MATERIALES Y MÉTODOS 1.1- PLANTAS UTILIZADAS PARA LA EXTRACCIÓN DE LOS ACEITES ESENCIALES

MATERIALES Y MÉTODOS

1.- MATERIALES

1.1- PLANTAS UTILIZADAS PARA LA EXTRACCIÓN DE LOS ACEITES ESENCIALES

 Eucalipto (Eucalyptus globulus Labill).

 Cidrón o hierba Luisa (Lippia citriodora).

 Limoncillo o malojillo (Cymbopogon citratus).

1.2.- ACEITES ESENCIALES EMPLEADOS EN LA CROMATOGRAFÍA DE GASES ACOPLADA A ESPECTROMETRÍA DE MASAS (CG-EM)

 Aceite esencial de Eucalipto (Eucalyptus globulus Labill).

 Aceite esencial de Cidrón o hierba Luisa (Lippia citriodora).

 Aceite esencial de Limoncillo o malojillo (Cymbopogon citratus).

1.3.- COMPUESTOS UTILIZADOS EN LA PREPARACIÓN DEL JARABE

1.3.1- COMPUESTOS UTILIZADOS EN LA PREPARACIÓN DE LA FASE ACUOSA

 Componente acuoso: Agua Destilada

 Conservante: Benzoato de Sodio (Bacteriostático) 99% de Pureza

 Propilenglicol

 Sacarosa (Azúcar Montalbán, Venezuela)

1.3.2.- COMPUESTOS UTILIZADOS EN LA PREPARACIÓN DE LA FASE ACUOSA

 Alcohol Etílico

 Aceite esencial de Eucalipto (Eucalyptus globulus Labill).

Composición 1,8 Cineol (76,09%) α– pinene (6,43%) β- pinene (0,13%) α- phellandrene (0,47%) Linalool (0, 23%)

β- fenchyl alcohol (5,49%)

α– terpinenyl acetate (7,52%)

 Aceite esencial de Cidrón o hierba Luisa (Lippia citriodora).

Composición Z - Citral (30,06%) Geraniol (12,60%) Geranial (34,78%) Linanool (1,47%) Citronella (0,57%) Geranyl Acetate (1,93%) Nerol (2,73%)

 Aceite esencial de Limoncillo o malojillo (Cymbopogon citratus).

Composición 1,8 Cineole (0,1%) β- pinene (9,8%) Linalool (1,36%) Citronella (0,12%) Geraniol (6,46%) Cidral (28,39%) Geranial (33,79%)

Juniper camphor (4,62%)

2.- INSTRUMENTOS

 Balanza Analítica OHAUS Adventure

 Licuadora Industrial LQ-4ID (METVISA ,Brasil)

 Equipo Clevenger (Destilador por arrate con vapor)(Laboratorio de Farmacognosia)

 Cromatógrafo de Gases Hewlett Packard 6890 (ANTECK, Alemania)

 Agitador MRVS-09 ( Merck, Alemania)

3.- METODOS Y PROCEDIMIENTOS

3.1.- PREPARACION PREVIA DEL MATERIAL VEGETAL

Las hojas frescas de Eucalyptus globulus Labill, Lippia citriodora y Cymbopogon citratus fueron adquiridas en el Mercado Principal del Estado Mérida y llevadas al Laboratorio de Farmacognosia de la facultad de farmacia de la Universidad de Los Andes.

3.2.- OBTENCIÓN Y AISLAMIENTO DE LOS ACEITES ESENCIALES

Los aceites se obtuvieron utilizando la técnica de destilación por arrastre con vapor usando la trampa de clevenger (figura 1). Este aparato está compuesto de un balón, donde se deposita la materia prima previamente deshojada y pesada, exactamente 600 gramos de cada planta, para luego ser licuada con una cantidad determinada de agua pura. El balón es calentado constantemente y el aceite esencial con el agua presente se evapora continuamente. El condensador va acoplado al balón a través de una conexión en forma de D que permitirá acumular y separar el aceite esencial de la mezcla condensada.

El agua condensada regresa al balón por el rebose de la conexión [13] .Una vez obtenidos los aceites se guardaron y el exceso de humedad se eliminó con sulfato de sodio anhidro y fueron almacenados a 4°C para su posterior análisis.

Figura 1 Equipo Clevenger

3.-IDENTIFICACIÓN DE LOS COMPONENTES DE CADA ACEITE ESENCIAL

La identificación de los componentes de los aceites esenciales se realizó en un equipo marca Hewlett Packard 6890 equipado con columna de fenil-metilpolixilosano (HP- 5) y un detector de masas Hewlett Packard MSD 5937.

en la cámara de inyección, el gas inerte pasa a través de un regulador de presión y llega a la cámara de inyección, arrastrando desde allí la muestra a la columna. Los componentes de la muestra se separan a medida que pasan por la columna, emergen de ésta a intervalos (característicos de cada componente) y pasan a un detector que manda una señal a un registrador. Finalmente el gas inerte pasa a través de un medidor de flujo y sale a la atmósfera y a diferencia de la mayoría de los tipos de cromatografía, la fase móvil no interacciona con las moléculas del analito; su única función es la de transportar el analito a través de la columna ver (figura 2). [10]

Esta técnica proporciono valiosísima información sobre el número de componentes de cada esencia, porcentaje de los mismos y mediante los tiempos de retención relativos a sustancias conocidas, y así fue posible identificar los componentes desconocidos en cada aceite esencial, usando la base de datos Wiley MS Data Library 6th edición

Figura 2 Cromatógrafo de Gases marca Hewlett Packard 6890

COMPONENTES IDENTIFICADOS

1. Cromatograma del aceite esencial del eucaliptus

Lista de Componentes del aceite esencial del Eucaliptus

Tiempo de retención Compuesto Área (%)

5.270 α– pinene 6.43

7.841 1,8 Cineol 76.09

12.604 β- fenchyl alcohol 5.49

17.729 α– terpinenyl acetate 7.52

6.259 β- pinene 0.13

6.939 α- phellandrene 0.47

9.649 Linalool 0.23

5.0 0

10.0 0

15.0 0

20.0 0

25.0 0

30.0 0

35.0 0

40.0 0 100000

0 200000 0 300000 0 400000 0 500000 0 600000 0 700000 0 800000 0 900000 0

1e+07 1.1e+07 1.2e+07 1.3e+07 1.4e+07 1.5e+07 1.6e+07 1.7e+07

5.270 α– pinene

6.259 6.547 6.937

7.841 1, 8 Cineol

8.442

9.318 9.649 11.799 12.138

12.604 β- fenchyl alcohol

16.857

17.729 α– terpinenyl acetate

19.622 20.528 21.200 24.876

2. Cromatograma del aceite esencial del Limoncillo

Lista de Componentes del aceite esencial del Limoncillo

Tiempo de retención Compuesto Área (%)

14.395 Cidral 28.39

15.416 Geranial 33.79

14.764 Geraniol 6.46

6.580 β- pinene 9.8

9.653 Linalool 1.36

25.932 Juniper camphor 4.62

7.681 1,8 Cineole 0.1

5.00 10.00 15.00 20.00 25.00 30.00 35.00 40.00

500000 1000000 1500000 2000000 2500000 3000000 3500000 4000000 4500000 5000000 5500000 6000000 6500000 7000000 7500000 8000000 8500000

6.451

6.580 β- pinene

7.684 7.800 8.099

9.651

11.060 11.24011.324

11.692 12.280

13.879 14.389 Citral

14.671

14.764 Geraniol 15.411 Geranial

15.574 15.922

18.76019.92420.403 22.214

23.078 24.61525.500

25.932 Juniper camphor

26.41126.653 27.083

27.23228.626

34.309

3. Cromatograma del aceite esencial del Cidrón

Lista de Componentes del aceite esencial del Limoncillo

Tiempo de retención Compuesto Área (%)

14.708 Geraniol 12.60

15.303 Geranial 34.78

14.307 Neral o citral 30.06

13.809 Nerol 2.73

9.646 Linalool 1.47

11.322 Citronella 0.57

18.761 Geranyl Acetate 1.93

5.00 10.00 15.00 20.00 25.0

0

30.00 35.00 40.00

500000 1000000 1500000 2000000 2500000 3000000 3500000 4000000 4500000 5000000 5500000 6000000 6500000

3.798 6.247

6.443

9.647 Linaool

11.06011.23911.320 11.687

12.272

13.808 Nerol 14.304 Geraniol

14.707 Neral 15.302 Geranial

18.149 18.762

19.057 19.931

20.976 21.821

22.55222.851 23.62224.844

4.- PREPARACIÓN DEL JARABE

Preparación de la Fase Acuosa

La disolución de la sacarosa se preparó mediante agitación, este método consiste en colocar agua de la fórmula en un recipiente, luego se agrego el benzoato de sodio para inhibir el crecimiento de bacterias actuando como conservante, utilizando un agitador en 370 revoluciones por minuto se fue incorporando el azúcar lentamente durante diez minutos para evitar un aumento excesivo de la viscosidad, aumentamos hasta 600 revoluciones por minuto para obtener disolución total y la viscosidad deseada. Con el fin de darle transparencia al jarabe se uso un vehículo codisolvente en este caso es el propilenglicol, con el objeto de facilitar la disolución de componentes alcoholsolubles.

Preparación de la Fase Orgánica

Con el fin de poder incorporar los aceites esenciales se procedió a agregar de manera intermitente y lentamente cada uno de ellos al alcohol etílico agitando de manera continua para que se mantuviera en una sola fase sin sobrenadantes.

La obtención del jarabe se hace agregando muy lentamente la fase orgánica a la fase acuosa que se encuentra en constante agitación, hasta no haber distinción entre las fases es decir que sea límpido (ausencia de partículas).

Envasado

Una vez concluida la preparación del jarabe se procede a envasar, en frascos Ámbar Boston de Polietilentereftalato (PET) de 120ml con tapa Pilfer proof con falda y Precinto.

Figura N° 3

Etiquetado

Una vez envasado el jarabe se procede a etiquetarlo a fin de identificarlo y hacer constar la fecha de caducidad, vía de administración y contenido expresado en peso y volumen.

5.- FORMULACIÓN DEL JARABE

Cada 100ml contiene: Aceite esencial de Eucalipto (Eucalyptus globulus Labill) 1ml

(Principio Activo), Aceite esencial de Cidrón o hierba Luisa (Lippia citriodora) 0,25ml

(Principio Activo), Aceite esencial de Limoncillo o Malojillo (Cymbopogon citratus) 0,25ml

(Principio Activo), Alcohol Etílico 15ml (Disolvente), Propilenglicol 10ml (Codisolvente),

Benzoato de Sodio 1gr (Conservante), Sacarosa 50gr (Edulcorante y viscosante), Agua

Purificada c.s.p 40,98ml.

ANEXOS

PREPARACIÓN PREVIA DEL MATERIAL VEGETAL

OBTENCIÓN DE LOS ACEITES ESENCIALES