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UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO
FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA
ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE FARMACIA Y
BIOQUÍMICA
VALIDACIÓN DEL MÉTODO ANALÍTICO POR CROMATOGRAFÍA LÍQUIDA DE ALTA RESOLUCIÓN (HPLC) PARA LA CUANTIFICACIÓN DE NAPROXENO SÓDICO 275mg Y PARACETAMOL 300mg EN TABLETAS
RECUBIERTAS.
AUTOR: ISABEL ALEJANDRA DÍAZ HONORES
ASESOR: Dr. Q. F. ERICSON FELIX CASTILLO SAAVEDRA
TRUJILLO-PERÚ
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DEDICATORIA
A DIOS POR SER LA FUENTE DE VIDA, FE Y ESPERANZA , POR GUIARME SIEMPRE POR EL BUEN CAMINO Y POR DARME LAS FUERZAS PARA SEGUIR SUPERANDOME CADA DÍA.
A MIS PADRES: MARIANO DÍAZ VENEGAS Y SANTOS HONORES ORUNA, POR SU APOYO INCONDICIONAL, SU GRAN CONFIANZA Y SUS ENSEÑANZAS QUE DÍA A DÍA ME INCULCAN.
A MIS HERMANOS JEAN LUIS Y MARIA ELENA POR SUS OCURRENCIAS Y GRAN CARIÑO.
A JHONATHAN GONZALES AVILA POR SU COMPRENSIÓN Y APOYO INCONDICIONAL.
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AGRADECIMIENTO
A LOS PROFESORES DE LA FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA POR
COMPARTIR SUS CONOCIMIENTOS,
CONSEJOS Y POR SU PACIENCIA PARA HACER DE NOSOTROS UNOS BUENOS PROFESIONALES
AL Dr. Q.F. ERICSON FELIX
CASTILLO SAAVEDRA POR EL
APOYO BRINDADO PARA EL
DESARROLLO DE LA PRESENTE TESIS
AL Dr. Q.F. JOSE LUIS QUINTE
SARMIENTO POR SUS CONSEJOS Y SU APOYO BRINDADO
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JURADO DICTAMINADOR
Dr. Q.F. Carmen Ayala Jara
Presidente
Dr. Q.F. Iván Miguel Quispe Díaz
Miembro
Dr. Q.F. Ericson Felix Castillo Saavedra
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PRESENTACIÓN
Señores miembros del jurado dictaminador:
Cumpliendo con lo establecido por los reglamentos de trabajos de investigación de la
Facultad de Farmacia y Bioquímica de la Universidad Nacional de Trujillo, someto a
vuestra consideración y elevado criterio profesional el presente informe de investigación
titulado: VALIDACIÓN DEL MÉTODO ANALÍTICO POR CROMATOGRAFÍA
LÍQUIDA DE ALTA RESOLUCIÓN (HPLC) PARA LA CUANTIFICACIÓN DE
NAPROXENO SÓDICO 275mg Y PARACETAMOL 300mg EN TABLETAS
RECUBIERTAS.
Es propicia esta oportunidad para manifestarle mi más sincero reconocimiento a
nuestra alma mater y toda su plana docente, que con su capacidad y buena voluntad
contribuyeron a mi formación profesional.
Dejo a vuestro criterio señores miembros del jurado dictaminador la calificación del
presente informe.
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ÍNDICE
JURADO DICTAMINADOR ... i PRESENTACIÓN ... ii RESUMEN ... iv ABSTRACT ... v I. INTRODUCCIÓN ... 1II. MATERIAL Y MÉTODO ... 6
III. RESULTADOS ... 27
IV. DISCUSIÓN ... 40
V. CONCLUSIÓNES ... 46
VI. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS ... 47
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RESUMEN
El presente informe tuvo como objetivo presentar evidencia documentada, que los
resultados producidos son confiables, consistentes y reproducibles en las condiciones
establecidas; teniendo en cuenta que la validación es un requisito imprescindible para el
cumplimiento de las Buenas prácticas de Laboratorio. Se realizó la validación del método
analítico por cromatografía liquida de alta resolución (HPLC) para la cuantificación de
naproxeno sódico 275mg y paracetamol 300mg en tabletas recubiertas, conteniendo
naproxeno sódico y paracetamol como principio activo, evaluado mediante parámetros
como: especificidad (Selectividad), linealidad, precisión, exactitud, intervalo (rango) y
robustez .Definidas las condiciones de trabajo, se realizaron los análisis para la evaluación
de los parámetros de validación y se demostró mediante el diseño experimental, que la
metodología analítica es lineal porque se obtuvo un coeficiente de correlación r = 0,9995 y
0,9998 para naproxeno sódico y paracetamol; es exacta con una recuperación global de
99,61 % y 100,03% para naproxeno sódico y paracetamol; es selectiva dado que no se
evidenció interferencia de productos degradados o de los excipientes en el análisis del
principio activo, estos parámetros dentro del rango establecido.Por lo cual concluimos que
el método validado es confiable, consistente y puede emplearse en los análisis de rutina
previstos.
Palabras clave: Naproxeno sódico y Paracetamol, validación, especificidad (Selectividad),
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ABSTRACT
The present report aims to present documented evidence, that produced results are reliable,
consistent and reproducible under the conditions laid down; taking into account that the
validation is an essential requirement for the implementation of the good practices of
laboratory. He was the validation of the analytical method for chromatography liquid of
high resolution for quantification of naproxen sodium 275 mg and acetaminophen 300 mg
in recubiert tablets containing naproxen sodium and acetaminophen as actives principles.
Evaluating parameters as: specificity (selectivity), linearity, precision, accuracy, and
robustness.Defined working conditions, conducted the analysis for the evaluation of
validation parameters and was demonstrated by the experimental design, the analytical
methodology is linear because obtained a correlation coefficient r = 0.999 5 and 0,9998 for
naproxen sodium and acetaminophen ; is accurate with a global recovery of 99,61 % y
100,03% for naproxen sodium and acetaminophen ; is selective because that was not
evident interference of degraded products or the excipients in the analysis of the active
principle, these parameters within the set range.So we conclude that the validated method
is reliable, consistent and can be used in the analysis of routine provided.
Keywords: Naproxen sodium and Acetaminophen, validation, specificity (selectivity),
linearity, precision, accuracy, and robustness.
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I. INTRODUCCIÓN
En la Industria Farmacéutica, una de las características más importantes de toda empresa es la calidad de sus productos, ya que el prestigio, desarrollo económico y crecimiento dependerá de la adecuada elaboración de sus productos, mediante la aplicación de las Buenas Prácticas de Manufactura (BPM). Atendiendo a esta necesidad se han venido formulando diferentes programas y parámetros por varias instituciones para lograr el Aseguramiento de la Calidad de los distintos productos. Entre los entes reguladores más importantes tenemos la Food and Drug Administration (FDA), y la International Conference on Armonization (ICH).1, 2
En nuestro país, la entidad reguladora de asegurar que los productos farmacéuticos se fabriquen de forma uniforme y controlada, de acuerdo a las normas de calidad en relación al uso que se les pretende dar y conforme a las condiciones exigidas para su comercialización que garanticen la salud de la población es la Dirección General de Medicamentos, Insumos y Drogas (DIGEMID).1
La International Organization for Standardization y la International Electrotechnical Commission (ISO/IEC) en su norma 17025 refieren: Los laboratorios deben validar todos los métodos que se utilicen en el laboratorio, tanto los desarrollados por ellos mismos, como aquellos procedentes de fuentes bibliográficas o desarrolladas por otros laboratorios. Además, también es necesario que el laboratorio valide los métodos de referencia aunque, en este caso, no es necesario que el laboratorio realice una validación completa. Asimismo, el laboratorio debe validar todo el procedimiento analítico teniendo en cuenta el intervalo de concentraciones y de matrices de las muestras de rutina. 3,4
La validación es el proceso establecido para la obtención de pruebas documentadas y demostrativas de que un método de análisis es fiable y reproducible para producir el resultado previsto dentro de intervalos definidos. 5
La validación proporciona un alto grado de confianza y seguridad del método analítico y se realiza con carácter obligatorio cuando se desarrolla un nuevo procedimiento, ya que permite asegurar que el método propuesto hace lo que tiene que hacer.6
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En la actualidad, se reconocen tres tipos de validaciones, entre las que se pueden diferenciar: retrospectiva, prospectiva y revalidación. La validación retrospectiva consiste en establecer una evidencia documentada de la idoneidad de un producto o proceso, basándose en la evaluación de los datos históricos acumulados existentes, siempre y cuando no se hayan modificado los procedimientos, maquinarias, tamaño de lote y características de las sustancias empleadas. 7, 8. 9
Asimismo, la validación prospectiva, consiste en la verificación del cumplimiento de las condiciones establecidas para un método analítico, y se llevan a cabo antes de la comercialización del producto.10
Por otro lado, la revalidación, informa de la existencia de un cambio que pueda afectar la idoneidad del método analítico establecido por la validación, es decir una validación total o parcial de dicho método analítico.11, 12
La United States Pharmacopeia (USP) versión 38 clasifica los métodos analíticos en las siguientes categorías 6:
Categoría I. Métodos analíticos para la cuantificación de los principales componentes de fármacos o de principios activos en productos farmacéuticos terminados.
Categoría II. Métodos analíticos para la determinación de impurezas en fármacos o productos de degradación en el producto farmacéutico terminado incluyendo ensayos cuantitativos y pruebas límite.
Categoría III. Métodos analíticos para la determinación de las características de comportamiento del producto o desempeño.
Categoría IV: Métodos analíticos para la determinación de las características de identificación.
En todo proceso de validación, existen parámetros que deben cumplirse, así tenemos: linealidad, precisión, exactitud, selectividad, límite de cuantificación, rango, robustez. La linealidad, que proporciona la capacidad del método analítico para obtener resultados directamente proporcionales a la concentración o cantidad del analito en un rango definido. Se determina mediante el tratamiento matemático de los resultados obtenidos en el análisis del analito a diferentes cantidades o concentraciones, y la selección del rango y del número de puntos experimentales está estrictamente relacionada con la aplicación del método.11, 12
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Otro parámetro importante a considerar es la precisión, que refleja la medida en que los valores de una serie repetida de ensayos analíticos que se realizan sobre una muestra homogénea son semejantes entre sí. Su estudio incluye el ensayo de repetibilidad, la cual se desarrolla bajo las mismas condiciones, utilizando la misma muestra, analizada por el mismo analista, en el mismo laboratorio, con los mismos equipos y reactivos, en una sección de trabajo semejante, en un periodo corto de trabajo. Este parámetro permite evaluar la incertidumbre en la estimación de la media, es decir, el error aleatorio que se corresponde con la dispersión de los datos alrededor de la media. 4, 12,13
La exactitud indica la capacidad del método analítico para obtener resultados lo más próximos posibles al valor verdadero. A diferencia de la precisión, que refleja el error aleatorio, la exactitud refleja el error sistemático. Cuando existen interferencias en el método por falta de selectividad (desviación por exceso en los resultados), el método se considera no exacto. Para asegurar una buena exactitud, es necesario eliminar los errores que no están sujetos a tratamiento estadístico (calibración o control incorrectos de equipos), los errores inherentes a blancos (errores constantes) y los que dependen de la cantidad del analito presente (errores proporcionales). En este aspecto, la mejor manera de identificar estos errores será realizando una prueba interlaboratorios, es decir el trabajo realizado con el mismo método en diferentes laboratorios. 10, 12, 14
La selectividad se define como la capacidad de un método analítico para medir exacta y específicamente el analito sin interferencias de impurezas, productos de degradación o excipientes que pueden estar presentes en la muestra, y se expresa como el grado de inexactitud del método. La evaluación de este parámetro es especialmente importante en el caso de los métodos analíticos diseñados para la cuantificación del analito en formulaciones y en estudios de estabilidad.12, 14
Aunque la especificidad y la selectividad se consideran términos equivalente, algunos autores los diferencian, considerando la selectividad como la capacidad de detectar simultáneamente o separadamente diferentes sustancias químicas presentes en una misma muestra, y a la especificidad como la capacidad de detectar el analito sin interferencias de otro compuesto. La selectividad se determina comparando los resultados del análisis de las muestras con otras semejantes en presencia de productos relacionados.13, 14, 15
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De manera general, en los estudios de validación de métodos analíticos se debe considerar los límites de detección y cuantificación, para obtener una mayor confiabilidad del resultado esperado. La determinación de los límites es una propiedad del método para evidenciar cambios en la respuesta, cuando se produce diferencias en las concentraciones. 6, 12, 14
Un resultado positivo no es suficiente para que el analista considere detectado un analito, se requiere, además, conocer el límite de detección en las condiciones del método; de lo contrario, se puede incurrir en un falso positivo: suponer el analito presente en la muestra cuando no lo está. El límite de detección es un parámetro analítico de gran interés en el análisis de trazas, contaminantes y productos de degradación.1, 15
De manera específica, el límite de detección o cantidad mínima detectable hace referencia a la mínima concentración del compuesto en estudio que es posible detectar con certeza, pero no necesariamente cuantificada, bajo las condiciones experimentales establecidas. 6, 12, 14
El límite de cuantificación expresa sobre la cantidad más pequeña de analito en una muestra que puede ser cuantitativamente determinada con exactitud aceptable. Es un parámetro del análisis cuantitativo para niveles bajos de compuestos en matrices de muestras y se usa particularmente para impurezas y productos de degradación, y se expresa como concentración del analito.16, 17
El rango se define como el intervalo entre la concentración superior e inferior (cantidades) de analito en la muestra (incluyendo concentraciones superior e inferior) para el que se ha demostrado que el procedimiento analítico tiene un nivel adecuado de precisión, exactitud y linealidad. El intervalo se demuestra cumpliendo con los requisitos de linealidad y exactitud.6, 18
La robustez es la confiabilidad de una medición analítica, la cual se debe demostrar realizando cambios deliberados a los parámetros experimentales, esto puede incluir la medición de la estabilidad del analito en condiciones de almacenamiento especificadas. 6,19
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La medición de la respuesta de un estándar o de una muestra después de un cambio en los parámetros experimentales no debe diferir de la medida obtenida con el mismo estándar usando parámetros establecidos en más de ±2,0% para una valoración de una forma farmacéutica y no más de ±20,0% para un análisis de impurezas.6,12
Por lo expuesto anteriormente, se planteó el siguiente problema técnico:
¿Cumple la validación del método analítico por cromatografía liquida de alta
resolución (HPLC) para la cuantificación de naproxeno sódico 275mg y
paracetamol 300mg en tabletas recubiertas?
Los objetivos fueron:
Objetivo general:
Validar el método analítico por cromatografía liquida de alta resolución (HPLC) para la cuantificación de naproxeno sódico 275mg y paracetamol
300mg en tabletas recubiertas
Objetivos específicos:
1. Determinar los parámetros de validación: linealidad, precisión, exactitud, selectividad, intervalo y robustez del método analítico por cromatografía liquida de alta resolución (HPLC) para la cuantificación de naproxeno sódico 275mg y paracetamol 300mg en tabletas recubiertas
2. Evaluar los parámetros de validación para verificar el cumplimiento de los criterios establecidos por la Farmacopea Americana.
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II. MATERIAL Y MÉTODO 1. MATERIAL
1.1. Muestra:
Naproxeno sódico y Paracetamol en Tabletas Recubiertas.
1.2. Materiales:
El de uso común en el Laboratorio
1.3. Equipos
Los equipos están previamente calibrados.
Nombre Modelo Marca Serie Ultimo
mantenimiento Agitador magnético (CDC-047) 15842457/0001-10 ANM-10015 SBS (Pesacon) 14045/000 0047 2015-06 Balanza analítica (BAL-CDC-008) GH-252 AND (Pesacon) 15104369 2015-06-30 Balanza (BAL-CDC-009) GX-6100 AND (Pesacon) 14550840 2015-06-30 Baño María (CDC-036) WNB22 Memmert L511.0972 2016-02-17 Cromatógrafo líquido HPLC (CDC-022)
1260 Infinity Agilent Tecnology
Bomba: G1311B 2016-03 Equipo Ultrasonido (CDC-050) 1510K-MTH Branson (8510) Automuestre ador: G1329B 2015-06 Estufa (CDC- 014 ) S 15 Memmert Horno de Columnas: G1316A 2015-06
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1.4. Reactivos:
o Ácido acético glacial o Ácido clorhídrico 37% Q.P o Ácido fosfórico 85% o Agua purificada
o Hidróxido de sodio Pellets o Acetonitrilo HPLC
o Metanol HPLC
o Peróxido de hidrógeno al 30% o Fosfato de potasio monobásico
1.5. Estándares de referencia
ESTANDAR SECUNDARIO
Nombre Lote Fecha Expira Potencia
Paracetamol 1412133 2016-06-26 99,4% T/C
Naproxeno Sódico NS141107 2016-06-24 99,7% T/C
2. METODO ANALITICO DE VALORACIÓN 19,20,21
Procedimiento
Técnica Operatoria: Método HPLC
Diluyente: Se Preparó una mezcla en volúmenes de Acetonitrilo: Agua purificada (30: 40)
Fase Móvil: Se Preparó una mezcla filtrada y recién desgasificada en volúmenes de Acetonitrilo, Agua y Ácido Acético Glacial (50: 49: 1). Se filtró usando una membrana 0,45 um de poro (HV DURAPORE EN PVDF MILLIPORE).
seven multi parameter
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Condiciones Cromatográficas
Columna : C18 5µm 100 Aº de 4,6 x 150 mm o Similar
Flujo : 1,0 mL/min
Temperatura : Ambiente
Longitud de Onda : 254 nm
Vol. Inyección : 5 µL
Tiempo de Corrida: 4,5 minutos.
Tiempo de Retención:
o Paracetamol: Aproximadamente 1,4 minutos. o Naproxeno Sódico: Aproximadamente 3,8 minutos.
Preparación de Estándares y Muestras:
Estándar (trabajar por duplicado)
Se pesó aproximadamente 30 mg de Naproxeno Sódico y 33 mg de Paracetamol estándar, transfiriéndose a una fiola de 50 mL, se adicionó 30 mL de diluyente, sonicandose hasta completar la disolución y se enrazó a volumen con diluyente, se homogenizó. Se transfirió 2 mL de la solución anterior a una fiola de 25 mL y se diluyo a volumen con fase móvil y se homogenizó. Se filtró por membrana Millipore Millex-GV Hydrophilic PVDF 0,22 µm.
Concentración: (0,048 mg/mL de Naproxeno Sódico y 0,053 mg/mL de Paracetamol
Muestra problema (Trabajar por duplicado)
Se pulverizaron no menos 20 tabletas, se pesó aproximadamente 226 mg de muestra pulverizada (Equivalente a 80,8 mg de Naproxeno Sódico y 88,1 mg de Paracetamol) se transfirió a una fiola de 100 mL, se adicionó 10mL de agua, se dispersó, se sonicó por 10 minutos, se adicionó 50mL de diluyente, se sonicó por 10 minutos; se agitó por 30 minutos, se enrazó a volumen con diluyente y se homogenizó. Se
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transfirió 3mL de la solución sobrenadante anterior a una fiola de 50mL, se diluyo a volumen con fase móvil, se homogenizó y se filtró por membrana Millipore Millex-GV Hydrophilic PVDF 0,22 µm.
Concentración: (0,048 mg/mL de Naproxeno Sódico y 0,053 mg/mL de
Paracetamol)
3. Límites de aceptación
Cuadro 1. Parámetros y criterios de aceptación del método analítico a evaluar:
Parámetro Especificaciones
Aptitud del sistema
Eficiencia de la Columna Mínimo 2 000 Platos teóricos
Factor de Asimetría (T) No deberá ser mayor de 2,0
Resolución No deberá ser menor de 5,0
Precisión El CV% de 6 Áreas, no es mayor de 2,0%
Especificidad
a. Especificidad (Selectividad)
Diluyente, fase móvil, blanco, placebo No deberá ser mayor de 2,0%
b. Especificidad- Estresada
b.1 Estándares
Solución Estándar Naproxeno Sódico y Paracetamol
(Análisis inicial) Entre 95,0% -105%
Solución Estándar Naproxeno Sódico y Paracetamol (Condición – Hidrólisis Ácida, Hidrólisis Básica, Oxidación, Calor seco, Calor húmedo, luz )
La diferencia no deberá ser mayor del 25,0%, del análisis inicial
b.2 Placebo
Solución Placebo Naproxeno Sódico y Paracetamol (Condición – Hidrólisis Ácida, Hidrólisis Básica, Oxidación, Calor seco, Calor húmedo, luz)
No deberá ser mayor de 2,0%
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Solución muestra naproxeno sódico y paracetamol
(Análisis Inicial) referencial
Solución Muestra (Condición – Hidrólisis Ácida,
Hidrólisis Básica, Oxidación, Calor seco, Calor húmedo, luz)
La diferencia no deberá ser mayor del 25,0%, del análisis inicial
Linealidad
Linealidad del Sistema (contenido) - naproxeno sódico y paracetamol
El coeficiente de correlación ( r ) (r) ≥ 0,9990
El coeficiente de determinación (r2 ) (r2 ) ≥ 0,9900
Test de verificación de la pendiente o de la linealidad
Test de t
Ttabla= 2,16
( α=0,05; gl= n-2 = 13) texp. > ttabla
Coeficiente de Variación de los factores de respuesta No mayor a 2,0%
Test de verificación de la variable independiente o de la proporcionalidad
Ttabla= 2,16
( α=0,05; gl= n-2 = 13) texp. < ttabla
Test de Cochran (Homogeneidad de Varianzas)
G experimental < G tablas
G tabla = 0,6838
( α=0,05; k= 5, n = 3)
Linealidad de Método - naproxeno sódico y paracetamol
El coeficiente de correlación ( r ) (r) ≥ 0,9990
El coeficiente de determinación (r2 ) (r2 ) ≥ 0,9900
Test de verificación de la pendiente o de la linealidad
Test de t
Ttabla= 2,365
( α=0,05; gl= n-2 = 7) texp. > ttabla
Coeficiente de Variación de los factores de respuesta No deberá ser mayor de 2,0%
Test de verificación de la variable independiente o de la
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( α=0,05; gl= n-2 = 7) texp. < ttabla
Test de Cochran(Homogenidad de Varianzas)
G experimental < G tablas
G tabla = 0,8709
( α=0,05; k= 3, n = 3)
Exactitud
Exactitud naproxeno sódico y paracetamol
Porcentaje de recuperación Entre 98% al 102%
Coeficiente de Variación No debe ser mayor de 2,0 %
Test de G de Cochran G tabla = 0,8709 ( α=0,05; k= 3, n = 3) G experimental < G tabla Test de t de Student Ttabla= 2,306 ( α=0,05; gl= n-1 = 8) t experimental < t tabla Precisión
Repetibilidad Instrumental naproxeno sódico y paracetamol
La desviación estándar relativa (RSD) o coeficiente de
variación de 5 inyecciones No deberá ser mayor de 2,0%
Repetibilidad del Método naproxeno sódico y paracetamol
Desviación Estándar Relativa (RSD%) DSR ≤ 2,0%
Intervalo de confianza Individual (al 95%) t tabla. S
Intervalo de Confianza del Promedio (al 95%)
t tabla. S
n
Precisión Intermedia
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Coeficiente de Variación o (RSD%) del análisis del
analista (1); día (1 ) ≤2,0%
Coeficiente de Variación o (RSD%) del análisis del
analista (2); día ( 2 ) ≤2,0%
Coeficiente de Variación Global o (RSD%) ≤2,0%
Rango
Rango naproxeno sódico y paracetamol
Exactitud Informativo
Precisión Informativo
Linealidad Informativo
Robustez
Condición -Tiempo: 72 horas de Reposo ( Estabilidad de Muestra) naproxeno sódico y paracetamol
Cálculo de la diferencia entre Promedios Absolutos ≤2,0%
Condición –Filtro de Nylon naproxeno sódico y paracetamol
Cálculo de la diferencia entre Promedios Absolutos ≤2,0%
Condición –Cambio de Columna Cromatografía naproxeno sódico y paracetamol
Cálculo de la diferencia entre Promedios Absolutos ≤2,0%
4. Procedimiento para el desarrollo de parámetros de validación
La validación del método analítico por cromatografía liquida de alta resolución (HPLC) para la cuantificación de naproxeno sódico 275mg y paracetamol 300mg en tabletas recubiertas se realizó por el estudio de los siguientes parámetros:
4.1 Aptitud del sistema:
Preparación de la solución Estándar Mixta: Se pesó aproximadamente 30
mg de Naproxeno Sódico y 33 mg de Paracetamol estándar, transfiriéndose a una fiola de 50 mL, se adicionó 30 mL de diluyente, sonicandose hasta completar la disolución y diluyéndose a volumen con diluyente y se homogenizó. Se transfirió 2 mL de la solución anterior a una fiola de 25 mL y
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se diluyo a volumen con fase móvil y se homogenizó. Se filtró por membrana Millipore Millex-GV Hydrophilic PVDF 0,22 µm.
Concentración: (0,048 mg/mL de Naproxeno Sódico y 0,053 mg/mL de
Paracetamol).
4.2 Especificidad
A) Especificidad (Selectividad)
- Se prepararon las siguientes soluciones:
- 01 Muestra de diluyente. - 01 Muestra de fase móvil. - 01 Muestra de blanco.
- 02 Muestras de Estándar Mixto
- 01 Muestra de Placebo más Naproxeno sódico - 01 Muestra de Placebo más Paracetamol
- Se analizaron todas las muestras de acuerdo al método analítico.
B) Especificidad - Estresada a) Estándar
- Solución Estándar Mixto - (Se Preparó por Duplicado):
Se pesó aproximadamente 30 mg de Naproxeno Sódico y 33 mg de Paracetamol estándar, se transfirió a una fiola de 50 mL, se adicionó 30 mL de diluyente, sonicandose hasta completar la disolución y se diluyo a volumen con diluyente y se homogenizó. Se transfirió 2 mL de la solución anterior a una fiola de 25 mL y se diluyó a volumen con fase móvil y se homogenizó. Se filtró por membrana Millipore Mixe-GV Hydrophillic PVDF 0,22 µm.
Concentración: (0,048 mg/ mL de Naproxeno Sódico y 0,053 mg/ mL de
Paracetamol)
- Solución Estándar Naproxeno Sódico (Análisis Inicial)- (Se Preparó por
Duplicado):
Se pesó aproximadamente 30 mg de estándar de Naproxeno Sódico, se transfirió a una fiola de 50 mL, se adicionó 30 mL de diluyente, sonicandose hasta completar la disolución, se diluyo a volumen con
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diluyente y se homogenizó. Se transfirió 2 mL de la solución anterior a una fiola de 25 mL y se diluyo a volumen con fase móvil y se homogenizó. Se filtró por membrana Millipore Mixe-GV Hydrophillic PVDF 0,22 µm.
Concentración: (0,048 mg/ mL de Naproxeno Sódico)
- Solución Estándar Paracetamol (Análisis Inicial)- (Se Preparó por
Duplicado):
Se pesó aproximadamente 33 mg de estándar de Paracetamol, se transfirió una fiola de 50 mL se adicionó 30 mL de diluyente, sonicandose hasta completar la disolución, se diluyo a volumen con diluyente y se homogenizó. Se transfirió 2 mL de la solución anterior a una fiola de 25 mL y se diluyó a volumen con fase móvil y se homogenizó. Se filtró por membrana Millipore Mixe-GV Hydrophillic PVDF 0,22 µm.
Concentración: (0,053 mg/ mL de Paracetamol)
- Solución Estándar Naproxeno Sódico- (Condición – Hidrólisis Ácida)-
(Se Preparó por Duplicado):
Se pesó aproximadamente 30 mg de estándar de Naproxeno Sódico, se transfirió a una fiola de 50 mL se adicionó 30 mL de diluyente, sonicandose hasta completar la disolución se adicionó 2,5 mL de HCl 1N; luego se llevó a baño maría por 2 horas a 80º±1ºC, se dejó que enfríe, y se neutralizó con 2,5 mL de NaOH 1N y se diluyo a volumen con diluyente y se homogenizó. Se transfirió 2 mL de la solución anterior a una fiola de 25 mL y se diluyo a volumen con fase móvil y se homogenizó. Se filtró por membrana Millipore Mixe-GV Hydrophillic PVDF 0,22 µm.
Concentración: (0,048 mg/ mL de Naproxeno Sódico)
- Solución Estándar Paracetamol- (Condición – Hidrólisis Ácida)- (Se
Preparó por Duplicado):
Se pesó aproximadamente 33 mg de estándar de Paracetamol, se transfirió una fiola de 50 mL se adicionó 30 mL de diluyente, sonicandose hasta completar la disolución se adicionó 2,5 mL de HCl 1N; luego se llevó a baño maría por 2 horas a 80º±1ºC, se dejó que enfríe, y se neutralizó con 2,5 mL de NaOH 1N y se diluyo a volumen con diluyente y se homogenizó. Se transfirió 2 mL de la solución anterior a una fiola de 25
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mL y se diluyo a volumen con fase móvil y se homogenizó. Se filtró por membrana Millipore Mixe-GV Hydrophillic PVDF 0,22 µm.
Concentración: (0,053 mg/ mL de Paracetamol)
- Solución Estándar Naproxeno Sódico - (Condición – Hidrólisis Básica)-
(Se Preparó por Duplicado):
Se pesó aproximadamente 30 mg de estándar de Naproxeno Sódico, se transfirió una fiola de 50 mL se adicionó 30 mL de diluyente, sonicandose hasta completar la disolución, se adicionó2, 5 mL de NaOH 1N; luego se llevó a baño maría por 2 horas a 80º±1ºC, se dejó que enfríe, y se neutralizó con 2,5 mL de HCl 1N y se diluyo a volumen con diluyente y se homogenizó. Se transfirió 2 mL de la solución anterior a una fiola de 25 mL y se diluyo a volumen con fase móvil y se homogenizó. Se filtró por membrana Millipore Mixe-GV Hydrophillic PVDF 0,22 µm.
Concentración: (0,048 mg/ mL de Naproxeno Sódico)
- Solución Estándar Paracetamol- (Condición – Hidrólisis Básica)- (Se
Preparó por Duplicado):
Se pesó aproximadamente 33 mg de estándar de Paracetamol, Se transfirió una fiola de 50 mL se adicionó 30 mL de diluyente, sonicandose hasta completar la disolución se adicionó 2,5 mL de NaOH 1N; luego se llevó a baño maría por 2 horas a 80º±1ºC, se dejó que enfríe, y se neutralizó con 2,5 mL de HCl 1N y se diluyo a volumen con diluyente y se homogenizó. Se transfirió 2 mL de la solución anterior a una fiola de 25 mL y se diluyo a volumen con fase móvil y se homogenizó. Se filtró por membrana Millipore Mixe-GV Hydrophillic PVDF 0,22 µm.
Concentración: (0,053 mg/ mL de Paracetamol)
- Solución Estándar de Naproxeno Sódico - (Condición – Oxidación)- (Se
Preparó por Duplicado):
Se pesó aproximadamente 30 mg de estándar de Naproxeno Sódico, se transfirió una fiola de 50 mL se adicionó 30 mL de diluyente, sonicandose hasta completar la disolución se adicionó 2,5 mL de peróxido de hidrogeno al 2%; luego se llevó a baño maría por 2 horas a 80º±1ºC, se dejó que enfríe, y se diluyo a volumen con diluyente y se homogenizó.
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Se transfirió 2 mL de la solución anterior a una fiola de 25 mL y se diluyo a volumen con fase móvil y se homogenizó. Se filtró por membrana Millipore Mixe-GV Hydrophillic PVDF 0,22 µm.
Concentración: (0,048 mg/ mL de Naproxeno Sódico)
- Solución Estándar de Paracetamol - (Condición – Oxidación)- (Se
Preparó por Duplicado):
Se pesó aproximadamente 33 mg de estándar de Paracetamol, se transfirió una fiola de 50 mL se adicionó 30 mL de diluyente, sonicandose hasta completar la disolución se adicionó 2,5 mL de peróxido de hidrogeno al 2%; luego se llevó a baño maría por 2 horas a 80º±1ºC, se dejó que enfríe, y se diluyo a volumen con diluyente y se homogenizó. Se transfirió 2 mL de la solución anterior a una fiola de 25 mL y se diluyo a volumen con fase móvil y se homogenizó. Se filtró por membrana Millipore Mixe-GV Hydrophillic PVDF 0,22 µm.
Concentración: (0,053 mg/ mL de Paracetamol)
- Solución Estándar de Naproxeno sódico - (Condición – Calor húmedo)-
(Se Preparó por Duplicado):
Se pesó aproximadamente 30 mg de estándar de Naproxeno Sódico, Se transfirió una fiola de 50 mL se adicionó 30 mL de diluyente, sonicandose hasta completar la disolución; luego se llevó a baño maría por 2 horas a 80º±1ºC, se dejó que enfríe, y se diluyo a volumen con diluyente y se homogenizó. Se transfirió 2 mL de la solución anterior a una fiola de 25 mL y se diluyo a volumen con fase móvil y se homogenizó. Se filtró por membrana Millipore Mixe-GV Hydrophillic PVDF 0,22 µm.
Concentración: (0,048 mg/ mL de Naproxeno Sódico)
- Solución Estándar de Paracetamol - (Condición – Calor húmedo)- (Se
Preparó por Duplicado):
En una fiola de 50 mL, se pesó 30 mg de estándar de Naproxeno Sódico, se adicionó30 mL de diluyente, sonicandose hasta completar la disolución, luego se llevó a baño maría por 2 horas a 80º±1ºC, se dejó que enfríe, y se diluyo a volumen con diluyente y se homogenizó. Se transfirió 2 mL de la solución anterior a una fiola de 25 mL y se diluyo a volumen con fase móvil y se homogenizó. Se filtró por membrana Millipore Mixe-GV Hydrophillic PVDF 0,22 µm.
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Concentración: (0,053 mg/ mL de Paracetamol)
- Solución Estándar de Naproxeno Sódico (Condición – Calor Seco)- (Se
Preparó por Duplicado):
Se pesó aproximadamente 30 mg de estándar de Naproxeno Sódico, se transfirió una fiola de 50 mL previamente sometido a estufa a 60º + 1ºC por 24 horas, se adicionó30 mL de diluyente, sonicandose hasta completar la disolución y se diluyo a volumen con diluyente, se homogenizó. Se transfirió 2 mL de la solución anterior a una fiola de 25 mL y se diluyo a volumen con fase móvil y se homogenizó. Se filtró por membrana Millipore Mixe-GV Hydrophillic PVDF 0,22 µm.
Concentración: (0,048 mg/ mL de Naproxeno Sódico)
- Solución Estándar de Paracetamol (Condición – Calor Seco)- (Se
Preparó por Duplicado):
Se pesó aproximadamente 33 mg de estándar de Paracetamol, Se transfirió una fiola de 50 mL previamente sometido a estufa a 60º + 1ºC por 24 horas, se adicionó30 mL de diluyente, sonicandose hasta completar la disolución y se diluyo a volumen con diluyente, se homogenizó. Se transfirió 2 mL de la solución anterior a una fiola de 25 mL y se diluyo a volumen con fase móvil y se homogenizó. Se filtró por membrana Millipore Mixe-GV Hydrophillic PVDF 0,22 µm.
Concentración: (0,053 mg/ mL de Paracetamol)
- Solución de Naproxeno Sódico (Muestra Estresada – Luz)- (Se Preparó
por Duplicado):
Se pesó aproximadamente 30 mg de estándar de Naproxeno Sódico, se transfirió una fiola de 50 mL previamente sometido a luz por 24horas se adicionó30 mL de diluyente, sonicandose hasta completar la disolución y se diluyo a volumen con diluyente, se homogenizó. Se transfirió 2 mL de la solución anterior a una fiola de 25 mL y se diluyo a volumen con fase móvil y se homogenizó. Se filtró por membrana Millipore Mixe-GV Hydrophillic PVDF 0,22 µm.
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- Solución Estándar de Paracetamol (Muestra Estresada – Luz)- (Se
Preparó por Duplicado):
Se pesó aproximadamente 33 mg de estándar de Paracetamol, se transfirió una fiola de 50 mL, previamente sometido a luz por 24horas, se adicionó 30 mL de diluyente, sonicandose hasta completar la disolución y se diluyo a volumen con diluyente, se homogenizó. Se transfirió 2 mL de la solución anterior a una fiola de 25 mL y se diluyo a volumen con fase móvil y se homogenizó. Se filtró por membrana Millipore Mixe-GV Hydrophillic PVDF 2,22 µm.
Concentración: (0,053 mg/ mL de Paracetamol) b) Placebo
- Solución Estándar Mixto - (Se Preparó por Duplicado):
Se preparó de acuerdo al método analítico
- Solución de Placebo - (Se Preparó por Duplicado):
Se pesó aproximadamente 226 mg de placebo, se transfirió a una fiola de 100 mL, se adicionó 10 mL de agua, se dispersó, sonicandose por 10 minutos, se adicionó 50 mL de diluyente, se sonicó por 10 minutos; se agitó por 30 minutos y se diluyo a volumen con diluyente, se homogenizó. Se transfirió 3 mL de la solución anterior a una fiola de 50 mL y se diluyo a volumen con fase móvil y se homogenizó. Se filtró por membrana Millipore Mixe-GV Hydrophillic PVDF 0,22 µm.
- Solución de Placebo (Muestra Estresada – Hidrólisis Ácida)- (Se Preparó
por Duplicado):
Se pesó aproximadamente 226 mg de placebo, se transfirió a una fiola de 100 mL, se adicionó 10 mL de agua, se dispersó, sonicandose por 10 minutos, se adicionó 50 mL de diluyente, se sonicó por 10 minutos; se agitó por 30 minutos y se adicionó 5 mL de HCl 1N; luego se llevó a baño maría por 2 horas a 80º±1ºC, se dejó enfriar, y se neutralizó con 5 mL de NaOH 1N y se diluyo a volumen con diluyente y se homogenizó. Se transfirió 3 mL de la solución anterior a una fiola de 50 mL y se diluyo a volumen con fase móvil y se homogenizó. Se filtró por membrana Millipore Mixe-GV Hydrophillic PVDF 0,22 µm.
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- Solución de Placebo (Muestra Estresada – Hidrólisis Básica)- (Se Preparó
por Duplicado):
Se pesó aproximadamente 226 mg de placebo, se transfirió a una fiola de 100 mL, se adicionó 10 mL de agua, se dispersó, sonicandose por 10 minutos, se adicionó 50 mL de diluyente, se sonicó por 10 minutos; se agitó por 30 minutos y se adicionó 5 mL de NaOH 1N; luego se llevó a baño maría por 2 horas a 80º±1ºC, se dejó enfriar, y se neutralizó con 5 mL de HCl 1N y se diluyo a volumen con diluyente y se homogenizó. Se transfirió 3 mL de la solución anterior a una fiola de 50 mL y se diluyo a volumen con fase móvil y se homogenizó. Se filtró por membrana Millipore Mixe-GV Hydrophillic PVDF 0,22 µm.
- Solución de Placebo (Muestra Estresada – Oxidación)- (Se Preparó por
Duplicado):
Se pesó aproximadamente 226 mg de placebo, se transfirió a una fiola de 100 mL, se adicionó 10 mL de agua, se dispersó, sonicandose por 10 minutos, se adicionó 50 mL de diluyente, se sonicó por 10 minutos; se agitó por 30 minutos se adicionó 5 mL de peróxido de hidrogeno al 2%; luego se llevó a baño maría por 2 horas a 80º±1ºC, se dejó enfriar, y se diluyo a volumen con diluyente y se homogenizó. Se transfirió 3 mL de la solución anterior a una fiola de 50 mL y se diluyo a volumen con fase móvil y se homogenizó. Se filtró por membrana Millipore Mixe-GV Hydrophillic PVDF 0,22 µm.
- Solución de Placebo (Muestra Estresada – Calor Húmedo)- (Se Preparó
por Duplicado):
Se pesó aproximadamente 226 mg de placebo, se transfirió a una fiola de 100 mL, se adicionó 10 mL de agua, se dispersó, sonicandose por 10 minutos, se adicionó 50 mL de diluyente, se sonicó por 10 minutos; se agitó por 30 minutos; luego se llevó a baño maría por 2 horas a 80º±1ºC, se dejó enfriar, y se diluyo a volumen con diluyente y se homogenizó. Se transfirió 3 mL de la solución anterior a una fiola de 50 mL y se diluyo a volumen con fase móvil y se homogenizó. Se filtró por membrana Millipore Mixe-GV Hydrophillic PVDF 0,22 µm.
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- Solución de Placebo (Muestra Estresada – Calor Seco)- (Se Preparó por
Duplicado):
Se pesó aproximadamente 226 mg de placebo previamente sometido a estufa a 60º + 1ºC por 24 horas, se transfirió a una fiola de 100 mL, se adicionó 10 mL de agua, se dispersó, sonicandose por 10 minutos, se adicionó 50 mL de diluyente, se sonicó por 10 minutos; se agitó por 30 minutos y se diluyo a volumen con diluyente y se homogenizó. Se transfirió 3 mL de la solución anterior a una fiola de 50 mL y se diluyo a volumen con fase móvil y se homogenizó. Se filtró por membrana Millipore Mixe-GV Hydrophillic PVDF 0,22 µm.
- Solución de Placebo (Muestra Estresada – Luz)- (Se Preparó por
Duplicado):
Se pesó aproximadamente 226 mg de placebo previamente sometido previamente sometido a luz por 24 horas, se transfirió a una fiola de 100 mL, se adicionó 10 mL de agua, se dispersó, sonicandose por 10 minutos, se adicionó 50 mL de diluyente, se sonicó por 10 minutos; se agitó por 30 minutos y se diluyo a volumen con diluyente y se homogenizó. Se transfirió 3 mL de la solución anterior a una fiola de 50 mL y se diluyo a volumen con fase móvil y se homogenizó. Se filtró por membrana Millipore Mixe-GV Hydrophillic PVDF 0,22 µm.
- Solución de Placebo más Estándar de Paracetamol- (Se preparó una sola
vez):
Se pesó aproximadamente 137,9 mg de placebo y 88,1 mg de Paracetamol, se transfirió a una fiola de 100 mL, se adicionó 10 mL de agua, se dispersó, sonicandose por 10 minutos, se adicionó 50 mL de diluyente, se sonicó por 10 minutos; se agitó por 30 minutos y se diluyo a volumen con diluyente y se homogenizó. Se transfirió 3 mL de la solución anterior a una fiola de 50 mL y se diluyo a volumen con fase móvil y se homogenizó. Se filtró por membrana Millipore Mixe-GV Hydrophillic PVDF 0,22 µm.
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- Solución de Placebo más Estándar de Naproxeno sódico- (Se preparó una
sola vez):
Se pesó aproximadamente 145,2 mg de placebo y 88,1 mg de Naproxeno sódico, se transfirió a una fiola de 100 mL, se adicionó 10 mL de agua, se dispersó, sonicandose por 10 minutos, se adicionó 50 mL de diluyente, se sonicó por 10 minutos; se agitó por 30 minutos y se diluyo a volumen con diluyente y se homogenizó. Se transfirió 3 mL de la solución anterior a una fiola de 50 mL y se diluyo a volumen con fase móvil y se homogenizó. Se filtró por membrana Millipore Mixe-GV Hydrophillic PVDF 0,22 µm.
c) Muestra (Tabletas Recubiertas de naproxeno sódico y paracetamol):
- Solución Estándar Mixto - (Se Preparó por Duplicado): Se preparó de
acuerdo al método analítico.
- Solución de Muestra - (Se Preparó por Duplicado): Se preparó de acuerdo
al método analítico
- Solución de Muestra (Muestra Estresada – Hidrólisis Ácida)- (Se Preparó por Duplicado):
Se pesó aproximadamente 226 mg de la solución muestra, se transfirió a una fiola de 100 mL, se adicionó 10 mL de agua, se dispersó, sonicandose por 10 minutos, se adicionó 50 mL de diluyente, se sonicó por 10 minutos; se agitó por 30 minutos y se adicionó 5 mL de HCl 1N; luego se llevó a baño maría por 2 horas a 80º±1ºC, se dejó enfriar, y se neutralizó con 5 mL de NaOH 1N y se diluyo a volumen con diluyente y se homogenizó. Se transfirió 3 mL de la solución anterior a una fiola de 50 mL y se diluyo a volumen con fase móvil y se homogenizó. Se filtró por membrana Millipore Mixe-GV Hydrophillic PVDF 0,22 µm.
- Solución de Muestra (Muestra Estresada – Hidrólisis Básica)- (Se Preparó por Duplicado):
Se pesó aproximadamente 226 mg de la solución muestra, se transfirió a una fiola de 100 mL, se adicionó 10 mL de agua, se dispersó, sonicándose por 10 minutos, se adicionó 50 mL de diluyente, se sonicó por 10 minutos; se agitó por 30 minutos y se adicionó 5 mL de NaOH 1N; luego se llevó a
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baño maría por 2 horas a 80º±1ºC, se dejó enfriar, y se neutralizó con 5 mL de HCl 1N y se diluyo a volumen con diluyente y se homogenizó. Se transfirió 3 mL de la solución anterior a una fiola de 50 mL y se diluyo a volumen con fase móvil y se homogenizó. Se filtró por membrana Millipore Mixe-GV Hydrophillic PVDF 0,22 µm.
- Solución de Muestra (Muestra Estresada – Oxidación)- (Se Preparó por Duplicado):
Se pesó aproximadamente 226 mg de la solución muestra, se transfirió a una fiola de 100 mL, se adicionó 10 mL de agua, se dispersó, sonicándose por 10 minutos, se adicionó 50 mL de diluyente, se sonicó por 10 minutos; se agitó por 30 minutos se adicionó 5 mL de Peróxido de Hidrogeno al 2%; luego se llevó a baño maría por 2 horas a 80º±1ºC, se dejó enfriar, y se diluyo a volumen con diluyente y se homogenizó. Se transfirió 3 mL de la solución anterior a una fiola de 50 mL y se diluyo a volumen con fase móvil y se homogenizó. Se filtró por membrana Millipore Mixe-GV Hydrophillic PVDF 0,22 µm.
- Solución de Muestra (Muestra Estresada – Calor Húmedo)- (Se Preparó por Duplicado):
Se pesó aproximadamente 226 mg de la solución muestra, se transfirió a una fiola de 100 mL, se adicionó 10 mL de agua, se dispersó, sonicandose por 10 minutos, se adicionó 50 mL de diluyente, se sonicó por 10 minutos; se agitó por 30 minutos; luego Se llevó a baño maría por 2 horas a 80º±1ºC, se dejó enfriar, y se diluyo a volumen con diluyente y se homogenizó. Se transfirió 3 mL de la solución anterior a una fiola de 50 mL y se diluyo a volumen con fase móvil y se homogenizó. Se filtró por membrana Millipore Mixe-GV Hydrophillic PVDF 0,22 µm.
- Solución de Muestra (Muestra Estresada – Calor Seco)- (Se Preparó por Duplicado):
Se pesó aproximadamente 226 mg de la solución muestra previamente sometido a estufa a 60º + 1ºC por 24 horas, se transfirió a una fiola de 100 mL, se adicionó 10 mL de agua, se dispersó, sonicandose por 10 minutos, se adicionó 50 mL de diluyente, se sonicó por 10 minutos; se agitó por 30 minutos y se diluyo a volumen con diluyente y se homogenizó. Se
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volumen con fase móvil y se homogenizó. Se filtró por membrana Millipore Mixe-GV Hydrophillic PVDF 0,22 µm.
- Solución de Muestra (Muestra Estresada – Luz)- (Se Preparó por Duplicado):
Se pesó aproximadamente 226 mg de la solución muestra previamente sometido previamente sometido a luz por 24 horas, se transfirió a una fiola de 100 mL, se adicionó 10 mL de agua, se dispersó, sonicandose por 10 minutos, se adicionó 50 mL de diluyente, se sonicó por 10 minutos; se agitó por 30 minutos y se diluyo a volumen con diluyente y se
homogenizó. Se transfirió 3 mL de la solución anterior a una fiola de 50 mL y se diluyo a volumen con fase móvil y se homogenizó. Se filtró por membrana Millipore Mixe-GV Hydrophillic PVDF 0,22 µm.
4.3 Linealidad
a) Linealidad del sistema: Se utilizó Estándares de Naproxeno sódico y Paracetamol, se preparó 3 muestras de cada concentración:
- Solución al 60%: Se pesó aproximadamente 18 mg de Naproxeno
Sódico y 19,8 mg de Paracetamol estándar, se transfirió una fiola de 50 mL, se adicionó 30 mL de diluyente, sonicandose hasta completar la disolución y se diluyo a volumen con diluyente, se homogenizó. Se transfirió 2 mL de la solución anterior a una fiola de 25 mL y se diluyo a volumen con fase móvil y se homogenizó. Se filtró por membrana Millipore Millex-GV Hydrophilic PVDF 0,22 µm. Se obtendrá una concentración (0,029 mg/ mL de Naproxeno Sódico y 0,032 mg/ mL de Paracetamol)
- Solución al 80%: Se pesó aproximadamente 24 mg de Naproxeno
Sódico y 26,4 mg de Paracetamol estándar, se transfirió una fiola de 50 mL, se adicionó 30 mL de diluyente, sonicandose hasta completar la disolución y se diluyo a volumen con diluyente, se homogenizó. Se transfirió 2 mL de la solución anterior a una fiola de 25 mL y se diluyo a volumen con fase móvil y se homogenizó. Se filtró por membrana Millipore Millex-GV Hydrophilic PVDF 0,22 µm.Se obtendrá una
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concentración (0,038 mg/ mL de Naproxeno Sódico y 0,042 mg/ mL de Paracetamol)
- Solución al 100%: Se pesó aproximadamente 30 mg de Naproxeno
Sódico y 33 mg de Paracetamol estándar, se transfirió una fiola de 50 mL, se adicionó 30 mL de diluyente, sonicandose hasta completar la disolución y se diluyo a volumen con diluyente, se homogenizó. Se transfirió 2 mL de la solución anterior a una fiola de 25 mL y se diluyo a volumen con fase móvil y se homogenizó. Se filtró por membrana Millipore Millex-GV Hydrophilic PVDF 0,22 µm. Se obtendrá una concentración (0,048 mg/ mL de Naproxeno Sódico y 0,053 mg/ mL de Paracetamol)
- Solución al 120%: Se pesó aproximadamente 36 mg de Naproxeno
Sódico y 39,6 mg de Paracetamol estándar, se transfirió una fiola de 50 mL, se adicionó 30 mL de diluyente, sonicandose hasta completar la disolución y se diluyo a volumen con diluyente, se homogenizó. Se transfirió 2 mL de la solución anterior a una fiola de 25 mL y se diluyo a volumen con fase móvil y se homogenizó. Se filtró por membrana Millipore Millex-GV Hydrophilic PVDF 0,22 µm. Se obtendrá una concentración (0,058 mg/ mL de Naproxeno Sódico y 0,063 mg/ mL de Paracetamol)
- Solución al 140%: Se pesó aproximadamente 42 mg de Naproxeno
Sódico y 46,2 mg de Paracetamol estándar, se transfirió una fiola de 50 mL, se adicionó 30 mL de diluyente, sonicandose hasta completar la disolución y se diluyo a volumen con diluyente, se homogenizó. Se transfirió 2 mL de la solución anterior a una fiola de 25 mL y se diluyo a volumen con fase móvil y se homogenizó. Se filtró por membrana Millipore Millex-GV Hydrophilic PVDF 0,22 µm.Se obtendrá una concentración (0,067 mg/ mL de Naproxeno Sódico y 0,074 mg/ mL de Paracetamol.
b) Linealidad del Método: Se utilizó Naproxeno sódico, Paracetamol,
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- Muestra al 60%: Se pesó aproximadamente 48.5 mg de naproxeno
sódico, 52.9 mg de paracetamol, 124.6 mg de placebo, se transfirió a una fiola de 100 mL, se adicionó 10 mL de agua, se dispersó, sonicandose por 10 minutos, se adicionó 50 mL de diluyente, se sonicó por 10 minutos; se agitó por 30 minutos, se diluyo a volumen con diluyente y se homogenizó. Se transfirió 3 mL de la solución sobrenadante anterior a una fiola de 50 mL, se diluyo a volumen con fase móvil, se homogenizó y se filtró por membrana Millipore Millex-GV Hydrophilic PVDF 0,22 µm. Concentración: (0,029 mg/ mL de Naproxeno Sódico y 0,032 mg/ mL de Paracetamol).
- Muestra al 100%: Se pesó aproximadamente 80,8 mg de naproxeno
sódico, 88,1 mg de paracetamol, 57,1 mg de placebo, se transfirió a una fiola de 100 mL, se adicionó 10 mL de agua, se dispersó, sonicandose por 10 minutos, se adicionó 50 mL de diluyente, se sonicó por 10 minutos; se agitó por 30 minutos, se diluyo a volumen con diluyente y se homogenizó. Se transfirió 3 mL de la solución sobrenadante anterior a una fiola de 50 mL, se diluyo a volumen con fase móvil, se homogenizó y se filtró por membrana Millipore Millex-GV Hydrophilic PVDF 0,22 µconcentración: (0,048 mg/ mL de Naproxeno Sódico y 0,053 mg/ mL de Paracetamol)
- Muestra al 140%: Se pesó aproximadamente 113.1 mg de naproxeno
sódico, 123,3 mg de paracetamol, 210,4 mg de placebo, se transfirió a una fiola de 100 mL, se adicionó 10 mL de agua, se dispersó, sonicandose por 10 minutos, se adicionó 50 mL de diluyente, se sonicó por 10 minutos; se agitó por 30 minutos, se diluyo a volumen con diluyente y se homogenizó. Se transfirió 3 mL de la solución sobrenadante anterior a una fiola de 50 mL, se diluyo a volumen con fase móvil, se homogenizó y se filtró por membrana Millipore Millex-GV Hydrophilic PVDF 0,22 µm. Concentración: (0,067 mg/ mL de Naproxeno Sódico y 0,074 mg/ mL de Paracetamol).
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4.4 Exactitud:
- Se preparó 02 estándares mixtos al 100% según indica el método
analítico.
- Para el estudio de la Exactitud, se utilizó las muestras preparadas en la
Linealidad del Método
- Se realizó el análisis por triplicado.
- Todas las muestras se analizaron de acuerdo al método analítico.
4.5 Precisión:
a) Repetibilidad Instrumental:
- Se Preparó 01 estándar mixto de Naproxeno sódico y Paracetamol de acuerdo al método analítico
- Se calculó el coeficiente de Variación (CV (%)) de las 5 inyecciones, el cual no deberá exceder el 2%.
b) Repetibilidad del Método
- Se preparó una Solución Estándar Mixto según indica el método analítico.
- Se preparó 6 veces la Solución Muestra según indica el método analítico.
- Se registró las respuestas y se determinó los límites de confianza de los resultados individuales y resultados promedio.
- Se determinó el Coeficiente de Variación (CV (%)) de las respuestas obtenidas.
4.6 Precisión Intermedia:
Se Prepararon las muestras según técnica analítica. Luego, se realizó ensayos con distintos analistas (se procedió a repetir los pasos descritos en la Repetibilidad del Método, empleando el mismo producto como muestra, el cual se analizó en diferentes días, en el mismo equipo HPLC y solo de ser posible en otro equipo HPLC.
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Se Registró las respuestas y se determinó los Coeficiente de Variación (CV (%)) del análisis del analista (1) y del análisis del analista (2).
Se Determinó el Coeficiente de Variación Global (CV (%)) de los resultados obtenidos del análisis del analista (1) y del análisis del analista (2). Criterio de aceptación: El CV (%) no es más de 2%.
4.7 Rango o Intervalo
Se procedió como se indica en la Contenido Linealidad.
Se usaron los datos obtenidos de la Contenido Linealidad
4.8 Robustez
Todas las muestras fueron analizadas de acuerdo al método analítico.
Condición – Tiempo: 72 horas de Reposo (Estabilidad de la muestras)
Condición –Filtro de Nylon
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III. RESULTADOS
Tabla 1. Especificaciones y resultados del parámetro de aptitud del sistema
PARAMETRO ESPECIFICACIONES RESULTADO CONCLUSIÓN
Naproxeno sódico Eficiencia de la Columna Mínimo 2000 Platos teóricos 12 521 Conforme Factor de Asimetría (T) No más de 2,0 1,0006 Conforme
Resolución No menor de 5,0 18,7 Conforme
Precisión El CV% de 6 Áreas, no es más de 2,0% 0,3% Conforme Paracetamol Eficiencia de la Columna Mínimo 2000 Platos teóricos 4 248 Conforme Factor de Asimetría (T) No más de 2,0 1,0931 Conforme
Resolución No menor de 5,0 N.A Conforme
Precisión El CV% de 6 Áreas, no es más de 2,0%
0,3% Conforme
Tabla 2. Especificaciones y Resultados del parámetro de Especificidad (Selectividad)
PARAMETRO ESPECIFICACIONES RESULTADO CONCLUSIÓN
Naproxeno sódico
Diluyente No deberá ser mayor de 2,0% 0,0% Conforme
Fase móvil No deberá ser mayor de 2,0% 0,0% Conforme
Blanco No deberá ser mayor de 2,0% 0,0% Conforme
Placebo No deberá ser mayor de 2,0% 0,1% Conforme
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BIOQUIMICA
Diluyente No deberá ser mayor de 2,0% 0,0% Conforme
Fase móvil No deberá ser mayor de 2,0% 0,3% Conforme
Blanco No deberá ser mayor de 2,0% 0,0% Conforme
Placebo No deberá ser mayor de 2,0% 0,0% Conforme
Tabla 3. Especificaciones y Resultados del parámetro de Especificidad (Selectividad) de Estándares.
PARAMETRO ESPECIFICACIONES RESULTADO CONCLUSIÓN
Solución Estándar Naproxeno Sódico (Análisis inicial) Entre 95,0% -105% 95,7% Conforme Solución Estándar Paracetamol (Análisis inicial) Entre 95,0% -105% 98,8% Conforme Solución Estándar Naproxeno Sódico (Condición – Hidrólisis Ácida)
La diferencia no deberá ser mayor del 25,0%, del análisis
inicial P=94,40%/D=1,3% Conforme Solución Estándar Paracetamol (Condición – Hidrólisis Ácida)
La diferencia no deberá ser mayor del 25,0%, del análisis
inicial P=90,93%/D=7,9% Conforme Solución Estándar Naproxeno Sódico (Condición – Hidrólisis Básica)
La diferencia no deberá ser mayor del 25,0%, del análisis
inicial P=95,19%/D=0,5% Conforme Solución Estándar Paracetamol (Condición – Hidrólisis Básica)
La diferencia no deberá ser mayor del 25,0%, del análisis
inicial
P=97,29%//D=1,5% Conforme
Solución Estándar de Naproxeno Sódico (Condición– Oxidación)
La diferencia no deberá ser mayor del 25,0%, del análisis
inicial
P=75,07%/D=20,6% Conforme
Solución Estándar de Paracetamol (Condición
La diferencia no deberá ser mayor del 25,0%, del análisis
BIBLIOTECA
DE
FARMACIA
Y
BIOQUIMICA
– Oxidación) inicial Solución Estándar de Naproxeno Sódico (Condición – Calor seco)La diferencia no deberá ser mayor del 25,0%, del análisis
inicial
P=96,93%/D=1,3 Conforme
Solución Estándar de Paracetamol (Condición
– Calor húmedo)
La diferencia no deberá ser mayor del 25,0%, del análisis
inicial P=99,52%/D=0,7% Conforme Solución Estándar de Naproxeno Sódico (Condición – Calor húmedo)
La diferencia no deberá ser mayor del 25,0%, del análisis
inicial
P=95,14%/D=0,5% Conforme
Solución Estándar de Paracetamol (Condición
– Calor seco)
La diferencia no deberá ser mayor del 25,0%, del análisis
inicial
P=98,97%/D=0,1% Conforme
Solución de Naproxeno Sódico (Muestra Estresada – Luz)
La diferencia no deberá ser mayor del 25,0%, del análisis
inicial
P=93,03%/D=2,6% Conforme
Solución Estándar de Paracetamol (Muestra
Estresada – Luz)
La diferencia no deberá ser mayor del 25,0%, del análisis
inicial
P=99,00%/D=0,2% Conforme
LEYENDA: P= Porcentaje; D= diferencia del porcentaje del análisis inicial menos porcentaje en la condición de estrés
Tabla 4. Especificaciones y Resultados del parámetro Especificidad (Selectividad) de Placebos.
PARAMETRO ESPECIFICACIONES RESULTADO CONCLUSIÓN
Naproxeno Sódico
Solución Placebo (Condición – Hidrólisis
Ácida)
No deberá ser mayor de 2,0% 0,0% Conforme
Solución Placebo (Condición – Hidrólisis
Básica)
BIBLIOTECA
DE
FARMACIA
Y
BIOQUIMICA
Solución Placebo
(Condición– Oxidación) No deberá ser mayor de 2,0% 0,0% Conforme
Solución Placebo (Condición – Calor
húmedo)
No deberá ser mayor de 2,0% 0,0% Conforme
Solución Placebo
(Condición – Calor seco) No deberá ser mayor de 2,0% 0,0% Conforme
Solución Placebo (Muestra Estresada –
Luz)
No deberá ser mayor de 2,0% 0,0% Conforme
Paracetamol
Solución Placebo (Condición – Hidrólisis
Ácida)
No deberá ser mayor de 2,0% 0,1% Conforme
Solución Placebo (Condición – Hidrólisis
Básica)
No deberá ser mayor de 2,0% 0,4% Conforme
Solución Placebo
(Condición– Oxidación) No deberá ser mayor de 2,0% 0,2% Conforme
Solución Placebo (Condición – Calor
húmedo)
No deberá ser mayor de 2,0% 0,2% Conforme
Solución Placebo
(Condición – Calor seco) No deberá ser mayor de 2,0% 0,1% Conforme
Solución Placebo (Muestra Estresada –
Luz)
BIBLIOTECA
DE
FARMACIA
Y
BIOQUIMICA
Tabla 5. Especificaciones y Resultados del parámetro Especificidad (Selectividad) de la muestra.
PARAMETRO ESPECIFICACIONES RESULTADO CONCLUSIÓN
Solución Muestra (Análisis Inicial)
Naproxeno Sódico
La diferencia no deberá ser mayor del 25,0%, del análisis
inicial
98,8% Conforme
Paracetamol
La diferencia no deberá ser mayor del 25,0%, del análisis
inicial
98,7% Conforme
Solución Muestra (Condición – Hidrólisis Ácida)
Naproxeno Sódico
La diferencia no deberá ser mayor del 25,0%, del análisis
inicial P=99,90%/D=1,2% Conforme
Paracetamol
La diferencia no deberá ser mayor del 25,0%, del análisis
inicial
P=92,52%/D=6,1% Conforme
Solución Muestra (Condición – Hidrólisis Básica)
Naproxeno Sódico
La diferencia no deberá ser mayor del 25,0%, del análisis
inicial
P=99,79%/D=1,0% Conforme
Paracetamol
La diferencia no deberá ser mayor del 25,0%, del análisis
inicial
P=97,22%/D=1,4% Conforme
Solución Muestra(Condición – Oxidación)
Naproxeno Sódico
La diferencia no deberá ser mayor del 25,0%, del análisis
inicial
P=90,39%/D=8,4% Conforme
Paracetamol
La diferencia no deberá ser mayor del 25,0%, del análisis
inicial
P=99,98%/D=1,4% Conforme
BIBLIOTECA
DE
FARMACIA
Y
BIOQUIMICA
Naproxeno Sódico
La diferencia no deberá ser mayor del 25,0%, del análisis
inicial
P=99,50%/D=0,8% Conforme
Paracetamol
La diferencia no deberá ser mayor del 25,0%, del análisis
inicial
P=98,17%/D=0,5% Conforme
Solución Muestra(Condición – Calor seco)
Naproxeno Sódico
La diferencia no deberá ser mayor del 25,0%, del análisis
inicial
P=106,70%/D=8,0% Conforme
Paracetamol
La diferencia no deberá ser mayor del 25,0%, del análisis
inicial
P=103,31%/D=4,7% Conforme
Solución Muestra(Condición –Luz)
Naproxeno Sódico
La diferencia no deberá ser mayor del 25,0%, del análisis
inicial
P=96,94%/D=1,8% Conforme
Paracetamol
La diferencia no deberá ser mayor del 25,0%, del análisis
inicial
P=95,49%/D=3,1% Conforme
Tabla 6. Especificaciones y Resultados del parámetro Linealidad del Sistema
PARAMETRO ESPECIFICACIONES RESULTADO CONCLUSIÓN
Naproxeno Sódico El coeficiente de correlación ( r ) (r) ≥ 0.9990 0,9995 Conforme El coeficiente de determinación (r2 ) (r 2 ) ≥ 0.9900 0,9991 Conforme Test de verificación de la pendiente o de la linealidad Test de t Ttabla= 2,16 ( α=0,05; gl= n-2 = 13) texp. > ttabla 118,46 Conforme