las características del mismo. Todos negaron haber consumido algún antiagregante plaquetario u otros fármacos que modifican la agregación plaquetaria al menos 2 sema-nas antes de acudir al laboratorio.

En el laboratorio se obtuvieron mues-tras de sangre de una vena antecubital con el empleo de jeringuillas plásticas dese-chables, en el horario de 7:30 a 09:00 a.m., después de 12 a 14 h de ayuno. La sangre fue vertida en tubos plásticos que conte-nían 0,1 volumen de citrato de sodio 3,8 % y centrifugada 5 min a 150 × G para obtener el plasma rico en plaquetas (PRP). El resto fue centrifugado 15 min a 1 000 × G para obtener el plasma pobre en plaquetas (PPP). La agregación plaquetaria fue determi-nada por el método turbidimétrico de Born.3 En cubetas de un agregómetro Elvi 840, se vertieron 200 µL de PRP que contenían 200 a 250 plaquetas/ × 109_{/L , previo ajuste con}

PPP autólogo. Se indujo la agregación plaquetaria por adición de 20 µL de una solución de colágeno o ADP (Sigma Chem), después de 2 minutos de incubación a 37 °C con agitación a 1 000 rev./min. El cambio de la transmisión de luz a través de la muestra fue recogida en un registrador Omni-Scribe, calibrado mediante el empleo del PRP (0 cm en la escala de deflección) y PPP (16 cm en

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la escala de deflección), equivalentes a 0 y 100 % de agregación plaquetaria respecti-vamente. Los resultados fueron expresados en porcentaje de agregación como medida relativa de la amplitud (cm) del incremento en la transmisión de luz a través del PRP.

Como parte del análisis estadístico se realizó la comparación entre los 3 grupos de sujetos mediante el análisis de varianza. Se consideraron significativas las diferen-cias con p < 0,05.

Resultados

Se emplearon 3 concentraciones de ADP y 3 de colágeno con el objetivo de evaluar la influencia de la enfermedad aterosclerótica diabética y no diabética so-bre la reactividad de las plaquetas frente a diferentes magnitudes de estímulo.

La agregacion plaquetaria inducida por ADP fue dependiente de la concentración los tres grupos de sujetos estudiados y no hubo diferencia significativa entre los gru-pos a ninguna de las concentraciones.

La agregación plaquetaria inducida por

colágeno fue dependiente de la concentra-ción en el grupo control de una manera cre-ciente entre 0,3 y 3,0 mg/mL.

En los grupos de pacientes diabéticos y no diabéticos, la respuesta de agregación plaquetaria fue marcadamente inferior con respecto a la ocurrida en los controles en las 3 concentraciones empleadas.

Como puede observarse en la tabla, a diferencia de los controles sanos, la respues-ta a las concentraciones 0,3 y 1,0 mg/mL fue similar en los dos grupos de pacientes.

Discusión

El ADP y el colágeno son estímulos fisiológicos para la agregación plaquetaria, pero difieren en su ubicación tisular, en los receptores de la membrana plaquetaria que estimulan y los mecanismos mediante los cuales activan a estas células. Una revi-sión sobre el tema ha sido realizada por

García y Coma.11

En la investigación realizada

previa-TABLA. Agregación plaquetaria en plasma rico en plaquetas de controles sanos, pacientes con macroangiopatía diabética y pa-cientes con otras manifestaciones ateroscleróticas

Grupos

Control Diabéticos No diabéticos Estímulo N = 68 N = 54 N = 63 ADP (µmol/L) X ± DS X ± DS X ± DS P 0 , 2 13,8 ± 15,8 16,0 ± 17,1 16,9 ± 22,0 0,2557 1 , 0 33,6 ± 28,0 35,3 ± 24,2 32,4 ± 24,2 0,4087 3 , 0 54,0 ± 27,8 44,0 ± 22,2 55,0 ± 2 , 3 0,1732 Colágeno (µg/mL) 0 , 3 13,6 ± 10,4 4 , 1 ± 10,1 4 , 7 ± 13,3 0,0006 1 , 0 20,2 ± 22,7 7 , 2 ± 14,5 4 , 7 ± 14,0 0,0108 3 , 0 5 7 ± 32,9 20,2 ± 23,5 20,2 ± 23,0 0,0004

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mente en nuestro laboratorio,10_la

respues-ta de agregación plaquerespues-taria inducida con la concentración de ADP de 2,7 µmol/L en pacientes con enfermedades estenooclu-sivas de miembros inferiores, estuvo den-tro de los límites de referencia para este la-boratorio, sin embargo, se encontró un in-cremento del malondialdehido formado por plaquetas estimuladas por N etilmaleimida, que ocurre por activación de la fosfolipasa A2 en la membrana plaquetaria.12_Esto

su-giere la existencia de modificaciones a nivel de la membrana celular.

Los resultados de la actual investiga-ción demuestran que la reactividad plaque-taria al ADP en los sujetos con diferentes mani-festaciones clínicas de la aterosclerosis, no difere de los sujetos sanos, resultado que concuerda con el estudio anterior, mas encontramos una hiporrespuesta plaquetaria al colágeno en los pacientes, fueran diabéticos o no, lo que sugiere que estamos en presencia de un fenómeno relacionado con la ateros-clerosis. Existen 3 alternativas para explicar este resultado:

• El plasma de los pacientes contiene un elemento que inhibe selectivamente el mecanismo de activación plaquetaria que desencadena el colágeno.

• Las plaquetas de los pacientes tienen

menor cantidad de receptores para el colágeno en su membrana externa.

• Las membranas externas de las

plaquetas de los pacientes poseen re-ceptores de membrana con menor afini-dad por el colágeno.

La aterosclerosis trae como conse-cuencia la reducción de la supervivencia plaquetaria y, por ende, el incremento del recambio celular. Esto pudiera influir en la composición de la población celular con el predominio de plaquetas de menor vo-lumen, que son menos reactivas.13,14_Esta

pudiera ser otra explicación al resultado obtenido y, aunque en principio debiera afectar por igual a la reactividad plaque-taria frente a los 2 agonistas, no debe ol-vidarse la influencia que puede tener el hecho de que, según se ha planteado, la agregación inducida por ADP en plasma citratado es un fenómeno inespecífico.15

En el futuro deben realizarse investi-gaciones para comprobar la veracidad de las hipótesis propuestas, no obstante, los resultados sugieren que la hiporrespuesta del plasma rico en plaquetas frente al colágeno pudiera ser útil como marcador de aterosclerosis.

SUMMARY:

Platelets have an important participation in the atherogenesis and formation of the arterial thrombus and that’s why the study of their funcional capacity seems potentially useful as a marker of atherothrombosis. In order to evaluate the platelet reactivity in subjects with different clinical manifestations of atherosclerosis, 63 patients with diabetic macroangiopathy, 54 non-diabetic patients with different clinical manifestations of atherosclerosis and 68 sound volunteers were compared as regards the platelet aggregation induced in platelet-rich plasma by different concentrations of adenosine diphosphate (ADP) and of collagen. No difference was observed between the groups in relation to the platelet reactivity to ADP, but the response to collagen was significantly reduced in both groups of patients. The results suggest that the hyporesponse of the platelet-rich plasma to collagen may be useful as a marker of atherosclerosis.

Subject headings: PLATELET AGGREGATION/drug effects; ATHEROSCLEROSIS, COLLAGEN; ADENOSINE

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Recibido: 26 de septiembre del 2000. Aprobado: 2 de noviembre del 2000.

Dra. Milagros García Mesa. Instituto Nacional de Angiología y Cirugía Vascular.

Calzada del Cerro No. 1551, esq. Domínguez, Ce-rro, Ciudad de La Habana, Cuba.