QUÍMICO FARMACÉUTICO

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UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO

FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA

ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA

VALIDACIÓN DE LA TECNICA ANALÍTICA POR

ESPECTROFOTOMETRIA UV - VISIBLE PARA LA CUANTIFICION E IDENTIFICACION DE RIBOFLAVINA.

INFORME DE PRÁCTICAS PRE PROFESIONALES PARA OPTAR EL TÍTULO PROFESIONAL DE:

QUÍMICO FARMACÉUTICO

AUTOR:

Br. GARCIA QUISPE, JUAN PABLO

ASESOR:

Dr. Q.F. RAMON PIMINCHUMO CARRANZA

Trujillo - Perú 2016

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Señores miembros del jurado dictaminador:

Dando cumplimiento a lo establecido por el reglamento de grados y títulos de la Facultad de Farmacia y Bioquímica de la Universidad Nacional de Trujillo, someto a consideración y elevado criterio profesional del Jurado, el informe de prácticas titulado:

“VALIDACIÓN DE LA TECNICA ANALÍTICA POR ESPECTROFOTOMETRIA UV - VISIBLE PARA LA CUANTIFICION E IDENTIFICACION DE RIBOFLAVINA”.

Con el cual pretendo optar el Título de Químico Farmacéutico. Es propicia esta oportunidad para manifestarle mi más sincero reconocimiento a nuestra alma mater y toda su plana docente, que con su capacidad y buena voluntad contribuyeron a mi formación profesional.

Dejo a vuestro criterio señores miembros del jurado dictaminador la calificación del presente informe.

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DEDICATORIA

A DIOS:

A ti Dios por qué has permitido que la sabiduría dirija y guíe nuestros

pasos. Has sido el todopoderoso, quien ha iluminado nuestro sendero

enseñándonos a encarar las adversidades sin perder nunca la dignidad ni

desfallecer en el intento.

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A mis Padres:

Félix y Martha

Por su amor, apoyo moral y espiritual y sobre todo por enseñarme que con

amor, esfuerzo y dedicación puedo lograr mis anhelados sueños.

Gracias.

Los amo.

A mi Familia:

Por acompañarme en cada momento de mi vida,

mis hermanos Cristhian, Richard e Ivett por ser

esa fuente e amor e inspiración hacia mi bienestar

espiritual.

Un profundo agradecimiento a mi hermana Nataly

mi negrita que siempre me apoyó, aconsejó y

motivó a no desfallecer y seguir.

Gracias mis queridos hermanos.

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A mis Sobrinos:

Rodrigo, Mathías y Liam que son el futuro de mi familia y los niños más

lindos del mundo.

Gracias

A mis Abuelos

Gilberto Garcia y a la memoria de mis tres abuelos

Delfín Quispe, María Rodríguez y Ninfa Arias,

que Dios los tenga en su gloría.

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AGRADECIMIENTO

Un agradecimiento especial al

Doctor Ramón Piminchumo Carranza

Por su tiempo y el apoyo brindado para el

desarrollo y culminación del presente

informe.

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ÍNDICE RESUMEN ... i ABSTRACT……….………ii INTRODUCCIÓN ... 3 MATERIAL Y MÉTODO ... 9 RESULTADOS ... 22 DISCUSIÓN ... 25 CONCLUSIONES ... … 28 REFERENCIAS ... 29 ANEXOS

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RESUMEN

El presente informe tiene como objetivo presentar evidencia documentada, que los resultados obtenidos son confiables, consistentes y reproducibles en las condiciones establecidas. Se planteó la Validación de la Técnica Analítica por Espectrofotometría UV - visible para la cuantificación e identificación de riboflavina, evaluándose parámetros como: Especificidad o Selectividad, Linealidad, Precisión y Exactitud con el fin de que cumpla con los requerimientos de la Farmacopea Estadounidense (USP), Conferencia Internacional Tripartita sobre Armonización (ICH) y recomendaciones de la Asociación Española de Farmacéuticos de la Industria (AEFI). Una vez definidas las condiciones de trabajo, se realizaron los respectivos análisis para la evaluación de los parámetros de validación y se demostró mediante el diseño experimental, que la metodología analítica cumple con la característica de que es lineal porque se obtuvo un coeficiente de correlación y un coeficiente de determinación cercano a la unidad. El método es preciso ya que el coeficiente de variación o desviación estándar relativa obtenido tanto en los ensayos de repetitividad y precisión intermedia fue RSD < 2%; es exacto por tener una recuperación media dentro del rango de 98% - 102%; y es selectivo para el analito en estudio ya que no se evidenció interferencia alguna. Por lo cual se concluye que el método validado es confiable, consistente y puede emplearse en los análisis correspondientes del laboratorio.

Palabras claves: Riboflavina, validación, Espectrofotometría, Especificidad o Selectividad, Linealidad, Precisión, Exactitud

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ABSTRACT

This report aims to present documentary evidence that the results are reliable, consistent and reproducible under the conditions set. Validation of Analytical Technique raised by spectrophotometry UV - visible for quantification and identification of riboflavin, evaluated parameters such as: Specificity or Selectivity, Linearity, precision and accuracy in order to meet the requirements of the US Pharmacopeia (USP), Tripartite International Conference on Harmonization (ICH) and recommendations of the Spanish Association of Industrial Pharmacists (AEFI). Once the working conditions are defined, the respective analysis for evaluating the validation parameters were performed and demonstrated by the experimental design, the analytical methodology meets the characteristic that is linear for a correlation coefficient is obtained and coefficient close to unity determination. The method is accurate because the coefficient of variation or relative standard deviation obtained both assays intermediate precision repeatability and was RSD <2%; It is accurate as having a mean recovery within the range of 98% - 102%; and it is selective for the analyte under study since no interference is evident. Therefore it is concluded that the validated method is reliable, consistent and can be used in the corresponding laboratory analysis.

Keywords: Riboflavin, validation, spectrophotometry, specificity or selectivity, linearity, precision, accuracy

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I. INTRODUCCIÓN

La industria farmacéutica es el sector dedicado a la fabricación y preparación de productos químicos medicinales para la prevención o tratamiento de las enfermedades. Estas empresas del sector fabrican sus productos mediante procesos altamente automatizados, en los que se encuentran la fabricación de fármacos dosificados, como pastillas, cápsulas, jarabes, suspensiones ó sobres para la administración oral, soluciones para inyección, óvulos y supositorios.1

El fin de la industria farmacéutica desde siempre ha sido producir medicamentos de calidad y con total garantía de seguridad. Desde el “hágase según arte” hasta el cumplimiento de las ICH, con los años, se han ido desarrollando recomendaciones e incorporando requerimientos que han evolucionado hasta una reglamentación estricta. La garantía de la calidad de un producto deriva de una cuidadosa atención a todos aquellos factores que pueden influir en su calidad: selección de sus componentes y materiales, diseño adecuado y control del proceso. 2, 3,4

Para la industria farmacéutica una de las características más importantes de toda la empresa es la calidad de sus productos, ya que de ésta dependerá tanto el prestigio como el desarrollo económico y el crecimiento de la misma. Atendiendo a esta necesidad se han venido formulando diferentes programas y parámetros por varias instituciones para lograr el aseguramiento de la calidad de los distintos productos. Entre los entes reguladores más importantes tenemos la Food and Drug Administration (FDA), la Internacional Conferenceon Amonization (ICH), y en nuestro país tenemos a la Dirección General de Medicamentos Insumos y Drogas (DIGEMID), quienes a través de las Buenas Prácticas de Manufactura (BPM) y las Buenas Prácticas de Laboratorio (BPL), aseguran la calidad de los medicamentos.5, 6

De acuerdo a la exigencia y normatividad vigente referida a buenas prácticas de fabricación de productos farmacéuticos, se considera sumamente necesario que los procesos que participan en el

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ciclo productivo, incluyendo los métodos de análisis aplicados tanto para la evaluación de materias primas como para productos terminados, se encuentren validados; es por esto que en nuestro medio durante los últimos años, las empresas farmacéuticas, en cumplimiento de las exigencias de calidad, están orientando sus esfuerzos al desarrollo y ejecución de la validación de sus procesos.7

Calidad es un parámetro importante en todos los sectores industriales, está es aún de más relevancia en la industria farmacéutica, ya que consciente de su alta responsabilidad, actúa siempre buscando mejorar la calidad del medicamento a lo largo del proceso que lo crea. El objetivo es uno y es importante conseguirlo plenamente, esto es, el medicamento seguro estable y eficaz. Sin embargo, a pesar de los esfuerzos de control y fabricación, se exige una mejora continua y máximas garantías de la calidad. Y es en el avance para conseguir un total dominio de la calidad, es cuando surge el concepto de validación.8, 9

El método o técnica analítica consiste en el estudio de cada parte y/o procedimiento, comprendiendo la causa, la naturaleza y los efectos. El análisis es la observación y examen de un hecho en particular. Es necesario conocer la naturaleza del fenómeno y objeto que se estudia para comprender su esencia. El método analítico permite conocer más el objeto de estudio, con lo cual se puede: explicar, hacer analogías, comprender mejor su comportamiento y establecer nuevas teorías.10, 11

Los métodos analíticos son ampliamente utilizados en la industria farmacéutica para la identificación y cuantificación de los componentes activos, impurezas y productos de degradación en materias primas y formas terminadas, así como para la determinación de propiedades específicas que influyen en la acción del producto, como la disolución y la velocidad de liberación. La industria farmacéutica tiene como objetivo principal producir medicamentos seguros, estables y eficaces; es por ello que actualmente las validaciones son una exigencia legal de las agencias reguladoras, ya no solo la validación de los procesos, sino también la validación de los métodos analíticos.12

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La validación de un método analítico provoca una mayor fiabilidad y aceptación de los datos generados, estando estas en proporción con la calidad del proceso de obtención de los mismos. Es por ello, que su realización es una tarea que puede ser tediosa, pero las consecuencias de no hacerlo, son seguro, una pérdida de tiempo, dinero y recursos. Dentro de las razones que justifican la validación de métodos analíticos se encuentran: a) Demostrar que los métodos son adecuados a los análisis propuestos en las condiciones descritas. La validación es la herramienta que permite obtener las pruebas documentales al respecto y b) Trabajar con métodos que ofrezcan confianza y seguridad en los resultados, lo cual a su vez minimizara el número de fallos y repeticiones permitiendo un importante ahorro de costos.13, 14

Las características de desempeño analítico o de fiabilidad comprenden criterios fundamentales de validación y de los que derivan en la práctica todos los parámetros de validación, así tenemos: Selectividad, Linealidad, Precisión, Exactitud, Rango, Robustez, Límite de detección y Límite de Cuantificación.15, 16, 17,18

Selectividad, es la capacidad de un método para determinar exacta y específicamente el analito sin interferencia de impurezas, productos de degradación, excipientes u otras sustancias presentes en la muestra. Este parámetro se debería determinar antes de iniciar el estudio cualquier otro parámetro de validación dado que debe conocerse en qué grado la respuesta del método es únicamente proporcionada por el analito, sin interferencia de otras sustancias con él, de una u otra forma.19,20,21,22

Linealidad de un método analítico es su capacidad de producir resultados que son directamente proporcionales (o se convierten en directamente proporcionales mediante una transformación matemática bien definida) a la concentración de analito dentro de un intervalo dado. La linealidad generalmente se expresa en función de la varianza alrededor de la pendiente de la recta de regresión calculada, según una relación matemática establecida, a partir de los resultados obtenidos mediante el análisis de muestras con diferentes concentraciones de analito.19, 20, 21,22

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Precisión de un método analítico es la proximidad entre los resultados, obtenidos por ese método y el valor real. La exactitud puede a menudo expresarse como un porcentaje de recuperación, por medio de la valoración de cantidades conocidas agregadas de analito. Representa el grado en que un método analítico se ajusta al valor verdadero para todo propósito práctico. La exactitud de un método analítico puede determinarse mediante la aplicación del método a muestras de valor conocido o mezclas de excipientes a las que se agregan cantidades conocidas del analito, tanto por encima como por debajo del nivel normal previsto. A partir de los resultados, luego se calcula la exactitud como el porcentaje de analito recuperado por medio de la valoración.19, 20, 21,22

Exactitud, es la proximidad entre los resultados, obtenidos por el método y el valor real. Capacidad del método analítico para proporcionar resultados lo más cercanos posibles al valor teórico o nominal.21, 22

Rango, es el intervalo entre los niveles superior e inferior del analito (incluyendo estos valores) en el que se ha demostrado la precisión, exactitud y linealidad del método tal cual está escrito. Normalmente, se expresa en las mismas unidades que los resultados de la prueba (por ciento, partes por millón, etc. 19, 20, 21, 22

Límite de Detección, es la mínima cantidad de analito en una muestra que puede ser detectado pero no necesariamente cuantificado con precisión y exactitud. 19, 20, 21, 22

Límite de cuantificación, es la mínima cantidad del analito que puede determinarse cuantitativamente con una adecuada exactitud y precisión. 19, 20, 21, 22

La validación de metodologías analíticas se fundamenta en la determinación de estos parámetros, que se aplican de acuerdo con la categoría a la que pertenezcan. Según USP 38 las metodologías se clasifican en cuatro categorías para su validación y ésta indica los parámetros a evaluarse.19

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Categoría I; cuantificación de componentes principales de fármacos a granel o ingredientes activos (incluyendo conservadores) en productos farmacéuticos terminados.

Categoría II; determinación de impurezas en fármacos a granel o productos de degradación en productos farmacéuticos terminados.

Categoría III; determinación de las características de desempeño (disolución, liberación de fármacos).

Categoría IV; pruebas de identificación. 19, 21, 22

Para cada categoría se necesita diferente información analítica; el método que fue objeto de estudio en el presente trabajo corresponde a la categoría I, para el cual se evaluará los parámetros antes mencionados.

Los métodos para los análisis, en los casos más favorables son selectivos; pocos, si es que los hay, son verdaderamente específicos. En consecuencia, la separación del analito de las posibles interferencias es a menudo una etapa de vital importancia en los procedimientos analíticos. Sin duda, uno de los métodos más comúnmente utilizado para realizar separaciones analíticas es, espectrofotometría UV - visible, un método que tiene aplicación en todas las ramas de la ciencia.22

La vitamina B2 es una vitamina hidrosoluble y bajo esta denominación, o la genérica de "Riboflavina" se agrupan la riboflavina propiamente dicha y las coenzimas derivados suyos, cuya estructura está formada básicamente por un grupo de tres anillos, dos de ellos heterocíclicos (la isoalloxazina), unido a una cadena lineal de ribosa. Pueden sintetizar riboflavina todos los vegetales y muchos microorganismos, pero no los animales superiores, que si pueden obtener las coenzimas a partir de ella. En forma sólida, la riboflavina es de color amarillo anaranjado intenso. En solución acuosa, tienen una fluorescencia amarillo-verdosa muy intensa23

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Hoy en día los laboratorios deben demostrar que sus métodos analíticos proporcionan resultados fiables y adecuados para su finalidad y propósito perseguido, ya que muchas de las decisiones que se toman están basadas en la información que estos datos proporcionan. La validación de las metodologías, junto a otras actividades englobadas en el control y aseguramiento de la calidad permite demostrar a los laboratorios que sus métodos analíticos proporcionan resultados fiables, que han permitido al mercado farmacéutico alcances mundiales, progresos en ciencia y tecnología que han llevado al desarrollo de numerosas drogas sintéticas de uso masivo. Debido a esto crece la necesidad de disponer de métodos para la determinación de compuestos activos de diversas formulaciones farmacéuticas.24, 25

Por lo expuesto anteriormente se pretende alcanzar los siguientes objetivos:

OBJETIVO GENERAL:

Validar la técnica analítica utilizada para determinar la cuantificación e identificación de Riboflavina por espectrofotometría UV – visible.

OBJETIVOS ESPECÍFICOS:

 Evaluar los parámetros de Especificidad, Linealidad, Exactitud y Precisión, según el protocolo de validación de métodos analíticos

 Establecer si los parámetros de validación mencionados cumplen con los parámetros planteados por la Farmacopea Americana (USP 39)

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II. MATERIAL Y MÉTODO A. MATERIAL

A.1. MATERIAL DE ESTUDIO

 Materia Prima: Riboflavina

 Lote: RPS / 072 / 2013 – 2014; H201505006N; RPS / 075 / 2014 – 2015

 Fabricante : Harman Finochem LTD.

 Origen : India

A.2. MATERIALES Y EQUIPOS DE LABORATORIO: A.2.1 Estándar:

 Estándar secundario Riboflavina Lab. Biomont S.A Lote N°: 90115228. Potencia T/C: 98.1%

A.2.2 Reactivos:

 Solución Reactivo de Hidróxido de Sodio Diluido

 Ácido Acético Glacial Reactivo

 Acetato de Sodio 14 g/L

 Agua Purificada A.2.3 Material de vidrio:

De uso común del laboratorio A.2.4 Equipos:

Balanza analítica

Marca : METTLER TOLEDO Modelo : ML 204

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Calibración y/o verificación : CONFORME  Espectrofotómetro

Marca : PERKIN ELMER Modelo : LAMBDA 25 Calibración y/o verificación : CONFORME  Sonicador

Marca : FISHER Modelo : FS -23

Calibración y/o verificación : CONFORME A.2.5 Otros:

 Bombillas

 Jeringas descartables de 5 y 10 mL

 Papel metálico y parafina para film

 Papel toalla

B. MÉTODO

B.1. OBTENCIÓN DE LA MUESTRA:

Las muestras analizadas fueron compradas a nuestro proveedor Andenex Chemie cuyo fabricante de las materias primas es Harman Finochem Ltd, cuyo origen es la India.

B.2 RECOLECCIÓN DE DATOS:

B.2.1 Determinación del muestreo de las materias primas:

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suficiente para el análisis.

B.2.1 Método analítico por espectrofotometría UV/VIS:

Se trabajó con el método espectrofotométrico modificado y propuesto por el departamento de control de calidad de Laboratorios Biomont11.

a) Condiciones espectrofotométricas:

Equipo : Espectrofotómetro UV - VIS

Celda : 10 mm

Longitud de Onda : 300nm

Blanco : 3,5 mL de acetato de sodio 14g/L llevar a 200 mL con agua.

b) Preparación estándar 11

En un matraz aforado de color topacio, de 500 mL de capacidad, sé colocó en suspensión 65,5 mg de la sustancia que sé examinó, en 5 mL de agua R, de modo que quedó completamente humedecida y sé disolvió en 5 mL de solución diluida de hidróxido de sodio R. En el momento en el que se completó la solución se añadió 100 mL de agua R y 2,5 mL de ácido acético glacial R. y sé diluyó hasta 500,0 mL con agua R.

Se colocó 20,0 mL de esta disolución a un matraz aforado de color topacio de 200 mL de capacidad, y sé añadió 3,5 mL de una solución de 14g/L de acetato de sodio R y se diluyó hasta 200,0 mL con agua R. Se Midió la absorbancia en el máximo de 444 nm

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absorbancia especifica

c) Preparación de la muestra11

En un matraz aforado de color topacio, de 500 mL de capacidad, se colocó en suspensión 65,5 mg de la sustancia que sé examinó, en 5 mL de agua R, de modo que quedó completamente humedecida y sé disolvió en 5 mL de solución diluida de hidróxido de sodio R. En el momento en el que se completó la solución se añadió 100 mL de agua R y 2,5 mL de ácido acético glacial R. y sé diluyó hasta 500,0 mL con agua R.

Se colocó 20,0 mL de esta disolución a un matraz aforado de color topacio de 200 mL de capacidad, y sé añadió 3,5 mL de una solución de 14g/L de acetato de sodio R y se diluyó hasta 200,0 mL con agua R. Se Midió la absorbancia en el máximo de 444 nm.

Sé calculó el contenido de C17H20N4O6 tomando 328 como el valor de la

absorbancia especifica

Especificación:

98,0 % – 102,0 % de Riboflavina (C17H20N4O6 Mr 376,4)

d) Cálculos

Dónde:

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Pmp : Peso de la muestra en mg

F : Factor de conversión

B.3 VALIDACIÓN DEL MÉTODO ANALÍTICO:

B.3.1 Selectividad

IDENTIFICACIÓN DEL PICO DE RIBOFLAVINA EN MUESTRA

Se Preparó la solución estándar y solución muestra según lo descrito en el procedimiento analítico

Procedimiento:

Se midió las absorbancias de las soluciones obtenidas en un espectrofotómetro UV - VIS realizando un barrido espectral entre 200 nm y 600 nm a intervalo de 1 nm en celdas con 1 cm de paso óptico, utilizando como blanco una solución de 3,5 mL de acetato de sodio 14g/L llevar a 200 mL con agua Realizar las lecturas por duplicado.

ENSAYO DE COLOR Y FLUORESCENCIA DE LA SOLUCION

Solución muestra: 0.01 mg/mL en agua.

Análisis: Alternativamente, se expusó a luz transmitida y luz UV de longitud de onda larga

Criterios de aceptación: La Solución muestra es de color amarillo verdoso pálido con luz transmitida con luz reflejada, presenta una fluorescencia verde amarillenta intensa que desaparece al agregarle álcalis o ácidos minerales.

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B.3.2 Linealidad

Se preparó 3 muestras de trabajo en el rango de: 80 %, 90%, 100%, 110%, 120%.

Muestra 80%: Se pesó aproximadamente 52,0 mg de estándar secundario de Riboflavina, se prosiguió según técnica de análisis.

Muestra 90%: Se pesó aproximadamente 58,5 mg de estándar secundario de Riboflavina, se prosiguió según técnica de análisis.

Muestra 100%: Se pesó aproximadamente 65,0 mg de estándar secundario de Riboflavina, se prosiguió según técnica de análisis.

Muestra 110%: Se pesó aproximadamente 71,5 mg de estándar secundario de Riboflavina, se prosiguió según técnica de análisis.

Muestra 120%: Se pesó aproximadamente 78,0 mg de estándar secundario de Riboflavina, se prosiguió según técnica de análisis.

B.3.3 Ensayo de exactitud

Se trabajó con las muestras de la linealidad y aparte se pesó 2 estándares secundarios a una concentración del 100% para comparar, y se prosiguió según técnica de análisis.

B.3.4 Ensayo de precisión

Este parámetro se evaluó en términos de repetibilidad y precisión intermedia

Repetibilidad instrumental: Se preparó las muestras según la técnica analítica, y se determinó este parámetro leyendo 6 veces de forma consecutiva un estándar secundario al 100%.

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analizó las 6 muestras de concentraciones al 100% de la muestra.

Precisión intermedia: Se preparó las muestras según técnica analítica. Luego, se realizó los ensayos con distintos analistas, determinándose el coeficiente de variación.

B.3.5 Rango

Cumplidas las especificaciones de linealidad del sistema, linealidad del método, precisión y la exactitud, se estableció que el rango de este método analítico es de 98,0 % a 102,0 %, verificándose que el método analítico funciona correctamente cuando se aplican a muestras que contienen concentraciones iguales a los extremos superior e inferior, así como dentro del intervalo de concentración definido.

B.4 ANÁLISIS DE DATOS:

Los datos obtenidos fueron sometidos a análisis estadístico de regresión lineal, test G de Cochran y test t-Student.

B.4.1 EVALUACIÓN ESTADÍSTICA

Identificación del pico de Riboflavina

Criterio de aceptación: Los espectros de absorción UV de la preparación muestra y preparación estándar presentarón máximos y mínimos a longitudes de onda semejantes.

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ANÁLISIS ESTADÍSTICO DE LINEALIDAD

Linealidad del estándar

Se determinó la curva de calibración relacionando la respuesta (Absorbancia) con la concentración de analito sobre los puntos sin promediar por el método de los cuadrados mínimos.

Cálculo de la recta de regresión:

Ecuación de la recta:

Y= bX + a

Dónde:

X : Concentración de analito

Y : Absorbancia del analito

b : Valor de la pendiente de la recta

a : Valor de intercepto de la recta con el eje “Y”

a y b se obtienen de:

b



Xi Yi



Xi

Yi n

X

i2





X i

2 n

a



Yi  b

Xi n

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Coeficiente de correlación "r"

El coeficiente de correlación "r" refleja el grado de relación o ligazón existente entre las variables X (concentración) e Y (respuesta). Si es cercano a la unidad significa que existe correlación con una probabilidad elevada.

Criterio de aceptación: r no debe ser significativamente diferente de 1. Valores mayores a 0,995 se consideran como aceptables.

Coeficiente de determinación (r2):

Es el cuadrado del coeficiente de correlación "r", e indica la proporción de la varianza total de "Y".

Criterio de aceptación: r2 no debe ser significativamente diferente de 1. Valores mayores a 0,990 se consideran como aceptables.

Test de hipótesis para demostrar regresión lineal en función del coeficiente de correlación "r"

HO: no hay correlación entre X e Y

Criterio de aceptación: Si el valor de "tr" obtenido es mayor que el "t" de tabla calculado para (n - 2) grados de libertad y un nivel de significación del 95% (probabilidad α = 0,05), entonces existe correlación lineal significativa.

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r : Coeficiente de correlación lineal

n : Número de mediciones

ANÁLISIS ESTADÍSTICO DE EXACTITUD

Cantidad de muestra: se calcula la cantidad de analito hallado en cada muestra, mediante la aplicación de la siguiente formula:

mg Muestra 

Amp

x Pst x f Ast

Donde:

mg Muestra: Cantidad de Riboflavina hallado en la muestra

A mp : Absorbancia de Riboflavina, obtenido con la solución muestra.

A st : Absorbancia de Riboflavina, obtenida con la solución estándar.

P st : Peso de estándar de referencia de Riboflavina

f : Factor de dilución de estándar y muestra.

Calculo de exactitud: la exactitud se expresa como el porcentaje de analito recuperado por el ensayo

R 

mg (h)

x 100 mg (a)

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R : Porcentaje de recuperación promedio mg (h) : miligramos de Riboflavina hallados mg (a) : miligramos de Riboflavina añadidos

Criterio de aceptación:

La recuperación (R) debe acercarse al 100%. En este caso, por tratarse del análisis de los principios activos como materia prima se consideran como indicativo de exactitud valores de 98 – 102%.

Prueba t de Student para determinar exactitud:

La exactitud se determina mediante la aplicación del test “t” de Student:

t (exp) 

100  R



n

RSD

Dónde:

t (exp) : Valor de t obtenido experimentalmente R : Porcentaje de recuperación promedio n : Número de datos o mediciones

RSD : desviación estándar relativa del total de mediciones

Criterio de aceptación:

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libertad y un nivel de significación del 95 % (α= 0,05), entonces no existe diferencia significativa entre la recuperación media y la cantidad añadida de analito.

ANÁLISIS ESTADÍSTICO DE PRECISIÓN

Cálculos:

La precisión está relacionada con la dispersión de las medidas alrededor de su valor medio o central y corresponde al grado de concordancia entre ensayos individuales cuando el análisis se aplica repetidamente a múltiples alícuotas de una muestra homogénea

La precisión se expresa matemáticamente como la desviación estándar (s) o como la desviación estándar relativa (DSR). El estimador de la desviación estándar se calcula como: n

s





X i X p

2 i1 n 1 Dónde: n : Número de medidas

Xi : Valor medido por el ensayo i

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n

X



X i p i1 n

La desviación estándar relativa (DSR) se calcula como:

DSR



s

.100 X P

Evaluar la precisión del método a nivel de repetibilidad y precisión

Intermedia:

Repetibilidad: Evaluar los resultados obtenidos por un mismo analista, el mismo día y en la misma serie de análisis.

-Precisión intermedia: Evaluar los resultados obtenidos en el análisis de la misma muestra por otros analistas.

Criterio de aceptación:

Precisión del sistema : DSR no mayor de 2,0% Precisión del método

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III.RESULTADOS

TABLA Nº 1: PARÁMETRO DE SELECTIVIDAD DE RIBOFLAVINA POR EL MÉTODO ESPECTROFOTOMÉTRICO UV -VISIBLE

SELECTIVIDAD

ESPECIFICACIONES RESULTADOS

Identificación

Los espectros de absorción UV d e l a Conforme preparación muestra y preparación

estándar presentan máximos y mínimos

a longitud de onda semejantes.

Ensayo de color y Fluorescencia de la solución

La solución muestra es de color amarillo verdoso pálido con luz transmitida con luz reflejada, presenta una fluorescencia verde amarillenta intensa que

desaparece al agregarle álcalis o

ácidos minerales Conforme

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TABLA N° 2: PARÁMETRO DE EXACTITUD DE RIBOFLAVINA POR EL MÉTODO ESPECTROFOTOMÉTRICO UV-VISIBLE.

EXACTITUD

ESPECIFICACIONES RESULTADOS Porcentaje de recuperación promedio 98,00 – 102,00% 99,4

Prueba t de Student t exp. > t tabla 0,189

(t tabla= 4.303)

Prueba G de Cochran t exp. > t tabla 0,343

(t tabla= 0.871)

TABLA N° 3: PARÁMETRO DE LINEALIDAD DE RIBOFLAVINA POR EL MÉTODO ESPECTROFOTOMÉTRICO UV-VISIBLE.

LINEALIDAD

ESPECIFICACIONES RESULTADOS Linealidad de

Ecuación de la recta Y=bX +a Y=0,0042585X + 5.8739779 Coeficiente de correlación Mayor a 0,995 0,999352 Coeficiente de determinación Mayor a 0,990 0,9987044 Pruebas de t de Student t exp. > t tabla 62.41

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TABLA N° 4: RESULTADOS DEL PARÁMETRO DE PRECISIÓN DE

RIBOFLAVINA, POR EL MÉTODO ESPECTROFOTOMÉTRICO UV-VISIBLE.

PRECISION

ESPECIFICACIONES RESULTADOS PRECISIÓN SISTEMA

Coeficiente de variación Menor a 2,0% 0,05 de absorbancias del

Estándar

PRECISIÓN DEL MÉTODO

Coeficiente de variación o Menor a 2,0% 0,37 desviación del estándar

Relativa

REPETITIBILIDAD

Coeficiente de variación o Menor a 2,0% Analista Analista Analista

desviación del estándar 1 2 3

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IV. DISCUSION

El presente trabajo se llevó a cabo en el laboratorio de control de calidad, que cuenta con las exigencias de BPM, por lo tanto los resultados de sus análisis deben de cumplir con las exigencias gubernamentales.

En la tabla 1 se presentan los resultados del parámetro de selectividad los cuales muestran conformidad entre los picos máximos en la comparación del estándar y la muestra, además de los resultados conformes de los ensayos de color y Fluorescencia de la solución.

La selectividad y especificidad del método analítico se debe determinar antes de iniciar el estudio de otros parámetros de validación, dado que así se conoce en qué grado de respuesta del método es únicamente es proporcionada por el analito, sin interferencia de otras sustancias relacionadas con el de una u otra forma, como son las impurezas y productos de degradación. 19, 20, 25

El grado de selectividad asociado a un método analítico adquiere mayor relevancia si su finalidad es evaluar la estabilidad del principio activo o de la fórmula farmacéutica; este es el parámetro que debe revisarse en mayores ocasiones, pues está vinculado al origen de la muestra, la optimización de la preparación, la especificidad de la medida y las condiciones instrumentales. 19, 20, 2425

La exactitud de un procedimiento analítico expresa la proximidad entre el valor que es aceptado convencionalmente como valor verdadero o un valor de referencia y el valor experimental encontrado. 19,20,24,25

En la tabla 2 se evidencia los resultados del parámetro de exactitud, teniendo como resultado un porcentaje de recuperación promedio de 99,4% dentro de las especificaciones (98,00 -102,00%), al aplicar la prueba t de student para evaluar la recuperación del método resulta 0,189, siendo menor a t de tabla (t tabla= 4,303), cumpliendo con la especificación (t exp < t tabla) por lo que se puede interpretar que no existe diferencia significativa entre la recuperación media y el 100%. Para evaluar la influencia de la concentración sobre los resultados se aplicó la prueba G de Cochran dando como resultado 0,343 siendo menor que el G tabla= 0,871 estando

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Especificación (G exp < G tabla) por lo que se puede concluir que el factor de concentración no influye en la variabilidad de los resultados. Este resultado nos condujo a considerar que los errores sistemáticos del método no fueron significativos, por lo que puede considerarse exacto. 19,20,21,24, 25

En la tabla 3 se presentan los resultados obtenidos durante la evaluación de la linealidad, se demostró que el método produce resultados que son proporcionales a la concentración de trabajo del analito, en un intervalo definido de 80% a 120%. Con la evaluación estadística de los datos; se obtuvo un coeficiente de correlación (r) de 0,999352 lo que indica una significativa correlación lineal entre la concentración y el área de lectura que reporta el analito en el análisis. De igual forma, el análisis estadístico de regresión lineal para la muestra ofreció al método una pendiente el valor de t de Student experimental fue mayor que el t Tabla (62.41> 2,160) para el p=0,05 % de confianza, por lo que la pendiente difiere significativamente de cero. En el test de linealidad DSR de la muestra es 0,989 ambos cumplen con las especificaciones (DSR<5,0%). Por lo que se infiere que tanto el estándar muestra cumplen con el parámetro de linealidad. 19, 20, 21,24, 25

La linealidad determina la región de la curva respuesta o de cuantificación en que hay relación directa entre la señal instrumental y la concentración del producto analizado, siendo un método lineal, estos valores pueden verse afectados si existe un cambio en la valoración del contenido de principio activo. 19, 20, 21, 25

En la tabla 4; la precisión, evaluada como repetibilidad, mostró resultados satisfactorios, pues el coeficiente de variación determinado para el sistema fue 0,05%, estando dentro de la especificación (menor de 2,0%). El resultado de la precisión del método arrojo un coeficiente de variación de 0,37% cumpliendo también con las especificación (menor de 2.0%). Asi mismo la repetibilidad de 3 analistas aplicando el coeficiente de variación de 0.96; 1,07 y 0,94% estando dentro de la especificación (menor del 2,0%).

El cálculo del coeficiente de variación permite deducir el número de replicados que se deben realizar en el ensayo para un determinado intervalo de aceptación. Según la ICH Q2B recomienda introducir los intervalos de confianza en el estudio de precisión – repetibilidad. 19, 20, 21, 25

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El objetivo del estudio de la precisión es conocer la variabilidad del método, esta variación puede deberse a errores aleatorios inherentes a todo método de ensayo. Los factores susceptibles a influir sobre los resultados de un ensayo no pueden ser siempre controlados como al analista, el equipo instrumental, los reactivos, el tiempo, etc., es por ello la importancia de este ensayo. 19, 20, 21,24, 25

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V. CONCLUSIONES

En el ensayo de linealidad se encontró 0,999352 y 0,9987044 para el

coeficiente de correlación (R) y coeficiente de determinación respectivamente.

En el ensayo de selectividad y especificidad se encontró un analito sin

interferencias.

En el ensayo de exactitud, no existió diferencia significativa entre la

recuperación media de 99.4% y en el test de G de Cochran, el G experimental 0,343 es menor que el G tabla 0,871.

En el ensayo de precisión se encontró 0,05%; 0,37% y para el coeficiente de

variación del sistema y método respectivamente así mismo 0,96, 1,07 y 0,94 % para el coeficiente de variación de repetibilidad.

El método analítico es específico, lineal, exacto y preciso, aplicable para la

cuantificación e identificación de Riboflavina.

El método analítico es válido por cumplir con los parámetros de linealidad,

exactitud y precisión, aplicable para la cuantificación e identificación de Riboflavina.

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VI. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

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2. Rudolph JS. Validation of solid dosage forms. En: Berry IR yNash R, editors. New York, 1993: 167-190

3. Salazar R. Aplicación del concepto de Calidad Total a la Industria Farmacéutica. Real Academia de Farmacia de Barcelona, discurso de recepción. Barcelona: Romargraf S.A., 1998; 1:991

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5. A laboratory guide to method validation and related topics. The Fitness for Purpose of Analytical Methods. Eurachem Guide. Guía para la validación de métodos de ensayo. OAA.DC-LE-05. 2009. [En línea] [Con fecha de acceso el 20 de Octubre del 2016]. Web disponible en: http://www.suelos.org.ar/adjuntos/validacion_metodos_analiticos.pdf

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7. Giovanna Francisca Mayorga Bustinza; Validación de una técnica de análisis por cromatografía líquida de alta eficiencia (HPLC) para cuantificar

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norfloxacino y fenazopiridina clorhidrato en cápsulas orales. [En línea] [Con fecha de acceso el 21 de Octubre del 2016]. Web disponible en:

http://cybertesis.unmsm.edu.pe/handle/cybertesis/1639

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9. Dalmau Roch R, Suñe negre JM, Cemeli Pons J. Control de Calidad en la industria farmacéutica: Concepto de validación. Industria Farmacéutica. España 1989. Pp. 85- 91

10. Ruiz R. Historia y Evolución del pensamiento Científico. Eumed.net. Enciclopedia Virtual. [En Internet]; agosto 1997. [Acceso 21 de octubre del 2016]. Disponible en: http://www.eumed.net/libros-gratis/2007a/257/7.1.htm 11. Lopera J. El método analítico como método natural.Rev Critica de ciencias

sociales y jurídicas. 2010. [Acceso 21 de octubre del 2016];25(1) Disponible en:

http://www.pendientedemigracion.ucm.es/info/nomadas/25/juandiegolopera. pdf

12. Marrero D. y Gonzales V. Acercamiento a la validacion de métodos analíticos en la industria farmaceutica cubana. Revista CENIC. 2009 [Acceso 20 de octubre del 2016]; 36(1):21-23. Disponible en: http://www.redalyc.org/pdf/1816/181620586005.pdf.

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13. Gomara F. Desarrollo y validación de un método espectrofotométrico para cuantificación de ácido kojico. Revista ArsPharm. 2004. [Acceso 20 de octubre del 2016];45(2): 145-153. Disponible en: http://www.ugr.es/ars/abstract/vol45/145-153.pdf.

14. Oficina de las Naciones Unidas contra la droga y el delito. [UNODC]. Directrices para la validación de métodos analíticos y la calibración del equipo utilizado para el análisis de drogas ilícitas en materiales incautados y especímenes biológicos.[En Internet]2010.[Acceso 20 de octubre del 2016].

Disponible en:

http://www.unodc.org/documents/scientific/validation_Manual_STNAR41_ Ebook:S.pdf

15. Oleksiuk, A.: “validación de la metodología analítica por hplc para la cuantificación de losartán potásico en comprimidos recubiertos”. Unidad de práctica profesional para optar el título de Químico Farmacéutico. Universidad de Chile. Santiago – Chile. 2009. [en línea]. [Con fecha de acceso el 21 de Abril del 2015]. Web disponible en: http://www.cybertesis.cl/tesis/uchile/2006/oleksiuk_a/html/index.html

16. Morales de la Cruz.: “desarrollo y validacion prospectiva de una tecnica analitica por cromatografia liquida de alta performance (hplc) para enalapril 10 mg tabletas recubiertas”. Tesis de la Universidad Nacional Mayor de San Marcos. Lima-Perú. 2008. [en línea]. [Con fecha de acceso el 23 de Abril del 2015].

17. British Pharmacopeia. Bp 2014-commission.: Vol. IV. England. 2014; A563 – Suplementary chapter III F.

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18. Convención de Inspección Farmacéutica (PIC).: Guía de Buenas Práctica de Fabricación de Medicamentos. Anexos. Abril 2008.

19. Asociación Española de Farmacéuticos de la Industria. Validación de Métodos Analíticos. Sección catalana de AEFI. España – Barcelona. 2001 20. International conference harmonization-harmonised tripartite guideline.:

Text on validation of analytical procedures. ICH QualityGuidelines. EE.UU. pp: 1-3

21. MERCK.:Chrom Book Merck. EE.UU. pp: 44-45

22. Skoog D. y Leary J.: Principios de Análisis Instrumental. 5°ed. Ed. McGraw Hill. Madrid-España. Pp: 674-675, 746-747.

23. Bioquímica de los alimento;2016 [Acceso 20 de octubre de 2016] Disponible

en: http://milksci.unizar.es/bioquimica/temas/vitamins/riboflavina.html

24. International Conference on Harmonisation of Technical Requirements for Registration of Pharmaceuticals for Human Use. Validation of analytical procedures: Text and methodology Q2 (R1). ICH Harmonised Tripartite Guideline; 2005. [Acceso 20 de octubre de 2016]. Disponible en: ‹http://www.ich.org/fileadmin/Public_Web_Site/ICH_Products/Guidelines /Quality/Q2_R1/Step4/Q2_R1__Guideline.pdf›

25. Agencia Española de Medicamentos y Productos Sanitarios, anexo 15.: “cualificación y validación”. España. [en línea]. [Con fecha de acceso el 21 de octubre del 2016]. Web disponible en: http://www.agemed.es/actividad/sgInspección/docs/28-anexo15.pdf

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ANEXO 1: SELECTIVIDAD

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ANEXO 2: EXACTITUD

DATOS DEL PARAMETRO DE EXACTITUD PARA LA VALIDACION DEL METODO ANALITICO POR ESPECTROFOTOMETRIA UV-VIS PARA LA CUANTIFICACION DE RIBOFLAVINA COMO MATERIA PRIMA

PARÁMETRO: EXACTITUD

ANALITO: RIBOFLAVINA

Evaluación de la exactitud en el rango de 80% - 120%

DATOS DE MUESTRA

Dilución Absorbancia

X s DSR

(mg) Abs Abs Abs

52.1 500 20 200 0.33504 0.33337 0.33261 0.3337 0.001243 0.37254 65.6 500 20 200 0.42185 0.41975 0.41880 0.4201 0.001560 0.37148 78.3 500 20 200 0.50352 0.50101 0.49988 0.50147 0.001866 0.37153

DATOS DEL ESTANDAR

Peso

Dilución Absorbancia

X s DSR

(mg) Abs Abs Abs

65.6 500 20 200 0.4220 0.4217 0.4219 0.42187 0.000153 0.03621 65.5 500 20 200 0.4198 0.4197 0.4197 0.419773 0.0000577 0.01376 65.4 500 20 200 0.4188 0.4188 0.4189 0.41883 0.0000577 0.01378 % mg % hallados % Recuperación s s2 añadidos X Varianza

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80 52.1 79.52 79.50 79.58 99.4 99.40 99.48 79.55 0.0354 0.001256 100 65.6 99.35 99.43 99.44 99.35 99.43 99.44 99.41 0.0354 0.001256 120 78.3 119.53 119.45 119.58 99.61 99.54 99.65 50.55 0.0354 0.001256 Numero de datos n : 9 % Recuperación promedio R : 99.48 % Desviación estándar s : 1.18

Desviación estándar relativa DSR : 1.18 %

EVALUACIÓN DE LA INFLUENCIA DE LA CONCENTRACIÓN SOBRE LOS RESULTADOS

Aplicación de la prueba estadística: G de Cochran

Gexp = s2 máx = 0.001256 = 0.343 s21+s22+s23 0.003768 Gtabla(p=0,05;k=3;n=3) = 0.871

Especificación: G exp < G tabla

POR LO TANTO: El factor de concentración no influye en la variabilidad de los resultados

EVALUACION DE LA RECUPERACIÓN DEL MÉTODO

Aplicación de la Prueba estadística: t de Student

texp = [100-R](n)1/2 = 0.1890 t tabla (α : 0,05; v: 8) = 4.303

DSR Especificación: texp < t tabla POR LO TANTO: No existe diferencia significativa entre la recuperación media y el 100%

CONCLUSION: EXACTO

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ANEXO N° 3: LINEALIDAD

1.1 LINEALIDAD DEL SISTEMA MÉTODO ANALÍTICO:

Materia Prima: Riboflavina Dosaje nominal de la Materia

Prima base seca : 98,0% – 102,0%

Estándar Riboflavina Potencia T/C

(%) 98.1

Concentración = 500 x 200 x ABS x 1000

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DATOS: muestras 80% 90% 100% 110% 120%

Pesos concentración Pesos concentración Pesos concentración Pesos concentración Pesos Concentración

mg % mg % mg % mg mg/mL mg mg/mL M1 52.1 79.52 58.6 89.55 65.6 99.35 71.6 109.41 78.3 119.53 M2 52.1 79.50 58.8 89.67 65.5 99.43 71.8 109.91 78.2 119.45 M3 52.2 79.58 58.7 89.61 65.4 99.44 71.5 109.40 78.4 119.58 Abs 80% 90% 100% 110% 120% M1 0.3350 0.37966 0.42185 0.46403 0.50352 0.3334 0.37897 0.41975 0.46446 0.50101 0.3326 0.37765 0.41880 0.46596 0.49888 M2 0.3351 0.37986 0.41980 0.46758 0.50254 0.3334 0.37567 0.41970 0.46786 0.50248 0.3324 0.37769 0.41970 0.46777 0.50214 M3 0.3329 0.37786 0.41880 0.46576 0.50325

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0.3333 0.37675 0.41890 0.46549 0.50295 0.3335 0.37684 0.41880 0.46612 0.50303 RESULTADOS: Concentraciones Concentración Abs yi xi2 yi2 xiyi Factor % respuesta (f) xi yi/xi 80% 79.52 0.33367 6323.4304 0.111335669 26.533438 0.004196051 90% 89.55 0.37876 8019.2025 0.143459138 33.917958 0.004229592 100% 99.35 0.42013 9870.4225 0.176509217 41.739916 0.004228878 110% 109.41 0.46481 11970.5481 0.216048336 50.854862 0.004248332 120% 119.53 0.50113 14287.4209 0.251131277 59.900069 0.004192504

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Suma 497.36 2.0985 50471.0244 0.898483636 212.9462429 0.021095267 Concentraciones Concentración Abs yi xi2 yi2 xiyi Factor % respuesta (f) Xi yi/xi 80% 79.5 0.33366 6320.25 0.1113288996 26.52597 0.004196981 90% 89.67 0.37774 8040.7089 0.142687508 33.871946 0.004212557 100% 99.43 0.41973 9886.3249 0.176173273 41.733754 0.004221362 110% 109.91 0.46773 12080.2081 0.218771353 51.408204 0.004255573 120% 119.45 0.50238 14268.3025 0.252385664 60.009291 0.004205776 Suma 497.96 2.10124 50595.7944 0.901346793 213.549165 0.021092249 Concentraciones Concentración Abs yi xi2 yi2 xiyi Factor % respuesta (f) Xi yi/xi 80% 79.58 0.33324 6332.9764 0.111048898 26.519239 0.004187484 90% 89.61 0.37715 8029.9521 0.142242123 33.796412 0.004208794 100% 99.44 0.41883 9888.3136 0.175418569 41.6484455 0.004211887

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110% 109.4 0.46579 11968.36 0.216960324 50.957426 0.004257678 120% 119.58 0.50307 14299.3764 0.253079425 60.157111 0.004206974 Suma 497.61 2.09808 50518.9785 0.898749338 213.0786425 0.021072817 Suma 1492.93 6.29783 151585.7973 2.69857977 639.5740504 0.06326033

DETERMINACIÓN DE LINEALIDAD DE SISTEMA:

Tabla de los 15 datos de linealidad xi yi 79.52 0.33367 89.55 0.37876 r = 0.999352 r2 = 0.9987044 99.35 0.42013 109.41 0.46481 Pendiente (b) = 0.0042585 Intercepto = 5.8739779 119.53 0.50113 79.5 0.33366

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89.67 0.37774 Ecuación de la recta: y = 0.0042585 + (5.8739779) 99.43 0.41973 109.91 0.46773 119.45 0.50238 79.58 0.33324 89.61 0.37715 99.44 0.41883 109.4 0.46579 119.58 0.50307

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ANEXO 4: PRESICIÒN

DATOS DEL PARAMETRO DE PRECISIÒN PARA LA VALIDACION DEL METODO ANALITICO POR ESPECTROFOTOMETRIA UV-VIS PARA LA CUANTIFICACION DE RIBOFLAVINA

PARÁMETRO: PRECISIÓN

PRECISIÓN DEL SISTEMA

ANALITO: Riboflavina

Iny. Absorbancia Iny. N° Absorbancia Iny. N° Absorbancia 1 0.4439 1 0.4494 1 0.4221 2 0.4441 2 0.4494 2 0.4217 3 0.4440 3 0.4496 3 0.4219 4 0.4439 4 0.4495 4 0.4220 5 0.4441 5 0.4496 5 0.4218 Promedio de Absorbancia X = 0.4440 Promedio de Absorbancia = 0.4495 X Promedio de Absorbancia = 0.4219 X Desviación estándar de s = 0.00001

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Absorbancia Desviación estándar de Absorbancia s = 0.00001 Desviación estándar de Absorbancia s = 0.00001

Desviación estándar relativa de

Abs. ST1 DSR = 0.02 %

Desviación estándar relativa de

Abs. ST2 DSR = 0.02 %

Desviación estándar relativa de

Abs. ST3 DSR = 0.02 %

Especificación: DSR f ≤ 2 %

CONCLUSIÓ

(53)

BIBLIOTECA

DE

FARMACIA

Y

BIOQUIMICA

PARÁMETRO: PRECISIÓN REPETIBILIDAD - PRECISIÓN INTERMEDIA ANALITO:RIBOFLAVINA

Evaluación de precisión en el rango de 80% - 120% Secuencia de

análisis: Día 1: Analista 1

Día 2: Analista 2 Día 3: Analista 3 % Analista Pesos Dilucio n Absorbancia s DSR X %. X s DSR (mg) Abs Abs Abs

1 52.1 500 20 200 0.3350 0.3334 0.3326 0.00122202 0.36623982 0.569 79.52 80 2 52.1 500 20 200 0.3351 0.3334 0.3324 0.00136504 0.40914368 0.573 79.50 79.53333 0.0416 0.05 3 52.2 500 20 200 0.3329 0.3333 0.3335 0.00030551 0.09167902 0.568 79.58 1 65.6 500 20 200 0.42185 0.41975 0.41880 0.00156072 0.37148103 0.703 99.35 100 2 65.5 500 20 200 0.41980 0.41970 0.41970 0.00005774 0.01375517 0.707 99.43 99.40667 0.0493 0.05 3 65.4 500 20 200 0.41880 0.41890 0.41880 0.00005774 0.01378473 0.703 99.44 1 78.3 500 20 200 0.50352 0.50101 0.49888 0.00023226 0.46346478 0.859 119.53 120 2 78.2 500 20 200 0.50254 0.50248 0.50214 0.00021572 0.04293821 0.866 119.45 119.52 0.0656 0.05 3 78.4 500 20 200 0.50325 0.50295 0.50303 0.00015535 0.03088798 0.858 119.58

(54)

BIBLIOTECA

DE

FARMACIA

Y

BIOQUIMICA

REPETIBILIDAD:

Evaluación de los resultados obtenidos por un analista, el mismo día y en la

misma serie de análisis. Especificación ≤

Analista 1 %. S DSR (%) 80% 79.52 100% 99.35 2.00 0.96 120% 119.53 Promedio 99.47 CONCLUSIÓN : CUMPLE Analista 2 %. S DSR (%) Donde: : Resultado promedio en %. 80% 79.5 X 100% 99.43 2.00 1.07 s : Desviación estándar 120% 119.45

DSR : Desviación estandar relativa Promedio 99.46 CONCLUSIÓN : CUMPLE CONCLUSIÓN : PRECISO Analista 3 %. S DSR (%) 80% 79.58 100% 99.44 2.00 0.84 120% 119.58 Promedio 99.53

(55)

BIBLIOTECA

DE

FARMACIA

Y

BIOQUIMICA

PRECISIÓN INTERMEDIA:

Evaluación de los resultados del análisis de la misma muestra por 3 analistas en diferentes días Especificación : ≤ 2,0 % Analista X s DSR (%) % 1 99.47 2 99.46 0. 37 0.037 3 99.53 Promedio 215.05

Figure

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Referencias