Integración de la señalización del receptor de andrógenos (AR) no genómico y canónico ..19 Figura 2. PC3 IV. metástasis ósea de la línea celular de cáncer de próstata PGRMC1 AR componente 1 del receptor de membrana de progesterona.
INTRODUCCIÓN
15 de la radiación ultravioleta se puede convertir en vitamina D2, que contribuye a la prevención del cáncer de próstata y colon (Gross et al., 2005). El peróxido de ergosterol es otro compuesto obtenido de varias especies de organismos marinos y hongos (Krzyczkowoski et al., 2016; Sgarbi et al., 1997;.
ANTECEDENTES
Los andrógenos y su receptor
- Acciones genómicas y no genómicas del RA
Esta asociación facilita el desarrollo y la autofosforilación de Src para activar el dominio quinasa Src (Zarif et al., 2015). Las interacciones directas entre el AR activado por ligando y PI3K en el citosol están mediadas por la unión de residuos de fosfotirosina en el NTD del AR al dominio SH2 de la subunidad reguladora p85α de PI3K (Baron et al., 2004).
Cáncer
- Cáncer de próstata
- El receptor de andrógenos en el cáncer de próstata
La expresión de AR se observa tanto en el cáncer de próstata sensible a los andrógenos como en el resistente a la castración. Los estudios inmunohistoquímicos muestran que la expresión de AR es heterogénea en el cáncer de próstata y que el grado de heterogeneidad generalmente no está relacionado con la terapia de privación de andrógenos (Ruizeveld de Winter et al., 1994).
Tumores del Sistema Nervioso Central (SNC)
- Glioblastoma Multiforme (GBM)
- El receptor de andrógenos en el glioblastoma
Aunque las vías de señalización reguladas por la AR están bien establecidas en el cáncer de próstata, se desconoce la participación de la AR en GBM y las vías de señalización dependientes o independientes de AR en GBM. Hay informes de que el efecto de los inhibidores de AR (bicalutamida y enzalutamida) sobre la supervivencia del glioma es inducir la muerte celular dependiente de la dosis; además, el silenciamiento de AR por siRNA induce la muerte celular en líneas celulares de glioma (Zalcman et al., 2018).
Actividad biológica del ergosterol y el peróxido de ergosterol
- Modelado molecular in silico de las interacciones entre el receptor de andrógenos y el
También se ha informado que el ergosterol revierte la resistencia a múltiples fármacos en las células SGC7901/Adr al inhibir 34 transcripción del gen MDR1 y la regulación negativa de la expresión de la glicoproteína P (Hu et al., 2014).
Estrés oxidativo y vías de señalización
- La oxidación de proteínas como marcador de estrés oxidativo
- Proteínas carboniladas (PCO): indicadoras de estrés oxidativo
- El rol de las ERO en la actividad anticancerígena
- El peróxido de ergosterol induce estrés oxidativo
Varios agentes inducen el estrés oxidativo para estimular la actividad de la tirosina quinasa, inducen la fosforilación en los residuos de tirosina y activan la proteína quinasa C, c-Src, raf-1 y MAPK (Sundaresan et al., 1995). A menudo se pueden encontrar niveles elevados de ROS en las células cancerosas; esto se debe a la capacidad de absorción de ROS comprometida o al aumento de la producción de ROS (Trachootham et al., 2009). El aumento de la actividad de ROS puede llevar a las células cancerosas a una proliferación anormal acercándolas a un umbral de muerte celular, etapa en la que las ROS pueden causar daños celulares irreversibles (Trachootham et al., 2009).
Su uso para tratar células cancerosas contribuye a la anulación del mecanismo adaptativo que mantiene la homeostasis redox bajo estrés oxidativo endógeno sostenido (Gibellini et al., 2010). La interrupción de la defensa antioxidante de GSH en células con sobrecarga persistente de ROS, como las células malignas, conduce a la muerte celular por apoptosis (Gibellini et al., 2010). Sin embargo, el papel de las ROS en las células cancerosas es complicado y puede desempeñar un papel opuesto en diversas condiciones fisiopatológicas (Galadari et al., 2017).
Líneas celulares de estudio (LNCaP, DU-145 y C6)
- LNCaP
- DU-145
- C6
- El rol del RA en las líneas celulares LNCaP, DU-145 y C6
Skowronski et al., 1993 también informaron una inhibición significativa de la proliferación de células LNCaP por calcitriol en presencia de andrógenos. Las células DU-145 expresan el receptor NF-kappa β funcional y la proteína AR (Alimirah et al., 2006). La isoforma ERβ es la predominante en las células de cáncer de próstata metastásico tardío DU145 (Piccolella et al., 2014).
En la línea celular C6 se ha demostrado la presencia de ARNm para PRm (receptor de membrana de progesterona acoplado a proteína G), PGRMC1 (receptor de membrana de progesterona componente 1) y ERβ, pero no PR (receptor de progesterona componente 1), RA y REα. (Su et al., 2012). La señalización AR también juega un papel importante en la regulación del crecimiento del glioblastoma en los hombres (Yu et al., 2015). Gatson et al., 2006 propusieron la existencia de un nuevo AR asociado a la membrana en las células gliales y respaldaron la existencia de dos vías potencialmente competidoras (las vías de señalización MAPK y PI3K/Akt).
JUSTIFICACIÓN
Además, se pretende demostrar que el ergosterol es un antioxidante capaz de agotar las vías de señalización de supervivencia inducidas por ROS o agentes generadores de ROS para causar daño irreversible y apoptosis en células C6, mientras que su peróxido es un compuesto que induce ROS convencionalmente. se considera que inducen citotoxicidad y apoptosis en las células.
PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA
PREGUNTAS DE INVESTIGACIÓN
HIPÓTESIS
OBJETIVOS
General
Específicos
MATERIALES Y MÉTODOS
Compuestos químicos
- Solubilización y preparación de las muestras
Mantenimiento y propagación de líneas celulares
- Condiciones de cultivos de las líneas celulares
Diseño experimental
- Determinación indirecta de la proliferación celular mediante el ensayo con MTT
- Análisis estadístico
- Extracción y cuantificación de proteínas para la determinación de PCO
- Extracción de proteínas
- Cuantificación de proteínas por el método Pierce BCA
- Ensayo de proteínas carboniladas
- Análisis estadístico
Esta modificación es químicamente estable y esta propiedad es particularmente importante para el almacenamiento y detección de PCO. Muchos métodos bioquímicos y analíticos se han desarrollado durante los últimos treinta años para el análisis de PCO y el método más exitoso consiste en la derivatización de PCO con 2,4-dinitrofenilhidrazina (DNPH) y la posterior determinación espectrofotométrica. Originalmente desarrollado por Levine et al., 1990, este ensayo permite una cuantificación global del contenido de PCO debido a la capacidad de DNPH para reaccionar con carbonilos, dando lugar a la formación de 2,4-dinitrofenilhidrazona estable, que es un aducto capaz de absorbiendo con un máximo entre 365-375nm.
Era necesario repetir el lavado con etanol y acetato de etilo al menos dos veces o hasta que los sobrenadantes estuvieran completamente claros para eliminar todo el DNPH libre; de lo contrario, el DNPH residual en el sedimento de proteína podría conducir a una sobreestimación del contenido de PCO de la muestra. Los datos del contenido de PCO se expresaron como la media ± error estándar de 3 experimentos independientes realizados por triplicado (n=3). El contenido de PCO se comparó entre controles y tratamientos mediante ANOVA unidireccional; la comparación entre controles, tratamiento y tiempo de exposición se realizó mediante ANOVA de dos vías.
RESULTADOS
- Ensayo de MTT en la línea celular LNCaP
- Ensayo de MTT en la línea celular DU-145
- Ensayo de MTT en la línea celular C6
- Ensayo de PCO en la línea celular C6
La Figura 7 muestra que después de 72 horas de incubación, el tratamiento con el grupo control DMSO 0.25% mostró diferencias significativas (p<0.05) en comparación con H2O2. En la Figura 9A, después de 48 horas de incubación, el tratamiento con H2O2 10 mM y PE 25 y 15 µM redujo significativamente (p<0,05) la proliferación celular en relación con el grupo control (DMSO 0,25%); se observa que los porcentajes de proliferación celular disminuyen más drásticamente que a las 24 horas, por lo que el efecto es dependiente de la dosis y el tiempo. La figura 14 muestra los resultados del contenido de PCO en la línea celular C6 después de 24 horas de exposición al tratamiento con ergosterol 15 y 25 μM.
La Figura 15 muestra los resultados del contenido de PCO en la línea celular C6 después de 24 horas de exposición con los tratamientos de peróxido de ergosterol (PE) 15 y 25 μM. La Figura 16 muestra los resultados del contenido de PCO en la línea celular C6 después de 48 horas de exposición con los tratamientos de ergosterol 15 y 25 μM. Es importante mencionar que la determinación de PCO también se realizó en la línea celular C6 luego de 48 horas de exposición con los tratamientos con PE 15 y 25 μM.
DISCUSIÓN
Ergosterol
En el cáncer de próstata, hay pocos estudios que informen la importancia de la localización del RE citoplásmico/membrana y la activación rápida de la señalización (acción no genómica) (Souza et al., 2019). Se ha descubierto que los andrógenos funcionan para promover la proliferación de células de glioma a través de la activación de la señalización AR. También se ha informado que la DHT se une a la RAM en altas concentraciones (100 nM y 0,1 μM), lo que resulta en la activación de un mecanismo antagónico que reduce y/o previene la inducción de la fosforilación de ERK por parte del receptor. ., 2006).
Se ha informado que la activación de la señalización del receptor del factor de crecimiento transformante β (TGFβ) por parte de TGFβ1 inhibe significativamente. Estos efectos neuroprotectores incluyen aumento de la mielinización, disminución del edema, inhibición de la apoptosis y disminución de la inflamación (Arevalo et al., 2010). Usando enfoques in vitro e in silico, se ha demostrado que el ergosterol funciona como una molécula antioxidante que puede estar involucrada en la resistencia de la levadura a la oxidación.
Peróxido de ergosterol
En cuanto a los suplementos alimenticios, la reforma determina que en su etiquetado y publicidad se prohíben las leyendas publicitarias relacionadas con un efecto nutricional o fisiológico, que no hayan sido debidamente aprobadas, para lo cual el Ministerio de Salud determinará las medidas reglamentarias y administrativas mediante las cuales se ser anunciado se elaborarán y publicarán leyendas relacionadas con un efecto nutricional o fisiológico que estará permitido y deberá relacionarse únicamente con los ingredientes de los productos (Araujo, 2021). 90 et al., 2018, el peróxido es capaz de ejercer su efecto anticancerígeno a través de múltiples mecanismos, incluida la inhibición de la proliferación celular y la formación de clones, la atenuación de la migración/invasión, el control de los ciclos celulares y la supresión de la señalización celular. β-catenina. Según lo informado por Govindharaj et al., 2019, la PE tiene la capacidad de regular genes sensibles al estrés oxidativo y regular genes inducibles por interferón.
Aún no se sabe con certeza si se trata de un componente natural del hongo medicinal o de un artefacto formado por el ergosterol durante el proceso de aislamiento; sin embargo, su importancia radica en sus múltiples efectos biológicos (Merdivan & Lindequist, 2017). Esta es la razón por la cual los estudios adicionales deben tener como objetivo dilucidar aún más los mecanismos de acción de la PE, los posibles efectos secundarios y las características farmacocinéticas in vivo. Debe prestarse especial atención a sus actividades quimiopreventivas, que arrojan nueva luz sobre el papel positivo de los hongos en la nutrición humana.
CONCLUSIONES
Ergosterol
Peróxido de ergosterol
PROSPECTIVAS
LITERATURA CITADA
Osteoblast-derived factors induce androgen-independent proliferation and prostate-specific antigen expression in human prostate cancer cells. Comparison of the effects of angiotensin IV on androgen-dependent and androgen-independent prostate cancer cell lines. Suppression versus induction of androgen receptor functions by the phosphatidylinositol 3-kinase/Akt pathway in LNCaP prostate cancer.
Site-specific androgen receptor serine phosphorylation linked to epidermal growth factor-dependent growth of castration-recurrent prostate cancer. Pro-apoptotic activity of ergosterol peroxide and (22E)-ergosta-7,22-diene-5alpha-hydroxy-3,6-dione in human prostate cancer cells. Androgen receptor non-nuclear regulation of prostate cancer cell invasion mediated by Src and matriptase.
