Efectos de los iones sobre los antibióticos: estreptomicina, acromicina, sintomicetina y terramicina y su posterior aplicación a los hemocultivos

UNIVERSIDAD NACIONAL DE LA PLATA

FACULTAD DE QUIMICA Y FARMACIA

EFECTOS DE LOS IONES SOBRE L0S ANTIBIOTICOS: ESTREPTOMIC IN A , ACROMICINA, SINTOMICET1NA Y TERRAM1CINA Y SU POSTERIOR APLICACION A LOS

HEMOCULTIVOS.

Te s is presentada para o p ta r a l grado de D o c to r en C ie n c ia s Quim ic a s , o r i e n t ac i ón B io ló g ic a , p o r :

GRACIELA ALVA

Señor Decano In te r v e n to r * Señores P r o fe s o re s ,

Tengo e l honor de p re s e n ta r a Uds* e l p resa n te tra b a jo de tes is ,d a n d o en e s t r forrea. c¡m~ p lin t e n t a e l ú ltim o r e q u is it o para o p ta r a l grado de D o c to r en C ie n c ia s Químicas, O rie n ta c ió n B io ló g ic a*

a l D o c to r V i r g i l i o O liv a quién d i r i g i ó e s te tra b a jo de te s is ,a c tu a n d o como p a d rin o d e l mismo,y e l cual f u é re a lis a d o en l a cá ted ra de A n á lis is B io lo g íc o s ;

siendo la p a rte de l o s h em ocu ltiv os re a liz a d a en e l I n s t i t u t o Malbrán p o r razones de comodidad en la qb~ te n c ió n d e l m a te ria l*

D o c to r R ica rd o A. Margni cuya ayuda e i n t e lig e n t e o~ r ie n t a c ió n he encontrado en todo nonénta y s in la s cu a les no hubiera podido r e a l i z a r e s te tr a b a jo•

agra d ecim iento a l p e rs o n a l de la s d is t in t a s cátedras que en una u o tr a form a c o la b o ra ro n para que e ste tra b a jo lle g a r a a su f i n *

Deseo e xp re sa r n i re co n o cim ie n to

M

i más profundo a gra d ecim ien to a l

E fe c to s de l o s iones s o b re lo s a n t i b i ó t i c o s : e s tr e p to m ic i— nams Ín to m ic e tin a »a c r o m lc in a * y te r r a n lc in a y su p o s t e r i o r a — p i t e a ció n a lo s h e m o cu ltiv o s »

P la n : Pasándose en lo s tra b a jo s de lo s d o c to re s ila rtha P o lic h e n c o y Baúl G» C oronato * r e fe r e n t e a 1c a c c ió n de lo s

i iones sob re la p e n i c ilin a : y d e l d o c to r R ica rd o A ,iía rg n i s o

-b re l a a p lic a c ió n d e l s u lf a t o de co -b re cono in h i-b id o r de la pe­ n i c i l i n a en lo s h e m o cu ltiv o s se han re a liz a d o lo s ensayos que son m otivo de esta t e s is de d octora d o»

Antes de e n tr a r de l l e n o en la n a rra c ió n de la s e x p e rie n ­ c ia s s e hará un com en ta rio s o b re lo s tra b a jo s a n te rio rm en te c ita d o s »

l o s d o c to re s P o lic h e n c o y Coronato encontrando poca b i ­ b l i o g r a f í a sob re e l tema* d e c id ie r o n a m p lia r l o s co n o cim ie n to s que se tie n e n s ob re la a c c ió n de lo s d iv e rs o s c a tio n e s metá­ l i c o s s o b re e l sistem a germen — p e n i c i l i n a * ya sea in h ib ie n d o o exaltando e l e fe c t o que l a droga pueda te n e r s o b re e l germen»

Con esa f in a lid a d y usando la té c n ic a adoptada en e s te

tra b a jo y la c u a l se d e s c r ib ir á p osteriorm en te*en saya n la a c c ió n de l o s s ig u ie n te s iones s o b re l a p e n ic ilin a s Cr*!Sn*Co*Ca*

AsQg"* B Í * l i * A l*Sr*A u* Rb* Mg* Bg+*A9*P b *N i* Cd* f í * FO'§“i"4~* 2n* MO^ Fe++* Cu»

Con o b je t o de poder e s ta b le c e r una comparación*usan en todos lo s casos s o lu c io n e s de iones m é ta líc o s de id é n tic a con­ c e n tr a c ió n »

lo s gérmenes que emplean para lo s ensayos son dos* e l S t a -p k ilo c o c c u s aureus C-4901*que corres-ponda a l 809—P*em-pleado p o r lo s in v e s tig a d o re s de O xford y e l B a c illu s s u b t í l i s C-4906*

que conservan ambos p o r tra n s p la n te s semanales o mensuales* re sp ectiva m en te*en c g a r in c lin a d o y que 84 horas antes d e l en­ sayo se resiem bran en ca ld o s im p le *

Según Ahraham y Chain la p e n i c ilin a es tnacttva d a p o r e l c o b re * z in c * c a d m io * n íq u e l* n e rc u rio * y u ra n io p e ro s in exp resa r l a cu a n tía de esa a c tiv id a d » P o r esta causa se q is ie r o n l l e ­ v a r más a d ela n te lo s ensayos procurando d ar una idea númerica de ese afecto*com parando o l aumento o re d u cció n de la zona /

4

do in h ib ic ió n de Id p e n i c ilin a en c o n ta c to con un m etal d e te r— m inado,con la de la p e n i c ilin a c o n t r o l y dando como exp resión ndmerica la d ife r e n c ia en m ilím e tr o s de la s dos sonas*

l o s g r& fic o s con lo s cu a le s se in te r p r e ta n l o s r e s u lta — d o s ,fu e ro n elaborados con lo s promedios de 257$ d eterm in a cio ­ nes d is t in ta s ,d e la s cu a les corresponden aproximadamente 7 para cada m etal y para cada uno de lo s in te r v a lo s en que fu e ­

ron hechas la s le c tu r a s *

Las c o n c lu s io n e s que s e deducen de e s te tra b a jo son la s s ig u ie n te s : 1 Todos lo s m eta les que c it a n Abraham y Chain

tie n e n ,e n e f e c t o , a cció n d e s tr u c tiv a sobre la a c tiv id a d a n t i -b c c te ria n a de la p e n i c i l i n a , p ero e x is te n o t r o s no c ita d o s que también la poseen * Los que más a c c ió n demuestran son : Cu++, UQpb+, ¿n++, ¡Ig++,B i+++, f f t + + , Pbf i , 8g+, Rb++, e tc *

2 ° ) E l c o b re es muchísimo més a c tiv o que ningún o t r o ca­ t ió n y lu e go de 15 d io s de c o n ta c to ,u n a s o lu c ió n de co b re , conteniendo+0,9m g* p o r l i t r o , h a d e s tru id o p o r com pleto la a c tiv id a d de una s o lu c ió n de p e n i c ilin a que c o n tie n e 1 VO/cc*

JS2 o t r o tr e b e jo en e l cu a l se besó e sta t e s is es e l t i tu -le d o 1 empleo de la s s o lu c io n e s d ilu id a s de s u lfa t o de co — b re como in h ib id o r de la p e n i c ilin a en lo s h e m o cu lttv o s * d e l d o c to r R ica rd o A*M crgnÍ, y d e l cu a l se hace la s ig u ie n te

t r a n s c r ip c ió n para la m e jo r com prensión de la s e x p e rie n c ia s p o s te r io r e s *

”Es b ie n con ocid o p o r todod l o d i f í c i l que r e s u lta en la a ctu a lid a d o b te n e r h em ocu ltiu os p o s it iv o s t y esa d if ic u lt a d emana d e l empleo de l o s a n t i b i ó t i c o s , l o s que, encontrándose a d ife r e n te s c o n c e n tra c io n e s en e l t o r r e n te c i r c u l a t o r i o cu­ ando son v e r tid o s Junto con la sangre a lo s medios de c u l t i ­ vos, cre^n c o n d ic io n e s d es fa v ora b le s pera e l d e s a r o llo ba cte­ r ia n o**

*Pcra c i e r t o s a n t i b i ó t i c o s , s e ha encontrado que d e te rm i­ nadas su sta n cia s e l s e r adicionadas a lo s medios n u t r ic io s acidan como a n ta g ó n ic o s ,in h ib ie n d o su a cció n y p e rm itie n d o , en e l caso de uqe la sangro sembrada proceda de una b c c te -rie s ita o una s e p tic e m ia ,q u e lo s gérmenes d e s a r r o lle n n orm a l-m ente”*

”Za c is t e ín a tie n e a cció n antagónica sobre la e s tr e p to ­ m icin a y la p e n ic ilin a s a sobre la p e n ic ilin a * P a r a lo s re s ­

ta n tes a n t ib i ó t ic o s e l re c u rs o que queda es e l de la d ilu c ió n , es d e c ir , sembrar pequeñas cantidad es de sangre en grandes volúmenes de medios de c u l t i v o ”*

"En una com unicación de Coronato y P o lic h e n c o ,s e in d ica Xa a cció n fa v o r a b le e i n h i b i t o r i a que sobre la s s o lu c io n e s de p e n i c ilin a tie n e n lo s d ife r e n t e s ca tío n e s *D e lo s e s tu d io s de d ich os cuadros he podido comprobar que e l c o b re es de ac­ c ió n ba sta n te in ten sa a pequeñas c o n c e n tra c io n e s y e l l o me ha lle v a d o a e s tu d ia r la a c c ió n d e l s u lfa t o de co b re sobre la s sangres p roced entes de p a c ie n te s tra ta d os con p e n i c i l i ­ na, y además 1c máxima c fn c e n tra c ió n t o le r a b le de dicha s a l p o r p a rte de la s d ife r e n t e s b a c te r ia s ,c o n f in e s a la u t i l i ­ z a c ió n de la misma cono i n h i b i t o r i a de la p e n i c ilin a en lo s h e m o c u ltiv o s ”•

”E1 p rim e r ensayo que se h iz o fu á e l de d eterm in a r la máxima c o n c e n tra c ió n de s u lf a t o de co b re (CuS0^*5ff^0) t o l e ­

ra b le p o r p a rte de le s d is t in t a s b a c te r ia s p o s ib le s de ha­ l l a r en lo s herzo c u l t i v o s ”*

6 S ta p h ílo c o c c u s aureus . . * . . * . . . * * • . * 2 / 4 0 0 S ta p h ílo c o c c u s c i t r c u s • *• *• **• *• • • • 2 / 4 0 0 S ta p h ílo c o c c u s elb u s * . . . . * * . * . . * * . . 2 / 5 0 0 S tre p to c o c c u s h e m o lttic o ( v l v i d s u s ) * 1/5000 S tre p to c o c c u s h e m o lttic o (h o m o U t ic o )*2/5000 S tre p to c o c c u s h e m o lttic o (e n h e n o U t ic o )*1/5000 S tre p to c o c c u s f a e c c l ls (S n t e r o c o c o )* m1/BOOO Viplococcus pneumonías «••••*•••*••*2/5000 Sscherichla c o l i . ...*«2/2000 Aerobacter aerógenes •••••••••***..*2/2000 Salmonella pypht *... ..2/2000 SalmonelJa paratypht A •••••••••••••2/2000 Salmonella parctyphi B . . . 2 / 2 0 0 0 Pseízaonorca aerugínosa ••••••••••••••2/500 Proteua v u lg e ris •••••••••••••••••••2/500 K le b s ie lla prñtmontae .2/500 tg e lla sh Igce. •••*••«•••••••••••••2 /S000 Brucella abortus «••••••••*•••••••••2/5000 B rucella suts ••••*•••••••••••••••••2/5000 Brucella m elíten sis ••*.•••*..••..•»2/5000 B cctllu s anthrasls ••••••••«••••«•••2/500

segunde s e r ie de ensayos e o n é ts tt ó en d eterm in ar en que c o n d ic io n e s e l SO^Cu *511^0, a una d ilu c ió n mayor que la máxima t o le r a b le p o r la b a c te r ia más s e n s ib le , era capas de

e

d e s t r u ir la p n i c i l i n a con ten id a en la sangre• *

nPara e l l o a n u estra s de sangre con ten ien d o 4 Unidades Oxford de p e n i c ilin a , ya que cantidades s u p e rio re s a ésta pueden d if ic lím e n t e e n c o n tra rs e en sangre c ir c u la n t e , se le s añadió CuSO^mSIf^O de manera t a l que la c o n c e n tra c ió n f i n a l fu e s e de 2/20.000* c o n c e n tra c ió n esta s in a c c ió n in h i b i t o r i a

sob re e l c re c im ie n to de ninguna de la s b a c te r ia s ensayadas*m nLos e stu d io s fu e ro n hechos en f u n d ó n d e l tiempo y la tem peratura y lo s re s u lta d o s o b te n id o s lo s que a con tin u a ­ c ió n se. in d ic a n i

C on ce n tra ción de p e n ic ilin a en &*0»

Temperatura 37CC

a n óten te

30 m inutos de c o n ta c to 4 ,0 3 ,6 Sangre t4U0 1 hora de c o n ta c to 3 ,5 3 ,0 p e n i c ilin a + 3 hopas de c o n ta c to 3 ,5 3 ,3 s u lfa t o de 3 horas de c o n ta c to 1 ,0 0 ,7 co b re l/10»000 4 horas de c o n ta c to 0 ,5 0 ,3 5 horas de c o n ta c to 0 ,5 0 ,0 Sangre ¥4l/■*> 6 horas de c o n ta c to 0 ,3 0 ,0 de p e n i c ilin a G horas de c o n ta c to 4 ,0 3 ,6

"De acuerdo a l cuadro que a n teced e,con una permanencia de s e is horas en e s tu fa de la méselas sangre—p e n i c ilin a - s u lf a t o de cóbrense lo g r q la d e s tru c c ió n t o t a l d e l a n t i b i ó t i c o , l o que hace p o s ib le e l empleo de l a s ’ s o lu c io n e s d ilu id a s de s u l­ f a t o de co b re h id ra ta d o como a n ta gón ico do l a p e n i c ilin a en

la p r á c t ic a c o r r ie n t e d e l h e m o c u ltio o »n

"T ie n e la v en ta ja de su f á c i l p re p a ra ció n g e s t e r i l i s a — c tó n » "

"Para e fe c tu a r lo s h em ocu lttvo s con vten e p rep a ra r s o lu ­ c io n es de s u lf a t o do co b re y c t t r a t o de s o d io ,s o b re la que se re c o g e l a sangre asépticam ente e x tr a íd a ,y d icha mésela se d eja en e s tu fa a 37°C p o r 6 horas y r e c ié n a p a r t i r de ese in s ta n te se c fe c td a n la s siembras en lo s d is t in t o s medios n u t r i c i o s » "

" l a s o lu c ió n de c t t r a t o de s o d io -s u lf a t o de cob re es la que s ig u e i "

S u lfa to de c o b re con 5 m óleculas de agua » » * » » » » 0 , 5 g r C tt r a to de s o d io con 3 m óleculas de agua • • « « * • » SOgr Agua d e s tila d a » » » » » » » » » » ... ... 1000 mi " E s t é r i l t s a r a 130°C p o r 30 m inutos*#

"En tubos de ensayo con ten ien d o 3ml#de la s o lu c ió n a n t e r io r e s t é r i l , a ñ a d i r O mi de sangre asépticam ente e x tra íd a » * "la mis­ ma permanecerá in c o a g u la b le p o r a c c ió n d e l c t t r a t o de sod io y a su ves la c o n c e n tra c ió n d e l s u lf a t o de c o b re será de 1/10»000, es d e c ir , la n e ce s a ria para que la p e n i c ilin a sea d e s tru id a• *

e

ncámo ensayo f i n a l se r e a l iz ó un b reve e s tu d io com parativo

¿

v efectuando^ 23\hom ocul11vo& ¿pordupltoado*; correspond iéndo una "

.de Jas s e r ie s a n u estra s / s in tratan, te n tó p r e v io , y l a o t r a

a sangres p u e s t a s p r e v ía m e n t c e n c o n t a c t o c o n l a s a l de c o b re ? * " l o s re s a lta d o s ' o b te n id o s son l o s q u e.s ig u e n :99 -’V' ■- -Vv ' ' vV P o s it iv o s n e g a tiv o s M uestras s in tra ta m ie n to p r e v io : 5 v n u es tra s añadidas de s u lf a t o de co b r a r -2 2 ’ ’ “C0I1CL ÜS1 OSES " 1 T.; •

mDe acuerdo a l o s, ensayos q u e a n te c e d e n puede e s ta b le c e rs e que j : *

nl ) - L á s s o lu c io n e s d ilu id a s de s u lf a t o de c o b re h id rata d o n o ; tie n e n a c c ió n d e s fa v o ra b le s o b re e l c r e c im ie n to b a c te ria n o de "a q u e llo s gérmenes p o s ib le s de h a lla r eh l o s h e m o c u liiv o s * *

•»i —*> *' j ’m wt?:‘ ^ 5-.:

* 2 )-D ic h a s -s o lu c io n e s tie n e n a c c ió n d e s t r u c t iv a s o b r e la ■ p e n ic ilin a »?

m3 ) - S l . b re v e e s tu d io com pa ra tivo efectu a d o demuestra;que Cl añadido p r e v io de CuS0..5Bp0 a una c o n c e n tra c ió n f i n a l de i/iO*OQO»’ fe sangres a em plear e n ■ h e n o c u ltiv o s , proceden^

. s s ” , ^ ‘ -i. .• \ ‘í¿ •••#<.»' "* « , . ¡ ** '• '* ' v'V -. — ’ ó . - i v tes^de e n fe r m o s tr a la d o s -co n p o n I c i lin a B auaental l a pos i t t v i dad dé l o s r e s til tod os » f

E ste tra b a jo de t e s is de d octorad o , e l cu a l se ha t i t u ­ la d o n E fectos de l o s iones sob re l o s a n t i b i ó t i c o s ••e s tre p to m i— c in c ,a c r o m ic in c ,s Ín to m Íc e tin a p t e r r a r io in a y su p o s t e r i o r a— p ltc a c tÓ n a lo s h e m o c u lttv o s * ?para su m e jo r r e a liz a c ió n se ha d iv id id o en c in c o p a r te s.

I o) P a rta : E s tu d ia r l a a c c ió n de lo s iones a u sor sob re l o s a n t i b i ó t i c o s , midiendo e l e fe c t o in h ib id o r que lo s mismos m a n ifie s te n sob re un germen s e n s ib le•

S ° ) P a rte : D eterm ina r en lo s iones que actúan in h ib ie n ­ do con más In ten sid a d a l a n t i b i ó t i c o , la máxima c o n c e n tra c ió n

t o le r a b le p o r la s b a c te r ia s que pueden h a lla r s e en e l hemocul— tíVOm

3 o) P a rte : Usando m ezclas de lo s iones s e le ccio n a d o s en la s e x p e rie n c ia s a n te r io r e s d eterm in a r s i e l poder in h ib id o r s o a c r e c ie n ta•

4o) P a rte s D eterm ina r la s c o n d ic io n e s óptim as pera que e l ló n en una c o n c e n tra c ió n menor que la máxima t o le r a b le p o r l a b a c te r ia más s e n s ib le » destruya e l a n t i b i ó t i c o*

S ° ) P a rte s A pilcan d o lo s re su lta d o s o b te n id o s en lo s en­ sayos a n te r io r e s , agrega r a la s sangres ob ten id a s de p a c ie n te s

tra ta d o s con lo s a n t i b i ó t i c o s ensayados, s o lu c io n e s de iones que destuyan su a c c ió n in h ib id o ra sobre l o s gérmenes•

Habiéndose d e ta lla d o e l pla n de tra b a jo se pasará a tra ­ t a r ceda p a rte en p a r t i c u la r•

10

PRIMERA PARTE

PREPARACION DE LAS SOLUCIONES DE IONES

Operaciones : U tiliz a m o s la s s a le s más s o lu b le s de l o s d ie s iones a ensayar* preparando s o lu c io n e s acuosas e q u iv a le n ­ te s a 1 gramo d e l ión p o r 100 m i l i l i t r o s•

Estas s o lu c io n e s se preparan sagdn l o s s ig u ie n te s c á lc u ­ l o s :

Cu++

S a l usada : CuSQ^SH^0 Peso m o le c u la r ** 249*634

Peso a tóm ico d e l co b re » 63*57

Cantidad de s a l pesada » 3*926 gramos Cq++

S a l usada * CoClg*6H^0 Peso m o le c u la r & 237*902

Peso a tóm ico d e l c o b a lto ** SE ,94

Cantidad de s a l pesada 4*036 gramos Zn++

S a l usada « Z n { C ¿0

Peso m o le c u la r ** 219*484 t Peso atóm ico d e l z in c 65,38

Cantidad de s a l pesada - 3*357 gramos ¡Cd¿£

S a l usada *» CdC1^3¿fí^0 Peso m o le c u la r » 228*364

Peso atóm ico d e l cadmio «* 112*41

Cantidad de s a l pesada * 2*031 gramos Ug++

S a l usada » MgSO^mTIJ^O Peso m o le c u la r ® 246*492

Peso a tó n ic o d e l magnesio ** 24*32 Cantidad do s a l pesada ~ 7,183 granos Crp ° ? ~

S a l usada — K oC r n0 „ <té €* ¥

Peso m o le c u la r =* 294*212

Peso a tó n ic o d e l cromo » 52*01

Bn++

S al usada

9

BgClg

Peso m o le c u la r & 871*524

Peso a tóm ico d e l m e rcu rio » 800*61 Cantidad de s a l pesada « 1,353 gramos Ag+

S a l usada » AgUO^

Peso m o le c u la r ** 169*688

Peso a tóm ico de la p la ta — 107*68 Cantidad do s a l pesada ** 1*574 granos ^ UíH

S a l usada ** BgBO-*BJ) «Jf *£ Peso m o le c u la r » 860*634

Peso a tóm ico d e l m e rcu rio * 800*61 Cantidad de s a l pesada ** 1*396 gramos Cr+++

S a l usada ** C rofS0^J^*25B^0 Peso m o le c u la r ** 668*440

Peso a tóm ico dal cromo « 58*01

Cantidad de s a l pesada ** 6*366 granos

Después de p esa r la s ca ntidad es ind icadas, se s o lu b ilis a n hasta 100 m i l i l i t r o s con agua d e s tila d a , con l o que se o b t ie— ne una s o lu c ió n madre que c o n tie n e 1 gramo de ió n p o r 100 n i*

Sstas s o lu c io n e s de l o s iones so e s t e r i l i z a n en a u tocla ~ ve a 120*C durante 20 m inutos*

Sn e l momento de r e a l i z a r l o s ensayos se d ilu y e n la s so ~ lu c io n e s a n te r io r e s a l 1/10*000* haciendo que la c o n c e n tra c ió n f i n a l d e l ió n corresponda a 1 gramo en 1*000*000*

12 PBSPASACI0ffW : LAS:*20LUÓ 102 ANTIBIOTICOS*

StTitonicQ tina-sCSQ-: usa Yeste a n t ib ió t ic o ven?comprimidos ^qué¡YcpnÍÍenen%0,250('¿rimo$Yé^á^tinü'^Se. s p lú b tlis a w^cpnprt^( % ido^enYcantidedxdetermtriada)dosolución fis io ló g tca iY p re é Y (vÍam enié[estérÍlÍxadeY(y( lu e g o ' se d iluye dental:maneratqué (laYcóncentrccíÓ Ji^final corresponde a 1,000'n i ero granos por y,

m i } i i i t r é [

SlYvroducto usado lesYde la b o ra to rio s »L e P e i i t n*

^ A cron icm a- 2 y se usan envases* ae acrom icinainyeczaose:' ITcUQycohtiéheriYlOO(m iligram os de a n t i b i ó t i c o en p a lv o m%Se;Y$Q~--■ y X d ^ iiN c í^ u y c o n i c n Íd o :c n (s Q Íu c i Ó r i f i s i l ó g i c é [ e s t é r i l *y-J2 úégo ) d ilu y e (ta m b ié n )e n v s o lu c ió n f i s i o l ó g i c a } d e t a l manera(que^ §jfco¿co^^ ^seá^deilíOÓQ"m ierógrem os p o r m il i l i t r o »

S I ;p rod u cto usado es de L a b o ra to rio s y ? L o d e rle *+

^ ú rrc m lc iñ a zÉ s te Y [q n tIb lÓ ttcó Y s e presen ta en enveses se~ Y n ^ i^ ^ 5 ^ | I0 5 jc í^ iíi;{¿ c r o p íc in fl» p o r l o cu a l su d ilu c ió n se

§l!e)f<f£p%<Q ábpg&egl aYu i smáímcnerált

[Slypf^dtiét^YtisádoYesYdáYZabpráióriosYY^PIisar^i^

P-'Sstreptonlciña : Se usen envases qué co n tien e n )su lfa to détéstreptom ietna en cantidad equivalente a 1 g rcu o d e estrep— étomíc tria i b a s e S o [d ilu y e Yen^soluetónYfÍstQ2ógiaaY(esiéril(dé yia2)m áñera[que¡la)concentración"Iinal)corréspond a a 100*000

m icr^grczaosfporYm ililitro m- (

SItprod ucto usado os marca nAnodian de la ¡^¿TicpY^glesa»

ÍSeYúsan coiü ^ d ilu c iones) d ey losY a n tib lÓ tlcQ s,a qu ella s l queYeri y los\ensayosIpreviosíY empleandoyla^misaa jté c n ic a 'del T trábe j o iresu ltcrprylctsY ópt tinas [para la le c tu ra de lo s resul~j[¿ (tcdosiK

iSsíostéiis ayos d an; cono condent re c io ríesJóp t inas Y2 as ?si— Y g u ien tes íg e s tre p to m ic in a

2

l o , 000 m i crogrcm os' p o r. m i l i l i t r o a

s in to m ice tín a s y lO O m icro g r a m o s Y p ó r y m ililitr o } QcronicináYzYy 1100 m i e ro granos po r ’m t i t i i t r o -í Y te rra n te tna: 100 n tc rogram óé^

p o r n i 1 i 1 i t r o t ,

DéYacuérdó-[a%es tos (resultad os; se preparan [2 as d ilu c io ~ [§ n e s d é flós y a h iÍb iÓ ticó sT e n ;so lu cio n es 10[veces;m&sconéenY~¿/

tradas quq Jas ó p tic a s p lu e g o so d ilu y e n a l 2/10 en la s so— Ilic io n e s de l o s iones*quedando entonces e s to s en Ja concen - tra c iÓ n f i n a l de 0*9 m iligra m os p o r 2 t i r o *

Sim ultáneamente y a p a r t i r do la s s o lu c io n e s madrepr.de lo s a n t ib ió t ic o s * s e preparan diluyendo a l 1/10 en s o lu c ió n f is io ló g ic a * 2 a s s o lu c io n e s que se usan cono t e s t ig o s*

Como medio de c u l t i v o se usa agar» Se p roced e a lle n a r ¿ p la ca s de P e t r t con 10 c e n tím e tro s c ú b ic o s de agar lic u a d o y previam ente sembrados con 0*1 m i l i l i t r o de un c u l t i v o en ca ld o de 34 horas d e l germen s e n s ib le *

^ S I germen que se usa es e l S ta p h tlo c o c c u s Aureus*cepa J H e a tly » So prepara un c u l t i v o en ca ld o y se d eja 34 horas en

e s tu fa a 37°C» Se lic ú a e l agar en baño de agua a 200CC y se l o deja e n fria r*cu a n d o e s tá aproximadamente a 43°C se s i ­ embra con 0 ,2 m i l i l i t r o d e l c u l t i v o c n t e r t o r * s e a g ita * y s o lle n a n la s p la c e s de P a tria

Una ves lle n a d a s la s p la ca s* se procede a c o lo c a r sobre e l agar lo s d is c o s de p a p el absorbente que c o n s titu y e n e l s o p o rte de la s s o lu c io n e s de lo s a n t i b i ó t i c o s e io n e s »

J e te é d is c o s de p a pel absorbente miden 1? un de diáme­ t r o y 2 mm de e s p e s o ri como no se con sigu en ya preparados de esta tamaño*se c o tta n de pa p el de f i l t r o de p o ro grueso* marcándolos previa m en te con un sacabocado de 17 mm de 2uz y lu e go se toman de a c u a tro para que e l esp esor sea de 2mst»

Con p in za e s t e r iliz a d a se co lo c a n c u a tro de e l l o s p o r p la ca d is t r ib u id o s en su s u p e r f ic t e•

Un d íso o p o r pla ca se usa como c o n t r o l y s e carga con 0*1 m i l i l i t r o de la s o lu c ió n t e s t ig o de a n tib ió tic o * m ie n tr a s que lo s o tr o s 3 d is c o s se cargan con 0*1 m i l i l i t r o de la s o lu c ió n de ió n - a n t i b i ó t i c o *

Se preparan tr e s p la ca s para cada ió n y cada a n t i b i ó t i c o » Se hacen p o r l o ta n to un t o t a l de nueve le c t u r a s para cada

ión en cada a n t i b i ó t i c o » Se hacen t r e in t a y s e ts le c tu r a s para cada ió n en p a r tic u la r * S n t o t a l para lo s d ie z tonas y lo s c u a tro a n t ib i ó t ic o s se hacen c u s íro e io n io s ochenta (4 3 0 ) le c tu r a s *

‘ ‘ r S ' Las p la ca s de P e t r t a s t preparadas se d eja n en la e s tu fa /

14

a 37°C durante 34 horas para p e r m i t i r e l c re e in te n to 4 e i S ta p h ilo c o c c u s Aureus y a l cabo de ese tiem po se hacen la s le c t u r a s*

Se nlden lo s halos de in h ib ic ió n y lu e g o , para^darlrúna^ e x p re s ió n námerica d e l p o d e r de in h ib ic ió n , de lo s ion es so­ b re lo s a n t i b i ó t i c o s se h a lla n la s d ife r e n c ia s entrer*tlo&\. * •> .> h a los de in h ib ic ió n de lo s d is c o s cargados con la^solüéiÓrt^

ió n — a n t i b i ó t i c o y d e l t e s t ig o *

S etos re s u lta d o s se rep resen ta n g rá fica m e n te expresan—^ ■}* ?'v' do ltn e a ln e n tc la d ife r e n c ia en n l l í ú e t r o s de lo s diám etroaí de l o s h a los o en c í r c u l o s que corresponden a lo s d is t in t o s h a los de in h ib ic ió n«

Todos 2os datos que s e usan corresponden a Jos promedios de todas la s le c t u r a s•

Resultados en m ilím e tro s

S tn to m tc e tin a Zn++ T e s tig o .... J ó n -a n t ib f ó t ic o P la ca n * l ** 39 20 - W - 31 " n “3 - SO 30 - 20 - 30 » n e3 »r 30 1 9 - 1 9 - 3 0 Promedios «• 3 9 ,3 1 9 ,6 D if e r e n c ia ~ 3 .7 Cu-t-t-T e s tig o l ó n - a n t i b i ó t i c o P la ca n ° l & 3$ 22 ~ 2 0 - 8 1 ” n 08 * 29 S I - 3 0 - 20 » n*3 » 86 2 3 - 2 0 - 2 0 Promedios ~ 3 7 ,6 3 0 ,3 D if e r e n c ia ~ 7 ,3 Co++

Tes t ifío Ió n —a n t i b i ó t i c o

P la ca n ° 2=* 2? 20 - 2 0 - 20 n n°3 - 30 21 - 20 -- 2 0 -Promedios » £7,3 20 D ife r e n c ie “ 7*3 Cd++ Tes t ig o lá n —a n t i b i ó t i c or~-L> , P fa c c n c2 ** 32 3 2 - 3 1 p sS a P & i n °2 « 37 20 - 20 - 22 n e3 = 28 33 - 19 - 3 2 ® Prom edios - 23,6 2 0 ,? D ife r e n c ia es 7 ,9 « M M M M T e s tig o P la c e nc2 - 32 9 n°2 ~ 33 9 n°3 - 37 Prom edios » 33,5 D ife r e n c ia ~ CrsO?-T e s tig o P la ca n*2 » 33 w 71*3 *r 33 * n°3 - 33 Promedios » 33,3 D ife r e n c ia » «0 + + T e s tig o P la ca nc2 33 w 7ic3 ar 37 37 Prom edios » 37,3 D ife r e n c ia « l á n - b n t i b i ó t ic o 23 ~ 22 - ,24 24 - 20 - 20 19 - 20 - 21 22,3 lá n - a n t t b i á t ic o 20 - 20 - , 2 0 20 - 20 - 20 21 - 21 - 21 2 0 ,3 3 ,0 ló n -a n tib já tic o 21 - 22 - 22 22 - 21 - 22 29 - 22 - 22 20,3 6 ,5

16 B9+ T e s tig o t 2 Ó n -a n tlb tÓ tic o P la ca n°1 « 2 5 81 - SO - S I * n °2 = 27 21 - 2 9 - 2 0 ” n°2 ~ 2 5 1? - £¿ - 2 5 Promedios * 8 5,6 7 0 « > v -D ife r e n c ia » 6 ,3 Á fli­ T e s tig o Ió n -a n t i b í Ó t i c o P la ca nc2 » 25 83 - 83 - 22 » r®3 «• 27 22 - 21 - 21 n«5 = 25 1 ₈ i _{& C}t Promedios ~ 27,2 2 1 ,7 r t f arene i a ~ 5 ,6 C n H -T e s tig o l ó n - c n t t h i ó t i c o P la ca n c2 *» 22 2 1 - 2 1 - 2 1 P la ca n °2 ~ 25 22 « *w) « A© w n°2 28 25 - 2 9 - 2 8 Promedios « 27 2 0 ,7 D ife r e n c ia « 7 ,3 Cr2 ° ? ~ T e s tig o A erolito tna l ó n - a n t i b t ó t i c o P la ca n°2 ~ 41 39 - 37 & 36 m 2 » 43 3 8 - 3 7 - 3 9 41 37 - 37 - 38 Promedios » D ife r e n c ia “ 42,6 4 ,3 3 7,3 £ f e L , T e s tig o 39 Jón—a n t ib i ó t ic o 38 - 38 - 37 P la ca n ° J »

P la ca «* 4S 3 9 - 3 3 - 3 7 • n*3 « 41 39 - 34 - 37 Promedios » 40*6 3 7 ,3 D ife r e n c ie » 3 ,3 if&++ T e s tig o Id n - a n t ib i Ó tic o P la ca n ° l ** 40 33 - 33 - 33 » r®3 *t 40 39 • 39 «*■ 35 " B°3 = 3? 35 - 35 - 35 Prom edios «* 39 3 5 ,7 P i/ e re n e ía x» O 9«7 Cr+++ T e s tig o Id n -c n t i b i d t i co P le c a ti°2 » — * n°5 *r 43 41 - 40 - 42 * n*3 »■ 30 37 - 33 - 43 Promedios ** 40*5 39, 3 ' D ife r e n c ia ~ _{0 ,7} Hfrb T e s tig o I d n - a n t ib i ó t ic o P la ca n ° l » 43 37 - 37 - 30 ” n °3 = 37 35 - 33 - 35 • n®3 «r 33 55 - 37 - 40 Prom edios — 39 3 5 ,7 D ife r e n c ia » 3 ,3 Zn++ T e s tig o Idn—a n t ib i d t ic o

P le c a nci = 39 & I ss i &

” r®3 = 35 37 - 33 - 39

» n°3 » 37 <0 1 i &

Promedios ~ 37 3 7 ,9

X<Sn—ant ib l ó t ic o ¿EL T e s tig o P la c e n°X ~ 50 50 - 37 - 37 » n*¿? « 40 30 - — - 37 w n°3 «• 57 50 - s e - 30 Prom edios » 33 ,5 37*3 P ifa r e n e i a « 1*4 Ca+* T e s tig o J<5n—c n t i b i ó t i c o P la ca Yi*l » 40 43 - 55 - 40 ® n*3 ^ 40 40 - 35 - 37 3i n°3 - 40 £ 1 <0 t £ Promedios =■ 40 35* J D ife r e n c ia ss ¿ , 9 Cd+t

T e s tig o X ó r t-a n ttb íé tic o

P le ca 7LÚ1 = — - ~ — ---7t°5 « 57 57 - 57 -50 u n°5 * 57 33 - 33 - 35 Promedios~ 57 50,5 D ife r e n c ia ~ 0*5 Ciu+ Tes t i z o I-Sn—n n t íb t Ó t ic o P la ca n ° l * 40 30 - 35 - .33 " n «3 = 39 36 - 35 - 37 * n®5 » 39 36 - 57 - 55 Prom edios » 39,3 3 3 ,3 D ife r e n c ia & 9 ,5 T e rra n tc in a Olí'.1-/ X ó n -a n ttb id ttc o P la ca n*2 «*. 40 40 - 39 - 39 " n°2 *» 40 p9 - 3 3 - 3 9 - n°3 **■ 33 39 - 36 - 40 Prom edios « 50 ,5 3 8 ,7 ^ÍDi/ercwcia ¡** 0 ,0

Ca++ T e s tig o I<Sn~antlb id t i c o F le c a n c2 ~ 40 40 - 3 » - 33 ' • n°S = 30 40 - 39 - 38 " n °3 » 37 38 - 38 - 40 Promedios « 55,0 3 0 ,8 D ife r e n c ia ** - 0 ,5 57Z-f*f ^tíSÍÍ^O Id n —a n t t b id t ic o P la ca n ° l « 30 38 - 33 - -37 " n¿3 = 33 5 5 - 5 5 5 55 » n °3 * 55 37 - 35 - 33 Prom edios ~ 5P, 5 3 7 ,5 i)t/í?rG7JCÍC J=? 0 ,0 T e s tig o lá n cen t ib td t ic o P la ca n * I ** 4¿ •*■*4 I \jt O I *át " 7IeS =• 40 35 - 40 ~ 40 “ n e3 « 33 3C - 37 - 38 Promedios » 55 3 8 ,8 D ife r e n c ia ~ 0 ,5 ITas ¿

£,<70

Idn—a n t i b i ó t i c o P la ca n*2 *» 55 38 - 37 - 33 * n * 5« 55 I <*> «0 1 S5<1 » n°3 a 37 34 - 33 - 37 “

55

55,5 jD£/ercrco¿£ « i^| vo 5 CrJ>„— 2 7 t T e s tig o Id n ~ a n tlb íd tic Q P la ca n ° l * 39 39 ~ 3? ~ 38 n °2 ■» 45 & 1 40 1 }&C » ft°5 » 55 35 - 33 - 43 Prom edios — 55,5 55,1 D ife r e n c ia ** _{. . h L .}

20 Cr+++ f e s t in o XÓn-antib f ó t i c o P la ca n ° I «■ 39 39 - 41 - 41 " n°2 - 33 33 - 33 - 39 * n°3 » 40 30 - 41 - 39 Promedios -*» 39 39 ,3 D ife r e n c ia » -O* 3 Cd+i fe a t i p o I Ó n - a n t ib ió t l c o P la c a n ' l = 40 33 - 38 - 38 ” - n

°2

a

39

38 - 33 - 40 “ n c3 » 35 37 ~ 3? - 37 P r o p ic io s « 37*3 37* C D ife r e n c ia ** —O »3 . 1‘P tL T e s tig o J<fn~ím ¿ i b f ó t i c o P la ca n ° l » ¿0 3 9 ---

43

* cr 40 39 - 39 - 41 ” n°3 =■ 42 40 - 37 - 43 Promedios — 40# 3 40 D ife r e n c ia » 0*3 T est i_£2. IÓn—a n t i b i ó t i c o Placa n c2 =? 33 30 - 34 - 38 n n*2 ** 39 37 - 3 7 - 35 * n ‘ 3 w 39 38 - 30 - 36 P ron od ios ~ D ife r e n c ie «? 38*6

0 * 1

36, S E s tr a p to n lc in a Cr+++

T e s tig o Id n —a n tib ió t ic o .

P la ca n*2 s* 33 30 - 36 - 33 »* fl*¿? 5* 30 30 - 29 - 31 / » n°3 « 40 31 - 33 - 37 Promedios » D ife r e n c ia » 34*3 5*0 2 9 ,3

« a * T est irjo Id n -n n t ib id t i c o P la ca n * l - SO - 55 - 59 * n ° s » 55 5 9 - 5 ^ - 5 5 » » ° 5 * 52 SO - £7 - SO Promedios » 55,5 s ? ,e D ife r e n c ia » 0 ,5 2n++ T e s tig o f d n - a n i íb id t ic o P le c a n°J ZT 30 SO - 55 - 59 * R°5 e 35 55 - 55 - 59 " n °3 « 2b 5 3 - 2 5 - 2 7 Promedios ~ 32,3 5 9 ,9 M f c r c n c .t r ~ 4 ,7 tta++

T e s tig o td n p -cn tib td ttco

P la c e n ° l » 23 27 - 25 - 23 " r°2 a 30 57 ~ - 59 M 72*5 sr 57 22 - 25 - 27 Prom edios * 59*5 ¿íí/ererccíe * 3 ,5 5 9 ,9 Test ip o X d n -c n ttb id ttc o P le c a n ° l ** 38 22 - 22 - 27 * ft*5 «=- 33 9tf - 55 - 30 R°5 » 33 2 7 - 2 5 - 3 9 5rO¡3C<££í5S » 30 s e t o D ife r e n c ia « 3 ,3 , Cu++ T e s tig o Id n -a n t ib id t ic o P la ce n * l « 59 3 5 - 2 7 - 3 0 n n c2 a 59 3? - 2 7 - 3 9 72^5 w 55 3 7 - 3 9 - 2 7 Promedios » 36,6 D ife r e n c ia « • 0 f5 ¿ 7 ,4

s s Ag+ p o s t ig o Xón-an t i h í ó t i c o P la ca n°2 ~ £9 27 - 20 - 57 n n *£ - 2? _{57 - 2 7 - 28} • n e3 - 33 37 - 37 - 33 Promedio a ~ 20* 6 2?, e D ife r e n c ia « 2 ,0 &0++ Tes t i ló n —a n t i b i ó t i c o P la ca n ° 1 ** 20 27 - 28 r ¿ I rt /l®5 «r w n*5 « 29 27 - 28 - 31 P ronod ios ~ D ife r e n c ia — P.0 1 .7 27,3 Cd++

T e s tig o X ó n -a n tib ió t i c o P la ca n “l » 30 37 - 25 - 37

n c3 = i?7 o? - 2 8 - 2 ?

” 7**3 ■=* 50 27 - 27 - 24

Prom edios vfe 57,3 - 2 6 f 5 :l

D ife r e n c ia ** 0 ,9 ffg++ T e s tíg o Jón—a n t ib i ó t ic o P la ca n ° l sa 29 3 0 - 3 0 - 3 7 * 71° 2 ^ 34 25 - 28 - 26 ” n°3 « 28 & 1 •V i -SI Promedios ** 50,*? 23,4 J5í/©rcnc£/t — * i , 0 \

S in to m ic e tin a : Actúan disminuyendo su a c c ió n 'b a c — t e r i ó s t d t í c a sobre e l S ta p h ilo c o c c u s Aureus lo s s ig u ie n ­ te s ion es Ag+» Hg++, Ng+, Cu++, Co++,Mg++, Cr+++, Cd++ y 'c o n mayor in ten sid a d que lo s p reced en tes e l Cr^Oy— y Zn++•

A crom icin a : Ningún ión actúa fa v o re c ie n d o su ac­ c ió n b a c t e r io s t d t ic a sob re e l S ta p h ilo c o c c u s Aureus¿mi—

e n tra s que la d is m in u iría n l o s iones Ug+,ffg++i y con ’cier^r, ta in ten sid a d e l Cu++,ttg+-h y Cr^O^— m

•\ -k "r-« * ^

Terra m icin a : No fa v o re c e n su a c c ió ij b a c t e r io s td tic a ; sobre e l S ta p h ilo c o c c u s Aureus e l Cr+++, Cd++,Co++,Zti++,

Ag+,Ng++»Rg'hh» y la d is m in u iría e l Bg+•

E s tre p to m ic in a : Ningún ió n fa v o r e c e su a c c ió n b á c-t e r i o s c-t d c-t i c a sobre e l S c-ta p h ilo c o c c u s Aureus9m ienc-tras que l a disminuye e l Zn++•

se

SEGUNDA PARTE

Esta segunda p a r te d e l t r a b a jo ,c o n s is te en Ja d e t e m t — n a ción de 2a máxima c o n c e n tra c ió n de l o s ion es Cu4+,Zn++,y* CrgOj~~ t o le r a b le p o r la s d ife re n te s , b a c te r ia s 'qué^con'ma^ p o r fr e c u e n c ia pueden a is la r s e e n -io s h e n o c u lttv o s *

Zas e x p e rie n c ia s con e l ión CÜ++.fueron\t¿echas^^pW '& D o c to r R ica rd o A ,U a rgn i en su tra b a jo er&plea de la s

' 1 J r \ ' ,# - i 4 /:< < y „ ./ '

s o lu c io n e s d ilu id a s de s u lf a t o de c o b r é como inittbtdoi*:áe¿ l a p e n i c i l i n a en lo s h e m o c u ltiv o s " , p u b lic a d o e n l a Resté?* ta d e l I n s t i t u t o E a lb rá n ,

Tono

X 7 1 ;,¿ fe ie rO '4 ; c ñ o .l9 5 4 «~ .

Se r e p it e n d ic h o s ensayos y dé*acuerdo a l a aisaa ■Jt§C

3

&, n ic a ,s e determ inan e l p o d e r b c e t o r io s t á t ic o l- d o f lo s iones Zn++ y C r g O f~ *

Operaciones * Se hacen s o lu c io n e s e n " c a ld o de E^lr^Ó^, Zn ( g* & CuSO¿*58^0, hac i endo que la s cono en t r a c t o * ñes f i n a l e s de C r,Z n , y Cu sean de 1/4/00,1/500,1/1000,2/2000, 2/3000,2/4000 y 2/5000 y lu e g o se^prdcede a sem brar en l ó s ^ medios de c u l t i v o s a s i preparados la s b a c te ria s *

Para la s E r u c e lla s ¿ fe lite n s is ,¿ b o r tu s y S uis.so"'u sa e l a y er S ta f s e th ,p o r s e r e l m e d i ó ¿ r u t i n a r i a m e n t e séyem~ p le d

con

t a l f i n *

Una ves sembrad s la s d ife r e n te s b a c te r ia s en l o s m edios de c u l t i v o co rre s p o n d í e n te s ,s e incuban 24 horas en e stu fa a 37*C *

Se p roced e lu ego a com probar que c o n ce n tra cio n e s de: .

• _S* ; ^ vV'-r. v‘ ’ 1'-> J.

Zn,Cu y C rJ 3 -—~ p e rm ite n e l c r e c im ie n to dé^Xás b a c te ria s *

RESULTADOS

Germen Concentraciones de2 l<Srt 2n++

1 1 1 I 1 1 2 '■* 400 500 1000 2000 3000\ 4000. 5 0 0 0 . S tc p h ilo c o c c u s áureos S ta p h ilo c o c c u s c i t r e u s S ta p h ilo c o c c u s albas S tre p to c o c c u s b e m o l{tic o S tre p to c o c c u s v ir td c n s S tre p to c o c c u s f c e c a l i s D ip lo c o c c u s pneumonías S s c h e ríc h ía C o li I E s c h e ric h ia C o ll J J d e ro b a c te r cerSgenes S a lm on ella ty p h t S a lm on ella p a ra ty p h t Á ^ S a lm on ella p a ra ty p h t B Pseudonona aerugtnosa P r o t e o s v u l g a r i s E l s b s t e l l a p n e x m o n ia e B a c t l l u s a n t h r a s i s B r o c e 11 a a b o r t a s - B r u c e l l a s a i s B r o c e 11 a m o l I t e n s i s

30

RESULTADOS

Germen C oncent rea ion es d e l tón Cti44

2 2 2 2 1 ] 2 ^ * r - 2)-• <*v 50 00 * 400 500 2000 2000 5000 4000 S tc p h ilo c o c c u s aureus S ta p h ilo c o c c u s c it r e u s S ta p h ilo c o c c u s a l bus S tre p to c o c c u s h o m o !ttíc o S tre p to c o c c u s v ir id a n s S tre p to c o c c u s f c o c c l i s D tp lo c o c c u s pneumonías E s c h e rlc h la C ol i 1 B s c h e rtc h la C a li I I A e ro b a c te r aerdgenes S alm on ella ty p h t S & lm onellc p a ra ty p h t A S a ln o n e lla p a ra ty p h t 3 Psetídonona acruginosa P ro te u s v u lg a r ls E le b s t o lla Pneu&aniao B a c illu s a n th ra s ts B r u c e lla aborta s B r u c o lla s u ts B r u c e lla m e llte n s ís

Germen

Concentraciones deL t<Sn

- A - X X * X i t i f X 4 0 0 5 0 0 1 0 0 0 2 0 0 0 3 0 0 0 ) 4 0 0 0 5 0 0 0 • S t e p k t l o c o c c u s c u r e u s S t c p h t l o c o c c u s c i t r e u s S t a p h í l o c o c c u s e l b u s S t r e p t o c a c c u s h e r a o l t t i c o S t r e p t o c o c c u s v t r t d a n s S t r e p t o c o c c u s f c e c a l l s D i p l o c o c c u s p n c u v i o n i a e E s c h e r i c h i a C o l t I E s c h e r i c h i a c o l t I I A e r o b a c t o r a e r ó g e n e s S a l n o n e l l a t y p h i S a l m o n e l l a p a r a t y p h i A S a l n o n e l l a p a r a t y p h i 3 P s e u d o n o n a c e r u g i n o s a P r o t e o s v u l g a r í s S l e b s i o l l a P n e u m o n í a s B a c í l l u s a n t h r a s t s B r u c e l l a a b o r t a d B r u c e l l a s u i s B r u c e ! 2 a m e l t t e n s t s

conclusiones

Los Iones Zn++ y Cu++ en d ilu cio n e s de 1/5000 permiten e l crecim iento de la s ba cteria s ensayadas* no a s í e l Cr2o7--.

TERCERA PARTE

Una ves determinadas Jas co n c e n tra c io n e s máximas-de Jos iones Cu y Zn que in h ib en lo s a n t ib i ó t ic o s ensayados * y no e je rc e n a c c ió n b a c te r ic id a * s e hace Ja misma e x p e rie n c ia con la mesóla de Jos dos ion es * porgue e l u s a rlo s Ju n tos sim plí** f i c a r t a micho Ja a p lic a c ió n p r á c t ic a a l h em ocu ltivog ya. que

Jos p a c ie n te s son tra ta d o s con d ife r e n te s a n t i b i ó t i c o s• Se usan lo s iones Cu y Zn en con cen tra ción ,m u ch o menor que l a máxima que p e rm ite e l c re c im ie n to de la s b a c te r ia s•

se

Se hacen *en lo s tubos donde4sembrarán la s b a c te ria s; > d ilu c io n e s en l o s medios de c u lt iv o * d e t a l manera que la

c o n c e n tra c ió n f i n a l de la mésela Cu++ y Zn++ sea de j/30*Ó00s l o que correspond e aproximadamente a una c o n c e n tra c ió n f in a l \

<20

1/10*000 de Ja mésela de Jas s a le s CuSO^+dtígO y Z n (

S//o0

Se siem bren la s b c c t c r ia s * s e dejan £4 horas en e s t it f c 'b 3?°C y lu e g o so observa s i e sta s han d e s a rro lla d o«

Resultados D e s a r r o llo S tc p h ilo c o c c u s Qurcus P o s it iv o J S ta p h ilo c o c c u s c i t r e u s P o s it iv o S tc p h ilo c o c c u s elbus P o s it iv o S tre p to c o c c u s v ir id e n s P o s it iv o S tre p to c o c c u s h e m o lttic o P o s it iv o S tre p to c o c c u s f c e c a l i s P o s i t i v o -D lp lo c o c c u s pneumonice p o s it iv o S s c h e ric h ia Col i I P o s it iv o E s c h e ric h ta C ol i 11 p o s it iv o A e ro b a cte r aerógenes P o s it iv o

S clm o n e lla typht P o s itiv o y

S alm on olla p a ra ty p h i A P o s it iv o S alm on ella p a ra ty p h i D P o s it iv o Pseudomona aeruginosa P o s it iv o P ro te u s v u lg a r is P o s it iv o K le b s ie lla pneumonías P o s it iv o B a c illu s a n th ra cis P o s it iv o

34 Germen B r u c e llc a bortus B r u c e lla s u te B ru c e lla n e l it e n s is D aserró1 2a P o s it iv o P o s it iv é P o s it iv o

La mésela de lo s ion es Zn + Cu en l a cancenirrac idn f in a l de

2

/

10*000 de CusO^SBpO i Zn(C

De ocuerdo con lo s re s u lta d o s a n te r io r e s ,s e determ ina e l poder in h ib id o r ,s o b r e e l e f e c t o b c c t e r i o & t á t i e o - d o l ó s a n t ib ió t ic o s ,s in t o n ic e t in a ,e s t r e p t o m ic in a , acropiictn a y t e ~ rra m tcin a sob re e l S tc p h ilo c o c c u s cu rca s , de

1

c m eada s u l~ f a t o de co b re y a c e ta to do sirte en la c o n c e n tra c ió n do

1/10.000 . ’ - ?

*r’ . ; y

Se usa la misma té c n ic a que en la p rim era p a r te d e l tr a b a jo*

Resultados en m lltn o tró s

A n tib id tic o Testigo A ntibidtico+C u+fn ^ Promedios - D iferen cia

S in to n ice tin a 25 3S - 25 = ,25,5= = “ ; _{y r ° i 5}

Estreptomicina 30 31 - 32 ; 31,5 ¿2,S.

Terramicina 34 35 - 33 _{■'?" 0,0}

Acromicina 35 34_{+ 9} - 35

CONCLUSIONES

Do acuerdo con l o s re s u lta d o s a n t e r io r e s , la mésela Zn+Cu t i m o muy poco o ningún p o d e r3^

in h ib id o r sob re e s to s c u a tro a n t i b i ó t i c o s , l o c u a l r e s u lta en e x tre n o p a ra d o ja l p o r cuanto usados p o r separado ^muestran un gran e f e c t o in h ib id o r , e l Cu++ s o b ré la a c r o n ic i— na y te rra n te tn a y e l Zn++ sob re l a e s tre p ­

38

CUARTA PARTE

En esta p a r te d e l tra b a jo se tra ta n de d eterm in a r la s c o n d ic io n e s de tiempo y tem peratura en que se in h ib ir ía n

com pletam ente lo s c u a tro a n t ib ió t ic o s a f r e n t e a lo s lo n é s Z iM + í y Cu í+ y f r e n t e ala mésela de lo s mismos*

Teniendo en cuenta la s c o n c lu s io n e s de l a prim era p a r te (p á g * 2 3 ),s e hacen ensayos usando pera cada a n t i b i ó t i c o e l c a tió n que más l o in h íb e le s d e c i r e l Cu++ para la .e c r o m tc in a y la te rra m ic in a y e l Zn+j* para la e s tre p to m ic in a y l a sin**

to m ic e tin a#

Se preparen s o lu c io n e s de CuSO^SIí^O y Z n ( C ^ 2 W < p a l l/ 2 0 »0 0 0 m Los a n t i b i ó t i c o s se usan en la s m ism asconcen tr a c io n e s que en la p rim era p a r te•

la té c n ic a es la misma que a n te rio rm e n te ,p e ro s e h a c e n

«í '• > . «

ensayos hora p o r hora y en tr e s c o n d ic io n e s d ife r e n te s t s é d eja un tubo con la s o lu c ió n d e l a n t i b i ó t i c o s o l o , a l medio am biente, é s te es e l t e s t i g o ; a o tr o s dos tubos con J a s o l u — c ió n d e l a n t i b i ó t i c o se le s agrega e l Zn++ o Cu++ según co ­ rresponda» y se d eje uno a l .edio a n íllen te y e l o t r o en estu — f a a 37°C.

Es d e c ir que en cada p la ca de P e t r i y para cada e n t ib ió t i c o hay tr e s d is c o s de pa p el a b sorb en te: I oJ a n t ib ió t ic o so­ l o ,

2

o) a n t i b i ó t i c o u&s e l ió n , a l medio ambiente , y 3 * ) a n t i b i ó t i c o más e l ió n ,e n e s tu fa a

3

? CC*

Resultados en m il trie tr o s

A crom icina

llora T e s tig o A m b i e n t ~~ Estufar

1

° 35 34 , » , " " 34 ,

2

o 34 r*J 3 2 ' ^■^:32f^t 3 Ú 34 32 4» _{'3 Ú 31} 5® « 34 ^ 31 3o 35 30 30

Hora T e s tig o Ambiente E stu fa * *?*> _{34 30} a° 34 39 ' '2? :y ^ /

0

° 35 39 _■■■, O/? _{:. . ' - v}V; -i o * 34

88

_. 25_{***';'.< y-:'%} ' i i * 34

8?

_{.. \ :} 13° 35

86

_V 23° 34 25 33 ■ •, 14° 35 35 15a 34 23 •' >. • f :■ ' l ' 26• 35 23 .• V ‘ . J 17° 34 Of> 17 Promedio ~ 34 Terram icin a

Hora T e s tig o Ambiente Estúfate#

2 o 37 30 ---T S ; 3 o * 35 34 "3 3 x. 3° 35 32 4* 35 34 _{:-32s/V: 'i} J’i*\ ' *•*•1 5 o 35 34 '-27^~-*p: 6 C 35 34 3 2 S - ; ; 7* 35 33 8* 35 32 3G:¿,-:^ 9° 35 32 35 _{*tv- -;*(} 10 o 35 30 3 3 ; ' "V"V; y 11° 35 29 22 ' p ■ 22° 35 27 29 2 3* 35 25 2? Promedio — 35 P s tre p to m tc ina

Hora T e s tig o Ambiente E stufa

40

Hora T e s tig o Ambiente E stufa

' S.. 2° 32 30 \ 30 3* 32 30 29 4° 30 30 ‘ . 27 5° 29 27 e° 27 25 _{m M -í} 7* 30 27 0 * 20 26 ■■■'23'^ 9* 30 26 22 10* 30 24 11* 29 23 7 oo «i ^ 31 21

10

; 13* 30 22 17 ; Promedio «■ 30 S in to m ic o tin a

Hora T e s tig o Am biente E stu fa

i * 26 25 24 ¿ 2* 26 24 2 ¿ m 3* 29 j 24 20 i 4* 23 22 2 1 -K 5° 25 22 6° 24 23 ■OOM: o ₂₅

_{2 2}

₁₉ 0* 24 22 28 ; 9* 25 20 ia % 4 10* 25 20 17 Promedio «■ 35

Com entario : Observamos que i A 37*C la in h ib ic ió n de l o s a n t ib i ó t ic o s es mayor que a tem peratura am biente* Igualm ente e l tiempo de c o n ta c to in f lu y e fa vo ra b lem e n te en dicha in h ib í— c tó n, siendo ésta t o t a l ye que e l halo se reduóe a Omm*(el d iá ­ m etro d e l d is c o de papel absorbente es 17nm»)m—

A p esa r de lo s re s u lta d o s negó t i pos qué se o b tie n e n con l a mésela Zn++ y Cu+40 (p ég+ 3 6 ) y p o r la s c o n s id c rc e io n e s

chas en la página 33*se hacen lo s ensayos de tiempo y te m p e ta ­ ta ra como en la s e x p e rie n c ia s a n te r io r e s«

Los a n t ib i ó t ic o s se usan en la s mismas co n ce n tra cio n e s que en l a prim era p a r te* Les s o lu c io n e s se preparan como en l o s ensayos a n te r io r e s p ero usando la mésela de la s 'io n e s Zn++ y Cu m en la c o n c e n tra c ió n f i n a l» de la n c z c lc de o c le s *

de 1/2

0*000*-Los ensayos se h ic ie r o n hora, p o r hora hasta 6 h ttas^etfec'* iúandose una ú ltim a le c t u r a a la s 34 horas, y no se co n tin ú a * ron porque durante ese tiem po se pudo o b s e rv a r ^uo l a mésela Zn++ y Cu t+ no te n ía c a s i ninguna a cció n sob re lo s a h i i É t ó i i *

eos•

R esultados en m ilím e tro s

<* •

S in to n ic e tin a

¡Jora Tes t i go Ambiente E s tu fa

1° 25 24 2$ K 2 » 35 24 25p4^ 3 ° 35 25 4 o 25 25 _{& -}.y} 5* 25 26 'ss'.íp. 6° 25 2? 24 c 24 22 ¿ Apo *■* ,, _ :■l E s tre p to m ic in a

Pora T e s tig o Ambiente E stufa

2 V 30 27 _{¿ * % . '} 2 V 29 29 28"'% 3 o 30 30 3 o y 4 o 30 29 30 5• 29 30 28 -* V . 6* 30 32 31 -34 0 2? 27 25

42

T erram icin a

llora T e s tig o Amo te n te E s tu fe

1* 34 34 33 2 ° 34 33 _{7 $ C ?í} 3* 33 34 34 4 o 34 35 5* 35 34 34 6* 35 35 :^ :;£ 3 $z, ... 24* 35 33 31 Acrom tcína

Cora T e s tig o Ambiente E stu fa

1* 35 34 34 2* 34 34 35-cc 3 ° 35 34 _{3 4 M} 4o 35 35 35/-, 5° 36 35 37 . , 6° 35 34 34 % 24° 36 35 35

S i 8& observan e s to s re s u lta d o s se ve que no puederiCusar~ se Zn¡-¡

y

C u J u n t o s , p o r g u e pa rece que su,'poder in h ib id o r

;se

anula o p o r l o ríenos dism inuye.

Co o b sta n te e stes s u p o s ic io n e s se h ic ie r o n v a rio s ensayos más usando Zn+-j y. Cu++ J u n to s •

E l p rim e r ensayo c o n s is t e en lo . s ig u ie n te se hace una mésela de lo s c u a tro a n tib ió t ic o s :t e r r c m íc in a ,a e r o b io tn c ,e s t r e p * *

to n ta in a y s in to m ic a tin a , de t a l manera que la s c o n c e n tra c io n e s f i n a l e s de cada uno en la mesólo sea la,misma que cuando estaban

separados en lo s ensayos a n te r io r e s•

Se d eja un tubo con esta mésela a l medio ambiente como t e s t i g o. A o tr o s dos tubos sem ejantes a l a n t e r io r so le s agrega ¿n-t+ en la c o n c e n tra c ió n f i n a l de la s a l de 1/10.000 * uno s e deja a l medio ambiente y e l o t r o en e s tu fe a 37°C durante 24 horas* Con o tr o s dos tubos se hace l o mismo p e ro con la s a l de co b re • é l cabo de la s 34 horas a lo s tubos con ¿n++ se le s /

agrega Cut* y a lo s que contienen'Cu^í se Ie s agrega, 3n*+ y se lo s deja cono a n te rlo m s n ie durante otras 34 horas*

l l cebo de esa tiempo se hacen lo s cnsai/os en placas de P e t r i usando lo misma té cn ica que en la primera parte*

Se hacen dos placas con tro s discos absorbentes ceda una, e l primero pare e l te s tig o Be l saguado para l e novela dú ,2d$* a n tib ió tic o s con ú l '¿n++ primero y e l Caí* después a l medX$ ambie?itep y e l te rcero pare e l tubo semejante al a n terior^ pero mantenido en estuca*

>vn otras dos plecas de P e tr i se hace lo rAsno qüe ahteí¿

r tórnente pero pora Jos tubos c Jos que se le s había agrega­ do p rinero e l Cu++ y luego e l Zn++* r

¡2asaltados en m ilím etros ¿antibióticos + i 6 Ctr+ 3 o ¿ r f *

Pla ca ¿*ex t i yo Amblante S stu fá

1 39 3G 35 '

40 * 3?

w > ’

36

A n t i b ió t ic o s * i * Zn.j v * 2cCu++

Placa T e s tig o Ambiento ¿'Jatufe?

1 38 35 34 1

o _{37 35 34}

Gbservando os tos re s u lta d o s so va que a l 3rir+ y eljCuM** actuando sucesivam ente durante 34 horas cada uno sobre l o

.V v . • ■ • T ' « V v*

ríesela do lo s Óuatro a n t i b i ó t i c o s demuestran una a c tiv id a d ' * >**!S?f* »ieif0& que actuando sim ultáneam ente s ob re cada uno p o r sepa— rodo* paro la misma es menor que cuando l o kacen*cada c a tió n sob ro e l a n t i b i ó t i c o que nós In h ib o * (p é g »3 3 )*

K1 segundo ensayo c o n s is t e en l o s ig u ie n te :.C o n e l ob­ j e t o de d eterm in a r s i e l anión a c e ta to fu e r a e l causante da

la re d u cció n de la a c tiv id a d de 1c mésela Qu.+ y ¿n++9se em­ p lea e l c lo r u r o de z in c * manteniendo la nisma c o n c e n tra c ió n d e l c a tió n

Las d ilu c io n e s se hacen ig u a l que en lo s ensayos a n te r io ­ re s m

44

Los re s u lta d o s son Jos s ig u ie n te s :

A n t i b ió t ic o s &'&uh4- Z n r+ a l cabo de 24 horas *

P la ca T e s tig o Ambiente JSstufté

1 39 \ M 3 6 j0

2 38 36 35

A n tib ió tic o s + 1* Cu** 2°¿n*a2 cabo de 4$^íiorasí?

T e s tig o ** 38 Ambiento «• 35 Iis tu fd 'r&^3á \

A n t ib ió t ic o s + l pZn++ + 2*Cu¿+ e l c a b e r le 48 horasm T e s tig o « 38 Ambiente - 35 t s t u f a ^ 3€

Los re s u lta d o s son sem ejantes a lo s de la e x p é río n c tá r a n t e r io r 0 s in aventurarnos a c o n s id e ra r como I n i c ó responso-* b le e l c a t ió n p o r no haber ensayado o tr o s a n ion es*—

CONCLUSIONESS

2 * ) La ocrosa i ciña s é\ tnh ib e‘t to t& lñ en ta c ó n Cu++ en la conceiitrceión

por 1c permanencia en estufa .a 3 ?*C d u ~ ren te 2? horas»

8 * ) la te rra m tc in a se in h ib e ^ io tc im e n te [cbj&S, »?£srjo ceíítfft a n t e r io r y en la s mismás c o n d ic io n e s ¿ u re n te 23 horas*

3 o) l a es t r e p t o m ic in a ^ t^ ^ in ^ h é tio t a ík o iit s fe o n Z m + en 2a c o n c e n tra c ió n f i n a l v¿e 2/30¿0CHXl p o r l a permanencia\^an e s tu fa c 3?°C duran~

■iY1 ' t e 23*h ora s.

4 QJ La s tn t o á ic e it n a sé in h íb a to ta lm e n te cotí

&■*' * %?: . o

n e l mismo c a t ió n a n t e r io r y en la s mismas

tr '