Evaluación del efecto tóxico de los extractos vegetales acuosos Barbasco (Phyllantus sp ) Neem (Azadirachta indica) y Marigol (Tagetes patula) sobre los microorganismos Trichoderma sp y Metarhizium sp

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(1)Evoluoc¡ón del efecfo tóxico de losextroclosvegetolesocuosos Borbosco(Phyilontussp.) Neem (Azodlroc hto ¡nd¡co) y N/origol(Iogetespotu/o) LuisE. Gómez Colcedol Moiho Cecil¡o Aguirre G.'? sobrelosmicroorgonismos sp.Y Metorhiziumsp. J. Dimos Seguro.3 Tr¡chodermo. ARNCULO TECNICO. ABSTRACTRESUMEN T¡fb: Evoluol¡on of loxic effecl of végetol exhocl Borbosco ( Polygonuñ h¡drop¡pero¡desl Neem ( A2ddr?dchfo L¡dico) ond Mor¡gol ( Iogetes pqtu/qJ on lhe microorgon¡sms Trichodemq sp ond Meld¡hiz¡um. Thisexperimenlwos coried out in the Phitopotology oborotory of the Reseorchcenler "Noloimo, of Corpoico, locoled in the munc polity of ElEspinol. deportrnenlof lolno, belween morch ond ougust of 2003. Fofihe teslsvegelol exlrocts af ¡\eem lAzod¡t¡1chta ¡r¡dlco ), Ivorigol I ¡ogetes pcdulo ) ond Borbosco I Phylonhts¡chfyomethius) ondlhe mcfoorgonisrns Tr¡ahoderma sp ond Meforhizium sp Underloborqlory cond tions five concentfolions l O % , 5 L , 1 O % l, 5 % o n d 2 0 % ) o fe o c h o n e o f the three exirqctsversusthe groMh of lhe ivo micfoorgqnismswere evoluoted The vorioblesgrovv4hrote, ( rodiql grov"4h of oiocon'roler fJnguslond the mini'nu-r inhibrtion concenlfotion volue were meosured. An experimenlol desi9n completely rondomzed wos used ond the observolions. El experimentose llevó o cobo en el Loborolorio de Fitopolologíodel Ceniro de Invesllgoción Nqtqirfra de Corpoico, locolizodo en el municrpio de El Espinol,departomenlo del Tolmo, enlre los meses de morzo y ogosto de 2003, Poro lo pruebo se ufilizoronexlroclos vegetoles ocuosos de Neenn (Azodkochto lndlcc), |\/origol (Iogefos pcrtulol y Borbosco fPhyllonthus ¡chthyomelhlus) y los rnicroorgonismosbloconlrolodoresh¡choder mq sp y Metorhiz¡umqp. Bojo condiciones de lo boralofio se evoluofon cinco concentrcc¡ones P7., 5'/", )O7", 15"4 y 2O"A)de codo uno de los lres extroctos ocuosos, frenle ol crecimiento de los dos microorgonismosbiocontrolodofes.Se evolucron los voriobiestoso de crecimiento (Creclmiento rod ol de los hongos bioconlrolodores) y el volor de la concenfoc ón minimo de inhibición. Se ulilizóun diseño complelomente ol ozor y los observocionesse onolizoronmedicnte pru+ bos de regresióny correloción. En conclusión se puede ofirmofque ningunode loslresexhoclosen os concentfociones evoluodos, ofecton sevefo menle o los hongos Metorh¡z¡um sp.y Trichadermo .!o,y que tonto el Neem como el Nlorigolen concentroc ones superioresol 20ol.puede ienel un efecto tunguicldo contro el hongo l¡lc,hodermo qo lguolmente con respecloo Marigol,es posibleque en concenfociones mós oltas, lengo efeclos tóxicos. wereqnlzedthroughregrellon ond coÍeloiionlests, Theresults showedtholnone .^^'ré dl Ara+^^n¡t tñ .^ oflhe extractsln lhe differentconcenlrqiions evoluoledoffectlhefungus Polobros c/ovesl Exiroctos ocuosos vegetoles, Trichode(masp ond Meforh¡ziumI Neemoswellos MorigolInconcenlfqtions Neem. Borbosco,N4origol,Irichode¡¡¡o, Metorh| greoferthon20%con hoveq tungicideeffecl rn,ñ .^ñn^l hii^llñi^^ ogo nst lrlchodermo sp. Relotedto Morigol,it lspossible thqt in hgher concentrotlons hqstoxicseffects an Melath¡ztumsp.. Keyú¡ordsrVegelolexlfocls,Neem Bofbasco,Mo igol Tt¡clÉ<F.rn)o, ^/1/"-tarl",2¡)¡n, biologicolconirol A M sc MIP c L Notolmo, CORPOICA"hoslo Felxero de 2@¡ ,o E "DDlAMsc MIPC l, ¡lololñro,CORPO|CA ,au Te M P C l,Nohr¡ñro, CORPOCA. Volumen7,SegundoSemesire2003 RE\ISIA Ná7¿^.1-4,. C) <1.. ll I.

(2) GCI\,4F¿r F.e o r lodo óhco de! 8dDño. N€ñ. | ¡v1o'901{'E e lrcr{Kie¡ñ.p. v Uétdnr¿ñ. t). INTRODUCCION,. Losplonlos conlienen sustonciosque pueden ocosionor olteroc¡oneser] el pfoceso olimenticio de los ¡nsectos,un tipo de ellos son los llomodos ontiolimenlorios.Se colculo que oproximodomenle unos I 0,000 metobolilos secundoriosse hon extroÍdoquímicomente de voÍios especies de plonlcs, pefo se consldefc que su numero sobreposo los 400,000y de eslos mW poco se hon ensoyodo como toles, fPolomino,crtodo por Aguirre.2000J. Esfudioshon demoslrodo que exlrcctosocuo sos de semillosde Neem (Azod¡rochto ind| co) reducen lo oviposiciÓny lo viobilidod de huevos.Ensovosen compo con dosisde l5 y 30 g de semillo de Neem/lilrode oguo reduieron lo oviposicióne lmpidieron lo colonizoción de lo mosco blonco y crisomélidosen el cultivo de fúol. lguolmente extroctos de Neem fueron eficoces en el conlrol de enfermedodes cousodos por hongos ol inhibir lo germinoción de esporos, el crecimienlo de micelio y lo esporuloción (Aguire, 2000) Extroctosocuosos de Florde muerto (Togefes pofuiol hon sido ulilizodosen el conirol de mosco bloncc en lomcte de meso con excelentes resultodos,Lo Florde muerlo es lombién utilizodoen sislemosde rotoción de cul' tivos poro el conirol de plogos del suelo' especiolmente nemótodos y lcmbién como repelente de moscos coseÍos. El Borbosco lPhyl/onthus ¡chthyomethius o Tephros¡oemorg¡noto) tiene suslonciosroTenoi des de orto podelnseclicido y rópido degrodoción,coroclerísticosque le pelmfen controlor efectivomente muchos plogos de cullivos y con mW boio toxicidod poro momiferos lrichoderma hoce pode de un pequeño grupo de hongos benéficog los cuoles son considerodos como ogenies de control biologico Suoclividod es porosilicoo fiovés de lo supervivenciosobreel hcrlgo potógeno {Soit 2000) Ir¡chodemo esló regisfodo como un biofungicido en poíses como Froncio, el Reino. lJnrdo,Suizo,Bélgrco,Chile, Nuevo Zelondo y EstodosUnidosy eslo pendiente su regislroen muchos oiros poíses (Soil 2000) Elhongofriohodermopuede inhibrrlospotógenos por medio de ontibiólicoso degrodondo los paredes celuloreso fovés de enzimostoles como los quitinosos,- l ,s-gluconosos, proteosot monnososy oiroshydrolosos(Limón ,1999) Adernós es complelomente inoet ol. cuo Doro los humonos. En 55 oños de ¡nvesligociÓn con esie hongo, nuncc se ho teporlo do cousondo reocciones1óxicos(Soit 2000) Se ho observodo que olrededor de 40 especies pertenecienteso 25 fomilios poseen oclividod biológico sobre hongos, inseclos, rnoluscos y roedores. Enlre los lomilias mós importonles.tonto por el número de esp€cies como pof lo versaiilidodde su octividod, se cuenicn lossigu¡enlesiNlelioceoe Solonoceoe Asteroceoe y Foboceoe, que se uson yo en el conlrol de plogos, ljno de los exiroctos vegetoles mÓs estudiodos en los úllimosaños es el oblenido del ór bol neem lAzod¡rochto¡nd¡col, con comprobodo efecto sobreinsectos,ócoros y nemolG dos, lguolmenle el extroclo de la llomodo Flor de muerlo o lvlorigol [Iogeies sp) ulilizodoen el control de mosco blanco y sobre todo como plonlo trompo de nemótodos, De iguol monero el Borbosco [Phyl/onlussp.) con ollo poder insecticido y de rapido degrodoción oue le oermiten controlorefectivomente mu chos plagos del suelo, Sinemborgo oÚn no se ho determinodo si el poder toxicdógico de estos extrocios veg€ic les es seleclivo cc,n dgunos microorgonismos del suelo, o en qué concentociones estos exfoctos no oerjudicoíon lo founo beético. El presenteexperimenlo tiene como objetivo volidor lo toxicidod de los extroctosvegeloles ccuosos sobre lo edofofouno microbiono, concfelomenle sobre los hongos Meto¡hZlum sp y frichodermo sP.. REVISTA ^Jrtáir*¿, Volumen7,Segundosemglre 2OO3.

(3) lovLl,. L. -t o ¡ fa 1) ¡or\-o oe do bo\co N#m r'Mo 90/ ¡ooo r. / ode -\] É'. vFio .f L4. o. Y IVETODOS I\4ATERIALES. Elexperimenlo se llevóo cobo en eLLaboralorio de Frlopotologiodel Centro de lnvesligocronesNotoimo de Corpoico, locolizodoen el munic pio de El Espnol, deporlomenio del Tolimo,entre os mesesde morzo y ogosto de 2003. Poro lo pruebo se utilizoronexlToctosvegeloles ocuosos de Neem lAzodirochto ¡nd¡co), Ny'orlgol [Iogefes potulo) y Borbosco (Phyl/onque son usodos poro el thus ¡chthyameth¡us), conirol de plagcs en el cultivo de tomole de meso (lycopers/bom scu/enfum) y los m cfoorgonismos bioconfolodores Tr¡chadermosp y Metarhizium sp. Bolo condiciones de loboroloriose evoluoron cinco concenficciones(0%,5%, 14"4,15%y 20%l de codo uno de los tresexiroctosocuosos frenle Ol Crec.mientode los dos micIOOgonismos tliocontrolodores, Porolc pruebo, se pesoron y mo ieÍon 50 9romos de semilloseco de Neem, 50 grornos de floresfrescos de lvlorigoly 50 gromos de holos y lollos de Borbosco;luego a codo uno de eslospreporodos se ogregoron 100 ml de oguo desfilodo esléri y se colocoron c hervif o 100'C por espocio de 15 minulos.Uscndo goso estérilse procedió o filtrorcodo uno de estos sustonciosporo oblener 100 ml de exlrocto vegetol. Se envosoronen froscoscolof ómbcr y se guordoron en lo nevero o 4"C, Lo evolJocionse eoliTopor medio de o si guiente melodo ogío: sobrecojos de Pelricon. cloronfenj medio PDA[Popo-Dexlroso-Agcr]+ col, se diluyó codo exirocto en su concenlroción correspondienteo evoluori luego e1 el cen ro oe codo cojo se co ocó Jno 'odojo de medio con crecimienlo de codo uno de los hongos biocontrolodoresjse feolizoronclnco repelicLonesPor trotomiento. 'lrotomienlosse Los cojos con los drferenles llevorono cómoros de incubcción o uno lemperoluro de 28'C por 3 díos, con olternoncio de uz y oscuridodde I2 horos. Lostrolomienlos se evoluoTona las 24, AB y 72 horos,por medio de lo medición en milíme'rosde c eci'niento rodiolde losmicroorgo nismos bioconfolodores sobre el med¡o. Adernós en codo evoluoción se reolizoron montojesol rn croscopio con el objeto de observoTesporulocionesde crecimienlo de los ho.]gos oroconlolodores porned o de porfooblelos eslérilesque conleníon finos películos del med o con codo uno de los exlrocios o evoluoT Se evoluoron los sjguienlesvoriobles: * Tosode crecimienlo (Crecimientorodiol de los hongos broconlroodores) * Volorde lo concentroción mínimo de lnhibi crón Se ut llzó un diseño complelamente ol ozor y los observocionesse onolizoronpor medio de p Letros de regresiony co,reloción.. Y DISCUSION RESULTADOS Como se oprecio en los Graficas I , 2 y 3 en lo evolucción reolizodoo lcs 24 horos,no se obsefvó ningún Jipo de crec mienlo de Melohizium sp., con respecfo o los concen fociones de Borbosco,Neem y l\4origol,esto no significo que los exlroclos vegetoles ho-. volüre- / SegLtose¡es're 2003 RrvS-a¡Vr¿Á;,r.¡,. yon lenido un efeclo lóxico sobre el m croorgonismo, es posible que se debo mós o uno corocterístico ptapia de Metorh¡zlurn sp , con respec'ioo su velocidod de crecimienfo en un medio odificiol.

(4) GOMC¿ L.E e] ol E/@¡o /ddno del6o¡bo5co. Neú. y MqtqoteÚe. i¡cha.|oñc. Fy ¡\¡etúÍhizium I. lgualmentesucedió en los evoJuociones reolizodoso los 48 y 72 horos,el promedio de crecimiento de Meto¡hizium rc,, en ptesenc o del extroclo de Borbosco, fue superiorcon respecto ol lesligo en los cuotro lo cuol quieredeclr que concenlrociones, en n ngÚn momento el hongo se vio ofec lodo por el exlroclo (Figuro I ).. F E. j. * E. 21. .13. ¡2. Figuro1. Sin emborgo en presencio del exiroclo de Neem, en los evoluociones reolizodoso los 48 v 72 ñotas, MeÍorh¡zium qp, con fespeclo ol testigo,tuvo unos diferenciosde crecimienyo que en lo concenlroción 10 s¡gnificolivos, del 0% (testigo)creció en promedio 3,8 crn, mientos queen lo concentoción delS% openos o conzo lo53 2 c'l"l como su moyoÍ cfecimienlo; odemós en los concenlociones de l0 y I 5% su crecimienlo fue oún menori lo que slgnifco que esos concenlÍociones lie nen sobreel hongo L1 efeclo levemenle toxi co pero en ro concenlocion del 20ol",sJ cre cimienio supeó ol lestigoj esle lipo de com poriomienlosoloes explicoble.desdeelpunlo de vistode lo fisiologiodel hongiofrenteo cierios ogentes ocondiciononfes (Figuro2).. 1¿ E o a. É. En cuonto ol N,{origol, en lo concentroción del 20%, ionlo o los 48 como o los 72 ho ros, el promedio de crecimiento de Metorhizium E), con respecto ol tesligo, tue s gnificotivcmente rnenor, o to punfo que e hongo en eso concentoción solo pudo crecer en prornedio 2,8 cm, frenle ol lesiigo que tuvo un pfomed o de creclm ento de 4,0 cm (Figuro3).. 5 E I E. 24. /-3. 12. Figuro 3. Melo¡¡hlz/um\s. |\,¡origol. guolmente los concenlrocionesde l0 y l5% lornpoco luvieron nlngún efeclo de restricciónen elcrecimiento del hongo, pG siblementedebido ol fenÓmeno de esco'o pe e'r superv.ve'lciodel '1c'oorgo'ris mo, Edo puede significor que ei Morigol en concentrociones mÓs olfos, puede tener efeclos ióxicos ñbre el Metorhiz¡um.. RE\SIA Natra;t a, volomen7,Segundosemeslre2003.

(5) c{)M / |. elol /re./oDt. o oe/8o/Do@. \eFT / ¡!Ár.,9o,sobre".crooe 4.oe /Mehr'!¿.úayl. con respecto ol honga ltichodemo sp, y su comporlcmienlo en presencicdelextroclo de Borbosco,como se puede observor en lo Frgurc 4, en lo evcluoción reolizodo o los 24 horos,que no se presenlorondiferenciossignificotrvosde crec miento con respectoo Testigo en .os cuolro concenhociones.. ts%. Sinembofgo, en lo evoiuoción reolizodoo los 48 horos,se pudo complobol que o lo con ceniroc;óndel I 0?ode Borbosco,el crecim erfo del hongo se detwo con lespeclo ol teslgo y o los oÍos concentrociones,presentdnood ferenciosde crecim enlo de aproximodomen te I 2 cm enlre uno y oios (Figuro41.. 1.0. c,0 F|guro 4, lrlc,hodermo \,s Borbosco. En lo evoluoción leolizodo o los 72 holos, el comporiomienfo vorió con respeclo o lo evoluoción onter oL como se observo en lo tiguro 4, los concenfociones del l0 I 5 y 20% tuyieron un efeclo significotivo soble el clectmienlo dei hongo; especÍticomenle lo concenlroción del l5% que monluvo iguo su compodomien'o con fespeclo ol creci'rier lo del hongo en los 48 horos. gE t E g. E p. En cuonto ol procedimiento de ]richodermo sp en presencio de los exlroctoscon bose en 2¡. 4A. 72. tiguro 5. Irchodermo !5. Neem. Neem y lvlorigol,podemos onoror, oue e'l lo evoluocronreolizodoo ¡os24 horos[5. el cre cimienlo promedio del hongo en los dos ex .1,5 cm, inleliolollestilroclosfue enfe 1,2y go, que registrÓun promedio de crecimienlo Guperioro 2,2 cm, en los cuotro concenlrociones(5,10,15y 2O%)siendoesto Úiimo la mós limilonle (Figuros5 y ó),. E E p a. El mismo comportomienlo se obselvo en lcs evoluoc ones reolizodoso los 48 y 72 horot [Figuros5 y ó), en ese mismo orden de ¡rnpor foncic de los concenfrociones,Loonteior nos permite sugerirque tonto el Neem como el l\lorigolenconcenlrocionessuperioresol 20% pueden lener un efeclo fungicida conÍa el hongo l¡l'chodermo sp,. REVSIANd4t. 4tVal'r-rren 7, S€gundo Semeslre 2003. E p.

(6) c,cMt/,.I. erol ¡'€cto 1ó1@oe/Bdd@.. En cuonto ol procedimiento de Tr¡chcúermo sp en pfesencio de los exifoctos con bose en Neem y Morigol, podemos onolct que en lo evcluoción reolizcdo o los 24 horos (Gróflcos 5 y ó), el ctecimiento promedio del hongo eo los dos exhoctosfue enÍe 1,2 y 1,5 cm, tnferior ol lesligo, que regisiró un promedio de crecimiento superioro 2,2 cm, en los cuoÍo concentrociones [5,10.15y 20%)siendoesto lirnílonfe mós úlfimo lo. rvefl/¡t. o gor {o,e ¡'f ¡'neino. e y ^4eto'1 ¿!-. to. El mismo comportomiento se observo en los evoluociones reolizodoso los 48 y 72 horos, lGról¡cas5 y ó), en esemismo orden de impot toncio de los concentrociones,Lo onleriornos permlle suger)f que lonto el Neem como eJ Morigolen concenhaciones superioresol 20% pueden tener un efeclo fungicido contro el hongo lrichodermo sp.. CONCLUSIONES Enconclusiónse puede ofrmor que ninguno de los lres exhocios en los concenltociones evoluodos, ofecton severomente o los hon gas Meto(hiz¡um sp. Y lt¡chodermo sp Que tonlo el Neem como el lvlorigolen concentrociones supeÍiolesol 20% puede lener. un efecto fungrcido contro el hongo Trichodermosp. lguolmente con respeclo o Morigol, es posible que en concenlrociones mós oljos, tengo efeclos lóxicos sobte el Metarh¡zium sp.. CI]ADA BIBLIOGRAFÁ. Aguirre, M. C. 2000 Evoluqciónpo icipolivo del uso de los exlroclos vegetoles ocuosos BoTt)osco (Ph),//ontussp.), Neem lA¿odhochto irñico)Y Mcriga (¡ogeles pqfulo ) poro el monelo de plogos en el cllllivo de torftie de nreso (¿)copersbom scuEntuml en ófeos de economio corrpedno en los rnunlc[tros de Libo.rf,,Fresnoycoior-.rorco,TolÍrl. PROMTTAConvG cotorio2000.43p, French,Ey Hebert, f. I 980. Métodos de lnvesfigoción Fitopotológico, Seriej Litlrosy Moteriobs Educo-. livos No. 43. lnslilulo Inlefomericqno de Cienc os Agricolos.llCA.son José, Coslo Rco 289 p, Limón, M.C.; Pinlor-Toro,J.A. & Benitez,f. 1999 I n c r ¿ a sdi Á n l i l u n g ! lA c t i v ¡ l y0 l T r i c h o d e r m c j fhoi ovefexpressq 33-kDq ¡o¡zlonum TTqnsformonls Chlinose. Phytopothology891254-261 Soit, G.2000. Trichodermo A ptomising Bio Funglcide.Nuti-Life4/20. SP.. RE\4STA N/.tairA¿, vo umen7,SegundoSemesfe2003.

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