Perea, M.
Facultad de Ciencias Exactas y Naturales, Universidad Nacional de Catamarca.
Resumen.
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La investigación realizada se propone determinar la viabilidad, a las 24 horas de efectuada la cosecha, de semillas de Myrcianthes cisplatensis (Cam.) Berg y las mejores condiciones de germinación en laboratorio. Se realizaron ensayos de viabilidad a 24 horas de cosechadas las semillas, para lo cual se separaron los cotiledones y se los sumergió en una solución al 1 % de 2-3,5 trifenil cloruro de tetrazolio durante 48 horas a 30 ºC constantes y se observaron los resultados.
A 24 horas de la cosecha se realizan ensayos de germinación simulando las condiciones ambientales en las que habitualmente germinan a cam-po (25 ºC y oscuridad). En otros ensayos se variaron la temperatura de incubación; efectos combinados de luz y temperatura de incubación; dis-tintas intensidades de luz, lo cual se logró con una lámpara mezcladora y luxómetro. Se realizaron además ensayos con preincubación a distintas temperaturas.
Los resultados obtenidos fueron:
• La viabilidad a las 24 horas de cosecha es 100 % .
• La simulación de las condiciones de germinación permitió obte-ner 40 % de germinación.
• En ensayos en los que se vario la temperatura de incubación se llegó a obtener 69,3 % a 7 ºC a los 26 días, mientras que con tratamiento de 700 lux a 30 ºC se obtuvo 82 % de germinación contra 20 % en oscuridad y a la misma temperatura.
• Los tratamientos de preincubación en un rango entre 25 ºC y 90 ºC no tienen variación significativa.
Se concluye que las semillas de M. cisplatensis son fotoblásticas y pueden ser inducidas a germinar con la aplicación de bajas temperaturas y/o iluminación.
M. cisplatensis tiene un óptimo térmico para la germinación entre 7 ºC
y 25 ºC, reacciona positivamente a la luz y negativamente a la oscuridad.
Palabras Claves: Germinación. Myrcianthes. Viabilidad.
Abstract.
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In the Chaco Serrano, district of the east of the province of Catamarca, the Myrcianthes cisplatensis (Cam.) Berg, grows and develops from very reduced or limited populations towards insolated individuals. This is the reason why this work tries to determine the viability of mature seeds, to detect the possible states of dormition, the more adequate method to break it and the conditions of incubation that permit to abtain the greatest percentages of germination.
Introducción:
Introducción:
Introducción:
Introducción:
Introducción:
Myrcianthes cisplatensis, n. v.:“Güil”, –“vil vil”– “sacha mato”) es un árbol inerme de 4-8 metros de altura, tronco hasta 40 cm de diámetro. Hojas simples opuestas, lámina lanceolada; flores hermafroditas llevadas por pe-dúnculos axilares solitarios terminados en dicasios. Fruto carnoso, subgloboso de 7 mm de diámetro. Semillas 1-3 de color castaño reniforme de 4 mm de largo con 2 cotiledones plano convexos (Digilio, A. P. L. y Legname, P. 1967). Se trata de un árbol que crece y se desarrolla en el distrito Chaco Serrano (Cabrera, 1976) al norte y este de la provincia de Catamarca. La importancia de Myrcianthes
cisplatensis radica en el
aprovecha-miento que se hace de la especie como forraje para ganado menor durante la estación seca.
En el rastreo bibliográfico realiza-do sólo se encontró un trabajo denomi-nado “Estudio para la determinación de la edad en Myrcianthes cisplatensis”; realizado en Córdoba por la Bióloga María Alejandra Losano en el año 1984. En el trabajo antes citado se sugiere que la propagación agámica sería una de las estrategias más importantes para la supervivencia de las poblaciones aunque destaca la presencia de plantas aisladas sin indicar su probable origen.
Sobre aspectos fisiológicos de la germinación de semillas, no se regis-tran trabajos, salvo comunicación epistolar con Alicia Rotman, (CONI-CET), Universidad Nacional de Jujuy. Facultad de Ciencias Agrarias, quien hizo germinar semillas.
Son objetivos del presente trabajo: • Determinar la viabilidad de semillas a las 24 horas de cosechadas.
• Realizar ensayos de germina-ción bajo distintas condicio-nes ambientales naturales y artificiales que permitan la obtención de mayor número de semillas germinadas.
Materiales y Métodos:
Materiales y Métodos:
Materiales y Métodos:
Materiales y Métodos:
Materiales y Métodos:
Búsqueda bibliográfica perma-nente y comunicaciones personales. Recolección de frutos maduros y traslado a laboratorio para la rea-lización de los siguientes ensayos: 1. Pruebas de Viabilidad:
A las 24 horas de cosechadas las semillas se separaron 4 lotes de 50 semillas cada uno, se les quitó el epicarpio membranoso y el mesocar-pio carnoso. Luego se procedió a cor-tar las semillas con un escalpelo desde el extremo hacia la base, a lo largo de la línea media, paralelo al plano del embrión sin llegar a sepa-rar ambos cotiledones.
Los 4 lotes se colocaron en cajas de Petri. A dos de estos lotes (tra-tamiento A) se los sumergió por espacio de 48 horas en una solución al 1% de 2-3,5 trifenil cloruro de tetrazolio a pH 6. Las cajas fueron cubiertas y colocadas en un germi-nador a 30 ºC constantes.
Con los restantes dos lotes (tra-tamiento B) se procedió de idéntica manera pero fueron sumergidas en agua destilada (Perry, D. A. 1981).
2. Ensayo de Germinación:
Se realizó en primer término un ensayo de germinación con cuatro repeticiones de 50 semillas cada uno, simulando condiciones ambientales en las que germinan naturalmente (ambiente 25 ºC y en oscuridad). 3. Efecto de las Distintas
Tempera-turas de Incubación:
Debido a los bajos porcentajes de germinación se plantea la hipóte-sis de que los mismos pueden deber-se a la necesidad temperatura de incubación distinta a la utilizada.
El siguiente ensayo de germina-ción se realizó tomando como base la hipótesis antes formulada y consistió en los siguientes tratamientos:
• Oscuridad 7 ºC Constantes. • Oscuridad 30 ºC Constantes. • Oscuridad 25 ºC Ambiente. Todos los tratamientos se reali-zaron con tres (3) repeticiones de 50 semillas cada una, sin pericarpio ni mesocarpio, puestas a germinar en cajas de Petri con papel de filtro y 10 centímetros cúbicos de agua destila-da, los tratamientos se cubrieron con un plástico negro y de esa manera se colocaron a incubar a las tempe-raturas correspondientes.
Los resultados se registraron hasta los 25 días.
En base a los resultados obte-nidos se realizó el siguiente análi-sis estadístico.
a) Grafico de resultados finales. b) Análisis de varianza (diseño completamente aleatorizado).
4. Efecto de la Luz.
Por haber observado germinación en semillas en condiciones de ilumi-nación (cauce de arroyos), se realiza un ensayo para determinar si ésta tiene efecto sobre la germinación.
Tratamientos:
• Luz 30 ºC Constantes. (700 Lux)
• Oscuridad 30 ºC Constantes. Los tratamientos se realizaron con tres (3) repeticiones de 50 semillas cada una, sin epicarpio ni mesocarpio, puestas a germinar en cajas de Petri con papel de filtro y 10 centímetros cúbicos de agua destilada, para el tra-tamiento de luz se utilizó una lámpara mezcladora de 150 W, lográndose una intensidad lumínica de 700 lux cons-tantes. Para el tratamiento de oscuri-dad se cubrieron las cajas de Petri con un plástico negro.
Se registraron los resultados hasta los 25 días.
Con los resultados obtenidos se graficaron los porcentajes finales y se realizó análisis de varianza. 5. Germinación a Distintas
Intensi-dades de Luz:
En base a los resultados obteni-dos en el ensayo de oscuridad e ilu-minación se realizó un nuevo ensayo de iluminación con distinta intensi-dad de esta última, lo cual se logró con una lámpara mezcladora varian-do la distancia a la fuente de luz. Tratamientos:
• Nivel (1) con una intensidad lumínica de 700 Lux.
• Nivel (2) con una intensidad lumínica de 2.270 Lux. Los valores de luminosidad se con-trolaron con un Luxómetro marca LX-101 LUX METER de sensibilidad hasta 100.000 Lux. Para homogeneizar la tem-peratura en 30 ºC se debió recurrir a la utilización de un ventilador durante los 24 días que duró el ensayo.
Con los resultados obtenidos se realizó análisis estadístico.
6. Efecto de las Distintas Tempera-turas del Agua de Imbibición:
A fin de comprobar si existe al-gún tipo de dureza en el tegumento se realiza un ensayo con distintas temperaturas de preincubación du-rante 30 minutos: Tratamientos: 1- preincubación 25 ºC inicial. 2- preincubación 40 ºC inicial. 3- preincubación 50 ºC inicial. 4- preincubación 60 ºC inicial. 5- preincubación 70 ºC inicial. 6- Sin preincubación (control
seco).
En todos los casos se utilizaron semillas sin epicarpio ni mesocarpio, con 2 (dos) repeticiones de 50 semi-llas para cada tratamiento, puestas, luego de la inmersión inicial, en cajas de Petri sobre papel de filtro y con 10 (diez) centímetros cúbicos de agua destilada; luego fueron incubadas con una intensidad lumínica de 700-800 lux y a temperatura ambiente (aproxi-madamente 25 ºC).
Los resultados obtenidos fueron sometidos a análisis estadísticos.
Resultados:
Resultados:
Resultados:
Resultados:
Resultados:
1. Prueba de Viabilidad:A las 48 horas de realizado el test de viabilidad se efectuó el con-trol con los siguientes resultados:
Tratamiento “A”: 100 % coloreado completo.
Tratamiento “B”: 0 % coloreado.
2. Ensayo de Germinación:
Se obtuvo un 40 % de germina-ción que comparado con el 100 % de viabilidad obtenido en el ensayo de viabilidad, resulta bajo por lo que se trata de optimizar este porcentaje.
3. Efecto de las Distintas Tempera-turas de Incubación: Ver Gráfico Nº 1. Ver Tabla Nº 1. 4. Efecto de la Luz: Ver Gráfico Nº 2. Ver Tabla Nº 2.
5. Germinación a Distintas Intensi-dades de Luz
Ver Gráfico Nº 3. Ver Tabla Nº 3.
6. Efecto de las Distintas Tempera-turas del Agua de Imbibición.
Ver Gráfico Nº 4. Ver Tabla Nº 4.
TTTTTabla Nº 1:abla Nº 1:abla Nº 1:abla Nº 1:abla Nº 1: Análisis de Varianza del efecto de las distintas temperaturas de incuba-ción sobre la germinaincuba-ción de Myrcianthes cisplatensis.
Fuente de Suma de Grados Cuadrado F calculado F requerido variación cuadrados de libertad medio 0,01% 0,05%
(SC) (GL) (CM) Entre 1188,65 2 594,32 2,246 13,2 5,79 tratamientos Dentro de 1323,4 5 264,6 tratamiento (EE) Total 2512,05 7 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 % de ge rm in a c ión
Oscuridad - 7 ºC Ctes. Ocuridad -30º Ctes. Oscuridad - 25 ºC Ctes. Tratamie ntos
Graf GrafGraf Graf
Grafico Nº 1ico Nº 1ico Nº 1ico Nº 1... Efecto de las distintas temperaturas de incubación sobre la germinaciónico Nº 1 de Myrcianthes cisplatensis.
Discusión.
Discusión.
Discusión.
Discusión.
Discusión.
La prueba de tetrazolio es una de las más empleadas tanto por su simplicidad técnica como por la posi-bilidad de repetirlo. Este método se basa en la estimación bioquímica de la actividad metabólica de una semi-lla en estado de latencia. Las sales de tetrazolio indican la actividad de las enzimas del grupo de las deshi-drogenasas. El compuesto incoloro es
absorbido por la semilla y reducido por las deshidrogenasas a un com-puesto rojo, estable y no difusible, caracterizado como formazán. En ausencia de enzimas activas, los tejidos embrionarios no se tiñen.
La positividad de los ensayos de tetrazolio realizados nos indica la pre-sencia de enzimas respiratorias acti-vas, lo que implica actividad metabó-lica y por lo tanto la viabilidad de las
Fuente de Suma de Grados Cuadrado F calculado F requerido variación cuadrados de libertad medio 0,01% 0,05%
(SC) (GL) (CM) Entre 1777,2 1 1777,2 ** 34,1 10,1 tratamientos 141 Dentro de 37,86 3 12,6 tratamiento (EE) Total 1815,06 4
TTTTTabla Nº 2:abla Nº 2:abla Nº 2:abla Nº 2:abla Nº 2: Análisis de Varianza del Efecto de la Luz sobre la Germinación de
Myrcian-thes cisplatensis.
semillas. Ensayos preliminares demos-traron que las semillas pierden viabi-lidad progresivamente hasta llegar a 0 % de germinación a los 15 días lo cual se debería a la baja humedad y elevada temperatura ambiente en la que fueron almacenadas las semillas. Desde un punto de vista ecoló-gico la mayor humedad y menor tem-peratura existente en quebradas y hondonadas contribuye a crear un ambiente más propicio para
mante-ner viables por más tiempo a las semillas y de este modo facilitar que estas encuentren condiciones ópti-mas para la germinación.
El primer ensayo de germina-ción realizado en el cual se intenta simular condiciones ambientales en las que germinarían las semillas (de acuerdo a observaciones realizada en el campo), da como resultado un bajo porcentaje de germinación (40 %), que no se corresponde con los por-Graf
Graf Graf Graf
Grafico Nº ico Nº ico Nº ico Nº ico Nº 22222... Efecto de la luz sobre la germinación de Myrcianthes cisplatensis.
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 % de ger m in aci ón Oscuridad + 30 ºC. Ctes. Luz + 30ºC. Ctes. Tratamientos
centajes de viabilidad obtenidos con ensayo de tetrazolio, lo cual implica que existen algunos otros factores no tomados en cuenta en este primer ensayo, de manera tal que los próxi-mos ensayos están dirigidos a deter-minar cuáles son los factores am-bientales en cuestión. Es así que se
comienza haciendo variar las tempe-raturas de incubación (gráfico Nº 1) que arroja diferencias, aunque no son estadísticamente significativas, (Ta-bla Nº 1) entre uno y otro tratamien-to. Se observa un mayor porcentaje de germinación en semillas someti-das a la acción de bajas temperatu-TTTTTabla Nº 3:abla Nº 3:abla Nº 3:abla Nº 3:abla Nº 3: Análisis de Varianza del Efecto de las Distintas Intensidades de Luz Sobre
la Germinación de Myrcianthes cisplatensis.
Fuente de Suma de Grados Cuadrado F calculado F requerido variación cuadrados de libertad medio 0,01% 0,05%
(SC) (GL) (CM) Entre 121,01 1 121,01 * 98,4 18,5 tratamientos 27,6 Dentro de 8,771 2 4,38 tratamiento (EE) Total 129,78 3 Graf GrafGraf Graf
Grafico Nº ico Nº ico Nº ico Nº 3ico Nº 3333... Efecto de las distintas intensidades de luz sobre la germinación de
Myrcianthes cisplatensis. 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 P o rc e n ta je d e g e rm in a c ió n
NIVEL 1 ( 700 LUX) NIVEL 2 (2.270 LUX) Tratamiento
ras, lo cual hace suponer la presen-cia de sustanpresen-cias inhibidoras de la germinación que al ser sometidas a la acción del frío son destruidas y el proceso de germinación se desenca-dena, aunque más lentamente que en los otros tratamientos. Todos los tratamientos alcanzan el máximo de germinación al noveno día lo cual demuestra que la constante de este
caso (oscuridad) puede ser la respon-sable de esta característica común. Las semillas maduras de M.
cis-platensis, poseen una considerable
cantidad de grasas y clorofila en los cotiledones que cubren el embrión, característica esta de especial impor-tancia en la identificación de sí las semillas de una determinada especie son o no fotolatentes (Cresswell y TTTTTabla Nº 4:abla Nº 4:abla Nº 4:abla Nº 4:abla Nº 4: Análisis de Varianza del Efecto de las Distintas Temperaturas del Agua de
Imbibición sobre la Germinación.
Fuente de Suma de Grados Cuadrado F calculado F requerido variación cuadrados de libertad medio 0,01% 0,05%
(SC) (GL) (CM) Entre 269,26 5 53,852 4,60 8,75 4,39 tratamientos Dentro de 70,14 6 11,69 tratamiento (EE) Total 339,4 11 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 Porcentaje de germinación IMERSION 25 ºC SIN IMERSION IMERSION 40 ºC IMERSION 50 ºC IMERSION 60 ºC IMERSION 90 ºC Tratamientos Graf Graf Graf Graf
Grafico Nº ico Nº ico Nº ico Nº ico Nº 44444... Efecto de las distintas intensidades de luz sobre la germinación de
Grime, 1981). Este tipo de semillas requieren de luz para germinar y es posible una interacción con la tempe-ratura, razón por la cual se realiza un ensayo para comprobarlo.
El análisis estadístico de los da-tos y la observación del gráfico Nº 2, evidencian una diferencia altamente significativa (Tabla Nº 2) entre el tra-tamiento oscuridad 30 ºC constantes y luz 30 ºC constantes, lo cual evi-dencia la intervención del fitocromo en el proceso de germinación de M.
cisplatensis. Por otro lado es sabido
que la temperatura casi no produce efectos en la interconversión fotoquí-mica de Pr y Pfr, pero las reacciones químicas controladas por Pfr, que influyen en su destrucción, son muy sensibles a este factor.
Existen antecedentes (Salisbury y Ross 1994) de otras especies como
Latuca sativa, en la cual las
tempera-turas frías de 10 a 15 ºC, le permiten germinar incluso sin tratamiento de luz. Otro ejemplo lo constituye el pas-to azul Kentucky, Poa pratensis, en el que la alternancia de temperaturas entre 15 y 25 ºC sustituye a la luz en la estimulación de la germinación.
La comparación entre los gráfi-cos Nº 1 y Nº 2 demuestra que M.
cisplatensis se comporta de una
ma-nera similar a la de los ejemplos antes citados, es decir que hay un reemplazo de la luz por bajas tempe-raturas. Esta respuesta a tempera-tura se debe interpretar como un efecto sobre la cantidad de Pfr en las semillas. Las temperaturas ele-vadas ocasionan la disminución de Pfr al incrementar su velocidad de
reversión a Pr; aunque tanto en este caso como en los antecedentes no se han evaluado otros factores.
También es factible que muchos de los efectos de las temperaturas no tengan nada que ver con los cam-bios en la cantidad de Pfr en las semillas. M. cisplatensis germina en la oscuridad a 7 ºC constantes. En este caso existen otras posibilidades: a) Las temperaturas bajas incremen-tan la sensibilidad y permiten que incluso cantidades muy pequeñas de Pfr, formado y atrapado durante la maduración de la semilla sean sufi-cientes para desencadenar el proce-so de germinación. b) Las temperatu-ras bajas provocan las mismas reac-ciones bioquímicas que las que cau-sa Pfr, y aun en ausencia de este se desencadena la germinación.
Se ha observado que las semi-llas puestas a germinar en condicio-nes de iluminación, lo hacen más rápido que en la oscuridad a la misma temperatura de modo que el efecto de la luz no sólo es sobre el porcentaje final sino también sobre la velocidad de la germinación.
La fotolatencia en semillas se rom-pe cuando el efecto de la luz, transfor-ma el Pr. en Pfr, y este último da lugar a la síntesis de giberlinas o a una citocinina, sin destacar que pudiera destruir un inhibidor como el ABA.
En un ensayo siguiente se de-termina si existe alguna relación entre dosis (de luz) y respuesta ger-minativa. Según el gráfico Nº 3 se deduce que los niveles “bajos” de ilu-minación (700 lux) estimulan la ger-minación mientras que niveles
“al-tos” (2.270 lux) la inhiben. El análi-sis de varianza realizado muestra una diferencia significativa entre uno y otro tratamiento (Tabla Nº 3), y que luego es confirmado mediante el Test de Tukey, lo cual demuestra que M.
cisplatensis es una planta que posee
reacción negativa a irradiación ele-vada (no sería una planta HIR), al menos en la respuesta germinativa, esto implicaría una nula o escasa cantidad de criptocromo.
Conclusión.
Conclusión.
Conclusión.
Conclusión.
Conclusión.
a. A las 24 horas de cosechadas las semillas de M. cisplatensis son viables, por lo tanto están en condiciones de germinar si tienen el ambiente apropiado. b. Las semillas de M. cisplatensis son fotoblásticas y pueden ser inducidas a germinar con la aplicación de bajas tempera-turas o iluminación. De acuerdo a los procesos fisioló-gicos intervinientes en las se-millas fotoblásticas se
plan-tea como hipótesis que el tra-tamiento con Giberlinas en os-curidad y a 30 ºC, producirá un efecto similar a la luz, no por transformación de Pr en Pfr sino por aporte exógeno, y de este modo se demostraría que Pfr puede, al parecer, es-timular la síntesis de AG. c. M. cisplatensis, tiene un
ópti-mo térmico para la germina-ción entre 7 y 25 ºC, reaccio-na positivamente a la luz sin llegar a ser una planta que reacciona a irradiación eleva-da (HIR). Reacciona negativa-mente a la oscuridad y altas temperaturas. Se plantea como una nueva hipótesis que la combinación de luz y bajas temperaturas puede tener un efecto aditivo y de este modo mejorar la germinación. d. Los tegumentos de M.
cisplaten-sis son muy permeables al agua
y gases por lo que se descarta al menos en parte una dormi-ción primaria o constitutiva.
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Bibliografía.
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