Generalidades en brucelosis bovina y control

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(1)'V31 1'. BOVINA GENERALIDADESEN BRI-ICELOSIS Y CONTROL Germa¡ I MendozaPucheMVZ. TAXONOMIA DEL GENERO BRUCELLA B. melitensisy B. abortuq En el año 1920 se establecióel géneroBrucpllecon las especies Posteriormenteen I 963 seañadióB. Suis,mástardeB. neotomae,B oüs y B canis [,as B, abortus,B. suis. B. melitensisy B !9E!amae son consideradascomo especiesclásicas .i"ntru, lu B qr.il y E. Eani¡sonmutante,pero selesconsideraun ancestrocomúnpafatodoslos biotipos el papelesla B abortusbiotipo 2 debido El miembrodel géneromáscapacitadoparadesempeñar son lasmásestrictasde todas.A partir del anteriorbiotipose ambientales a quelas deman'das y deiivanlos demásbiotiposde b. abortusdebidoa la pérdidaprogresivaen los requerimientos desdeluegoel biotipo 5 como y en su patogenicidad.Considerando demandasmedioambientales el final de la linea evolucionaria.A su vez la BJ!elitg4$! seconsideraderivadade esteúltimo hiotipo de B. ab,orh¿S, l-a B suisse asemejaa los primerospasosde derivaciónde B. neotomaey los biotiposde B. la abortuq Por otra partey segúneüdencias,la B. canisesunaespeclequepareceserderivadade B suisbiotipo3. de La B. ovis esconsideradacomo mutantede la B. abortusbiotipo 2 ocasionadapor la influencia hormonasesteroides del géneroBrucellaperola ideano ha sidobien Existela tendenciade cambiarla nomenclatura recibidaentrelos investigadores. zoonóticasy de repercuciónsocioeconómic4 [,a Brucelosisesunaenlermedadde características al ganadobovino,ovino,caprino,porcinoy equinos.En los animales qr.re afectaprincipalmente aborto,au-ento de mortalidadperinatale infertilidadexistiendodiversasvíasde transmisión "ourae interespecíficas, por contactodirecto,duranteel manejode el hombrecontraela enfermedad intra o por ingestiónde productoslacteosfrescosy contaminados animales, e El diagnósticode la Brucelosisesen formadirecta,por cultivode la leche,tejido del animal la cual por esmuy dificil y laborioso,razón de la bacteria.sinembargo,el aislamiento identiircación inmune,perola multiplicidadde las esteserealiz¿por máodos indirectosconrelacióna la respuesta y a lascondiciones frentea animalreaccionante parael diagnóstico, desarrolladas metodologías de los la interpretación en sanita¡iasJel hato, manifiestanen el profesionaluna seriede controversias resultados,que sedebeunificar parahacerun mejor controldé la enfermedad. J5.

(2) TOMA DE MUESTRAS PARA EXAMENES SEROLOGICOS EI diagnósim de la brucelosismedia¡telaidentific¿ciónde losantianerposproducidascomo respr¡esta a la infeccióno en la vacunación,puedeserrealizadoen suerosanguíneo, plasmaseminalyieche, pero parapoder realizarun diagnósticocorrectolasmuestrasdebensertomadasy conservadas adecuadamente hastael momentodel análisis,seaconsejatomarla sangreentubosal vacio. Si esnecesariotransportarlasmuestrascon coágulo,esindispensable taneren q¡entaquela agitación de lasmismasproducehentólisis.Otro factor de hemólisislo constituyeel colocarlas muestrasal sol cua¡doseestántomando,o al envasarlas en recipientes húmedoso contaminados condeterqentes u otras sustanciashemolíücas. Igualmente,lasmuestrasde lechedebentomarsede la forma masasépticaposible,los primeros chorrosdebendescartarse y estadeberecibirseen frascoso tubosestériles.puedeemplearseun reapiente puacadacuarto o ¡elizarseuna mezclade los cuafos. Las muestr¿sde semensetoman mediantemasajeconelectroeyaculador o vaginaartificialpudiendoemplearse un preservativopara eüt¿r la contaminación. Todasestasmuestragal igualque el suerosanguineodebenconserva¡se en refrigeraciónhastasu reciboen el laboratorio.El plasmaseminaldebeconserva¡se congelado.. PRUEBASDE DIAGNOSTICO SEROLOGICO EN BRUCELOSISBOVINA En nuestromedio,el objaivo de laspruebasserológicasno essolamenteide¡rtificarlos animalesque hanestadoen contactocon el agente,sinoqueesprecisopoderdiferenciarlos animalesque han sido vacunadosy estánsanos,de aquellosque habiendosido vacunadoso nó, esténinfectados. Esto esdebidoa que la vacunación,no protegeal cientopor cientode los animales. La diferenciaciónentre infectadosy vacunados,se intentarealizarinterpretandolas pruebas serológicasexistenteen funcióndetipo de inmunoglobulina" el antigoroempleadoy el estadodel animal,tanto en los animalesinfectadoscomoen los vacunadoscon cepa19,la respuestahumoral incluyeanticuerposIgM e IgG.. TÉCNICA DE AGLUTINACTÓN R",iplpa EN PLACA Como sunombrelo indicg éstatécnicatienela ventajade requerirpoco tiempoparazurealizaciór¡ ademásde sereconómic4 sepuedenprocesarmuchoszuerosen el mismo día. Sinembargo,esuna técnicasujetaa erores del operadorpor lo que en programasde erradicación,diagnósticoen humanoso en actiüdadesde investigación espocorecomendable. Estapruebaesmásaconsejable paraexámenes en los serequiereexpedircertificadosde moülizaciónde animaleso comotécnica de muestreoen mas4 pero s¡ sensibilidad y especificidad sonbajas.una modificaciónempleando antígenobuferado(pH 3.6) seía recomendable. 36.

(3) TÉCNICA DE AGLUTINACTÓNLENTA O EN TUBO En comparacióncon la pruebarápidao en placa,éstaes una técnicamáseficienteporqueestá sujetaa menoserroresde ca¡acterhumanoy técnico. No obstante,algunosinvestigadoresencontraronquela pruebano identificabael 39lo de los bovinos bacteriológicamentepositivosy alertaronsobrelafalta de sensibilidaddel método,especialmenteen áreascon tasade muy bajainfeccióny en hatosproblema;ademáspuededarreacciónnegativaen casoscrónicosy no sejustificaemplearlaen lugaresdondela vacunac¡óncon cepal9 esextensa lentapracticadaa todoslos animales Sinembargo,la utilizaciónde dospruebasde seroaglutinación de rebañoinfectadoscon un intervalode 30 a 60 días,permiteidentificar99 50%de los animales infectados. Ahorabien,en ciertosnivelesde los programasde controlde la infecciónpor B. abortus,cuandola prevalenciaseha reducido,lasreacciones adquierenimportanciadiagnóstica.Seha no específicas demostradoqueunagran proporciónde reaccionesde aglutinaciónen tubo, posit¡vasa Brucela, a Ia accióndelEDTA. Secreequeestos dadaspor suerosde animalesno infectados,sonsensibles sueroscontienenmoléculasde IgM quecausanaglutinacióndelantígenode B. abortt¡senformano inmune,básicamentepor unión a travésde la región Fc. Estaunión inespecificaesinhibidapor parecidos,mientrasquela unión quelantescatiónicosdivalentescomo el EDTA estructuralmente inmuneespecíficade la regiónFabde la IgM no seafecta. Debido a la necesidadde tratamientosdel antígenocon EDTA, estametodologiaserecomienda de dudacuandola prevalenciaen el hatoesmuy baja. sóló parasituacionesespeciales. TÉCNICA DE AGLUTINACIÓN CON ANTÍGENO ROSA DE BENGALA (RB) Las pruebasde la tarjeta,con atígenotamponadoy coloreadooonrosadebengalacomprendenun procedimientocualitativoy rápido de aglutinaciónmacroscópic4el cual seefectúacon una sola los anticuerposIgG1. principalmente dilucióny establece La aglutinacióninespecíficade las brucelaslisasdesaparecea pH 3.6, mientrasque en estas razónpor la cual seempleaen condicionessemantienela actiüdadde los anticuerposespecíficos estapruebade aglutinaciónantigenocelularteñidocon el coloranteRB, tamponadoa pH 3.6. La técnicaha sido evaluadapor diversosautoresy ha demostradoelevadasensibilidadaunquerequiere baja. Serecomiendacomo sustituto relativamente pruebaconfirmatoriadebidoa su especificidad pocovalor de la pruebadetamiz,aglutinaciónrápidaen plat4 ya queestaúltimaesconsideradade diagnósticoenla actualidad. de erradicación La rnayorutilidadde la técnicaestáen suempleocomo pruebatainizen campañas de En z-o¡aso fincasdondeno seempleala vacunaciónde bovinosesmuy útil enel establecimiento animalespositivos,sinembargo,cuandosesiguenprogramasdevacunación,existela tendenciaa t7.

(4) da¡resultadosfalsospositivosdebidoa sumayorsensibilidad, siendonecesario la comprobación de los suelospositivosmedianteotrastécnicas.. TÉCNICA DE AGI,UTINACIÓN (ON 2-MERCAPTIOETANOL (}Im) Esta técnicase basaen la inactivaciónde la IgJtÁpor el2-MecaÍcaptoetanolsin que afectenlas inmunoglobulinas G Si la técnicadel 2-ME esnegativay la de tubopositiva,significaque los anticuerpossondel tipo IgM. Si los resultadossonpositivosparalaspruebaslentao rápiday para el 2-ME significaquepredom¡nan lasinmunoglobulinas G. Comolaslgc seconsideran indicativas de infecciónactiv4 la comprobacióndeestosanticuerpos esde muchaimportanciay estatécnicase debeincorporarenel diagnósticode rutina. A niveldel animal,éstasedebeemplearparaprocesar suerossospechosos o positivosa lastécnicasordinariasde aglutinacióncon el fin de corroborarel estadode infección. Otra ventajade esta técnicaes la de poder establecerla presenciade animalesinfectados crónicamente, contítulosbajosenlastécnicasordinariasde aglulinación.Los suerosquepresentan inmunoglobulinas inespecíficas puedenserdescartados medianteef tratamietnoconel reactivo.Srn embargo,debetenerseen cuentaque la respuestaserológicainicialen la infecciónestádadapor anticuerposIgM específicoslos cualessonatacadospor el 2-Mercaptoetanolconresultadonegativo a la prueba.Tambiénesnecesarioseñalarque en humanos,algunospacientesen especiallos que sontratadosprecozmentedesa¡rollananticuerposIgG resistentes al 2-ME y en ellosla reacciónes negativaal 2-ME pesea sufrirde enfermedad activa. TÉCNICADE AGLUTINACIÓNCoN RIVANoL Estatécnicatieneel mísmofundamentoquela Pruebade2-ME y comoesel de dejaren libertadlas IgG paraquereaccionen conel antígenoy suinterpretación parala sigueel mismocriterioesbozado técnicade 2-M.E.. TECNICA DE FIJACIÓN DE COMPLEMBNTO (FC) Es la pruebaconsideradacomo referencia,debidoa su sensibilidad y especificidad elevadas.pues dentrode las pruebasclásicaspresentael más a.ltogradode sensibilidad analiticaenla deternunación dela IgGl . La IgGl boünafija mmplemento y en consecuencia, la pruebaesde gran valor confirmatoriocuandoseaplicaal menosseismeses después de la vacunaciónen la edadjuvenil.Lo anterior,debidoa quetambiéntasIgM boünasfijan complemento y entoncesIosanimales reciénvacunasseríanpositivos.En la realización de esta pruebapuedeutilizarseantígenocompletoo LPS purificado. La principaldesventaja deestatecnicaessr complejidad, yaquereqüeredecondiciones delaboratorio especiales y de un entrenamiento muycuidadosopor partedela personaquela va a realizar. 38.

(5) TECNICA DEL ANILLO EN LECHE Estatécnicatienecomo característica importante,el queponede manifiestolaslgs presentes en la lecheoriginadasen el sistemasanguineo,lascualespresentanun pasoselectivoa la glándulamamaria en la épocadel parto al igualque lasoriginadasen la mismaglándulamamariacomo respuestaa la infecciónlocal. La técnicatienela ventajaprácticade sermuy sencillay r,ípida Puederealizarseademásen muestras tomadasen recip¡entes con lecheprocedentes de uno o variosanimales,en la lechede cadacuarto o en una mezclade los diferentescuartos. Al realizarseen recipientescon lecheprocedentede variosanimales, examinarposteriorrnente, esnecesario en casode positividad,cadaunade las vacasparaidentificarlasreaccionantesEn estascondicicnes,la técnicarepetidaconun intervalo de 90 díasproveeuna eficienciasupenoral95%oparalocalizarlos hatosinfectados.Tambiénse tiene la informaciónde que el 97% de los hatoscon tres puebasnegativaspuedenconsiderarse libresde lainfección. Sehacalculadoademásquelaprobabilidadde obtenerunapruebade anillo positivomezclardolechede 25 vac¿sde lascualessolodossonreacciona¡tes a la seroagluünación, esdel 960loy cuandohay tresvacaspositivasesdel 99olo.. TÉCNICA DE INMUNoDIFUSIÓN RADIAL (IDR) l-astécnicasde inmunoprecipitación paraestudiarnuevosantígenos.Estasha¡r hansidoempleadas incluídomezclascomplejasde antigenos,asícomoantigenosseleccionados comoel poli-B y el A2 Lasprincipalesventajasdiagnósticas de estastécnicasson l . La determinación nápidade animales queestiÁri elimina¡doactivarnentebrucelamn la técnicaIDR conantigerroPoli-B y 2. La demostración de respuestaa antígenosdiferentesal LPS, lo cual proveeeüdenciadiagnósticaadicional. La presencia de anticuerposprecipitantes a estosantigenospuedeindicarinfecciónactivarecientey es consistente con suaparcióntardíay regresióntempranaluegode vacunacióncon cepaüva. La pruebaempleadael a¡tígenopoli-B o haptenonativo(HN) extraidode laB. melitensis, hoymás conocidocomo cadena-Ola cualal serevaluadaha dernostradoserespecíficaen la diferenciación entreanimalesvacunadose infectados.Basadosen Ia reactividaddel polisacrárido de la cadena-O enla pruebade inmunodifusión radial,puedetarnbiénproponerse quelosepítopesinmunodominantes puedenserunivalentes, ocurriendoposiblemente en la porciónterminalde la cadenay sonincapaces de participarenunareacciónde precipitación.En situaciones como vacunaciónde desfavorables, adultoscon cepa 19,su especificidadpuedeser superiora la fijación del complemento,perolas infeccionespersistentes de nuevocomplicanel diagnóstico. TECNICA DE ELISA A causade sr¡sensibilidadextrema.relativasencillez,seguridadparael empleode rutinay estabilidad delos reactivosutilizados,lastécnicasinmunoenzimáticas presentan tambiéngrandesventajaspara el diagnósticode brucelosisSonmúltipleslaspublicaciones existentes sobrela explicaciónde algun tipo de ELISA a estaenfermedadComo aplicaciónal diagnósticoserológico,la ELISA indirect¿.

(6) esla que másventajasprácticasha presentadotanto paradeterminaciónde anticuerposséricos como en leche. Eüdentemente,el antígenoempleadoesdeterminanteen la funcionalidadde la pruebay con frnesdiagnósticosse consideraque el LPS pareceser el más indicado dada su inmunogenicidady suexcelentecapacidadde adsorciónal poliestireno l-a utilizaciónde anticuerpos monoclonales a IgGl bovinaaaumentaaúnmássu especificidad diagnósticasincomprometersu elevadasensibilidad. En la búsquedade la diferenciaciónentreanimalesinfectadosy vacunados,seha utiliz¿dola ELISA competitivacon antígenopolisacárido(cadena-O)y anticuerpomonoclonala un epítopelineal específicode la cadena-O. Bundle y colaboradores,19E4,han sugeridoque existenepítopes únicosy comúnessobrela respec-tiva cadena-O, algunosdelos cualessonunivalentes mientrasque otros sonmultivalentes.Secreequelos multivalentes residena lo largodel polímero,mientrasque los univalentes estanlocalizadosenla porciónterminalde la cadena Un anticuerpomonoclonalen particular(YsT9-2),elcual 6:eobtenidocontra!. enterocolitica0 :9 escapazde reacciona¡con la cadenaO purificadadelenteropolitica B. abom¡sy B. mellitensis.Sepiensaqueestamonoclonal tieneespecificidadpor un epítopecomúnmultivalentedefinidopor una*¡ie co¡tade enlaces1,2 descritospor la != melitensis Comoseha anotadoanteriormentgel LPS esel antigenoinmunodominante en la respuesta tanloa cepasde campocomovacunalesde Cepa| 9; sinembargo, esteepítopecomúnmultivalenteparece serdébilrnenternmunogénicoy los anticuerposa esteepitopesolamentesonproducidosur cantidades apreciables luegode unaexposición prolongadao crónicade unadosistal comola presentadabajo la inspección de campo.Ganadovacunadopareceproducirtar sólorespuesta trans¡toriaa esteepitope,excepto bajocircunstancias en la.quesehaestablecido la infecciónpersistente por cepavacunal.La prueba competitivaofrecevariasventajas,entreellas,esmásrápid4 no requiereconjugadoantiespecie, es fácil de automatizary escapazde diferenciarpor lo menosel 85%ode los animalesvacunadoscon respectoa infectados. Como reglageneralsedebeteneren cuentaque parael diagnósticode la brucelosisesnecesario hacerunapruebarápida,económicay de altasensibifidad como pruebatamizy utilizarunao más pruebasadicionales como confirmatoriasde losanimalesPOSITIVOS.. EFICIENCIA DIAGNOSTICA Y CORRELACIONDE LAS TECNICAS SEROLOGICAS La respuesta inmuneal serdeterminada por unatécnicadelaboratorioparabrucel4estáinfluenciada por mucbosfactoreslos cualesincluyenel prolongadoy variableperíodode incubaciónduranteel cual la pruebaserológicaesnegativa,el estadovacunaldel animal,la naturalezade la descarg4las variacionesen la respuesta serológicaindividuallantoa la vacunacomoa la descargay la etapade gestaciónal momentode la exposicióna la enfermedad.Además,laspruebasserológicascompranden dos variablesbiológicasde importancia,el antígenoy el anticuerpo,en dondeuna semantienefija para poder evaluarla variaciónde la otra En muchasde estaspruebasse presentauna gran 40.

(7) dificultaden la interpretacióny evaluaciónde Iaeficienc¡qdebidoa quepuedenocurrir reacciones falsaspositivasy negativas,y a quesu presentaciónvariade acuerdocon el valor diagnósticomínimo establecidoparauna pruebaen particular. La comparaciónentrelasdiferentestécnicasha sido realizadapor diferentesinvestigadores con el fin de evaluarla utilidadde cadaunade ellasen el diagrósticode la brucelosis. Como requisito previo a la utilizaciónde una nuevatécdca en un programade diagnóstico,se requierequela sensibilidad y especicifidad seacompa¡adacon pruebasestandar.La especificidad de unatécnicasedefinecomola probabilidadde da¡un resultadonegativocuandoéstaesaplicada a un animal no infectado. Un alto nivel de especificidadgarantizaque la técnicano clasifica inconectamente animalesno infectados,comopositivos.t¿ sensibilidad, esla probabilidadde dar q¡ando un resftado positivo latecnicaseapücaa un animalinfectado.Unapruóacon altasensibilidad preüenequeun númeroexcesivode animalesinfectadosescapena la determinación. La sensibilidad y especificidad de unatécnicapuedevariara medidaquecambianlascaracterísticas razónpor la cualse de la poblaciónde animales, a brucelosis, comoesel casode la vacunación requiereconocerestosdosfactorestanto en unapoblaciónvacunadacomoen unalibre. La simpiicidad, y seguridadsoncualidades en la eficiencia aceptabilidad definidascomoimportantes pruebas pueden delas diagrróstic4 serconfirsos biológicas Sinanbargo,losconceptosdeeficiencia y especificidad si sesugiereque la sensibilidad constantesdeuna prueba,estos soncaracteristicas dosparámetros,puedenva¡ia¡dentrodela poblacióny mascambiaráncon la prevalencia a medida queavanzael control o la eliminaciónde la enfermedad. y comoejemplode lo anterior,uno de los estudiosmás Con respectoa pruebasconvencionales conocidosesel de Stems[orny col,, enel cualsecompararontécnicasde aglutinacióny fijacióndel complementocon respectoa especificidady sensibilidadrelativaal diagnósticoserológicode la brucelosisbovina.En una muestrade 167cultivospositivos,la sensibilidades delaspruebasfueron. fijacióndel complemento79.0%;técnicaen placaconantígenobuferado75.4;tecnicaconantígeno rosade bengala74.9%;pruebade I ataietaT 4.3yo,pruebade aglutinaciónen placa73.170;prueba de aglutinaciónen tubo 68.9% y técnicade aglutinacióncon 2-lvIE 59.9yo Todaslas técnicas combinadasdetectariansolo el 82oáde los animalesinfectados En el mismoestudlo,la especificidad en 105I suerosde hatoslibresde brucelosisfue la siguiente: técnicaen placacon antígenobuferado98.9%;técnicade aglutinaciónentubo 99.2Vo;técnicade con z-lvE 99.8%.En esteestudiolastecnicasde aglutinaciónenplac¿99.3;tecnicadeaglutinación clasificaronconectamente todos rosadebengal4pruebade la tarjetay de fijacióndelcomplemento los suerosnegativos.Por lo anterior,serecomiendael empleode la técnicacon antígenobuferado y la fijacióndel complemento y sensibilidad comopruebade tamiz, ya quetienealtaespecificidad como tecnicaconfirrnatoria lascualesincluyena Posteriormente, hansido mUltipleslascomparaciones de técnicasrealizadas, la mayoríade ellas,lautilizacióndela ELISA indirecta lastécnicasinmunoenzirniücas,recomendando y especificidadcon respectoa frjaciónde monoclonalcomo pruebatamiz de elevadasensibilidad complemento. 4l.

(8) DIAGNOSTICO SEROLOGICOINDIVIDUAL El diagnósticoindividualconecto basadoúnicamenteen pruebasserológicas,motivo por el cual parapoderllegara unaconclusión,enocasionesesnecesario teneren cuentavarioscriterios. Parafacilitarla interprctaciónde estetipo de diagnóstico,sepuedensuponervariassituaciones de práctica: comúnocuerrenciaenla enprimerlugar,seconsideran arbitrariamente comotemeras,a lashembrasdesdeel nacimientohastaaproximadamente los nuevemesesde edad;novillas,delos 9 a los 22 mesesy como vacás,a lashembrasquehan tenidocria. Comoreg|ageneral,en brucelosisparala interpretación de laspruebasdeaglutinaciónen animales adultos,esnecesaiosaberpreviamentesi setratade animalesvacr¡nadoso no a la edadrecomendada esdecir,entrelostresy los nuevemeses conuntítulodel:100ómás(Tabla deedad Porejemplo: l), no vacunadoo con historiade vacunación desconocida, sedebeconsiderar como infectado, paraeütar dar unaintopretación erróneaa aquellosanimalesinfectadosquesevacunanparajustificar supositividad Si la conclusiónes que se tratade un animalsospechoso se procedede la forma siguiente:se practica una prueba suplementariaque determinelgGl como es el caso de la pruebade 2Mercaptoetanol,de rivanolo de fijaciónde complementoSi estapruebada resultadopositivo,se consideraqueel animaltieneunainfecciónactiva;si el resultadoesnegativo,serecomiendatomar unasegunda por lo menosquincedíasy serepitenIosexámenes. muestapasados Si los titulosde permanecenegativa,el animalseconsidera aglutinacióndisminuyeny la pruebacomplementaria negativo,por el contra¡iosi los tíhrlosaumentano perÍ¡anecenconstantesy la pruebacomplernortana infectado.En la actualidadseconsidera determinatihrlos de anticuerposelanimalpredeconsiderarse positivo queun animalestáinfectado,cuandopresentaun resultado en pruebasde ELISA indirecta y cuandoésteesconfirmadoconELISA competitivao IDR. En gened laspruebasconvencionales por laspruebas podríanser remplazadas por unaaglutinación conrosadebengalay complementada de ELISA e IDR lo cual proporcionariaun diagnósticomássensibley específico. TABLA I TNTERPRETACIONDE LAS REACCIONES DE AGLUTINACION EN LAS PRTJEBASDE PLACA Y TTJBO PARA DIAGNOSTICO DE BRUCELOSIS BOVINA EN ANIMALES ADTIUTOS TITULOSDEANTICUERPOS. INTERPRETACION. |25 I :50 I .00 I .200 No vacunado Vacunado. 42.

(9) Negativo Negativo l*. t t"gutiuo Negativo +. Negarirro Negativo + ]. Sospechoso Negativo + +. Sorp""horo Negativo + + l* Sospechoso Sospechoso. + + + Positivo Sospechoso. + + t. l*. 43.

(10) Positivo Sospechoso + + + Positivo. Sospechoso imcompleta. l * Reacción. DIAGNOSTICO EN TERNERASHIJAS DE VACAS INFECTADAS Una ternerahijade una vacainfectadaal ingerirbrucelascon el ca.lostroseconüerteen un animal positivo. infectadoy serológicamente aproximadamente en seis de la terneracaena nivelesno determinables Los anticuerposcalostrales similar,detal manera mesesy la infeccióneseliminadadel organismoanun tiempo aproximadamente negativay srsceptible que aflfegara la edaddel primer servicio,la noülla debeestarserológicamente desarrollan a la enfermedad.Sinembargo,en algunoscasos,lastemeras,hijasde vacasinfectadas, pero que llegar a al su primera de anticuerpos, una infecciónlatentecon nivelesno determinables gestaciónabortany secomportancomo si reciénhubieranadquiridola infección.Estosanimales, de los hatosproblemaganlos cualesa p€sarde lasmedidasde control empleadas sonlos responsables El porcentajedeanimalesconi¡fecciones casospositivosde la enfermedad. continúanapareciendo del 2.5%o. latentesesaproximadanrente permitenestablecermásrápidamentesituacionescomo lasdescritas Las pruebasinmunoenzimáticas y sonpor consiguiente altamenterecomendables.. DIAGNOSTICO DE TERNERASHIJAS DE VACAS SANAS Estosanimalesnacensin oportunidadde infectarseen forma intrauterin4no recibenanticuerpos calostralesy por lo tanto sonsjsceptiblesa la infeccióndebiendopor corsiguienteprotegersemediante negativas. enestosanimalessonusualmente la vacunación.Las pruebasserológicas. DIAGNOSTICO EN TERNERAS INFECTADASO VACUNADAS los gérmenespuedensereliminadosy al Si la ternerarecibeunainfeccióndecampoo esvacunada" sin embargo,la novilla no llegaralos22 meseslos anticuerposaglutinantes son determinables; conservatodos susmecanismosde resistenciacelulara la infección.Si esteanimalrecibevarias mayortiempo.Lo mismosi ademásde la vacunaciones haytendenciaa quelos títulospersistan vacunarecibeinfeccionesde campo.Lógicamente,existencasosen los qralesel nivel de anticuerpos.

(11) desaparece anteso seprolongadespuésdel tiempoantesmencionadoPor lo regular,laspruebas negativas ordinaraias de aglutinacióndantítulosbajosacompañados de pruebascomplementarias Algunasexperienciasindicanque laspruebasdeRB e IDR, sehacennegativasaproximadamentea puededar como los tres meses.Sin embargo,la técnicade ELISA por su mayorsensibilidad positivoalgunosanimales,pero al hacerIa tecnicacompetitivaestossedesca¡tan.[¿ IDR no da reacciónpositivaen ningunaetapasiemprey cuandosetratede animalesde hatosno infectadosy vacunadosa la edadreglamentaria.. DIAGNOSTICO EN VACAS INFECTADASO VACUNADAS Despuésde los l0 mesesde edady mientrasmásadulto seael animal,la infecciónde campoo vacunaltiendea persistirindefinidamente, estoprovocaun desafioantigénicopermanentecon la produccióncontínuade anticr¡erposespocialmente inmunoglobulinas G l, lo oral sefaduce enpruóas positivas.En el casoqueocurranreinfecciones serológicas o unacombinaciónde o revacunaciones éstas,la persistencia de anticuerpos tiendea sermayory los títulosserológ¡cos a sermásaltos. Además,losmicroorganismos tiendena elimina¡se a travésde la leche,la cualseconüerteenfuente parael hombre,Estassonrazonespor lascualesno debenvacuna¡se de contagioespecialmente los animales adultos. En un hatoseencuentran reaccionantes y consintomatología animales detipo reproductivocon mortalidadembriona¡i4abortos,metritiq retencióndeplacent4mastitiüetc. puedepensarseentonces queel origende estossíntomasobedecea unainfecciónpor Brucellaabortus. Si no seencuent¡ansintomascomo los mencionados anteriormentqel origendelos títulos serológicos puedeseratribuídosa uia respuestapost-vacunalo a uru reacciónanamnésica, por infecciónde campoo vacunal Em ambassituaciones, debeintenta¡se el aislamiento conel fin dedeterminarsi del microorganismo, se tratade una infecciónpor cepavacunalo de campo. La definiciónde situaciones como la mcncionadapodráserproporcionadapor la utilizaciónde serologíasinmunoenzimáticas, ELISA indirectay competitivay pruebasde inmunodifusiónradial,siendoen especialéstasdosúltimaslas rnáseficientesnaradiferenciarentrevacunadoe infectado.. INTERPRETACIONDE PRUEBASSEROLOGICASEN CASOSCOLECTIVOS Paraunamejorinterpretación de laspruebasserológicas deberealizarse un analisisde los resultados encontradosa nivel de hatopero engruposde animalesque hayantenidoel mismomanejo. Este análisisno sepuederealizarconboünosde diversoorigenlos cualeshansido sometidosa planesde vacunacióndesconocidos o diferentes. En la Tabla2, sepresentandosejemplosde resultadosserológicosprobablesen un hatolibre de la enfennedady en un hatodondeeúste la infección. 45. . ) $.

(12) presentan bajoso títulosdeaglutinación Estecasohacerelacióna un hatoenquelosanimales y pruebas deRivanolo 2-MEnegativas ausentes esquelosnivelesde adultoslo máspresumible deanimales Tratándose deun grupohomogéneo post-vacunales. Laspruebas deRivanolo 2-ME seantítulosresiduales anticuerpos encontrados deIDR y ELISA. El bovino lo indicaráur laspruebas indicanquenohayinfecciónactivae igualmente y debeser sospechoso lentade I :100,puedeconsiderarse quepresenta untítuloporaglutinación porIDR o ELISd sinosepuedeclarificarsusituación preferiblanente posteriormente, reexaminado esmejoreliminarlo. PROBABLESEN UNA FINCACONDIEZ SEROLOGICOS TABLA 2 RESTJLTADOS VACASLIBRESDE BRUCELOSISY EN UNA FINCA SIMILAR DONDE EXISTELA INFECCION FrNCA"A" (LTBRE) AnimalPruebadeAglutinación PruebadeRivanoló 2-ME. FINCA"B" (INFECTADA) AnimalPruebadeAglutinación PruebadeRivanoló 2-ME l. 1..25 Negativa 1:25 Negativa 2 Nesativa 2 L100 Positiva FINCA"A'' (LIBRE) AnimalPruebade4glutinación Pruebadefuvanoló 2-ME. j FINCA'B'' (INFECTADA) AnimalPruebadeAglutinación PruebadeRivanoló z-ME. Negativa 3 l:50 Negativa I50 Negativa. Negatira 16.

(13) 5 | :25 Negativa J. l:25 Negativa 6 Negativa : Negativa. Positiva'. '7 Negativa 7 1 200 8 Negativa 8 I :100. Positiva 9 Ll0 Negativa 9 I :50 Negativa l0 Negativa l0 l:2O Positiva. FINCA A. Enesteejemplo, esnecesario considerar además enrelación a losaspectos clinicoslo siguiente:Si talescomo enlafincao enel hatoexisteunasintomatología eüdentedeproblemas reproductivos mortalidad abortos,retención deplacenta, esnecesario embrionaria, metritis,etc.,eüdentemente yaqueconla serología presentada buscarotraetiologíadelproblema, enestasituaciónno debe problemas reproductivos manifestarse enlo queabrucelosis serefiere. 47.

(14) FINCA B y además presentan pruebas a laspruebas ordinarias reaccionates Enestehatoseenq¡enrana¡rimales podría ELISA detectar la de positivas. En este caso, tecnica deRivanolo 2-ME complementarias sepresentan serológicas positivosal igualquela deIDR y ademris delasreacciones másanimales gon enbrucelosisSino metritis,etc.,puedepensarse seguridad abortos,repeticióndeservicos, o quelos quehubounavacunación o revacunaciór¡ widente,puedesuponerse o<istesintomatolOgía pérdidas duranteel cualaún no se hanpresentado animalesestánen períodode incubación negativos losanimales contítulosserolóSicamente inclusive último caso, gestacionales. En este realizarse ancortoúanpo deberán confirmativas comopositivosy lasserologias debenconsidera¡se porelaumento detítulos. paraconfirmar la infección. DIAGNOSTICOSEROLOGICODE BRUCELOSISEN TOROS serealizasiguiendolasparfasestablecidas En toros,la interpretacióndelaspruebasde seoaglutinacion paralashembrasya queel comité mixto FAo-oMS de expertosefibrucelosis(FAo/oMS, 1986) no hacedistinciónentremachosy hembrasparala interpretaciónde laspruebasde seroagluünación del bacteriológicos exámenes Ademas,en los toros paraun corectodiagnósticodebenpracticarse los cualesdebensernegativos semeny de espermoaglutinación, a lasdosy debenserexaminadosrepetidamente, Los toros que dentítulos en la seroaglutinación, posiblese incluyendoel bacteriológico. utilizandotodo el grupode exámenes cuatrosemanas. EVALUACION DEL DIAGNOSTICO SEROLOGICOCON RELACION AL COMPORTAMIENTO REPRODUCTIVO En los bovinos,los porcentajesde fertilizaciónseencuentranalrededordel 90%, mientrasqueel promediode partosestaentfeel SoYoy60Yo.La muerteembfionaria(daltro de los 20 díaspostiertilización) pareceserresponsabledel 75-80% de todas laspérdidasgestacionales,entanto que el | 0%- 15%conespondehastael momentode la implantacióny el 5-8% de laspérdidasrestantesse presentaentrela implantacióny el nacimientodeltemero figura la de estaspérdidasgestacionales Dentro del grupo de entidadesinfecciosasresponsables en efectuarse Brucellaabortus,razónpor la cualla evaluacíónserológicade la enfermedaddebe reproduclivode los animales formaparalelaal diagnósticodel comportamiento como el único síntomaatribuíblea la Usualmente,seconsideraal aborto o a susconsecuencias enfermedad.Sinembargo,lasvacas,por lo generalabortanunasolavez,si bienen lasgestaciones y con lasmembranas posterioreshayunanuevainvasióndel úteroy seexcretanmicroorgan¡smos iíquidos. En las vacaspreñadasexpuestasa cantidadespequeñásde microorganismos,pueden producirseinfeccionesinmuniza¡tesautolimitanteso el animalpuedeconvertirseenportador laterte.

(15) En un hatoinfectado,ademrás de producirseunareducciónde un 2fflo en el potencialde producción de leche,el l57o de lasvacasreactorasabortany unade cadacincovacasreaccionantes debeser reernplazada por infertilidadternporalo permurentc Comosemencionóa¡teriormenteen un hatoque presente no siempreseva animalesreaccionantes a encontrarsintomatologia clinicade la enfermedad, debidoa queéstapuedeserpor ejemplo,el resultadode unavacunaciónde adultoso deunainfeccióninmunizante autolimitante.Sinembargo, el pronósticodela situacióncambiacompletamente si ademásexisteun conjuntode síntomasque evidencianunainfecciónactivade campo Por otra parte,el resultadodeun programade controldebeevaluarse teniendotambiénen cuenta la mediciónde diferentesparámetrosreproductivosantesy despuésde lasmedidasestablecidas Existeunagancantidadde indicadoresde la situaciónreproductivade los animales,algunosde los cualessonmáscomplejosque otros,dependiendo de la calidadde los registrosque sellevanen la finca. El índicede másfácil evaluaciónesel intervaloentrepartoso de díasabiertos,el cual se puedecalcularen forma indiüdual,obteniéndose asíel promedioparael hato. queel promediode Cuandoexisteproblemareproductivoatribuiblea brucelosispuedeobservarse diasabiértosaumentaa medidaqueaumentael titulo de los animalesLos animalesquepresentan un promediode díasabiertosmayorpresentan a su vezun promed¡omayorde tíhrlo serológicoy a que medida el control de la enfermedad va teniendoéxitoestascifrassereduceqlógicamentesi no existeun problemadiferenteconcomitante.. DIAGNOSTICO SEROLOGICO EN BRUCELOSISCON RELACION A OTROS FACTORESDE INFERTILIDAD Como semencionóanteriormente, el diagnósticoserológicoenbrucelosisesunprocesocompleto que requierela valoraciónde múltiplesvariables,sinembargo,esnecesarioteneren cuentaotros factoresresponsables de infertilidaden los boünos,los cualespuedeninfluir en el comportamiento serológicode los animalesa lasdiferentespruebasde diagnósticosobretodo en Ios programasde controlde la enfemredad La zupervivencia deltemerodependede la maneracomoelfeto completala organogénesis funcional necesaria paralaüda extrauterinay de la formacomoafrontael conjuntode factoresresponsables de mortalidadembrionariay gestacional. f)entro de éstosse mencionanfactoresgenéticos,endrocrinos, estresantes, factoresde edad traunráticos,tóxicos,nutricionales,y factoresde manejoe infecciososocupandola brucelosisun papelimportanteen estaproblemática. Por lo tanto,el enfoquequeseasumaconrelaciónal diagnóstico y mntrol de la enfermedad depende y sobretodo en el éxitoquese de losfactoresque puedeninfluir en la patogenésis dela enfermedad esperade un mecanismode control. Así por ejemplosemencioñaquebajosnivelesnutricionales afectandirectanrentela función ovárica,reduciendola capacidadde respuestaa los estímulos 49.

(16) hormonales, y limitandola síntesisdeesteroides por el anerpoluteo. Por otraparte,la sobrealimentación y el excesode proteinen la dietapuedenafecta¡la reproduccióndebidoa altercionesde la función hepáticqlo cualproduceunamayorpredisposición a Ia endometritispostparto. Ex¡stenotrasenfermedades como la diarreaviral bovinay la leucemia,en las que entreotras c¿racterísticas, predilección losürus presentan paramultiplicarse y lesionarel tejidoünforeticular, lo cual puederesultaren una supresiónsignificativade los mecanismos de defensadel animal,tanto específicos comoinespecíficos, haciaotros microorganismos comola brucela,loscualesbajoestas circunstancias adquiriríanunapatogenicidad quepuedesergraveenun momentodeterminadoAsÍ mismo,otrasinvestigaciones sugierenquela liberacióndeendotoxinas porbacteriasC¡ramnegativas inducenun incrementoen lasconcentraciones de cortisolduranteel períodopreolulataoriodel ciclo estralpreüniendola ovulaciónpor unbloqueode la liberacióndehormonaluteinizante preowlatona. Los ejemplosanteriores,ilustranla responsabilidad quetienenotros factoresen el desarrollode patogénesis de la brucelosis,lo cualrepercuteen el diagnósticoserológicode estaentidadya que predisponeal animala presentarvariaciones en los nivelesde anticuerposde acuerdoconel gtado enque semanifiestanen un cuerpode a¡rimaleso enformaindiüdual. Por estasrazones,esnecesario teneren cuentaestosfactoresparaunacorrectainterpretación del diagnóstico y un pronóstico acertadóde lasmedidaso campañasde controlde la enfermedad. PROGRAMA NACIONAI, DE CONTROL Y ERRADICACION DE LA BRUCELOSISBOVINA EN COLOMBIA Unagrancantidadde paísesafectadospor la brucelosisconsiderannecesarioorganizarsistemas y afectasu población de luchaparaenfrentarestaenfermedad quelesproducepérdidaseconómicas nulnana. La brucelosisestádispersaen AmericaLatinaconestimativos a¡ualesde20 000 personas enfermas econ(rnricamente activas,y de pérdidasdirectasen la especiebovinapor másde 270 millonesde dírlarescad año lJstazoonosisgenerapérdidasdirectaspor abortos,ampliaciónde interva.lo entrepartos,retención placeutariaporreemplazos, reducciónde disminuciónen la produccióndeleche,costosadicionales indicesproductivos,y por los costosindirectosgeneradospor Iosprogramasde control quedemostraronla rentabilidadde losprogtamasde reducción Existenanálisisde costo/beneficio y Canadápor ejemplo,al finalde susaccionesde eradicación,por oerradicación de la enfermedad, qadadólarinvertidoredutuabacincodólarescomo beneficio. Se ha desarrolladotecnologíapara reducir la prevalenciade la enfermedad,y aún, erradicarla combinandodiferentesestrategias, tal comoocurrióenCubaquelogró sueliminacióny en Untguay vacunación qtredespuésde 20 añosde a un nivel tal (O 5%), que puede redujosu prevalencia pensarenla erradicación. 50.

(17) '7!.,! t,. Todoprogramadebetenerencuentaquelosprocesos y quepor ejemplo sonlargosy costosos y Canadá inürtió 29 años 260millonesdedólaresensuerr¿dicación, Holandala elimin'+oen7 añosa un costode 160millonesdedólaresy EstadosUnidos,iniciandosutrabajoen 1918,con prevalencias de laenadicación para1997,conuncostode58millones de0.OO062%o tieneprevista dólares,incluyendovacunacióndeternerasenalgunasáreas. debeobedecer sentida delestadoydelos El controlyla erradicación dela brucelosls a la necesidad ganaderos, basados enla coordinación serdecanácter regional amparado enprogramas nacionales y Iacomunidad y enla disposición intersectorial, delosganaderos derecursos enla participación y privadodela veterinaria igualmente, económicos; debeesta¡bajola responsabilidad delejercicio y supervisados porautoridades oficiales delosproductores, coordinadores estánfundamentados en el conocimiento de sus Los programasde lechacontrala brucelosis y enladecisióndeenfrentarla or laadopcióndeteonologia epidemiologí4 desuimpacatoeconómico, y con permanentes detiempodeterminados, enformaorganizad4enperíodos oonevaluaciones generada. aiustebasados enla información. EL PROGRAMA EN COLOMBIA de En Colombia,la enfermedad en 1924en suerosbovinosprocedentes sediagnosticóinicialmente Cundinama¡caanalizadose¡rlos EstadosUnidos,d rpimeraislamientodel germen(Instituto Samper Martinez)sehizo en 1927y lasprimerasserologiasen 192E. positivasseregistraronenoperariosdel mataderode En la especiehumana,lasprimerasserologías Bogotá en 1935 y se hieieronaislamientode B. abortus en funcionariosde mataderosy de explotacionesdel Valledel Cauc¿en 1973y permanenlemente el Sisternade Informaciónde Sanidad Animal, registraserologíaspositivasen diferentesregionesdel país. La B. suis fue aisladaen 1968y además,hay serologíaspositivasa brucelosisboüna en búfalos, equinos,ovinos,caninosy cervidoslo cualreflejala gravedaddel problema.En Colombiano seha aisladoB. melitensis. En 1949el Ministyerio de Agriculturay Ganadería(Resolución0750),implementólasprimeras medidasparael control de erradicaciónde la brucelosis;en 1970,sedictaronnormassanitarias (Resolución673) quesecomplemantaron en en 1973conun Manualde Normasy Procedimientos; 1977semodificó parcialmenteel anteriormandato(Resolución261) y en 1988,el Ministerio de Agriorltura @esolución0354), confirmaal Instituto ColombianoAgropecuarioICd paraorganizar, por el ICA (Resolución minisruialfue reglamentada dirigiry qleurtu d Program4estaúltirnalegislación 3 193)y lasdosrigenactualmentelasaccionesdel programa. El programaestáplanteadoparalucharcontrala enfermedad en los boünos porquela información hace pensar que abortus es la que esxistente la B. con mayorfrecuenciasepresentay la quemás pérdidascausa.. 5l.

(18) OBJETIVOS l.ograrelcontroldelaenfermedad aladisminución deperdidas ecornmicas conmirasalaerradicaciórr y a lareducción delriesgoparala especie humana.. ESTRATEGIASDEL PROGRAMA Lasactiüadesestrinfundamentadas e la importanciaganderade lasdiferentesá¡eas,enlos sistemas deexplotaciór¡en la densidaddepoblacióq anlos flujosde moülizacióny enla clasificacióncr¡alitativa del paáisen zonasde prevalenciaalta, ,ediay baja,con baseen la informacióngeneradapor los centrosde diagnósticoy algunosestudiospuntuales. METODOLOGIAS DE TRABAJO A NIVEL DE CAMPO que se desarrollan Lasactividades a nivelde campotiendena reducirlos factoresde riesgode presenciay difusión de la enfermedady en generalson los utilizadospor los paísesque tienen progtamasde control.. ZONIFICACION DE AREAS Y ACCIONESDEL PROGRAMA .. ZONASDE PREVALENCIABAJA:0 A 3% DE REACTORES. Depflrtrmentos¡Meta,Quindio,Caldas, Cauca,Tolima"Antioquia,Chocoóy Casanare. y controladade reactorespara de temeras,eliminaciónsistemática Acciones: Vacunación certificación dehatosy áreaslibres.. ZONAS DE PREVALENCIA MEDIA: 3 A 5 "/" DE REACTORES Atlántico,Caquetá,y Santander Depart¡mentos: Huila, Riralda-Valle,Norte de Santander, deternerasy reducciónde los índicesde afección, obligatoriay sisternática Acciones: Vacunación mediantela eliminaciónde reactores.. ZONAS DE PREVALENCIAAI-TA: MAYOR DE 5 % DE REACTORES La Guajir4 Magdalen4Nariño, Bolívar,Boyaca,Cesar,Córdob4 Cundinamarca, Departamentos, Sucrey Arauca. 52.

(19) decontrola y masiva y organización deprogramas detemeras Acciones:Vacunación obügatoria niveldehato.. DIAGNOSTICO DE LA ENFERMEDAD En Colombiael diagrróstaico de la enfermedad sehahechoconbaseen laspruebasde Aglutinación con la del Anillo en Leche,todas con baja Rápidaen Placa,Lenta en Tubo y espóradicamente y especificidad; como pruebacomplementaria s ehautilizadola de Aglutinacióncon 2sensibilidad y con la implanentación validación de la pruebade AntigenoBuferado Merc¿pto Eta¡rol; actualmante (Rosade Bengala)seiniciasu usoa nivelde campo.. CAPACITACION DEL RECURSOHUMANO El programatienererursohumanocapacitadoenaspeclosdediagnósticobacteriológicoy serológico, manejode muestras,interprtetaciónde resultados,metodologíasde control y erradicación, y análisisy usode Ia informacióngenerada. epidemiología de la enfermedad. VACUNACION COMO MEDIDA PREVENTIVA Por legislaciónnacional,el praogramasolo autorizala aplicaciónde vacunaa basedei. abortus cepa19,en temerasent@3 y 6 mesesdeedad,por unasolavez. Un estimativode vacunaaplicada entre 1990y l99l indicaque sólosecubrióun bajoporcentajede lasternerasenedadde vacunar.. DECLARACION DE HATOS Y AREAS LIBRES Estaactividad pret€ndela elíminacióntotal dela enfermedada nivelde prediosy derireasdetennindas y ha obtenidoalgunoslogrosa nivelde hatosperono de áreas.. CONTROL DE MOVILIZACION DE ANIMALES y paraestoexigesolo el El objetivode estaactiüdadesel evitarla difusiónde la enfermedad de controly programas organizados a zonas en donde se desarrollan trasladode animalesnegativos ganaderas, libreso negativasa brucelosis a zonasde bajaprevalencia, erradicaciórya exposiciones y a los mercadosparas(pofación. Ins animaleasimportadosno debentenersignosde la enfermedad, ser-seronegativossi sonmayoresde 20 meses,y acreditarcertificadode vacunaciónentre3 y 6 mesessi sonmenoresde esaedad. Cuandoseimportasemen,lbs toros donantesdebensersero negativosy el semennegativoa laspruebasbacteriológicas, 53.

(20) DECOMISOSA NIVEL DE MATADEROS En el sacrificiode animalespositivoscon destinoal consumohumano,sedebendecomisarfetos completos,úteros,glándulasmamarias,terticulosy los principalesganglios linfiticos.. CONVENIOS COOPERATIVOS para la unificaciónde Existenconvenioscoperativos conEcuadory Venezuela basicamente procedimier¡tos y delucha.interc¿mbio información evaluación anual de actiüdades. de. VACUNACIÓN El punto másimportanteen la investigaciónde unaenfermedadinfecciosaesla prevención de la mismay la vacunaciónde los huéspedes susceptibles esle mejormétodoempleadohastaahora del agenteetiológicode la Brucelosisen 1906seha buscadola manerade Desdeel descubrimiento proteger animalescontra la enfermedad. de!. ¡bortus inocr¡ladas ante¿sdel El primermetodorecomendado fue el empleode suspurimas servicio Este procedimientológicamentecausabala enfermedaden muchosa¡rimales. desarrollarcepasde virulenciareducidapara la tendenciafue posteriormente Como consecuencia, serompleadas comovacunaso utilizarvacunasmuenasqueeütaríanlos problemasdel empleode cepasüvas. Los avancesen el conocimientoinmunológicoy en la genáicabacterianaha suministradonuevas perspectivasen el desarrollo de vacunasmássegurasy efectivas parala elaboraciónde inmunógenos, insertando Estosawnces lun pennitidoo<plorarlasposibilidades informacióngeneticade antígenasprotectivosenvectores,y el desarrollode mutantesganeticamente establesque eliminenen la prácticael problemade la revisiónde ürulencia de cepasvacunales atenuadas,. VACUNASVIVAS en 1923por JohnBuck,quienaislóla cepadela lechedeuna La primeravacunaüva fuecre¿da cepa19,quefueel númerodela vacaJerseyllamada VictorsLadyMatilda Estacepafuellamada porun fue dejada al medioambiente trabajando.Estacepa cepadevariasenlascualesestaban genéticamente. año,despues delo cualquedóinactivay esfabilizada variaModosisy víasdeinoculaciones investigaciones estacepa,sehicierondiversas Empleando inmunidad delargaduracióny no revertiasu queestebiológicosuministra una demostrándose y se la dosisfuereducidapaulatinamente virulencia. Conel fin dereducirlostítulospersistentes,.

(21) poseía y poseemuchas desventajas apfcaciónlimitadaaanimales inmadurog se¡<ualmente sinembargo, comoson: deldiagnósatioo. a. Anticuerpos residualeas la interpretación enla lechey sueroquecomplican vacunados. b- Infecciónpersistente enIosanimales dequeda¡comovacunados. c. El estigrna delosanimales parael hombre d lnfecciosidad e. Restriccionesparasu empleopor la edady sexo. f La diñcultad enadministrardosisreducida.. s. Presentación ocasionaldeartritisy shockendotóxico, Manejo h muy cuidadosoparaevgitarla aparicióndevariantesmucoidesy de utilizaciónde eritntol.. En 1929McEwaqaislóunacep4rotuladaN"45,deunboünola cualencontróqueerareldivamente poreste y queelpasqie po o induciaprotección 20conserrr¿ estascaracterísticas; avimlante eÍ cobayos y a pesardesusventajas inestable motivofue denominad a cx4ia45120.Estacepaerarelativamente paralosbovinosdonderwertiaalaformamumsa. relativas paraovinosy caprinoserapatógena de!. 4g!!lgg!¡ el aislamienato deunaformalisaatenuada En 1957Elbergy Fance,reportaron cultivadaenunmedio dependiente estreptomicina llamadaCepa Revl, a partirdeunapoblación deficientedeantibiótico. podía reversión a formasürulentasaunque nopresentaba Estavacunaofrecióbuenaprotección, producir abortos,nivelesde anticuerposy ser excretadaen leche esporádicamente de paraestaespecie Comparativamente conlacepa19,lacepaRevI esmuchomejorinmunógeno la utilización deestavacunaenboünos. lo queesla C 19. Tambiénesprometedora a apalicar millones dedosisde!.gig biotipoI cepa2 como A partirde 1971seempezaron boünosy cerdosendosisde5 - 50 vacunaoralparala prevención debrucelosis enovejas,cabras, hastapornueve y anticuerpos x l0' UFCestimulando fijadoresdelcomplemento seroglutininas y al inyectarla subcut¡inea meses unaduracióndeinmunidadde4 5 añosenovejas.Extrañamente produciaabortoenovejasy cabras. o instramuscularmente por la eliminación Estacepa(8. suis)esmuyseguray soloesporádicamente sehacomprobado glutinantes posWacunales. y tansoloel2.2Yomostraba anticuerpos lechey descargas vaginales, que handemostrado yaqueestudios Desafortunadamente zuempleoenbovinosnoestanseguro, frente estacepanoprotegeboünosfrenteaB, abortus;ni quela C19protejaa estamisnaespecie porB. suis. a lainfección quelascepashomólogas deBrucella59 son vivassehademostrado Enrelaciónconlasvacunas pero erralgunos casos una especie, protectoras que las cepas hetérologas dentro de usualmente más por lashomólogas puedeninducirigualprotección a la conferida lascepashetérologas y devacunas o cepasdecampoparaboünos,cabras Sehapropuestolajerarquíainmunogénica es inmunogénica lajerarquía (8. neotomae ó B. suis> B 4bornrs.En cerdas ovejas, B. meütensis aprentemente B. suisó B. mulitensis> B. abortus. másprotectilasquelascepasnucoides. üsassongeneralmente Setn üsto tambiénquetodaslascÉpas.

(22) REQUISITOSDE BIOSEGURIDADY EFICACIA PARA LAS VACUNASVIVAS DE BRUCELLA a No producirenfermedaden animalesvacunados. b. Prevenirla enfermedaden ambossexosy en cualquieedad. c Prevenirabortoy esteriüdad. d. Suministrarproteccióna largoplazocontrala infeccióny e[ abortoconunasoladosisde campo queinterfierancon el diagnósticode infecciones e. No produciranticuerpospersistentes persistentes latrentes. f. No trasmitirsea otros animalesen el casode infecciones inüvo. tantoinütro como g. Serbiológicamente estables h. No serpatógenasparael hombre. i. No contamina¡leche,camey productosdenvados. j. Sersusceptibles de fermentación mediantetecnologías de crecimientoabundante cumplenen formaabsolutacontodos los Hastael momentoningunade lasvacunasdesarrolladas requisitosmencionados.. VACUNAS MUERTAS oleosospor Fra¡nden 1944,todoslos intentosrealizados Solohastala introducciónde adjunvantes paralaproducciónde vacunasmuertasresulta¡oninfructuosos. en bacterianossuspendidos Con el nuevoconceptoadjuvanticida(capacidadde los cnstituyentes humoralmmo celular)sepudioon desarrollar deaumentartanto[arespuesta unamezcladeagua-aceite dostiposde vacunacontrála brucelosis. que tenia,el inconveniente La ceparugosa45120empleadain üvo a pesarde no seraglutinogénica podíarecuperarsu patogenicidaden animalesvacunados.Los ensayosrealizadosen estacepa muertapor calor,no resistieronla competenciade la cepal9 en cuantoa nivelesde proteccióny con el manejode los animales. otrosproblemasen relaciónprincipalmente Se hicieronotros ensayospor parte de Renoux,con una cepade ! !qi!¡!Si! H38 muertapor formalina.Esta vacunafue utilizadaprimero en cabrasy posteriormentecontrala brucelosisen en el sitlo ademáslasde la 45130radicabaen reaccionesdesfavorables boünos y susdesventajas y persistentes de anticuerposdespués bacterianos de inyeccióny la respuestaa laslipopolisaráridos de dosvacunaciones. EVALUACION DE EFICACIA DE LAS VACUNAS La evaluaciónde la eficaciade unavacunasebasaen lassiguientesetapas:evaluaciónen animales inoculadasy evaluaciónen natrualesexperimentalmente de laboratorio,evaluaciónde huéspedes naturales. condiciones naturalesesel quetienemayorimportancia. En relacióncon la evaluaciónen huéspedes.

(23) En el casode la cepa19 el máodo de desafiomascorrienteesla inoculaciónpor üa conjuntival despuésde lo cual seesperaqueel 90-100%de los animalesseinfecten. El nivelde protecciónofrecidapor la vacunaen ensayoserealizafrentea un productobiológico corriente que sirva como control y frente a un grupo no vacunado. Los factoresa tener en qrenta parala evaluaciónson : a. Exámenbactaiológicos hechosal partoy sacrificiorcalizadosunoo dosmesesdespuésde la carga. b. En vez del aborto seutiliza el porc€ntq¡ede supervivenciade los temerosde lasvacasinoculadas. c. Indicede infección. d. Ratade infecciónen noüllas no preñadas. e. Respuestasserológicas. dosproblemas: En laevaluaciónde vacunaspuedenpresentarse de [osgruposde animalesinoculadosyvacunados. El primerode ellosradicaenlascomparaciones puedenno sersignificativos,siendo Si no seempleangruposmuygrandeslos an¡ifisisestadísticos al hacerlosuelenencontrarse necesa¡iorealizarvariasreplicasde losexperimentose inerplicablemente diferenciasmuy notables EI otro problemaen relacióncon estosesnsayosradicaen la falta de unauniformidaden lasdosis que debenser empleadasen los inóculos. Esto ha inducidoa variacionesen los resultadosque publicandiferentesautores.Por ejemploparaunacepaen particularunadosisde desafiomuy alta la protecciónofrecidaporunavacun4mientrasque unadosisbajapuedeofrecer puedesobrepasar rezultadosmuybuenosfrentea la rusmavacuna de defensay el Una vez realizadala inoculaciónseestablecela competenciaentrelos mecanismos inoculo.Sila resprestaesnipiüy fuerteel gérmanesnertralizadolocalmentea¡rtesde unadiserninacion sistánica. En condicionesnaturalesdecontaminaciór¡cuandola exposiciónno esel lülo la dosisinfectiv4 pueden s¡cederestimulosinfectantespequeñosloscualespuedenprovocarunosnivelesdeprotecciónaltos. En talescndicionespuedenhallarsediferenciassutilesentreexperimentossucesivoscontra una descargaexperimental.. PERSPECTIVASEN NUEVASVACUNASMUERTAS El mejoramientode vacunasa basede célulasmuefas hasidoinfructuosoa pesarde los esft¡erzos dosis,refuerzos,etc.mientrasno seconozcanexactamente hechoscondiferentescepasadjuvantes, estimulados. involucradosen la protecciónvacunalquedebenserespecificamente los mec¿nismos celulary humoral.Dependiendode la lasvacunasmuertasinducenrespuesta En térninosgenerales vaq.rnalos antiqrerposestandirigidoscontralos antígenossuperficiales$LPS o R-LPS y proteínas de membranaeKerna. 5?.

(24) Lasrespuestas muertas hansidoestudiadas in vivoe in vitro. Losresultados celulares a vacunas obtenidos noparece¡r estarrelacionados conla protección, lo cualdaebeinvestigarse enelfuturo.. ELABORACION DE VACUNASA PARTIR DE FRACCONES ANTIGENICAS quepresentantanto lasvacunasvivascomo lasmuertas,serealizan En vistade los inconvenientes actualmenteinvestigacionesparadesarrollaruna vacuna superiorponiendoénfasisen aquellas subunidades de la célulaque poseenuna mayorantigenicidad.Los resultadosobtenidoshastael vacunaciones momentosonmuy prometedores a nivelde animalesde laboratorio,siendonecesario rigurosasa nivel de campo.. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS I . Alton C.G 1996. Durationofthe imnunityproducedby Rev I Brucellamelitensisvaccine L Comp.PatholT6'241-253 2. BoletínAnualde SanidadAnimal.Subgerencia de Prevencióny Control,Diüsión de Sanidad y Epidemiológica, InformeTécnico,Bogotá,1990Animal,Unidadde Información Mgilancia 1993. 3. Forerode LL G. Ruedade C.8.,MariñoO., DelevisL. S. l99l.Purificaciónycaracterización de proteínasde mernbra¡aextemade Brucellaabortus Networkingin BrucellosisVaccine devacunas a partirdefracciones 4. GómezG.,MorenoL A.,UmañaG. 1991. Elaboración Reseach the UnitedNations antigenicas de Brucellaabartus Networkingin Brucella suis. university. P ags.33-47.. andconjuntival ofthe subcutaneus 5. NicolettiP, JonesL.M., BermanD.T. 1978.Comparison routeof vaccinationswith Brucellaabortusstraiq l9 Vaccinein adultcattle J. Am. Vet.Med Assoc73:1450-1456. 6 Principiosgeneralesde brucelosis,basesparala prevencióny controlen los humanos. Ambiental,SecciónZoonosis,Bogotrá" Miniesteriode Salud,Direcciónde Saneamiento Marzo 1987. sexta 7 BLOOD, D,E ; RADOSTIS,O.M.; I{ENDERSON,J A. 1987 MedicinaVeterinaria. Edición-México.D.F 1987. P 662-673 8. GALLEGO, M .l 1994.Taxonomiadel Género!¡ag!!q. CursoTeórico Prácticode Actualiz¿ciónen BacteriologiaVeterinaria:Diagnósticoe InvestigaciónBogotri D.C 1994. C.C. 1994.Interpretación 9 GALLEGO, M I ;MARÑO, J.O.C; RUEDA L.E.; GARCLA,, Teórico Práctico de Actualizaciónen del DiagnósticoSerológicoen BrucelosisBoüna. Curso BacteriologíaVeterinaria.Diagnósticoe lnvestigación.Bogotrá,D.C. 1994..

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TABLA 2  RESTJLTADOS  SEROLOGICOS  PROBABLES  EN UNA FINCACON DIEZ VACAS LIBRES DE BRUCELOSIS  Y EN UNA FINCA SIMILAR DONDE

TABLA 2

RESTJLTADOS SEROLOGICOS PROBABLES EN UNA FINCACON DIEZ VACAS LIBRES DE BRUCELOSIS Y EN UNA FINCA SIMILAR DONDE p.12

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