Polimorfismo genético do fator de crescimento vascular endotelial G1612A (rs10434) e manifestações neuropsiquiátricas em pacientes com lúpus eritematoso sistêmico

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Comocitaresteartigo:TahaS,etal.PolimorﬁsmogenéticodofatordecrescimentovascularendotelialG1612A(rs10434)emanifestac¸ões w w w . r e u m a t o l o g i a . c o m . b r

REVISTA

BRASILEIRA

DE

REUMATOLOGIA

Artigo

original

Polimorﬁsmo

genético

do

fator

de

crescimento

vascular

endotelial

G1612A

(rs10434)

e

manifestac¸ões

neuropsiquiátricas

em

pacientes

com

lúpus

eritematoso

sistêmico

Sherif

Taha

a

_,

_Sherif

_Mohammed

_Gamal

b,∗

_,

_Mohamed

_Nabil

c

_,

_Nahla

_Naeem

b

_,

Dalia

Labib

d

_,

_Ibrahim

_Siam

e

_e

_Tamer

_Atef

_Gheita

b

a_Cairo_University,_Faculty_of_Medicine,_Chemical_Pathology_Department,_Cairo,_Egito b_Cairo_University,_Faculty_of_Medicine,_Rheumatology_Department,_Cairo,_Egito

c_Beni-Sweif_University,_Faculty_of_Medicine,_Internal_Medicine_Department,_Beni-Sweif,_Egito d_Cairo_University,_Faculty_of_Medicine,_Neurology_Department,_Cairo,_Egito

e_National_Research_Center,_Internal_Medicine_Department,_Cairo,_Egito

informações

sobre

o

artigo

Históricodoartigo: Recebidoem18demaiode2016 Aceitoem29deagostode2016 On-lineemxxx Palavras-chave: LES VEGF GeneG1612A(rs10434) Polimorﬁsmo Manifestac¸õesneuropsiquiátricas

r

e

s

u

m

o

Objetivo:Investigararelac¸ãoentreopolimorﬁsmogenéticodofatordecrescimento

vascu-larendotelial(VEGF)empacientescomlúpuseritematososistêmico(LES)emanifestac¸ões

neuropsiquiátricasrelacionadascomolúpus.

Pacientese métodos:Foramrecrutados60pacientesadultoscomLESnosdepartamentos

deReumatologiaeNeurologiadehospitaisuniversitáriosdoCairoeclassiﬁcadosemdois

grupos;grupoA: 30pacientescommanifestac¸õesneuropsiquiátricas(LESNP)egrupoB:

30pacientessemmanifestac¸õesneuropsiquiátricas.Genotipou-seoSNPG1612A(rs10434)

dogeneVEGFemambososgruposporreac¸ãoemcadeiadapolimeraseemtemporeal

(RT-PCR).

Resultados: Foiencontradadiferenc¸aestatisticamentesigniﬁcativanasfrequências

geno-típicasealélicasentreosdoisgrupos(AA[70%vs.13,3%,p<0,001]eGG[10%vs.66,7%,

p<0,001]).

Conclusão:OpolimorﬁsmonogenequecodiﬁcaoVEGFpodeestarassociadoaoaumento

naincidênciadelúpusneuropsiquiátricoempacientescomLES.

licenc¸aCCBY-NC-ND(http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/).

∗ _Autor_para_{correspondência}_.

E-mail:sherif775@hotmail.com(S.M.Gamal).

http://dx.doi.org/10.1016/j.rbr.2016.08.005

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Comocitaresteartigo:TahaS,etal.PolimorﬁsmogenéticodofatordecrescimentovascularendotelialG1612A(rs10434)emanifestac¸ões

Vascular

endothelial

growth

factor

G1612A

(rs10434)

gene

polymorphism

and

neuropsychiatric

manifestations

in

systemic

lupus

erythematosus

patients

Keywords: SLE VEGF G1612A(rs10434)gene Polymorphism Neuropsychiatricmanifestations

a

b

s

t

r

a

c

t

Aim: Toinvestigatetherelationbetweenvascularendothelialgrowthfactor(VEGF)gene

polymorphisminsystemiclupuserythematosus(SLE)patientsandlupusrelated

neuropsy-chiatricmanifestations.

Patientsandmethods: SixtyadultSLEpatientsrecruitedfromtheRheumatologyand

Neu-rologydepartmentsofCairoUniversityhospitalswereclassiﬁedintotwogroups;GroupA:

30patientswithneuropsychiatricmanifestations(NPSLE)andGroupB:30patientswithout.

ForbothgroupstheSNPG1612A(rs10434)oftheVEGFgenewasgenotypedbyrealtime

polymerasechainreaction(RT-PCR).

Results: Statisticallysigniﬁcantdifferencewasfoundingenotypeandallelefrequencies

betweenbothgroups(AA[70%vs13.3%,p<0.001]andGG[10%vs66.7%,p<0.001]).

Conclusion: PolymorphisminthegenecodingforVEGFmaybeassociatedwithincreased

incidenceofneuropsychiatriclupusinSLEpatients.

BY-NC-NDlicense(http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/).

Introduc¸ão

Olúpuseritematososistêmico(LES)éumadoenc¸aautoimune1

emquefatoresgenéticoseambientaisdesempenhampapéis

signiﬁcativosnasuapatogênese.2_Como_{consequência}_da_sua

imunopatologiacomplexa,queenvolveaproduc¸ãode

autoan-ticorposeavasculitedocomplexoimunecomdanosacélulas

endoteliais,3_diferentes_órgãos_e_vasos_sanguíneos_podem_ser

afetadospelainﬂamac¸ãocrônica.4

Odanoeaativac¸ãodecélulasendoteliaisvascularessão

osfatoresqueiniciamapatogênesedoLES.5_O_fator_de

cres-cimentovascularendotelial(VEGF)éummoduladorchaveda

angiogênese,proliferac¸ãoemigrac¸ãodecélulasendoteliais,

quimiotaxiaehiperpermeabilidadecapilar6_;_{veriﬁcou-se}_que

estásuprarreguladoemumasériededoenc¸asdocolágeno,

incluindooLES.7_Além_disso,_relatou-se_que_níveis_elevados

deVEGFpodemestar associadosà atividadeda doenc¸ano

LES.3,4_Além_disso,_o_{polimorﬁsmo}_no_gene_VEGFR2_já_foi

cor-relacionadocom doenc¸as vascularesepode inﬂuenciar na

integridade,reparac¸ãoefunc¸ãodoendotélio.8

Alémdaassociac¸ãodosníveisdeVEGFcomaatividadeda

doenc¸anoLES,encontrou-seaindaqueoVEGFestá

correla-cionadocomoutrasmanifestac¸õesdadoenc¸a,comoanefrite

lúpica,ecomumamaiorespessuramédiadastúnicasmédia

eíntimadacarótida9,10_e_hipertensão_pulmonar11_e

inversa-mentecorrelacionadocomacontagemdeplaquetas.7_Apesar

detersidorelatadoqueoanticorpoantiproteínaPribossomal

possainﬂuenciarnapatologiadolúpusneuropsiquiátricopor

meiodaelevac¸ãonaproduc¸ãodeVEGFpelosmonócitos,12_a

associac¸ãoentreolúpusneuropsiquiátricoeoVEGF

perma-neceobscura.

Esteestudotemcomoobjetivoinvestigararelac¸ãoentreo

polimorﬁsmodenucleotídeoúnico(SNP)G1612A(rs10434)do

VEGFempacientescomLESemanifestac¸ões

neuropsiquiátri-casrelacionadascomolúpus.

Pacientes

e

método

Este éumestudotransversal queincluiu 60pacientes que

atendiam aoscritérios revisadosatualizadosda ACRparaa

classiﬁcac¸ão doLES.13 _Foram _recrutados₃₀ _pacientes _com

manifestac¸ões neuropsiquiátricasdoLES(LESNP)(GrupoA)

dosdepartamentosdeReumatologiaeNeurologiade

hospi-taisuniversitáriosdoCairodemaiode2013amaiode2015.As

manifestac¸õesneuropsiquiátricasdoLES(LESNP)foram

deﬁ-nidaspelapresenc¸adeacidentevascularencefálicoatualou

pregresso,ataqueisquêmicotransitório,psicose,convulsões,

confusão mental e/ou disfunc¸ão cognitiva.

Selecionaram--se outros30pacientes consecutivossemenvolvimentoNP

(GrupoB)paracorresponderaomesmonúmerodepacientes

com envolvimento NP. Obtiveram-seconsentimentos

infor-mados dospacientes eo estudo foi aprovado pelo comitê

de ética local. Fez-se em todos os pacientes uma

anam-nese abrangenteeumexameclínicocompleto,comênfase

especial no envolvimento neuropsiquiátrico. Excluíram-se

doestudopacientesqueapresentassemdoenc¸arenalativa,

hipertensão pulmonar, hipertensão arterial, artrite ativa e

trombocitopenia.

Em todos os pacientes, o SNP G1612A (rs10434) na

região 3’ não traduzida (3’-UTR) do gene VEGF foi

genoti-pado por reac¸ão em cadeia da polimerase em tempo real

(RT-PCR).

IsolamentodoDNA

Isolou-se o DNA genômicode leucócitosdo sangue

perifé-rico com okit High PurePCR TemplatePreparation (Roche

DiagnosticsGmbH,RocheAppliedScience,68298Mannheim,

Alemanha).Oisolamentofoifeitodeacordocomasinstruc¸ões

(3)

GenotipagemdoVEGFporRT-PCR

APCRemtemporealfoifeitapeloCarousel-BasedSystem,

Lightcycler2.0,comokitmastermix,kitLightcyclerfaststart

MasterHybprobe(RocheDiagnosticsGmbH,68298Mannheim,

Alemanha),emconjuntocomokitLightSNiPrs10434VEGFA

(TIBMOLBIOLGmbH-Eresburgstrasse22-23,D-12103Berlin,

Alemanha)quecontinhaosprimersnecessáriosparaareac¸ão.

O kit Lightcycler fast start Master Hybprobe é um Hot

StartReactionMixparaPCRqueusasondasHybProbecomo

formatodedetecc¸ão.OformatoLightCyclerHybProbe

baseia--senoprincípiodatransferênciadeenergiaderessonância

de ﬂuorescência (FRET), em que sondas oligonucleotídicas

especíﬁcas de duas sequências, marcadas com diferentes

corantes(doadoresereceptores),foramadicionadasàmistura

de reac¸ãoalém dosprimers de PCR. Aquantidade de

ﬂuo-rescênciaproduzidapelamarcac¸ãonasondaédiretamente

proporcionalàquantidadedeDNA-alvoproduzidoduranteo

processodePCR.Areac¸ãodePCRfoifeitadeacordocomas

instruc¸õesdofabricanteefoiacompanhadapelaanáliseda

curvademelting(curvadefusão).

Análiseestatística

Os dados foram descritos estatisticamente em termos de

média±desvio padrão (± DP), mediana e intervalo, ou

frequências(númerodecasos)epercentagens,quando

apro-priado. Usou-se o teste de qui-quadrado para comparar

variáveisqualitativas. Acorrelac¸ãoentre osparâmetrosfoi

feita pormeio do coeﬁciente de correlac¸ãode Pearson. As

diferenc¸as entre os grupos foram consideradas

estatistica-mentesigniﬁcativasemcasodevaloresdepinferioresa0,05e

altamentesigniﬁcativosseinferioresa0,01.Todososcálculos

estatísticosforamfeitoscomaversão16doprogramaSPSS

(StatisticalPackagefortheSocialScience;SPSSInc.,Chicago,IL,

EUA)paraWindows.

Resultados

Osdadosdemográﬁcoseosparâmetroslaboratoriaisdo

pre-senteestudosãoapresentadosnatabela1.Osgruposforam

Tabela1–Característicasdemográficaseduração dadoençanospacientescomLESdogrupoA(LESNP) egrupoB(semmanifestaçõesneuropsiquiátricas)

GrupoA(n=30) GrupoB(n=30) p Idade Intervalo 19-52 21-55,0 0,3 Média±DP 31,9±7,6 34,3±8,6 NS Sexo Masculino 1(3,3) 3(10) 0,6 Feminino 29(96,7) 27(90) NS Duraçãodadoença Intervalo 1,0-12 1,0-11 0,9 Média±DP 5,5±3,5 5,5±3,3 NS NS,nãosignificativo.

pareados poridade esexo,semdiferençassignificativasna duraçãodadoença(p=0,9).

As manifestac¸ões neuropsiquiátricas nos pacientes do

grupoA(LESNP)sãodescritasaseguir:nove(30%) apresen-tavamdiagnósticodepsicose,oito(26,7%)tinhamconvulsões, cinco(16,7%)tiveramataquesisquêmicostransitórios(AIT), quatro(13,3%)tiveramacidentevascularencefálico,três(10%) tinhammielitetransversa(TM)eum(3,3%)tinhadepressão. Asmanifestac¸õesclínicasdogrupoBforam:manifestac¸ões

mucocutâneas, artralgia, leucopenia, anemia hemolítica e

serosite.

As características laboratoriais, incluindo a distribuic¸ão

genotípica da populac¸ão do estudo, são mostradas na

tabela2.

Discussão

OLESéumadoenc¸aautoimunemultissistêmica.14_No_lúpus,

a inflamação sistêmica crônica leva à ativação de células

endoteliaisvascularesqueporsuavezlevaaumaumento

substancialemfatoresangiogênicosquedesempenhamum

papel signiﬁcativo na permeabilidade vascular, no

cresci-mento vascular e na resposta inﬂamatória, o que leva à

destruic¸ãodosvasossanguíneoseadisfunc¸ãodeórgãos

inter-nosgrave.15

OVEGFtambémestáenvolvidonafunc¸ãorenale

pulmo-nar,alémdeatuarcomoumfatordesobrevivênciaparaas

célulasneuronais.16_Os_{polimorﬁsmos}_em_genes_que_regulam

aangiogênesepodemafetararespostaaumestímulo

angi-ogênicoe,assim,afetarasusceptibilidadee/ouaprogressão

daangiogênesedependentedadoenc¸a.Emestudospréviosde

genes,ospolimorﬁsmosnoVEGFereceptordofatorde

cres-cimentovascularendotelial2(VEGFR2)estiveramclaramente

associadosaodesenvolvimentodedoenc¸asdependentesde

angiogênese.17

OsníveiscirculantesdeVEGFsãoaltamentehereditários;18

noentanto,ogeneVEGFéaltamentepolimórﬁco,com

cente-nasdepolimorﬁsmosatualmentedescritosnobancodedados

SingleNucleotidePolymorphism(dbSNP).Issoincluipelomenos

trêspolimorﬁsmosquesãorelativamentecomunsepodem

afetaraexpressãodoVEGF.Considerou-sequeopolimorﬁsmo

deinserção/deleção(I/D)naposição-2549da região

promo-toraeopolimorﬁsmo-634G/C(rs2010963)localizadono5’-UTR

estãoassociados aumaumentonaexpressãodoVEGF.19 _O

polimorﬁsmo936C(rs3025039)localizadono3’UTRtambém

estáassociadoaníveisséricossubstancialmenteaumentados

deVEGF.20

Emdecorrênciadaimplicac¸ãodoVEGFcomoum

modu-lador da angiogênese, proliferac¸ão e migrac¸ão de células

endoteliais,oobjetivodopresenteestudofoiinvestigara

pos-sívelrelaçãoentrepolimorfismosnogenequecodificampara

oVEGFemanifestac¸õesneuropsiquiátricasempacientescom

LES.

Nopresenteestudo,encontrou-seumadiferenc¸a

estatis-ticamentesigniﬁcativanasfrequênciasgenotípicasealélicas

entreos pacientesdogrupoA(aquelescom manifestac¸ões

neuropsiquiátricas) e pacientes do grupo B (aqueles sem

envolvimentoneuropsiquiátrico)(AA[70%vs.13,3%,p<0,001]

(4)

Comocitaresteartigo:TahaS,etal.PolimorfismogenéticodofatordecrescimentovascularendotelialG1612A(rs10434)emanifestações Tabela2–ComparaçãoentreosdadoslaboratoriaisempacientescomLESdogrupoA(LESNP)egrupoB(sem

manifestac¸õesneuropsiquiátricas) GrupoA(n=30) GrupoB(n=30) p ANA +ve 28 (93,3) 25 (83,3) 0,4 −ve 2 (6,7) 5 (16,7) NS DNA +ve 11 (36,7) 10 (33,3) 1 −ve 19 (63,3) 20 (66,7) NS GenótipoVEGF AA 21 (70) 4 (13,3) <0,001 AG 6 (20) 6 (20) 1 GG 3 (10) 20 (66,7) <0,001 VHS 48,8±32,3(5-12) 48,2±34,9(12-150) 0,9 Hb 12,3±1,4(9,5-15,3) 12,3±1,5(9,3-15,3) 0,9 CL 8,4±2,5(3,8-16) 7,6±1,5(3,8-9,5) 0,1 PLT 246,2±77,4(80-466) 229,8±42,3(130-321) 0,3

ANA,anticorposantinucleares;CL,contagemdeleucócitos;Hb,hemoglobina;PLT,contagemdeplaquetas;VEGF,fatordecrescimentovascular endotelial;VHS,velocidadedehemossedimentac¸ão.

Osresultadossãoapresentadoscomonúmero(%)oumédia±DP(intervalo).

Embora nenhum dos estudos anteriores tenha focado

no polimorﬁsmo do gene VEGF e sua associac¸ão com o

LESNP,estudou-searelac¸ãoentreessepolimorﬁsmoeoutras

manifestac¸ões relacionadas com o lúpus; descreveu-se a

relac¸ão signiﬁcativa do gene (VEGF) +405GG com a nefrite

lúpica.21 _Da _mesma _maneira, _a _relac¸ão _entre _os _seis _SNP

do gene VEGF (rs2010963, rs3024994, rs3025000, rs3025010,

rs3025035ers833070)e asusceptibilidade aoLESno norte

daChinafoipesquisadaem44pacientes.22_O_estudo_relatou

queafrequênciadoalelo Ars833070foisigniﬁcativamente

maiornospacientes comLESdoquenoscontroles eoGG

rs833070diminuiuasusceptibilidadeàartriteempacientes

comLES.

Limitac¸ões

O pequeno número de pacientes incluídos no estudo e a

ausênciadeestudossemelhantescomfoconarelac¸ãoentre

o polimorﬁsmo do gene VEGF e manifestac¸ões

neuropsi-quiátricasrelacionadascomolúpussãoaslimitac¸õesmais

importantesdesteestudo.Noentanto,estetrabalhopodeser

considerado um estudo piloto; ele pode abrir portas para

o futuro, para estudos feitos em grandes populac¸ões

para estabelecer o impacto real do polimorﬁsmo

gené-ticodoVEGFnapatogêneseounascaracterísticasclínicasdas

manifestac¸õesneuropsiquiátricasdoLES.Alémdisso,outros

estudoscom avaliac¸ãodosníveisséricosdeVEGFem

paci-entes com manifestac¸ões neuropsiquiátricas poderiam ser

benéﬁcos.

Mensagem

chave

OSNPG1612A(rs10434)dogeneVEGFpoderepresentarum

aumentonasusceptibilidadeaoenvolvimento

neuropsiquiá-tricoempacientescomLES.

Conﬂitos

de

interesse

Osautoresdeclaramnãohaverconﬂitosdeinteresse.

r

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e

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ê

n

c

i

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s

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