• No se han encontrado resultados

Inhibición enzimática y actividad antioxidante de polifenoles de frutilla nativa Chilena tras digestión in vitro

N/A
N/A
Protected

Academic year: 2021

Share "Inhibición enzimática y actividad antioxidante de polifenoles de frutilla nativa Chilena tras digestión in vitro"

Copied!
26
0
0

Texto completo

(1)

1

Inhibición enzimática y actividad

antioxidante de polifenoles de frutilla

nativa Chilena tras digestión

in vitro

Samanta Thomas Valdés, MSc ,PhD

Escuela de Nutrición y Dietética

(2)

Declaración de Intereses:

(3)

3

Introducción

Fragaria chiloensis spp. chiloensis f. patagonica

Elevado contenido de POLIFENOLES

Retamales et al (2005) HortScience, 40:1633–1634; Simirgiotis et al (2009) Food Chemistry, 113, 377–385

(4)

Atribuciones de polifenoles

In

t

r

o

d

u

c

c

n

Fotoreceptores

Agente antimicrobiano

Pigmentos

Repelentes

Anti-inflamatorio

Antioxidante

Inhibición enzimática

(5)

5

Biodisponibilidad y

procesos de metabolización

• Tamaño molecular

• Polimerización

• Glicosilación

• Solubilidad

• Conjugación con matriz alimentar

• Actividad enzimática

• Factores relacionados al indivíduo

• Microflora intestinal

• Otros

Métodos de digestión in vitro

Minekus et al (2014) Food & Function 5:1113-1124; Carbonell-Capella et al (2014) Comp Rev Food Sci Food Safety 13:155-171

(6)

• Describir el perfil de compuestos fenólicos de la frutilla F. chiloensis

spp. chiloensis f. patagonica tras la digestión in vitro

• Relacionar el perfil de fenólicos con su capacidad antioxidante in vitro

y en modelo celular, y con inhibición enzimática

(7)

7

Preparación de los extractos

Extracto PEE

Extracto Metanólico

Thomas-Valdés et al (2018) Food Res Int 105:10–18

(8)

Simulación Intestinal

PEE

Fluido gátrico (30 min)

Ajuste del pH 4.5 con NaOH

Amiloglucosidasa

(30 min)

Centrifugado

(10 min)

Ajuste pH 6.9 con NaOH ,

α-amilasa

(45 min)

Sobrenadante mantenido a -80

o

C para demás analisis

Fluido intestinal (30 min)

Adición de lipasa y extracto biliar

(pH 7.5) (30 min)

Centrifugado

(10 min)

Sobrenadante mantenido a -80

o

C

para demás analisis

Minekus et al (2014) Food & Function 5:1113-1124; USP 23-NF 18, 1995

Simulación Gástrica

Controles

1) Enzimas inactivadas

por temperatura

2) Estándares

Cianidina-3-hexosido,

(+)-Catequina, Ácido

clorogénico,

Ácido elágico

Quercetina-3-rutinosido

Digestión

in vitro

Cartridge C18

(9)

9

Análisis de los extractos

Fenoles totales

Flavonoides totales

DPPH

FRAP

TEAC

Ánion superóxido

9

Simirgiotis & Schmeda-Hirschmann (2010) J Food Comp Anal

(10)

Inhibición enzimática

α-glucosidasa:

p-nitrofenil-D-glucopiranosido

• Costamagna et al (2016) Food Chem 190: 392

α-amilasa:

almidón

• Tan et al (2017) Food Chem 214: 259

Lipasa pancreática:

p-nitrofenil palmitato

(11)

11

Citotoxicidad

Células AGS confluentes

PEE

0-500 μg/mL

Viabilidad

celular

Cheli & Baldi (2011) J Food Sci. 76:197

11

(12)

Citoprotección

Células AGS

confluentes

PEE

overnight

Agente agresor

(H

2

O

2

)

Viabilidad celular

(13)

13

Perfil de compuestos fenólicos

Tiempo

ACN

1% HCOOH

0

5

95

60

25

75

70

60

40

75

5

95

Bomba: LC-20AT pump

Columna: 100 RP 18-5 μ, 250 × 4.6 mm,25 °C

Flujo: 1mL/min

Vol. inyección: 20 μL

Espectros UV-vis: 200 to 600 nm

Espectro masa: m/z 150 - 2000 amu

Ionización: modo negativo

Gas nebulizador: Nitrogeno, 27.5 psi, 365 °C

Flujo: 8 L/min

Colisión: helio

Identificación tentativa: tR, espectro UV-visible y patrón MS/MS

fragmentación comparado a literatura o con estándares

13

(14)

RESULTADOS

Fenólicos y flavonoides totales

Muestras

TP

(g GAE/kg muestra)

% rec.

TF

(g CE/kg muestra)

% rec.

PEE

PEE-ND

301.1 ± 14.0

a

214.1 ± 9.0

a

PEE-DG

290.8 ± 15.5

b

96.6

84.7 ± 8.2

b

39.6

PEE-DI

171.7 ± 16.0

c

59.0

19.5 ± 0.3

c

23.0

Control enzima inactivada temperatura

PEE-ND

301.1 ± 14.0

a

214.1 ± 9.0

a

PEE-DG

229.1 ± 20.6

b

76.1

131.9 ± 3.8

b

61.6

PEE-DI

87.8 ± 7.1

c

38.3

81.3 ± 4.9

c

61.6

(15)

15

Actividad Antioxidante

In vitro

Muestras

DPPH

(SC

50

µg/mL)

FRAP

(mmol TE/kg muestra)

TEAC

(mM TE/kg muestra)

Ánion Superóxido

(SC

50

, µg/mL)

PEE

PEE-ND

5.27 ± 0.97

a

2550.72 ± 21.68

a

3692.62 ± 100.77

a

13.11 ± 0.64

a

PEE-DG

12.56 ± 1.16

b

1400.11 ± 30.06

b

2241.89 ± 67.30

b

23.09 ± 1.10

b

PEE-DI

17.11 ± 0.98

c

1250.70 ± 6.88

c

1570.77 ± 82.17

c

47.23 ± 0.56

c

Control enzima inactivada temperatura

PEE-ND

5.27 ± 0.97

a

2550.72 ± 21.68

a

3692.62 ± 100.77

a

-

PEE-DG

13.19 ± 0.35

b

1594.16 ± 5.47

b

1887.02 ± 90.45

b

-

PEE-DI

17.68 ± 1.03

c

1476.40 ± 13.44

c

1324.68 ± 37.38

c

-

ND: no digerido; DG: digestión gástrica; DI: digestión intestinal; PEE: extracto enriquecido en polifenoles

(16)

RESULTADOS

Citotoxicidad

R

u

b

u

s

g

e

o

id

e

s

Todos los extractos analizados no presentaron citotoxicidad contra células AGS, con

(17)

17

RESULTADOS

Citoprotección frente H

2

O

2

Giampieri et al (2014) Food & Function, 5, 1939–1948 Avila et al (2017) Oxidative Medicine and Cellular Longevity 13p.

(18)

RESULTADOS

Inhibición enzimática

Muestras

α-Glucosidasa

(IC

50

µg/mL)

α-Amilasa

(% inhibición en 100

µg/mL)

Lipasa pancreatica

(% inhibición a 50 µg/mL o

IC

50

)

PEE-ND

0.80 ± 0.06

a

Inactivo

41.36 ± 0.30

a

PEE-DG

1.16 ± 0.02

b

Inactivo

30.09 ± 1.20

b

PEE-DI

1.82 ± 0.08

c

Inactivo

4.30 ± 0.60

c

Compuestos de referencia

Acarbosa

120.86 ± 1.99

28.48 ± 0.29

-

Orlistat

-

-

0.04 ± 0.00

(19)

19

RESUTADOS

Estadística

Fenólicos totales

Flavonoides totales

Coeficiente de Pearson

p valor

Coeficiente de Pearson

p valor

DPPH

-0.876

< 0.01

-0.723

< 0.05

FRAP

0.865

< 0.01

-0.543

> 0.05

TEAC

0.945

< 0.01

-0.748

< 0.05

Ánion Superóxido

-0.798

< 0.05

-0.755

< 0.05

α-Glucosidasa

-0.723

< 0.05

0.100

> 0.05

Lipasa pancreatica

0.817

< 0.01

-0.202

> 0.05

19

(20)

Identificación tentativa compuestos fenólicos

300

600

600

PEE-ND

PEE-GD

PEE-ID

(21)

21

Comp Rt (min) [M-H]- MS/MS Identificación tentativa PEE

ND DG DI 1 10.2-11.9 783.73 481.00, 300.76 Bis HHDP hexosido 1 X X X 2 15.3 783.13 481.10, 300.90 Bis HHDP hexosido2 X X X 3 17.5-17.6 783.44 480.91, 300.75 Bis HHDP hexosido 3 X X X 4 20.2-21.4 577.30 451.10, 425.18, 289.40 (epi)C-(epi)C dimero X X X 5 21.8 467.47 303.80, 285.80 DHQ hexosido X X X 6 23.6 288.77 244.79, 205.16 (epi)catequina X X X 7 24.2-24.5 483.90 270.89 Pelargonidina derivativo X X X 8 25.0-26.1 633.00 463.00, 300.87 HHDP galoil hexosido 1 X X X 9 26.9 599.32 435.95, 303.00 DHQ hexosido pentosido X X X 10 27.3 633.96 463.10, 300.78 HHDP galoil hexosido 2 X X X 11 28.3 451.15 286.80 Cianidina hexosido X X 12 32.5 449.05 284.77 K hexosido 1 X X X 13 33.1-33.9 635.64 465.14, 301.00 HHDP galoil hexosido 3 X X X 14 34.0 611.61 447.97, 284.91 K dihexosido X X X

15 35.1 594.82 462.90, 300.90 Ác. elagico pentosido hexosido X X X

16 35.8 432.69 268.76 Apigenina hexosido X X

17 38.5-38.6 464.91 300.68 Ác. elagico hexosido X X X

18 38.5-38.8 935.05 633.26, 301.39 Bis-HHDP galoil hexosido 1 X

19 38.9-39.0 633.84 464.91, 316.05 Miricetina rhamnosido derivativo X X X

(22)

Comp Rt (min) [M-H]- MS/MS Identificación tentativa PEE

ND DG DI

20 39.8-40.9 935.46 633.30, 301.49 Bis-HHDP galoil hexosido 2 X

21 43.7 933.91 631.04, 450.92, 300.80 Bis-HHDP galoil hexosido 3 X X

22 44.9-45.0 435.46 302.89, 150.70 DHQ pentosido 1 X X X 23 46.7 433.38 300.61 Q pentosido 1 X X X 24 47.0 579.47 447.05, 301.00 Q pentoside rhamnoside X X X 25 47.5 435.79 302.85, 150.80 DHQ pentoside 2 X X X 26 48.3-48.7 448.91 300.03 Q rhamnoside X X X 27 48.7-49.0 625.13 300.77 Q dihexoside X 28 49.3-49.7 435.22 302.88 DHQ pentoside 3 X X X 29 49.7 463.31 300.80 Q hexoside X X X 30 49.9-50.4 477.25 300.84 Q glucuronide X X X 31 55.0 433.89 300.82 Q pentoside 2 X X X 32 55.8-56.1 449.08 284.79 K hexoside 2 X X X 33 56.3 448.82 314.86 Isorh pentoside X X X 34 61.2 491.30 284.82 K acetyl hexoside X X X 35 67.9-68.2 593.55 446.98, 284.83 K rhamnoside hexoside X X X

(23)

23

Cambios en el perfil de compuestos fenólicos

Digestión gástrica

Digestión intestinal

Bis-HHDP galoil hexosido 1 (18)

Cianidina hexosido (11)

Bis-HHDP galoil hexosido 2 (20)

Apigenina hexosido (16)

Q dihexosido (27)

Bis-HHDP galoil hexosido 1 (18)

Bis-HHDP galoil hexosido 2 (20)

Bis-HHDP galoil hexosido 3 (21)

Q dihexosido (27)

(24)

• El contenido de fenólicos y flavonoides totales, y actividad antioxidante in vitro antes de la digestión

presentaron mayores concentraciones y actividad

• Los PEEs no presentaron efecto citoprotector significativo contra el estrés inducido por H

2

O

2

en células

AGS

• El efecto inhibidor contra enzimas digestivas relacionadas al síndrome metabólico (α-glucosidasa y

lipasa) fueron mayores antes de la digestión. Para α-glucosidasa, todos los PEEs mostraron valores de

IC

50

menores que el inhibidor comercial acarbosa

• Un total de 35 compuestos fueron identificados tentativamente, tras la digestión simulada:

- DG 3 compuestos no fueron identificados: Bis HHDP galloil hexosido y quercetina dihexosido

- DI otros 3 compuestos no estaban hexosidos de cianidina, apigenina y Bis HHDP galloil

Conclusiones

(25)

25

Agradecimientos

Instituto de Química de Recursos Naturales

Dr. Guillermo Schmeda

Dra. María del Pilar Caramantin Soriano

Sra. Irene Manríquez y Sr. Sergio Reyes

Alberto Burgos

Facultad de Ciencias de la Salud

Cristina Theoduloz

Dr. Felipe Jiménez

CONICYT

FONDECYT 1120096

Beca Doctoral 2013-63130042

Universidad de Valparaíso

Escuela de Nutrición y Dietética

25

(26)

Referencias

Documento similar

a) hay un total de 93 compuestos (193 fragmentos) en disposición cabeza- cabeza y un total de 308 compuestos (477 fragmentos) en disposición cabeza-cola que cumplen

 Los Estados miembros disponen de un amplio margen para JUSTIFICAR medidas con el fin de lograr objetivos en material SOCIAL y de EMPLEO..  El control del TJUE de

El día posterior a la cosecha (día 1) de los cubios morfotipo morado y amarillo se midió la actividad antioxidante enzimática de la peroxidasa y los

En este estudio se ha evaluado el tratamiento de digestión individual y co-digestión anaerobia de los residuos derivados del café y plátano en distintas

Fuente de emisión secundaria que afecta a la estación: Combustión en sector residencial y comercial Distancia a la primera vía de tráfico: 3 metros (15 m de ancho)..

After in vitro gastrointestinal digestion, marjoram extracts registered significant losses in the amount of RA; however, thanks to its greater abundance in the enriched

Una vez que ya son conocidos todos los materiales y compuestos que se van a utilizar para la obtención de la embarcación, y tras el estudio de cada uno de los

o Si dispone en su establecimiento de alguna silla de ruedas Jazz S50 o 708D cuyo nº de serie figura en el anexo 1 de esta nota informativa, consulte la nota de aviso de la