Detección y genotipificación de Adenovirus en niños con gastroenteritis

Texto completo

(1)UNIVERSIDAD DE S O N O RA DIVISIÓN DE CIENCIAS E I N G E N I E R I A. DEPARTAMENTO DE CIENCIAS QUÍMICO BIOLÓGICAS Y. AGROPECUARIAS. "Elhará saber mis hijos:====================== mide grandeza". "DETECCIÓN Y GENOTIPIFICACIÓN DE ADENOVIRUS EN NIÑOS CON. GASTROENTERITIS". TESIS PRÁCTICA. QUE PARA OBTENER EL TÍTULO DE:. QUIMÍCO BIOLÓGO CLINICO. PRESENTA:. ARMANDO AVILÉS HERNÁNDEZ. NAVOJOA, SONORA. OCTUBRE 2017.

(2) Universidad de Sonora Repositorio Institucional UNISON. Excepto si se señala otra cosa, la licencia del ítem se describe como openAccess.

(3) FORMA DE APROBACIÓN. Los. miembros. del jurado. asignado. para. revisar. la. tesis. profesional. de. Armando. Avilés. Hernández, la han encontrado satisfactoria y recomiendan que sea aceptada como requisito. parcial para obtener el titulo de Químico Biólogo Clínico.. onzález Ochoa. D a. Lilian Karem Flores Mendoza. Suplente. ¡¡.

(4) DECLARACIÓN INSTITUCIONAL. Se. permiten. especial. del. y. agradecen. autor,. citas. siempre. y. breves. cuando. del. se. material. dé. el. contenido. crédito. en. esta. tesis. correspondiente. al. sin. autor. permiso. y. a. la. Universidad de Sonora, Unidad Regional Sur.. La publicación en comunicaciones científicas o de divulgación popular de datos contenidos. en esta tesis deberá dar crédito a la. Universidad de Sonora,. previa aprobación escrita del. manuscrito en cuestión por el director de tesis profesional.. M.C. Jefa a Departamento de Cienci. s. ui. ico Biológicas y Agropecuarias. ¡¡¡.

(5) AGRADECIMIENTOS. Quiero expresar mi más sincero agradecimiento a Dios, familia y amigos por motivarme a ser. mejor persona y por todas las bendiciones que me ha dado. A la Universidad de Sonora, por. permitirme formar parte de su programa académico.. A la. Dra.. Guadalupe González Ochoa,. por brindarme la oportunidad de formar parte de su. equipo de trabajo, por la confianza depositada en mí y por la motivación brindada.. A los integrantes de mi comité de tesis por su apoyo y colaboración. este. trabajo.. Al. Dr.. Jesús. Alfredo. Rosas. Rodríguez. y. al. Dr.. para la culminación de. José. Guadalupe. Soñanez. Organis por el espacio de trabajo brindado.. iv.

(6) DEDICATORIA. Quiero dedicar este trabajo que empezó como un miedo a superar y se convirtió en mi forma. de vida.. A mis padres: Sra. Hortencia Hernández Sierra y Sr. Francisco Felipe Avilés Torres. Gracias. a. ustedes,. tengo. la. motivación. día. a. día. de. realizarme. y. ser. mejor. persona,. compartiendo todos mis sueños y proyectos, para unirnos más como familia.. V.

(7) CONTENIDO. FORMA DE APROBACIÓN . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . • . . . . . . . . . . . • . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ii. DECLARACIÓN INSTITUCIONAL. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . • . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . iii. AGRADECIMIENTOS . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . • . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . iv. DEDICATORIA . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . • . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . v. CONTENIDO . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . • . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . vi. LISTA DE TABLAS . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . • • . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . viii. LISTA DE FIGURAs . . . . . . . . . . . . . . . . . . • . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . • • . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . • • . . . . . . . . . . . . . ix. RESUMEN . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . • • . . . . . . . . . . . . . . x. INTRODUCCIÓN . . . . . . . . . • . . . . . . . . . . . • • . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1. ANTECEDENTES . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . • . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . • . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3. Gastroenteritis en Niños . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . • . . . . . . . . . . . . . 3. Adenovirus. S. Clasificación de Adenovirus. 7. Características Estructurales de las Partículas Virales de Adenovirus. 11. Ciclo de Replicación. 13. Patogénesis . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . • . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 19. OBJETIVO GENERAL . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . • . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 21. OBJETIVOS ESPECÍFICOS . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . • . . . . . . . . . . . . . . . . . . 21. MATERIAL Y MÉTODO. 22. Área de Estudio y Muestreo. 22. Detección de Adenovirus. 22. Extracción de Ácidos Nucleicos. 23. Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR). 23. Amplificación del Gen Hexón de Adenovirus. 23. Purificación del Producto de PCR . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . • . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 24. Secuenciación y Análisis de las Secuencias. 25. RESULTADOS Y DISCUSIÓN . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . • . . . . . . . . . . . . . . 26. Detección de Adenovirus Entérico Mediante Pruebas Rápidas. 26. Amplificación del gen Hexón de Adenovirus . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . • . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . • • . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 27. vi.

(8) Análisis Filogenético. CONCLUSIÓN. 28. 32. BIBLIOGRAFIAS . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . • . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 33. vii.

(9) LISTA DE TABLAS. Figura. Pág.. 1.. Principales agentes infecciosos causantes de gastroenteritis. 4. 2.. Patologías clínicas asociados a adenovirus h u m a n o . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. 5. 3.. Principales serotipos de adenovirus asociados con enfermedades en los h u m a n o s . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. 4.. 9. Secuencias de oligonucleótidos y tamaño de segmento esperado en la detección de a d e n o v i r u s . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . .. 23. viii.

(10) LISTA DE FIGURAS. Figura. 1.. 2.. Pág.. Microscopia electrónica de microvellosidades intestinales. Estructura tridimensional de la proteína viral hexón de adenovirus tipo 5. 3.. 4.. 8. del grupo C. Microscopia electrónica. 10. de partículas de adenovirus. 12. Esquema de la estructura del genoma de Adenovirus tipo 2 del grupo C. 14. 5.. Esquema de los extremos del genoma de adenovirus tipo del grupo C . . . . 1 7. 6.. Esquema descriptivo del ciclo de replicación de Adenovirus. 18. 7.. Pruebas rápidas de detección de. 26. 8.. Amplificación del gen hexón de Adenovirus. 9.. Alineación de secuencias nucleotídicas del. 1 O.. Adenovirus. 27. fragmento amplificado. del gen hexón de Adenovirus. 29. Análisis filogenético del Grupo C, tipo 6 de Adenovirus. 30. ix.

(11) RESUMEN. La gastroenteritis infecciosa es una de las enfermedades más frecuentes en los humanos, es. la. segunda. mayor. principalmente. además. de. abdominal.. Reoviridae,. grupo. aguda. F. a niños. otros. Los. causa. principales. Caliciviridae,. infantes. como. virus. por. que. mortalidad. náuseas,. que. y. objetivo. a. fiebre,. infantes. Astroviridae.. 40. de. en. todo. causando diarreas. vómito,. infectan. Adenoviridae. lo. y. cinco años,. entéricos) serotipos. adenovirus aisladas en. y 41,. este. la. trabajo. mundo.. anorexia,. a. depresión. familias. Adenovirus. tercera. es. Afectando. agudas deshidratantes,. pertenecen. Los. son. el. y. dolor. diferentes:. pertenecientes. causa. detectar. y. de. al. gastroenteritis. tipificar. cepas. niños menores de cinco años con gastroenteritis durante el. de. periodo. Para la detección de Adenovirus se utilizó el kit comercial SO Rota!Adeno Rapid. de estudio.. Test y para. la. tipificación. para la proteína hexón;. 179. morbilidad. menores de. síntomas. (Adenovirus. en. de. muestras. de. las. se. realizó. la. amplificación. de. mismo que posteriormente fue. cuales. 2. ( 1 . 1 %). fueron. un fragmento del. secuenciado.. positivas. para. gen que. codifica. En total se analizaron. Adenovirus.. El. análisis. de. secuencia de 1 (50%) muestra de adenovirus indica que corresponde al sub-género C tipo 6,. cepa. responsable. de. causar. principalmente. infecciones. respiratorias. agudas,. pero. encontrado esporádicamente en casos de gastroenteritis en infantes. La evolución molecular. de. adenovirus. hace. más. propenso. a. modificaciones. de. su. tropismo.. brindándole. la. capacidad de infectar a más tipos de tejidos en los mamíferos. Por tal motivo, es importante. continuar. con. el. monitoreo. epidemiológico. y. molecular. de. adenovirus. causantes. de. gastroenteritis en niños.. X.

(12) INTRODUCCIÓN. La gastroenteritis aguda es en la actualidad una de las enfermedades más importantes que. afectan. a. los. inflamación. niños. del. menores. revestimiento. de. cinco. gástrico. años.. Este. e intestinal. el. padecimiento. principal. se. síntoma. define. es. la. como. diarrea. una. aguda. asociada a una rápida deshidratación. La diarrea es la causa más frecuente de morbilidad y. mortalidad de infantes en. de. 760,000. muertes. de. países desarrollados y en desarrollo, y se relaciona con alrededor. niños al. año.. Aunque. factores y agentes infecciosos (toxinas,. bacterias,. son por consecuencia de una infección viral.. adultos y niños;. sin embargo,. la diarrea. puede ser causado. parásitos,. virus),. la. por diferentes. mayoría de los casos. Los virus pueden infectar de igual manera a los. los niños presentan estas infecciones con mayor frecuencia y. severidad debido a que su sistema. inmunológico. no. ha. madurado. por completo,. que son más susceptibles a una rápida perdida de fluidos y por lo tanto a una. aunado a. deshidratación. severa (Lindesmith y col., 2 0 1 1 ; Hostetler, 2004 ).. Actualmente. se. han. identificado. diferentes. tipos. de. virus. como. agentes. etiológicos. causantes de gastroenteritis aguda, pero los principales virus que infectan a niños se dividen. en. cuatro. familias. (adenovirus. Adenoviridae. surgen. de. su. capaces de. generación. grupo. F. infantes;. menores. embargo,. de. genoma. (Adenovirus. de. las. viral. y tienen. la. entéricos). cinco. años,. en. serotipos. (Raboni. son. del. 1-8%. países. se. la. y col.,. (astrovirus),. con. han. 2000;. considerar que los. Domínguez. y col.,. de. de. 2014).. causa. los. y col.,. y. 2008;. de. 18 y 31. en. los. Mendoza,. 2012).. 1,2,. Por. cambios en el genoma adenovirus a consecuencia. recombinaciones entre serotipos,. han. modificado su. no. tropismo,. tal. evolución y. bacteriana. aguda. en. procesos. del grupo A,. tiempo. pertenecientes. gastroenteritis. países. del. mecanismos de. permiten su. adenovirus. en. sapovirus),. por consecuencia. gastroenteritis. 2-31 %. implicados. 12,. Los. y. paso. recombinación,. de. casos. desarrollados. visto. el. debido a que carecen de. capacidad. tercer. gastrointestinales tales como los serotipos. (Baum. (norovirus. Caliciviridae. Astroviridae. mismas familias,. emergentes. responsables. otros. y. (rotavirus),. presentar mutaciones y re-arreglos genéticos que. cepas. Son. Reoviridae. entéricos). nuevos serotipos de. reparación. son. diferentes:. en. en. niños. desarrollo,. de. al. sin. infecciones. 5 y 6 del grupo C. motivo,. se. puede. de las mutaciones y. brindándole la capacidad de. infectar a una variedad de células en los mamíferos, convirtiéndose en el responsable de un. 1.

(13) gran número de enfermedades del sistema respiratorio, gastrointestinal, neurológico, ocular,. genitourinario, cardiaco y cutáneo (Kaslow y col., 2014;. Lu y col., 2014; Shen y col., 2017).. Es por eso que es de suma importancia su vigilancia epidemiológica para poder contribuir a. la. creación. de. nuevas. estrategias. de. prevención. contra. infecciones. gastrointestinales. de. origen viral.. 2.

(14) ANTECEDENTES. Gastroenteritis en Niños. La gastroenteritis infecciosa es una de las enfermedades más frecuentes en los humanos, es. la segunda mayor causa de morbilidad y mortalidad en todo el mundo. Afecta principalmente. a los niños menores de cinco años, se calcula más de 1 , 700, 000,000 de casos de diarreas. agudas por año, solo para este grupo de la población mundial (Wilhelmi y col., 2003).. Según. datos. diarreicas. de. la. organización. ocasionaron. Concluyendo. disminución. que. de. en. la. muerte. los. mortalidad. mundial. de. últimas. infantil,. siguientes factores favorables,. de. la. 760,000. cuatro. pero. salud. niños. menores. décadas. una. (OMS),. han. morbilidad. desarrollo de vacunas,. 2013,. de. cinco. demostrado. constante. una. las. y. años,. cada. año.. claramente. una. esto. mejor nutrición. enfermedades. se. debe. infantil,. a. los. aumento. de la lactancia materna y un mejor servicio de salud y oportuno (Victora y col., 2000; Instituto. Mexicano del Seguro Social, 2015).. La. gástrica. gastroenteritis. (mucosa). deshidratantes,. depresión. del. estómago. además. y dolor. infecciosa. de. abdominal. diferentes. factores. causantes. de. o. por. gastroenteritis. aguda. e. se. intestinos,. otros. síntomas. (Peña. y Conejo.,. diferentes. se. define. como. agentes. encuentran:. la. 201 O).. como. cual. se. náuseas,. La. inflamación. manifiesta. vómito,. diarrea. infecciosos.. bacterias. una. puede. Entre. (10-20%),. los. de. con. fiebre,. ser. la. capa. diarreas. anorexia,. causada. por. microorganismos. parásitos. (<10%). y virus. (70-80% de los casos) (Tabla 1 ) (Elliott, 2007).. 3.

(15) Tabla 1 . Principales Agentes Infecciosos Causantes de Gastroenteritis.. Virus Causantes de Gastroenteritis en Humanos. •. Rotavirus (grupos A,B,C). •. Calicivirus: Norovirus y sapovirus. •. Astrovirus. •. Adenovirus entéricos ( serotipos 40 y 4 1 ). •. Coronavirus. •. Torovirus. •. picobirnavirus. •. Picomavirus: Virus Aichi. Bacterias Causantes de Gastroenteritis en Humanos. •. Escherichia Coli (enteropatagenica). •. Yersinia Enterocolitica. •. Shigella Spp. •. Salmonella Typhi y S. Paratyphi. •. Campylobacter jejuni. •. Vibrio cholearea. Parásitos Causantes de Gastroenteritis en Humanos. •. Giardia Lambía. •. Entamoeba histolytica. •. Cryptosporidium. •. Strongyloides stercoralis. Los. ancianos;. virus. sin. causantes. embargo,. de. los. gastroenteritis. niños y los. pueden. adultos. infectar. por igual. inmunosuprimidos. son. a niños,. adultos,. y. más susceptibles. a. desarrollar la enfermedad debido a que su sistema inmunológico no está tan desarrollado o. se. encuentra. comprometido. (Roy. y. col.,. 1995).. En. México,. las. enfermedades. gastrointestinales representan una de las principales causas de consulta médica, el. Mexicano. del. Seguro. gastrointestinales,. Social. según. la. (IMSS),. Encuesta. infecciones gastrointestinales en. atendió. 2. Nacional. millones. de. Salud. 188. y. pacientes. Nutrición. por. en. el. Instituto. enfermedades. año. 2012,. las. México, ocupan el 5º sitio como causa de muerte con 266. decesos (Hernández, 2 0 1 1 ).. 4.

(16) Adenovirus. Las. partículas. 1953. por. virales. Rowe. y. de. adenovirus. colaboradores. amígdalas o adenoides,. es. del. fueron. tracto. por eso que lo. aisladas. y caracterizadas. respiratorio. superior,. por. primera. específicamente. nombraron adenovirus. vez. en. en. las. por el tejido original del. cual fue encontrado (Knipe y col., 2013). Adenovirus es el agente causal de un gran número. de. patologías. respiratorias,. como. infecciones. catarro. Johnson),. clínicas,. común,. nefritis,. entre. en. las. frecuentes. incluye,. vías. urinarias. (cistitis. infecciones. cutáneas. (Exantema. meningoencefalitis. gastroenteritis,. hemorrágica),. y enfermedades. petequial. cardiacas. enfermedades. conjuntivitis. y Síndrome. (Miocarditis. y. de. las. raras. Stevens. y Pericarditis). (Tabla 2) (Pereira, 2007; Ghebremedhin, 2014).. Tabla 2. Patologías clínicas asociados a adenovirus humano.. TIPOS DE INFECCIONES. ESPECIES DE HAdVs. A. •. Gastroenteritis, Infecciones Respiratorias Agudas y. meningoencefalitis.. B tipo 1. •. Queratoconjuntivitis,. respiratorias. gastroenteritis,. infecciones. agudas,. meningoencefalitis, miocarditis y Cistitis. B tipo 2. •. Gastroenteritis, infecciones respiratorias agudas y cistitis.. e. •. Gastroenteritis,. infecciones. respiratorias. agudas,. hepatitis,. cistitis,. miocarditis y meningoencefalitis.. D. •. Queratoconjuntivitis, meningoencefalitis y gastroenteritis.. E. •. Queratoconjuntivitis e infecciones respiratorias agudas.. F y G. •. Gastroenteritis.. 5.

(17) Adenovirus humanos del grupo C (HAdV-1, -2, -5, -6), grupo B (HAdV-3, -7, -14, -21). y. grupo. E. (HAdV-4 ).. son. los. responsables. del. 10%. infantes, causando nasofaringitis, faringitis, amigdalitis,. pulmón. Hiperlucido. infecciones. invierno,. nivel. Unilateral,. respiratorias. primavera. mundial,. incubación. 5. frecuentemente. genogrupo. agudas. y principios. la transmisión. de. a. en. causa. siendo los. 7. las. serotipos. mortales,. la. de verano y son. Entre. estos. enfermedades. epidemias. entre. 14 y 21. los. y los. respiratorias. en. responsables de provocar. aumenta. la. ligeramente. a finales. mayoría. los. partículas de aerosoles,. genotipos,. niños. infecciones. endémicas en. respiratorias,. los. las. neumonía, síndrome tipo tos ferina y. incidencia. ocurre a través de. días.. de. HAdV-7. numeroso. espacios. y. con. HAdV-3. estudios. llenos. de. de. un. se. países a. periodo de. asocia. informan. gente. de. más. que. (Moom,. este. 1999;. Bernaola y Luque, 2002; Li, 2015; Yang y col., 2 0 1 7 ) .. Las. infecciones. oculares. causados. por. HAdV,. se. presentan. con. patologías. variables, tales como queratoconjuntivitis hemorrágica, fiebre faringoconjuntival,. folicular inespecifica y conjuntivitis papilar crónica,. clínicas. conjuntivitis. estas patologías se clasifican de leves a. graves, donde la queratoconjuntivitis es la forma más severa de las infecciones oculares,. la. transmisión ocurre por contacto directo con el área infectada a través de las lágrimas, con un. periodo de incubación de 8 a 1 O días y se presentan síntomas como dolor, ojos rojos, ardor,. prurito,. lagrimeo,. casos. más. graves. disminuyendo. (HAdV-1,. -2,. esporádicos. fotofobia,. la. de. puede. calidad. -5),. E. sensación. de. provocar. vida. (HAdV-4). conjuntivitis. y. e. de. un. visión. incluso. grupo. y fiebre. cuerpo. borrosa. grades. B. extraño. durante. daños. (HAdV-3,. y secreciones. -7,. faringoconjuntival,. meses. económicos,. -11). son. circulan. o. purulentas,. incluso. HAdV. del. responsables. en. su. mayoría. en. años,. grupo. C. de. brotes. en. China,. África, Australia y Estados Unidos, los del grupo B afecta principalmente a infantes, donde el. 30%. de. los. casos. identificados. presentan. principalmente. lesiones. serotipos. corneales,. del. grupo. O. en. los. (HAdV-8,. brotes. -19,. epidémicos. -37),. los. cuales. se. han. son. los. agentes más comunes en la queratoconjuntivitis hemorrágica, una infección ocular altamente. contagiosa y discapacitante,. en. el continente Asiático (Jernigan y col.,. López. de. las infecciones oculares causados por Adenovirus. y. col. , 2008;. miocardio. Adenovirus. donde. del. edaoui y col. , 2 0 1 6 ) .. F. se. han. grupo C y B,. encontrado. 1993;. Cooper y col.,. 1998; Adhikary y col.,. 2001;. or otro lado, se han realizado estudios en tejidos. P. los. genomas. por lo que se considera. miocarditis aguda (Feldman y McNamara,. predominan. 2000;. de. Enterovirus. (. Coxsackievirus). y. una de las causas más comunes de. Bowles y col., 2003; Sharma y col. , 2 0 1 6 ) .. 6.

(18) Adenovirus entéricos. 8%. de. los. casos. pertenecientes al grupo. de. gastroenteritis. desarrollados y 2-31%. en. inmunocomprometidos,. países en. han. aguda. F,. en. desarrollo.. surgido. brotes. serotipos 40 y 41. niños. menores. son. de. responsables del. cinco. años,. La prevalencia se incrementa. esporádicos. principalmente. en. en. en. 1-. países. pacientes. guarderías,. escuelas (pre-escolar) y hospitales, por lo que ocupa el tercer lugar entre los virus entéricos,. donde. rotavirus. Dashti, 2015).. B,. (HAdV-3),. ocupa. el. primer lugar,. B2. (HAdV-11),. han. aislado de. igual. han. reportado. intestinal,. se. apendicitis. C. (HAdV-1,. manera. casos. y hepatitis. norovirus. viriones. de. -2,. -5,. -6),. D. (Verma,. (HAdV-15,. muy frecuente en. muy. donde. grupo C (Bernaola y Luque, 2002;. Los. de. 2009;. Rezaei,. 2012;. Recientemente algunos adenovirus de serotipos del grupo A (HAdV-12, -31 ),. (HAdV-52) se. que. seguido. raros. el. de. agente. -17,. -32,. -33,. -38). y G. brotes de gastroenteritis aguda,. linfadenitis. causal. son. mesentérico,. partículas. de. al. invaginación. adenovirus. del. Wold y Horwitz, 2 0 1 3 ; Raboni y col., 2014).. adenovirus. entéricos. infectan. selectivamente. a. los. enterocitos. maduros de la porción apical de las microvellosidades intestinales sin afectar las células de. la. cripta,. las. células. del. huésped. son. invadidas. provocando lisis celular y por lo tanto una. por. el. virus,. se. replica. rápidamente. atrofia de las microvellosidades y una hiperplasia. compensatoria de las criptas, con la consecuente malabsorción y pérdida de líquidos (Figura. 1A,. de. 1 8 ) (Lundgrena y Svensson, 2001;. cinco. años,. adenovirus. han. humano,. adquirido. no. hay. fecal-oral, con un periodo de. Domínguez, 2008). El 70-80% de los niños menores. anticuerpos. predominio. específicos. estacional. por. y la. lo. menos. transmisión. para. es. a. un. serotipo. través. de. la. de. vía. incubación de 3 a 1 0 días y con una duración promedio de 9 a. 1 2 dias (Moom, 1999).. Clasificación de Adenovirus. Adenovirus. Mastadenovirus,. pertenece a la familia Adenoviridae,. Aviadenovirus,. Atadenovirus,. la. cual. se divide en. Siadenovirus. e. cinco géneros:. lchtadenovirus.. Los. adenovirus humano (HAdVs) se localizan dentro del género Mastadenovirus, que a su vez se. divide en siete especies o genogrupos (AdVs A - AdVs G), con más de 50 serotipos, que son. capaces. de. propiedades. infectar. a. antigénicas. humanos,. de. las. en. el. proteínas. cual. se. han. estructurales. lograron. de. clasificar. superficie. del. en. base. virión. a. las. (fibras. y. 7.

(19) hexones), los hexones. contienen numerosos epítopos que pueden ser específicos de grupo. localizados en la superficie basal y epítopos específicos de serotipo, localizados en la región de la torre (Figura 2) y son responsables de una fuerte respuesta inmune humoral. Hasta el. momento. se. conocen. métodos. clásicos. 72. genotipos,. (propiedades. que. se. han. antigénicas:. logrado. identificar,. neutralización. y. utilizando. capacidad. de. diferentes. aglutinar. eritrocitos humanos y animales), distancia filogenética, organización del genoma, homología. del DNA (G+C%), capacidad de recombinación, ensayos con endonucleasas de restricción y capacidad de provocar tumores en roedores (oncogenicidad) (tabla 3). (Harrach, 2012; Lu y col., 2014; La Rosa y col., 2015; Hage, 2016;. Fedaoui y col., 2016). La especie 8 de HAdV. esta subdividido en dos subespecies (81 y 82). esta división se logró mediante ensayos con enzimas. de. restricción. y. por. cultivo. celular,. mostrando. también. tropismos. diferentes. (Segerman, 2003).. Figura un. 1.. Micrografías de microscopio electrónico de transmisión. A) Microvellosidades intestinales de. animal. sano. microvellosidades Adenovirus. (Dr.. Joaquín. intestinales. Humano. tipo. 40,. Carrillo. fetales flecha. y. humanos, roja. indica. colaboradores, de un. cultivo. partículas. de. Facultad. de. celular infectado adenovirus. Medicina, cinco días. replicándose. en. UNAM),B) antes el. con. núcleo. (Tiemessen y Kidd, 1995).. 8.

(20) Q). (/). -o .8. o c �. Q). .,. E. "'. E. o,C/J. ::,. "'. E:. o. "' 'SI". �. '. '. "'. N. eo. N. �. �. -e--'. ' o. 'SI" '. ' o �. �. z .:= 'SI". � o N. o. u. a,. +. ..... o. ,..:.. ..... o >,. N. a,. "' o. "' ,..:.. "'. "'. o !.O. '. '. "' "'. co. N. "'. "'. :::,. ....J Q). -o. o -o. !.O. .!!!. 8' o E. o. o. �. �. �. ' o. ce. a,. �. cri. o "'. o. !.O. �. I. ' ce. 15. � o. ..... i a, '. co. g¡. r-,. � J, �. '. o. �. o. a,. �. ..... cri !.O. '. a, ' a,. ' N. a,. !.O. E (/). o. Q). e. -o. E. -o. .s. "' E :::,. -. .e (/). o. a, N. 2 "' ·01. .e. 5. ..:=. ...J. .!!!. 1. e Q) (/). Q). -o. ¡;] -o ·¡-;. -o. "'. ·e. Q). Q). > "'. � Ol. Ol. E. 8. 2. e. e. o. "'. >. "'. > "'. m. �. �. .<'.. Ol. Ol. Q). Q). Q). z. z. z. g>. z. Q). e. o o. �. "'. (/). o -o. a,. ..... J. "'. ·¡:;. -e. o (/). a,. "'. :¡:. (/). :::,. ce. � ·5. .,.;. o. ('"). e Q). -o. "' Q). -o (/). o c.. Ñ ('"). (/). !.O. a. .,,-. �. ó. ..... ('"). e. N. Q). 1. o. ..... N N. (f). o N. e. a,. Q) (/). (/). Q). cii. c. ·¡:;. e ·.::. o, ('). "'. ..o. "'. f-. :¡¡ ·¡-;. Q). N. CD >,. c. (/). w. cii. u. o. w. N. "'.

(21) u. al.

(22) Características Estructurales de las Partículas Virales de Adenovirus. Los adenovirus son virus icosaédricos de 70-90 nm de diámetro (Figura 3), su genoma es de. DNA. lineal. de. doble. cadena. de. aproximadamente. 35. Kpb. tiene. y. dos. secuencias. de. repeticiones terminales invertidas (ITR), localizadas en cada extremo y sirven como orígenes. de. replicación. (Tan y col., 2016;. proteínas estructurales,. Ballester y col.,. el hexón (11) es la. 2016).. La cápside está formada. por siete. proteína más abundante, se encuentra dispuesto. en 240 trímeros, los cuales conforman las 20 caras de la superficie icosahédrica. La base de. pentón ( 1 1 1 ) y la fibra (IV) dan lugar. de. los. 12. vértices. de. virión;. así. al complejo pentón el cual sella la cápside en cada uno. mismo,. estas. proteínas. están. involucradas. tanto. en. el. reconocimiento como en la entrada del virus a las células hospederas (Rux y Burnett, 2004;. Ebner y col.,. (217. a.a),. 2005;. VIII. polipéptidos. VI. Russell,. ( 1 34. y. a.a). VIII. 2009;. IX. y. unen. la. Liu. (139. y col., 201 O; Ziros a.a). cápside. brindan. con. el. y col., 2015),. estabilidad. núcleo. al. central. los. polipéptidos VI. capsómero,. del. virión. y. además. por. los. último. el. polipéptido l i l a (566 a.a) se encuentra rodeando al pentón para permitir la unión con el hexón. (Flores y col., 2006).. En. proteina. el. núcleo. terminal. se. encuentra. (TP) y proteasa;. el. las. material. genético. proteínas. V y VII. y 6. se. proteínas,. encargan. V,. de. VII,. 1Va2,. X,. la. dar estabilidad. al. genoma, función similar al que realizan las histonas, la proteína principal en el core es V I I ; la. proteína X (conocida como proteína Mu) es una proteína transactivadora, TP tiene la función. de. oligonucleótido. por lo. que. se. encuentra. involucrada. en. la. replicación,. esta. proteína. se. encuentra covalentemente unida al final del genoma.. La. proteína. 1Va2. tiene. empaquetamiento. del. transcripcional. principal. proceso. de. del. DNA. maduración. de. una. viral,. función. aunque. específica,. también. promotor tardío. seis. proteínas. (MLP).. se. La. de acuerdo al. ha. relacionado. proteasa. estructurales,. serotipo,. lo. se. que. como. encarga. resulta. la. cual. un. de. es. el. activador. catalizar el. esencial. para. la. producción de partículas virales (Zhang e lmperiale, 2003; Cusack, 2005; Goncalves y Vries,. 2006; Liu y col., 2 0 1 0 ) .. 11.

(23) re. E .:::. "' 0 "' § � .Q. "'. (9 � •. (.J. o� -. > re. QJ L.. .5::. o. e. 0. · 0. �. "' tí "'. QJ. � Q}. ID. 'O QJ. '. o. �·5 -�. E. >. "' u. o o. ·e. u. -. · e �. u QJ. �. u ·-. ¡¡j. �. "' ·-. e. g.. QJ. u. "'. "'. "(J. o "' CJ) �. .2. et:. E s:. 0 "' 2 n · s; CJ). o. "' e. 'O. QJ. "'. "C. N. n,. =. QJ. g¡. "(J. � "' "' > ::,. ·-. en t: :::,. ::,. �. � 1ii. ·s;. o. QJ. a5 � 'O. QJ. <(. "(J. Q). 5. -o :.:::: CJ). •lt. "' E QJ i3 :::i. -. t 5l "'. o,. QJ. e ·O. - · c3 <(. ("') "' � :::, O). ü:. "'. e. a:. "'. QJ � o QJ. o::.

(24) Ciclo de Replicación. Adherencia, penetración, desenvoltura del virus y entrada al núcleo celular:. La entrada. del virus a la célula huésped se lleva a cabo por un mecanismo de endocitosis mediada por. receptor,. empezando con. la interacción, entre la proteína estructural de superficie del virión. (Fibra) con el receptor CAR (Receptor Coxanquie-Adenovirus) localizado en la membrana de. la célula huésped, seguido con la interacción de las integrinas de membrana av�3 y av�5 con las secuencias de Arginina-Glicina-Aspartato de los cinco polipéptidos de la base del pentón,. ocurriendo. como. consecuencia. la. internalización. del. virión. por. endocitosis. mediada. por. clatrina. También se han descrito mecanismos de unión a moléculas del Complejo Mayor de. Histocompalibilidad. de. Clase. 1. (CMH-1 ),. CD46,. COSO,. CD86,. ácido. sálico. y. otras. glicoproteínas celulares (Wickham y col, 1995; Hong y col., 1 9 9 7 ; Lu y col., 2014).. Después. fusiona con. virión. de. la. internalización. los lisosomas,. sufren. cambios. del. virus,. acidificando el. conformacionales,. la. medio,. membrana. de. la. vesícula. endocítica. se. por lo que las proteínas de la cápside del. provocando el desprendimiento parcial de algunos. de los péptidos, principalmente la proteína hexón ( 1 1 ) y la proteína lítica (VI). La proteína lítica. desestabiliza. la. membrana. del. endosoma,. liberando. a la. partícula. viral. al. citosol. (Flores. y. col., 2006). Las partículas virales son transportadas desde el espacio citoplasmático hasta el. núcleo celular, por la proteína motora kinesina-1. desprendido. de. su. cápside,. para. que. el. a través de microtúbulos, donde el virión es. genoma. viral. pueda. ser introducido. al. núcleo. por. poros de la membrana nuclear.. Transcripción del genoma viral: Una vez. su. célula. huésped. se. inicia. el. genes tempranos (E1A, E 1 B , E2,. proceso. de. que el genoma viral ingresa al núcleo de. transcripción. en. tres. etapas,. transcripción. de. E3 y E4), transcripción de genes intermedios (IX y 1Va2) y. transcripción de genes tardíos (L 1 . L2, L3, L4, L5) (Figura 4) (Robinson y col., 2 0 1 1 ; Ballester. y col., 2016).. 13.

(25) Unidades de transcripción temprana: Cada una codifica para un número de proteínas. los RNA son trascriptos por un solo promotor y pueden orientarse en cualquier dirección y se. someten. a. subunidad. un. empalme. E1A. es. la. alternativo. primera. en. para. ser. producir. expresada,. varios. mRNA. codifica. para. (Murray. dos. y. col,. proteínas. 2009).. (12S. y. La. 13S). indispensables para activar la transcripción de otros genes necesarios para la replicación del. genoma. viral. a. regulan/activan. interactúa con. través. su. de. secuencias. expresión,. pero. se. TATA,. conoce. su. no. se. han. huésped a entrar en. la fase S del. definido. mecanismo. el factor de transcripción T8P (proteína de. interactúa con el represor transcripcional D r 1 ,. célula. aun. de. unión. los. acción,. elementos. la. que. proteína. 12S. proteína. 13S. a TATA) y la. otra de las funciones de E 1 A es inducir a la. ciclo celular,. (Philipson,. 1995;. Flores y col.,. 2006;. 8erk y col., 2007).. La subunidad E 1 8 expresa dos proteínas ( E 1 8 1. celular. uniéndose. transcripcional. a. E2. la. proteína. expresa. p53. tres. inhibiendo. proteínas,. el. la. y E 1 8 2 ) prolongan la supervivencia. apoptosis. cual. tienen. (Lu. la. y col.,. función. 2014).. de. La. unidad. proporcionar. la. maquinaria para la replicación del genoma viral (proteína de unión a DNA, DNA polimerasa y. el precursor de la proteína terminal TP) y la consiguiente transcripción de genes tardíos (Ying. y col., 2010).. Mastadenovirus. (human adenoviirus 2). IX. E1B-19K. III. 52K. VA. E1A E'9-55K. pilla. V. pVII. protea5e. pVJ. pX. hexon. E3 region pVIII. líber. 1. 1. poi. 22K. -1. .... . ....... 1Va2. 33K 100K. ... pTP'. pTP. OOP. 1. •. UXP. UXP". UXP. poi'. •. D. 6{7. 3. 3'!K 4 E4. dUT-'ase 2. region. Figura 4. Organización del genoma de Adenovirus tipo 2 del grupo C, las flechas indican la de. la. transcripción,. {Mastadenovirus,. las. de. color. Aviadenovirus,. negro. indican. Atadenovirus,. representan genes que se encuentran. en. genes. muy. Siadenovirus. más de un género,. conservados e. en. lchtadenovirus),. los. dirección. cinco. las. por ultimo las flechas. de. géneros. color. rojas. gris. indican. genes específicos del género Mastadenovirus cedido por Murphy y col., 2012.. 14.

(26) La. unida transcripcional. E3 codifica. para tres. proteínas. (19. kD,. 14 kD y 1 0. kD}. se. clasifica como no esencial en el cultivo y replicación in vitro, se han realizado experimentos. con adenovirus mutantes que tienen. deleción de. E3 y pueden replicarse eficientemente en. cultivos celulares, por lo que hace pensar que estas proteínas son parte de los mecanismos. de Adenovirus para evadir o regular la respuesta inmune del huésped,. une a la. molécula del CMH de clase. la proteína. 1 9 kD se. I durante su tránsito por el retículo endoplásmico y no. permite su transporte a la membrana celular, además E3-19kD puede unirse directamente a. TAP. (Transportador Asociado. péptidos. virales. procesados. al. en. Procesamiento de. el. citosol. a las. Antígeno). moléculas. del. y bloquea. CMH. de. la. trasferencia. clase. 1,. por. lo. de. que. disminuye el número de moléculas presentadoras de antígeno en la superficie de las células. infectadas. y. por. lo. tanto. se. inhibe. la. lisis. de. las. células. infectadas. por. los. linfocitos. T. (lnternalización. y. citotóxicos (Coa•).. Las. proteínas. degradación. del. 14. kD. y. receptor) que. 10. kD. forman. estimula. la. un. complejo. degradación. de. llamado. los. RID. receptores. Fas. y TRAIL vía. endocitosis y degradación lisosomal e inhiben la lisis por el factor de necrosis tumoral (TNF),. evadiendo. la. receptores. apoptosis. de. la. mediante. muerte,. los. el. bloqueo. productos. de. de. la. la. cascada. unidad. de. señalizaciones. transcripcional. E4. de. los. regulan. la. transcripción, la salida de los mRNA del núcleo, el corte y empalme de RNA, la traducción y. la replicación del ADN, (Gooding. y col., 1998;. La. se. ha. y col.,. 1 9 9 1 ; Philipson,. 1995; Shisler y col.,. 1997; Tollefson. Bennett y col., 1999).. unidad. transcripcional. demostrado. que. actúa. pero también tiene la función. proteína 1Va2 es un. intermedia expresan. como. proteína. a dos. cemento. proteínas a la. reforzando. la. proteína. cápside. viral. IX,. que. madura,. de un activador transcripcional antes de ser ensamblada y la. activador transcripcional del principal promotor tardío (MLP) (Lutz y col.,. 1997).. Replicación. por. dos. cada. secuencias. extremo. del. genoma viral:. de. y sirven. repeticiones. como. El. genoma. terminales. orígenes. de. de adenovirus se encuentra flanqueado. invertidas. replicación,. (ITR). además. de. se. 100. bp,. requieren. localizadas. en. de tres. las. de. proteínas expresadas por los genes E2, la DNA polimerasa, proteína de unión al DNA (DBP). y el precursor de la proteína terminal (pTP). La replicación se inicia con la unión covalente de. la. DNA. polimerasa. con. el. primer. residuo. desoxicitidina. 5'-monofosfato. y a. un. residuo. de. 15.

(27) serina del. precursor de la proteína terminal (pTP), formando un complejo (pTP-C-DNA poi),. posteriormente la DNA polimerasa inicia la síntesis de la nueva cadena de DNA (elongación). (Figura. 4 ),. protege al. la. proteína. de. unión. al. DNA. DNA de cadena sencilla. está. implicada. en. varios. pasos. función. polimerasa.. terminal. similar. Una. (pTP). vez. de. la. helicasa. sintetizada. madura. la. (ssDNA) de ser degradas por nucleasas,. desenrollamiento del genoma mediante la formación de multimeros,. DNA. de. la. y. aumenta. primera. mediante la acción. la. velocidad. cadena. de la. de. y. ADN,. participa en el. separa las cadenas de. precesabilidad. el. replicación,. precursor. proteasa viral y pasa. de. de. la. la. proteína. de ser pTP a TP,. nueva cadena de DNA se circulariza mediante la unión de secuencias complementarias. luego. la. segunda. cadena. es. sintetizada. de. la. misma. manera. DNA. que. la. primera,. la. ITR,. con. la. intervención de una nueva pTP.. Al mismo tiempo que el genoma viral se replica, se activa la unidad transcripcional. de. los genes tardíos (L 1 - L5) que codifican principalmente las proteínas estructurales del virión,. solo. se. produce. un. transcrito. de. 29,. 000. nucleótidos. de. longitud,. este. transcrito. es. procesado por corte y empalme, generando 1 8 mRNA que son traducidos en el citoplasma.. (Nagata y col., 1983; Komatsu y Nagata, 2 0 1 2 ; Hoeben y Uil, 2 0 1 7 ) .. La. Ensamble del virión:. capsómeros de. hexón. y los. añadiendo la fibra y el. empaqueta. el. genoma,. morfogénesis del virión ocurre en el. capsómeros de. resto de las. para. que. pentón,. partícula. viral. los. una vez armados se auto-ensamblan,. proteínas que estabilizan. la. núcleo, se forman. sea. la capside,. estable,. posteriormente se. infecciosa. y. resistente. a. nucleasas, las proteínas de la capside tiene que sufrir algunos desdoblamientos por la acción. de una cisteína proteínasa, el proceso de auto-ensamble es ineficiente ya que el 80% de las. proteínas estructurales y el 90% del DNA del virus. ocurre entre las 24 y 36 horas y genera unos 10. 4. no se utilizan.. El ciclo de vida completo. viriones por célula infectada.. 16.

(28) A. 1--. ---!. fTR. ---l. AfT-rich. haiiaryoñgin------1. reg;... NA. Oc�1. _ l\TGATl'.AT. G • .. TACTATTl\.. .C • .. 4. 40. .50. B. •. ¡;. o I. .,.,. Figura. 5.. A). Extremos. repeticiones terminales. del. genoma. invertidas. de. (ITR),. adenovirus. tipo. del. grupo. C,. donde se encuentra el origen. que. contienen. de replicación. las. y las. secuencias donde interactúan las proteínas víricas y celulares, para iniciar la replicación del genoma viral. B) Representación esquemática de la iniciación de la replicación del DNA, se ilustra como los nucleótidos 4-6 se usan como molde para la formación del complejo pTP CAT-DNA poi y como el complejo se desplaza a los. nucleótidos. 1-3 para continuar con. la. elongación.. 17.

(29) X X X. r ( Cel ,.,.,). IADP. Miaotubular. .\. inwards transport. Kfneslo-1. úpskl-disassemb. .....__ Penetration into. J<". DNA. �!.-,,,/� ,..•..\ /. Tran�ription. ...�--.,. VII. ElA. J!. 'lj¡. .._. /. ' -... _.,., �. Cell cycle modulation. E185Sk. transition to S phase. P.s:3-ao:urnulation. e. DNA strafld.displacement re. tiution. ::.. HeKon. Pfflton. ; , ( e l l. trallSiarmation. . � " , -----= -= -. ...... �. +---- lmmediateE!lrly--M----. .... aca :as. :. :. ear. �. ,. -. ·-'. Early ----.,.+-lntermediate·-----1.+-----. Late------,;. Figura 6. Ciclo de Replicación de Adenovirus cedido de viralzone.. 18.

(30) Patogénesis. La. infección. viral. inicia. con. la. interacción. de. la. fibra. y base. del. pentón. con. la. membrana. celular; la fibra lleva a cabo el reconocimiento inicial con el receptor CAR y el pentón con las. glicoproteínas. (integrinas).. de. viral. replicación. animales. revelan. significativos. en. clínicas. parecen. células. huésped. Los. y lisis. que. de. las. ausencia. adenovirus. sus. partículas. de. la. la. virales. y lisis. invasión. localizada. causan. huésped.. replicación. resultar tanto de. (Infección. células. humanos. de. patologías. Estudios. de. Adenovirus. pueden. causar. celular,. por lo tanto. las. durante. en. procesos. las. el. proceso. modelos. inflamatorios. manifestaciones. partículas virales de Adenovirus a sus. o diseminada) como de. la. respuesta. inflamatoria. del. huésped (Lu y col., 2014).. Además. proteínas. Adenovirus. receptoras. y. tiene. la. antígenos. específicos de genotipo,. capacidad. de. de. superficie. principalmente. interactuar. celular,. es. con. un. probable. gran. que. número. los. de. cambios. en las secuencias codificantes de las proteínas de. la capside {fibra y pentón) sean las responsable del variable tropismo de tejidos.. La mayoría. de los serotipos de las especies A, C, O, E y F se unen a CAR, la mayoría de los virus de la. especie B se unen a moléculas como C046, COSO y C086 (Roelvink y col.,. 1998; Gaggar y. col., 2003; Short y col., 2006).. Las. nuevos. mutaciones. genotipos. de. puntuales. y. la. Adenovirus,. recombinación. se. han. homóloga. realizado. estudios,. tienen. como. donde. se. resultado. realiza. la. secuenciación completa del genoma encontrado en pacientes con infecciones Adenovirales,. demostrando. ocurre. que. los. usualmente. especies. entre. (lnter-especie),. ínter-especies. replicar el. resultando. virulencia. eventos. se. de. recombinación. miembros. se. producen. de. requiere. cuando. la. misma. co-infección. la. son. ONA. especie. de. y. con. genotipos. capacidad. recombinantes. de. producir. la. polimerasa. ONA del otro serotipo y por consecuencia. nuevos. con. muy. la. de. célula,. cualquiera. evolución. brotes. La. (lntra-especie). misma. tropismo. nuevos. comunes.. celular. de. las. de. recombinación. o. con. diferentes. recombinaciones. los. HAdV pasa. a. molecular es más rápida,. alterado,. aumento. enfermedades. más. de. la. graves. (Lukashev y col., 2 0 1 7 ; Cook y Radke, 2017).. 19.

(31) En infecciones naturales, Adenovirus ha desarrollado varios mecanismos para evadir. y regular. genoma. la. respuesta. viral. de. inmunológica. Adenovirus. se. de. sus. células. transcribe. en. huésped.. RNA. no. Aproximadamente. codificante. el. 1%. denominado. del. RNA. asociados a virus (VA RNA), este transcrito tiene una longitud de 160 pb aproximadamente y. forma. una. estructura. similar a un. dsRNA,. gracias a su. secuencia. autocomplementaria.. La. función de los interferones de tipo I es activar la expresión génica de los genes involucrados. en la defensa viral como la síntesis de la proteína cinasa R (PKR) o también llamada cinasa. dependiente de dsRNA que cumple con. la función de fosforilar al factor de. iniciación de la. traducción elF2-a, lo que lleva a la detención de la síntesis de proteínas virales. Los VA RNA. impiden la dimerización y activación de la PKR y por consecuencia impide que la síntesis de. proteínas virales se vea afectada (Kitajewski y col., 1986; O'Malley y col., 1 9 8 9 ; Kumar y col.,. 1999; Felty y col., 2015).. En 2 0 1 5 en China, se realizó un estudio epidemiológico sobre un brote de infecciones. respiratorias. estudios. mayoría. graves,. adicionales. de. sus. donde. como. genes. se. la. revelo. que. secuenciación. fueron. altamente. HAdV-7. del. del. genogrupo. genoma. completo,. conservados. responsables de brotes anteriores menos graves,. con. B. era. revelo. otras. el. responsable,. que. cepas. en. de. la. gran. HAdV-7. con excepción de la región no codificante. denominado VA RNA que fueron altamente variables y con la deleción de 1 2 pb. También se. realizó cultivo celular y se comparó la cinética de replicación viral, se demostró que las cepas. de HAdV-7 con la región incompleta de la región terminal VA RNA mostraba un crecimiento. más. rápido. en. comparación. con. las. cepas que. contienen. la. región. completa. de. VA. RNA. (Yang y col., 2017).. 20.

(32) OBJETIVO GENERAL. Detección. y genotipificación. de. cepas. de. adenovirus. aisladas. en. niños. menores. de. cinco. años con gastroenteritis durante el periodo de estudio.. OBJETIVOS ESPECÍFICOS. •. Detectar partículas virales de adenovirus causantes de gastroenteritis en niños menores. de. cinco años. mediante. pruebas. rápidas. (inmunocromatografia) y técnicas de biología. molecular (PCR).. •. Identificar. los. genotipos. correspondientes. de. las. cepas. circulantes. de. adenovirus,. detectados durante el periodo de estudio, mediante la secuenciación parcial de la región. codificante del gen Hexón.. •. Analizar. la. secuencia. nucleotídica. (mediante. programas. bioinformáticos). de. los. genes. asociados a la clasificación genotípica de adenovirus (Gen hexón).. 21.

(33) MATERIAL Y MÉTODO. Área de Estudio y Muestreo. Las. muestras. de. heces fecales se obtuvieron. de. niños. con. gastroenteritis. atendidos en. el. Hospital Regional de Navojoa y el Hospital del Niño y la Mujer en Cd. Obregón. Las muestras. se transportaron al laboratorio. de. inclusión. episodios. se. consideró. diarreicos. en. la. un. y se almacenaron. edad. del. menor,. tiempo. no. mayor. a -20ºC hasta su análisis.. no. de. mayor. 24. de. horas,. 5. años,. vómito,. Como criterios. presentar. fiebre. o. 3. uno. o. más. de. los. síntomas mencionados. Como criterios de exclusión se consideró que la gastroenteritis fuera. de. origen. obtenidas. bacteriano. de. niños. o parasitario. con. y que. gastroenteritis. el. se. infante. tuviera. transportaron. más. al. de. 5 años.. laboratorio. de. Las. muestras. Microbiología. e. Inmunología (JL-203) de la Universidad de Sonora, Unidad Regional Sur.. Detección de Adenovirus. Para. determinar. comercial. Bioline,. SD. CTR,. continuación:. si. una. muestra. Rota/Adeno. S.A.. con. de. un. Rapid. C.V.,. hisopo. era. positiva. Test. Monterrey,. se. µI). de. temperatura. esta. mezcla. ambiente. al. por. pocillo. 20. acuerdo. N.L.).. recolectaron. disolvieron en 4 mi de buffer diluyente,. 150. de. min.. para. El. adenovirus. a. las. entéricos,. indicaciones. protocolo. se. aproximadamente. se. del. describe. 50. mg. de. utilizó. el. proveedor. kit. (SD. brevemente. heces. que. a. se. posteriormente se adicionaron de 3 a 4 gotas ( 1 2 0 a. de. La. la. tira. reactiva. muestra. se. del. kit. determinó. comercial. positiva. y. para. se. incubó. rotavirus. a. y/o. adenovirus entérico con la aparición de una banda de color rosa en la linea correspondiente. a rotavirus y/o adenovirus en la tira reactiva y otra similar correspondiente al control.. 22.

(34) Extracción de Ácidos Nucleicos. De muestras recolectadas se realizó una suspensión de heces al 20% en buffer de fosfatos. (PBS),. y. posteriormente. Purelink®. Genomic. se. DNA. realizó. Mini. Kit. una. extracción. (ThermoFisher. de. DNA. utilizando. Scientific,. el. lnvitrogen). kit. comercial. siguiendo. las. amplificar el. gen. indicaciones del fabricante.. Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR). Amplificación del Gen Hexón de Adenovirus. El. DNA. extraído. de. las. muestras. positivas. se. sometió. a. una. PCR. para. hexón de adenovirus, se realizó una mezcla con un volumen final de 12.5 µI, utilizando PCR. Master Mix (2x) (50. U/µ1 de. Taq polimerasa DNA, 400 µM de dATP, 400 µM de dGTP, 400. µM de dCTP, 400 µM de dTTP,. para. genotipos. y 41. 40. (Tabla. 3 mM MgCl2) (PROMEGA®) y oligonucleótidos específicos. 3),. posteriormente. se. sometió. en. el. termociclador. a. las. siguientes condiciones: desnaturalización inicial a 94ºC por 4 min, seguido de 35 ciclos de 3. etapas a 94 ºC por 1. min. (Verma y col.,. una. corrida. min, 57°C por 1 min y 72ºC por 2 min, finalmente un ciclo de 72ºC por 7. 2009).. electroforética. El producto obtenido se visualizó en gel de agarosa al. en. buffer tris. acetato. EDTA. (TAE). a. 100. volts. 1 . 5 % , tras. durante. 35. min,. teñido con SYBR® Safe (lnvitrogen), en exposición a luz ultravioleta en el transiluminador.. Tabla 4. Secuencias de oligonucleótidos y tamaño de segmento esperado en la detección de adenovirus (Rezaei y col., 2 0 1 2 ) .. 1. 1. Oligonucleótido. Polaridad. Ad1. (+). TICCCCATGGCICAYAACAC. Ad2. (-). CCCTGGTAKCCRATRTIGTA. Secuencia 5. �. 3. Producto (Pb). 482. 23.

(35) Purificación del Producto de PCR. Para. realizar. la. purificación. del. producto. de. PCR. de. rotavirus,. astrovirus,. adenovirus,. norovirus y sapovirus, se utilizó el kit comercial Wizard® SV Gel and PCR Clean-Up System. (PROMEGA®),. siguiendo. las. instrucciones. del. fabricante.. A. continuación. se. detalla. metodología: se agregó en partes iguales la solución de unión a membrana a la amplificación. de. PCR. ensambló. (gel).. la. incubar por. Después. se. mini-columna. 1. realizó. en. la. purificación. el tubo colector,. min a temperatura. ambiente,. se. de. DNA. por. le agregó el. posteriormente. centrifugación,. producto de. se centrifugó la. donde. se. PCR y se dejó. mini-columna. a. 13,500 RPM por 1 min (Centrífuga LabNet lnternational lnc.®).. Se descartó el líquido del tubo colector,. para esto se. removió la. mini-columna,. y se. volvió a colocar en el tubo una vez descartado el sobrenadante. Se realizaron dos lavados a. la mini-columna, al primer lavado se le adicionó 700 µI de. a 1 3 , 5 0 0 rpm. 500µ1 de. la. por 1. solución de lavado. y se centrifugó. min, descartando el líquido resultante, el segundo lavado se realizó con. solución. previamente mencionada y se centrifugó a 13,500. rpm. por 5 min.. Por. último, se transfirió la mini-columna a un tubo eppendorf de 1 . 5 mi debidamente etiquetado,. se le agregó 25 µI de agua libre de nucleasas y se dejó incubar a temperatura ambiente por. 1. min y se almacenó a -20ºC hasta su uso. Una vez realizada la purificación, a las muestras. se les realizó una electroforesis en gel de agarosa al 1 . 5 % en buffer tris acetato EDTA (TAE) a 1 0 0 volts durante 35 min,. SYBR® Safe. (lnvitrogen),. en exposición a luz ultravioleta en. el. transluminador (Bio-lmaging Systems MiniBis Pro) con el fin de confirmar la purificación del. DNA.. 24.

(36) Secuenciación y Análisis de las Secuencias. Una vez realizada la purificación del producto de PCR, se procedió medir la concentración de. DNA. a. una. 260/280. entre. en. 1.8. 2.0. indica. de. NANODROP. y. menores a. absorbancia. 2.0,. 1.8,. se. 260;. 2000. considera. asi. mismo. (Thermo. optimo,. Ficher. la. del ADN.. La. verifico. la. secuenciación. su. Scientific. muestra. la cantidad de proteína en. rotura. se. pureza. lnc.). contiene. base. a. este. se. cuando. exclusivamente. muestra es alta,. se. en. la. relación. encuentra. ADN,. valores. indice mayor que valores de. realizó directamente. del. producto. de. PCR. purificado y cuantificado,. de acuerdo con las instrucciones de la solicitud de secuenciación,. con. 16. un volumen final de. purificado,. mezclado. con. µI,. 1O. en. un tubo eppendorf de 0.2. pmol. del. oligonucleótido. µI. se agregó. correspondiente. 120. ng del. (sentido. y. DNA. anti. sentido ), la mezcla fue enviada a la Unidad de Síntesis y Secuenciación de DNA del Instituto. de. Biotecnología. de. la. UNAM. en. Cuernavaca,. Morelos,. donde. fue. secuenciada. por. el. método de Sanger.. Las secuencias obtenidas fueron alineadas y se compararon con secuencias ya reportadas. en. la. base. Posterior. de. se. datos. realizó. GenBank. un. utilizando. análisis. el. programa. filogenético. en. el. BioEdit. programa. Sequence Alignment. MEGA. 7.0,. por. el. Editor,. método. máxima verosimilitud (Maximum likelihood) en base al modelo Tamura-Nei (1993) con 1.000. bootstrap.. 25.

(37) RESULTADOS Y DISCUSIÓN. Detección de Adenovirus Entérico Mediante Pruebas Rápidas.. Las. 179. Navojoa. muestras. obtenidas. y Hospital. del. rápidas comerciales SO. N.L.).. Niño. durante. y la. el. periodo. Mujer de. Cd.. de. muestreo. Obregón,. en. fueron. Rota/Adeno Rapid Test (SO Bioline,. el. Hospital. sometidas. Regional. a las. CTR, S.A. de C.V.,. de. pruebas. Monterrey,. Se obtuvieron 2 muestras positivas de adenovirus ( 1 . 1 1 %). Así mismo, se observó la. presencia de rotavirus en. una. de las. muestras,. por lo que se determinó como ca-infección. (figura 8).. De acuerdo con los informes médicos de los casos, los pacientes eran infantes con edad. 12. meses,. presentaron. síntomas. típicos. de. enfermedades. gastrointestinales. tales. s. como. diarrea (100%) con una duración de 2 a 4 días y con evacuaciones de hasta 6 veces por día,. vómito (50%) y deshidratación (50%) leve, los pacientes fueron hospitalizados (100%).. Figura. 7.. Pruebas. rápidas. de. detección. de. rotavirus.. A). Prueba. SD. Rota/Adeno. Rapid. Test. (SD. Bioline) positiva para Adenovirus . B) Prueba SD Rota/Adeno Rapid Test (SD Bioline) negativa.. 26.

(38) Amplificación del gen Hexón de Adenovirus. Las. dos. muestras. analizadas. por. positivas. PCR. bajo. Ad1/Ad2. respectivamente,. los cuales. (Figura. hexón,. 8).. La. bioinformáticos,. genotipos,. sólo. adenovirus. las. oligonucleótidos. estructural. de. condiciones. (Tabla. 4),. amplifican. una. de. las. secuenciación. proporciona. identificadas. antes. que. un. se. información. alinean. de. más. mutaciones y recombinaciones.. humano. tipo. 6. en. el. precisa. posición. codifica. segmento. para. circulantes. en. regiones. fuertemente conservadas entre. la. 2372. y. proteína. de. con. identificación. de. de. 482. pb. análisis. nuevos. Una vez amplificado el segmento de interés,. se. el cual fue secuenciado por el método de Sanger.. perteneciente. otras. para. fueron. juego. 1890. combinada. la. el. esperado. del. grupo. C. reveló una identidad del 99% con. (Figura. 9).. Por su. filogenético de la secuencia codificante obtenida en este estudio y su. cepas. rápidas,. utilizando. la. adenovirus. En el análisis de secuencias de la muestra de adenovirus. adenovirus. pruebas. mencionadas,. amplificó. genes. procedió a purificar el producto de PCR,. las. segmento del gen que. muestras. de. con. del. mundo,. indicaron. que. las cepas reportadas en Japón,. las. parte,. el. análisis. alineación con. secuencias. otras. fueron. Estados Unidos, Argentina,. China y Okinawa (Figura 1 O).. Mpb. Carril N.2. 500 pb. Figura carril. 8. 1:. Amplificación Marcador. de. del. gen. pares. hexón de. de. adenovirus. bases;. Amplificaciones del segmento hexón (482 pb).. carril. 2:. 27.

(39) 00 N. .. �-u. .. .... �--º. · u. ·o. .... .. . ¡... ·C. · u. .... . ¡.. ¡... . ¡... . ¡.. ¡... ¡.... . ¡.. ¡... ¡.... .... · u. .... -u. -e. ·. u. <. •. .. ·<. ·<. · e. . .... u u. • 1- C. · u . .... ! - 'i:. ! .: �. o. . .... · u. · u. · ..C. •. • 1- ..C. • l- 1- 1- +- +- I-. .. · l- +- 1-. .. • l- l- l- l- 1- 1- l- l- l- l- l- l- +- I-. e. . .... •OO. e. • I-. 1- ¡.. 1- +- 1- ... ¡.. ... 1- ¡.. .... • Q O O C C C O O O O O O. ·u. · e. •. . .... •. •. •. •. •. •. •. •. •. •. •. •. ¡... •. e. u. . .... u. . .... · e. . .... u. . u u u u u. u u u u u. u u c. u. · u. · e. u. i .: !:!. •-o. ·e. u. ·o. · e e. . .... u. o. • 1-. u. · < < 0 < 0 1- 1- 1- 0 1-. • +-. +- 1- 1-. +-. +- +- +- +- +- 1-. u. . cooo. +-. +- o o e c o o o e. . ...... o. · u. ·ou. .... .. . .... u. o -o. u -u. ·. u u u u u u u. •. U U. • U U. · u •. · e. .. ·o. ·e. · C. 1-. •. · I- O C O l- 1- 1- 1- 1-. ·000. •. -e. . .... t:. ·. < o o o u u u u < <. .. . .... •. ·. u u u. ·e. . .... .. .... u u t- +- u U U U U U U U I- U. · u u. • U U U U U U U U U U. •. U U U. ·. ·. •. •. ·o. - u u u c. u u u u u. ·. u u. · c o c c ..: c c c. ·< • O O. . u. · < < < < < C. u +- +-. u. +- u. uo. u. u. u +- +-. · u. e · u ·. · U U U U U U. U U U. ·. U. •. . +-. • +-. 9-::. - , u. e. ·. 1- 1-. · c c < c c t- o. ·. · u. o. · u . .... · 0 0 0 0 0. · +- e. e e. ·oo. e < +- +- +- +- +- +-. e e. ' O. · C. o. ·. ·. · <. ·. o. · C. .... ·e .. · u. .... • U U. • U U O. U U U U. U U U U. Ue. U. o. . .... u. ·e. !.:�. 2-o. ,. ·C. · 1.:J c -c c o c:> o. o. · u. e. · ..C < < < C. · u . .... · e. · u. • U U. •. U. U. U. U. U. _ ,_. e. e. . .... u. u. o. e. · c u. 'O. • U U. ·. · U. U U V U. ·. U. .. · o +- u u. · o c u. · +- u. 2-� - ·o. e. o. e • O U. · e. · U U U U O O U U I- U. 'O. . .... o ·. -e. u u u. •OOO. · u. .... · v u u u u u. u. u u u. < 0' 0 0 0 0 0 0 0. . .... -u. e. 1-C::,. e . .... · u. u. ·o. ?..: �. �- +-. -. · e. · < 1-. · u · u. o. ... e. o •O. • U. u. -u. ·e. u. ·o. u. .... . u u u u u u u ·e. u. • U U. · u. o. · < C. ·o. .... .. • C C. f - ';. -e. .... -e. •. - u u +- c u c u u. .... ·e. .... •OO. • C. u. �- .... ,-. - u u ..: u u u ..: u u. ·e . ... .... e. .. <(. •. o · U C. · e. :;. ·. u. •. ·oo. ... · u. • U U. · e. •. e. -o. ·. • l- l. e. u. .!!!. 1-. o. . .... .!!!. ·. e. 'O. 3-u. · e. ,;-o. u. ... .... ·. e •. u. C). ·. · +- 1- +-. u · e. · e. u. .2 ¡¡. l-. · u. u. · u. ·. .. · o +- +- l- +- +- 1- 1-. .... · e. -u. U. ·u. · e. t:. I-. u. .... (b. ·. !-� . .... · u. · u. +-. ·. U <D <.:J <# U +- U I- U U U l- 1- 1-. � - +-. CJ. ·. u. .... :;:::. ·. .... • U U U. e. •CIJ. .... e ·o. e. a-o. +-. !-0. •-e. o. +- 1-. o. u. .... . 1-. . 1- ¡... . +-. e. . .... . ¡.... 1-. . ¡.. +-. u. - .... -u. .... e. · U U. • +-. +-. .. .. · +- 1- 1- 1- 1-. .. •.

(40) !-u r. • U U. • C U O O O U. •. · · e ·. · u. ... · 1-. r. · < • < < u. •. •. •. •. •. U. ·oo. · 1- 1-. •. •. •. · o o c c ,c: c:,. -r. u. ·. o. r. •. .. ·. · C. • 1U. •. • 1-. - ,c e. ·<. · 1- 1- 1-. •. r. 1 - ::!. · r. .. .... .. .. •. • 1-. .. ·e. • C:, 1- Q O C H , :J Q c:J C O < <. ·o u u. ... >,. -o. u. (O. · r r. . e .. o. ... • ,C ,C: 1-. • 1-. g. •. �-�. o. o o. · r r. . 1- u 1- 1- u u u 1- 1- 1- 1- 1- 1- 1-. e. u ·. Q). u. -o. e:. · o. -e. r. O). u. ·r. · r. .o '. �-: r. ::;¡ (/). · U. r (/). ::;¡. "'. · r. o. -u. -r. r. ·. · r. ·. o. u. u. u. u. · U U U. - u. u. � ·;;. · r r. u. o. . ... e: · o. Q). . .. ... � - ::;. f..:.:. . ... ... · u u u. ·. · u. · r. - u u u u u u u o o o o o o u o o o o o o o. •. ·u. 1- ¡... ¡.... 1- ¡... ¡.... •. +-. ¡... 1- .... ¡... 1- 1-. e - u u u u. · u u u u u u u. . .. · u. .. .. .. .. .. .. .. · o .. · el[ <. -o r. -. . ... •. l- l- l- l-. .. ...... l- l- l- l- l- l- l- l- 1- 1-. ¡¡ .e:. · u. · r. ·o. · r. . ... . <. . c. .. .. ... · <. · U U. · U U. •. ·. .. . .... ... ... .... . 1-. •. •. • U. · U U U U U U Y U U U U U U U. C. Q). · C C C C C C C. - u u u u u v u u u u u ,c. .. .. Q). (/). -o. 2. •. ¡.... - u u u u u u u u u u u u u u. .. • u u u u u u u u. 8. 2. ·o. E. o,. ·o. O). o. ·. · < o. � s. e. · C. . u. · u r. .. vu. .. ..... .. .. ·o. . ... · r .. . ... "'. .. •. ·C. . ...... '. .. ·. · ·. O. c:,. •. .. .. · I- U U. .. · C C <C C C < C C <C <. . ..... ..... .... ·<. · o. 0 e:¡. ·r. · r. .. .. .. •. · 1- 1- 1- 1- 1- I- I-. • C U C C U. • U U C C U U U U. . ... Q). · r r. · r. • 1-. · u. •. •. •. •. •. · C. ::;¡. "'. •. "'. ·¡;. e:. -e. · u. e: (/). • U. · r. . .. ... -r. g o. ... · r. · o. . .. ... . .. .. 32. ::;¡. �-:;. ·. (/). .!d!. • I- C:, I- I- U U U l- 1- 1-. r. · u. O). aj. (/). -u. u. -. -o. ...... ¡..:.:. · r. ... . ... o. · o. Q) •. · r. • U U. •. • U. • U. •. •. · U (/). 1 ..:. �. · u u u u u u u u u u u u. · u. · r. · u. ·o. . ... ·. Q). . <. .. c e:. -o. · C C. e. ·o. r •. -e. ·r. •. •. •. .. •. <;:J. • 1- 1- 1- 1- 1-. • r. O. -r ·. e. • U U. • U. · U U. · U U. • U. e: -o ·¡¡. . ... · u r. · < <. · 1-. · 4 4'.. · u. · <. · < 1- 1- 1- C. (/). :ii. · r. -u. "'. !..:.�. ·<. • ,O. · r. · r. Q). � � a. Q). .9 •. · r · r r. • r r. e:. E -o · u u u u u u u u u u u u. · u. · U U. o-� � o. · r r. ·o. �-�. · u. e: O). <. · o. u. u. C. ... -o ·U. · r. !-e. C. ·o. -e. · r. ·. · r. . ... . ... C. . ... -e · r. · u. · u. ·. · u • U. � ..:. �. z:-. . ..... .... · r. · r. 0. . ¡.... · r. .. ·o. u. · u. .. .. · u. :1..:.: . ... u. · r. · r. ·<. · u. · r. · r. Q). · r r. -e. · U U U l- 1- U U. -r. . ... e:. - <. . ... ·r. ·o. · r. .. · o. o. r. "'. Q). -o. · u. · u. �-: ... . .. . ... · U U U U U U U U U U I- U U U U U U U U U U. 1 ..:. :. . ... "' r. -o. u. · u - u. 1! -!:. -o. -. . ... -r · r. <. .. ... .. . ... r. . <. · u. "'. Q). .!: <{. ai. � ::;¡ O). u:. e 5.

(41) <)· SOt.iMX<Sa l I HMV'. H0413315. 1 J-IAdV li TCll!li'/USA. m.23389.1 HMV. e Es,-.ada<!. Uli005. 99. -. JX17J079.1 HMV-C Agenilla. KF9515S5.1 HA!N-C Clilla. ABG01022. 1 J-IMV. CO!wlawa 100. LC!li!ff719.1 HA!N-<i. Japón. Grupo. e. KC632616.11·1Ad\l.{; 6 Talaniia. e. AJ2"3il(J4 .1 J-IAdV,2 �¡¡¡¡¡¡. 100. JX17:l!l77.1 HAdVC rn;. �rna. AY2243!!2.1 HAdV,2 Kciea. KM�.15.1 HAdV·,2 30. AB33008o.1 HAdV-5. 7. 31. AB330082.1 HAdV-1 .. ABJ30085.1 HA<fV4. AB33013a.1 HAdV-19. y. Grupo E. 7. }. Grupo D A83:!0089.1 HAdV-'9 .. OQ9Zlt22.2 HAd\1--52. Grupo G. AB33011.2.1 HAdV-31. 99. }. GrupoA. AB330093.1 HAdV-1 2. EO. � AB330121.1 HAdll-40. 1 99 1. }. GrupoF. }. GrupoB2. }. GrupoBl. A833!1112.1 HA<fV41. KC$$1<l5.1 HA!IV·ll:i Agenilla. 65 JI.. 100. L. '--. 99. A8330095.1 HAd\f..14. AS33IJ092. 1 J-IAdV ·11. AB330102.1 HAdV-21. � AB330088.1 J-IAdVC7 34. . ' Ef564001.1. tao. HAdV-3. 0.050. Figura. 1 O.. Análisis. secuencias de. filogenético. referencia. del. reportadas. Grupo. C,. tipo. previamente. en. 6. de. el. adenovirus. GenBank.. Se. aislado. utilizó el. en. este. método. estudio. y. Maximum. likelihood en base al modelo Tamura-Nei (1993).. 30.

(42) l.os adenovirus del grupo. serotipo. 31 ),. son. los. F,. que. serotipos. se. 40 y 4 1 ,. asocian. así como el. principalmente. embargo, otros genogrupo como son, el genogrupo C,. esporádicos de gastroenteritis. 2014; La Rosa y col., 2015).. aguda. (Janes. y col.,. genogrupo A (particularmente. con. gastroenteritis. en. niños,. sin. D y G han sido asociados con brotes. 2007;. Ghebremedhin.,. 2014;. Lu. y col.,. Es importante mencionar que el genogrupo C, comúnmente se. encuentra más asociado con infecciones del tracto respiratorio; sin embargo, esta especie no. entérica de adenovirus, ha sido asociada con adenitis mesentérica, la cual puede imitar una. apendicitis. y. ocasionalmente. (Ghebremedhin.,. determinar. intestinal. los. en. asociación. 2014;. principales. infantes,. con. Lu. la. causar. y col.,. 2014).. factores. demostraron. intususcepción. intususcepción. y. Estudios. agentes. que. las. intestinal,. en. lactantes. realizados. infecciosos. infecciones. ya. los. que. en. niños. Vietnam. causantes. Adenovirales. fueron. y. detectados. pequeños. y Australia. de. intususcepción. tienen. en. para. el. una. 37%. fuerte. de. los. casos, en el cual adenovirus respiratorio del grupo C fue la especie predominante con el 63%. (Bines y col., 201 O).. 31.

(43) CONCLUSIÓN. De las 1 7 9 muestras analizadas, dos muestras fueron positivas a HAdV ( 1 . 1 %), mientras que. el análisis de secuencia. aislado de. asociado. pacientes con. a. invaginación. reportada. Estados. revelo la. brotes. importancia. de. China. HAdV-C tipo 6,. respiratorias. agudas,. gastroenteritis. y hepatitis.. se ubicaron en el. Argentina,. seguir. de. apendicitis. en este trabajo,. Unidos,. infecciones. esporádicos. intestinal,. presencia de. y. profundizando. El. la. con. la. Grupo. capacidad. filogenético,. indico. de. que. C está. causar. la. cepa. mismo grupo de cepas circulantes en Japón,. Okinawa.. en. HAdV tipo 6 del. aguda,. análisis. genogrupo más frecuente. La. epidemiología. investigación. de. las. molecular. cepas. refleja. circulantes. la. de. adenovirus en el pais.. 32.

(44) BIBLIOGRAFIAS. Aslow, K., Stanberry, L. R., & Le Duc, J. A. W. (2014). Viral lnfections of Humans. P.99. Adhikary, A. K., Numaga, J . , Kaburaki, T., Kawashima, H., Kato, S., Araie, M.,. H.. (2001 ).. Rapid. adenoviruses. detection. by. and. fiber-based. typing. PCR. of. and. oculopathogenic. restriction. strain. enzyme. ... & Ushijima,. of. subgenus. D. analysis. lnvestigative. ophthalmology & visual science, 42(9), 2 0 1 0 - 2 0 1 5 .. Bern,. C.,. Martines,. problem. of. J.,. De. Zoysa,. diarrhoeal. l.,. Glass,. &. disease:. a. R.. l.. ten-year. (1992).. The. magnitude. update. Bulletin. of. the. of the. World. global. Health. Organization, 70(6), 705.. Berk AJ.. Adenoviridae. In Fields BN, Knipe DM, Howley PM, editors. Fields Virology. 6th ed.. Philadelphia (PA): Lippincott-Raven; 2007. P.1704.. Bernaola,. G.,. Luque,. &. W.. A.. L.. T.. E.. R.. (2001).. Fisiopatología. de. las. Infecciones. por. Adenovirus. Paediatrica, 4(2).. Bennett EM,. Bennink JR, Yewdell JW,. Brodsky FM.. Cutting edge:. adenovirus. E19. has two. mechanisms for affecting class I MHC expression. J lmmunol. 1999;162(9):5049-52.. Brooks,. G.. (2 0 1 1 ). Jawetz,. Melnick. y. Adelberg:. Adenovirus.. Capitulo. 32.. Microbiología. médica (25a. McGraw Hill Mexico.. Bowles, N. E .,. Ni, J., Kearney, D. L., Pauschinger,. Towbin,. J. A.. M., Schultheiss, H.. P.,. McCarthy, R., . . . &. (2003). Detection of viruses in myocardial tissues by polymerase chain. reaction. Joumal of the American Col/ege of Cardiology, 42(3), 466-472.. Bines,. J.. E .,. Liem,. N. T.,. lntussusception. Vietnam. and. pediatrícs,. Cooper,. Justice,. Study. F.. Group.. Australia:. A.,. (2006).. adenovirus. N .,. Risk. Kirkwood,. factors. implicated,. for. but. C.. D.,. De Campo,. intussusception. not. in. rotavirus. The. M.,. .... infants. Joumal. &. in. of. 149(4), 452-460.. R. J., Yeo, A. C., Bailey, A. S.,. reaction. Son, T.. assay. for. rapid. & Tullo, A.. diagnosis. of. B.. (1999). Adenovirus polymerase chain. conjunctivitis. lnvestigative. ophthalmology. &. visual science, 40(1 ), 90-95.. 33.