Universidad Nacional Autónoma De México
Facultad De Estudios Superiores Zaragoza
Química Farmacéutica Biológica
Bioquímica Clínica
Octavo Semestre
Laboratorio De Hematología
Práctica # 9 Serie Granulopoyética y
linfopoyética
Integrantes:
González Pérez Isis Daniela
Hernández González Evelyn Jaquelin
Martínez Chávez Jonathan
Santillán Briones Julio Izue
Profesor: Dr. Guillermo Gutiérrez Espíndola
Grupo: 1804
Equipo: 3
Introducción
Serie granulopoyéticaLos tres tipos de granulocitos derivan de sus propias células madre descendientes de la célula madre pluripotencial CFU-GEMM. La CFU-Eo, del linaje de los eosinófilos, y la CFU-Ba, del linaje de los basófilos, sufren división celular y dan lugar a la célula precursora o mieloblasto.
Los neutrófilos se originan en la célula madre bipotencial, CFU-GM, cuya mitosis produce dos células madre unipotenciales, CFU-G(de la línea de los neutrófilos) y CFU-M (del linaje de los monocitos).
Imagen 1. Hematopoyesis
El mieloblasto es un elemento con ausencia de granulación al microscopio óptico. Se trata de una célula de tamaño comprendido entre 15-20 µm, de forma redondeada u oval y de contorno liso. El núcleo, de gran tamaño en relación con el diámetro celular, es redondo y está provisto de una cromatina finamente reticulada, con presencia de dos o tres nucléolos bien visibles. El citoplasma, de color basófilo, aunque menos intenso que el del proeritroblasto, es escaso y está desprovisto ópticamente de granulación y vacuolas. A nivel ultraestructural puede detectarse mieloperoxidasa en el retículo endoplásmico y aparato de Golgi.
El promielocito tiene un tamaño ligeramente superior al de su precursor (16-25 µm), y es la célula mayor de la granulopoyesis normal. Su forma es redondeada u oval. El núcleo, también de aspecto redondeado, se sitúa en
posición algo excéntrica. La cromatina, algo más densa, presenta todavía algún nucléolo visible a nivel óptico. El citoplasma es amplio y basófilo, y contiene un número variable de gránulos primarios o azurófilos, que se disponen alrededor del núcleo dejando una zona más clara, agranular, que corresponde a la zona centrosómica. La granulación azurófila toma una coloración rojo-violácea con las tinciones panópticas habituales. Los promielocitos son citoquímicamente positivos a la mieloperoxidasa, fosfatasa ácida, arilsulfatasa y naftol-AS-D-cloro-acetatoesterasa. Su contenido en mieloperoxidasa es responsable de la positividad con el negro Sudán. El citoplasma posee glucógeno, detectable citoquímicamente con la tinción del PAS.
A medida que progresa la maduración del promielocito, éste se transforma en mielocito, célula redondeada de tamaño entre 12 y 18 µm. El núcleo, también redondeado, posee una cromatina condensada en cúmulos, de color violeta oscuro y sin nucléolo visible. El citoplasma que ha perdido toda su basofilia, contiene un gran número de gránulos. A partir de este estadio comienza la formación de la granulación secundaria específica ( neutrófila, eosinófila, basófila), que junto a la primaria persiste en todos los elementos de la serie.
El metamielocito tiene un tamaño entre 10 y 15 µm, y posee las mismas características morfológicas del mielocito, exceptuando la forma del núcleo, el cual adopta un aspecto reniforme al iniciar su indentación, con la parte convexa situada en la periferia celular y la cóncava dirigida hacia el centrosoma. El núcleo está dotado de una cromatina condensada en numerosos cúmulos cromáticos. Esta célula ha perdido la capacidad mitótica. Al progresar en su maduración el metamielocito estrecha su núcleo hasta que éste se transforma en una delgada banda, dando origen a la célula del mismo nombre. Las bandas tienen un tamaño algo inferior al del metamielocito, con sus características morfológicas idénticas a las de su precursor. La mayor parte de estas células se localizan en la médula ósea, donde constituyen el compartimento de reserva granulocítica medular. En condiciones normales, un 2 a un 5% pasan a la sangre periférica, aunque esta proporción aumenta, entre otros, en los procesos infecciosos.
Los granulocitos segmentados se originan a partir de las bandas por segmentación nuclear, y son los elementos más maduros de la granulopoyesis. Circulan por la sangre periférica donde ejercen sus funciones de fagocitosis y bacteriólisis. Según el tipo de granulación específica se identifican los neutrófilos, eosinófilos y basófilos. A compás de la maduración de los polinucleares acontecen importantes cambios, entre los que citaremos el aumento de su capacidad de movilización, gracias a la presencia de proteínas contráctiles. En el polinuclear adulto un 10% de sus proteínas totales corresponden a actina y un 1% a miosina. La aparición de receptores de superficie para la fracción Fc de la inmunoglobulina G y para la fracción 3 del complemento también acontece en este avanzado estadio de maduración.
Serie monocítica
Los monocitos comparten sus células bipotenciales con los neutrófilos. La CFU-GM sufre mitosis y da lugar a CFU-G y CFU-M (monoblastos). La progenie de CFU-M son los promonocitos, que tienen un núcleo en forma de riñón localizado en forma acéntrica. En el transcurso de un día o dos, los monocitos recién formados penetran en espacios del tejido conjuntivo del cuerpo y se diferencian en macrófagos.
Los monoblastos son difícilmente identificables en la médula ósea de los sujetos normales; no obstante, gracias a estudios citoquímicos y al aspecto morfológico óptico y estructural observado en las leucemias agudas
monoblásticas, se les considera claramente diferenciables de los mieloblastos. El tamaño de los monoblastos es superior al de los mieloblastos, de 15 a 25 µm; son células redondeadas con un gran núcleo, también redondo, provistas de una cromatina muy laxa con numerosos nucleolos (generalmente más de cinco). Su citoplasma, más abundante que el del mieloblasto, es intensamente basófilo adquiriendo una tonalidad azul plomiza con las tinciones panópticas habituales. El dato más fidedigno del monoblasto es la existencia de una intensa positividad esterasa inespecífica fluorosensible.
Los promonocitos, claramente identificables en la médula ósea pese a su escaso número, poseen un tamaño de 15-20 µm y una elevada relación nucleocitoplasmática. El núcleo, de aspecto morfológico irregular, con pliegues e indentaciones, posee una cromatina algo más condensada que la de su precursor, a pesar de lo cual son visibles uno o dos nucléolos. El citoplasma es intensamente basófilo por su gran riqueza en polirribosomas; puede contener un número variable, aunque generalmente escaso, de granulaciones azurófilas, lo que hace a veces difícil su diferenciación con los promielocitos. Citoquímicamente los promonocitos contienen fosfatasa ácida, naftol-As-D-acetatoesterasa fluorosensible, alfa-naftilbutiratoesterasa, peroxidasa, N-acetil-beta-glucosaminidasa y arilsulfatasa.
Serie Megacariocítica Plaquetar
El progenitor unipotencial de plaquetas, CFU-Meg, da lugar a una célula muy grande, el megacarioblasto, cuyo núcleo único tiene varios lóbulos. El megacarioblasto se somete a endomitosis, en la cual no se divide la célula, sino se torna más grande y el núcleo se vuelve poliploide, hasta 64N.Los megacarioblastos se diferencian en megacariocitos, que son células grandes, cada una con un núcleo lóbulo único. Cada megacariocito puede formar varios miles de plaquetas (trombocitos).
Promegacarioblasto se identifica por la expresión de marcadores específicos: peroxidasa plaquetaria, glicoproteína IIb-IIIa, factor von Willebrand. Cesan de proliferar, pero continúan aumentando su ADN. Son muy sensitivos a la demanda de trombopoyetina.
Megacarioblasto son de tamaño menor. Núcleo único con nucléolos. Citoplasma basófilo.
Promegacariocito es una célula grande de núcleo multilobulado que no tiene nucléolos y posee un citoplasma ligeramente basófilo con granulaciones azurófilas.
Megacariocitos tienen la propiedad de sintetizar ADN sin sufrir mitosis y son los encargados de producir las plaquetas el megacariocito maduro granular es de tamaño entre 15 y 56 µm y tiene ciitoplasma rosado y granular.
Megacariocito maduro formador de plaquetas tiene el citoplasma más extenso, repleto de granulación azurófila. Contiene zonas internas delimitadas por membranas que se forman por invaginaciones de la membrana externa durante el proceso de maduración de la célula. El citoplasma tiene diversos organelos que formarán parte de las plaquetas generadas por la fragmentación de las zonas demarcadas. Los principales organelos son: aparato de Golgi, mitocondrias, ribosomas, microtúbulos y microfilamentos. Además, tienen diferentes tipos de gránulos que se dividen en: gránulos a, gránulos densos, lisosomas y microperoxisomas.
Los megacariocitos se encuentran, en ocasiones, en la circulación, asociados con algunas enfermedades como: síndromes mieloproliferativos crónicos, enfermedad de Hodgkin, después de las cirugías y en los leucocitos, por infección. Se observan, además, en número significativo, en los vasos pulmonares y el bazo; en estos sitios producen del 7 al 15 % de las plaquetas.
La producción plaquetaria comienza con el desarrollo por el megacariocito de proyecciones citoplasmáticas largas dentro de los espacios medulares extravasculares. Estos penetran la membrana de la sinusoide por ruptura de la célula endotelial y, al fragmentarse, dan lugar a las plaquetas. También pueden formarse por demarcación simultánea de grandes porciones del citoplasma de los megacariocitos.
Serie linfocítica
La célula madre pluripotencial Ly forma las dos células progenitoras uipotenciales LyB y LyT. CFU-LyBen médula ósea da origen a los linfocitos B con capacidad inmunitaria, que expresan marcadores de superficie específicos, incluidos los anticuerpos. CFU-LyT se somete a mitosis y forman células T con capacidad inmunitaria que se desplazan a la corteza del timo en donde proliferan, maduran y comienzan a expresar marcadores de superficie celular.
El sistema linfático está formado por los órganos linfoides primarios (timo y médula ósea) y los secundarios (ganglios linfáticos, bazo y tejido linfoide extranodal).
El linfocito es la célula dominante del ganglio linfático, agrupándose en la zona subcotical en pequeños nódulos y en la parte medular en cordones ramificados. Entre los linfocitos también puede observarse macrófagos y plasmocitos, sobre todo a nivel de la zona medular, así como mastocitos y granulocitos aislados.
Las células reticulares con sus fibras, al igual que en otros órganos hematopoyéticos, constituyen el armazón del ganglio que da sustento a las células libres, especialmente a los linfocitos, a los que dividen en compartimentos que mantienen separados los linfocitos T y B. Dichas estructuras reticulares también contribuyen a la creación del microambiente necesario para la adecuada supervivencia linfocitaria.
Existen dos tipos linfocitarios fundamentales, los linfocitos T y linfocitos B, que a su vez, constan de diversas subpoblaciones.
Los linfocitos T proceden de la célula primitiva linfoide, progenitor común a todos ellos, ubicada en la médula ósea.
El estadio incial en la formación del linfocito T se ha denominado protimocito. El protimocito, al ponerse en contacto con el epitelio tímico y bajo la influencia de hormonas (timosina y timpoyetina) evoluciona hacia los diferentes estadios de diferenciación.
El timo es un órgano de pequeño tamaño, que se localiza en la parte alta y anterior del tórax. Es activo durante el periodo fetal y primeros años de la vida para involucionar en el adulto. Está formado por unas áreas densas, constituidas por linfocitos, que se hallan separadas entre sí por trabéculas del tejido conectivo. En el seno del timo los linfocitos T (timocitos) maduran y adquieren plena competencia inmunológica. En la zona más periférica o corteza, que constituye un 80% de la glándula tímica, se localizan los timocitos más inmaduros, que tras un
proceso de maduración pasan a la zona medular constituida por el 15% restante del timo y formada por linfocitos T que poseen caracteres de madurez fenotípica y funcional.
Los linfocitos T de la sangre periférica constituyen entre un 65% y 75% de los linfocitos circulantes. En la sangre periférica se distinguen cuatro tipos de linfocitos T: linfocitos supresores, linfocitos colaboradores, linfocitos T citotóxicos, linfocitos T de la hipersensibilidad retardada.
Los linfocitos B derivan también de una célula germinal linfoide pluripotente y adquieren su competencia inmunológica, en el hombre, en la médula ósea y otros equivalentes de la bolsa de Fabricio de las aves, como el hígado fetal, y posiblemente, la placenta.
Antes de llegar al estadio de linfocito B maduro, los precursores más inmaduros de célula B pasan por diferentes estadios celulares. Estas células son los linfocitos pre-pre-B, linfocito pre-B y linfocito B inmaduro y pueden ser identificadas por técnicas inmunológicas. Los linfocitos maduros pasan de la médula ósea a la sangre periférica y se dirigen a los órganos linfáticos periféricos para ubicarse en los folículos linfoides. Aquí bajo un estímulo antigénico adecuado, se activan y proliferan formando el centro germinal en el interior del folículo linfoide. Los linfocitos B constituyen la minoría del pool linfocitario circulante (10%-20%), afincándose en los órganos linfáticos periféricos en las zonas B-dependientes.
El linfocito sin memoria inmunológica de la sangre periférica procede directamente de la stem-cell, y que bajo un estímulo antigénico adecuado podría transformarse en las células centrofoliculares. El linfocito B activado incrementa la expresión de las inmunoglobulinas de superficie y de algunos antígenos de membrana. Las células hendidas se caracterizan por poseer un citoplasma muy escaso e hialino en la variedad pequeña, y algo más extenso, con discreta insinuación de su basofilia, en la variedad grande. El núcleo tiene una cromatina condensada, sin nucléolos visibles a nivel óptico, en la variedad pequeña y con nucléolos visibles en la forma grande, semejando una célula blástica. Las células centrofoliculares no hendidas son de tamaño superior a las células hendidas de gran tamaño; el núcleo es redondeado, de cromatina laxa y nucleolada. El citoplasma, moderadamente amplio, destaca por su notable pironinofilia.
Las células plasmáticas, secretoras de inmunoglobulinas, representan el estadio final de la transformación antigénica del pequeño linfocito B. En este estadio las Igs, en lugar de expresarse en la membrana, pasan a ser secretadas y pueden ser fácilmente detectadas en el citoplasma. El núcleo, casi siempre excéntrico, posee una cromatina condensada en fuertes cúmulos cuya disposición radial adopta el aspecto morfológico "en rueda de carro". El citoplasma es abundante e intensamente basófilo en toda su extensión, excepto en la zona centrosómica de la célula donde adquiere una tonalidad blanquecina.
Material
Preparaciones fijas de Leucocitos Microscopio
Método
Resultados
Los resultados obtenidos en la observación de los diferentes leucocitos y sus precursores en preparaciones fijas proporcionadas por el profesor de ciertos padecimientos, se reportan en la siguiente tabla.
Tipo de célula Microfotografía
Anemia Megaloblastica El asesor entregara una
preparación fija
En el microscopio con el objetivo de 100x (inmersión) se buscara
en la preparación la anomalía morfológica o la estructura que
indique la etiqueta de la preparación
Una vez localizada la anomalía, se dejara fija en el microscopio para que todo el resto del grupo lo observe
Observar y dibujar las características de las células Finalizada la sesión
entregar las laminillas limpias y secas de aceite al
asesor
Limpiar los microscopios
Leucemia Linfocítica Crónica
Leucemia Linfocítica Aguda (LLA) en recaída
Leucemia prolinfocítica Linfocitos atípicos Leucemia Mielocitica Prolinfocito Linfocito Prolinfocitos Linfocito Mielocito
Purpura Trombocitopenia Idiopática (PTI)
Leucemia prolinfocitica
Leucemia Linfocítica Aguda
Análisis de resultados
En la práctica se llevó a cabo la observación de los diferentes leucocitos y de algunas células precursoras de los mismos en preparaciones fijas de ciertas enfermedades (neutrófilos, linfocitos, monocitos, eosinófilos y basófilos).
Las células observadas en cada una de las preparaciones fijas de leucocitos se reportan en la tabla anterior, en la cual se señalan la ubicación, forma y nombre de la célula en la preparación. En el caso peculiar de un frotis de una leucemia prolinfocítica, se pueden observar los prolinfocitos que son células redondas con un núcleo que ocupa la mayor parte de la célula, la cromatina es condensada y se observa un nucléolo.
La médula ósea en pacientes con PTI contiene cantidades normales o incrementadas de megacariocitos. Son células precursoras o productoras de las plaquetas de la sangre. Derivan de células madres llamadas hemocitoblastos que se encuentran en la médula ósea. Por otra parte, los mielocitos ubicados en una
Eosinófilo
Promielocito Megacariocito
preparación de leucemia linfocítica aguda de recaída se observan un núcleo inmaduro con varios nucléolos y granulaciones citoplasmáticas.
Las leucemias son proliferaciones neoplasias malignas que se originan a partir de la línea mieloide en la medula ósea. La información que se obtiene al examinar una extensión de sangre periférica adquiere gran importancia ya que del análisis visual de los leucocitos se puede valorar: hallazgos de anomalías de maduración nuclear y citoplasmática, características generales de tamaño y color, hallazgos de trastornos leucocitarios y su delimitación, y presencia de cuerpos de inclusión y su asociación a causas viables. Esta evaluación cuantitativa de las características morfológicas de los leucocitos por medio de un examen de frotis de sangre puede contribuir bastante al diagnostica de afecciones de la sangre.
Conclusiones
En conclusión si se logró con el objetivo de llevar a cabo la observación de los diferentes leucocitos y sus células precursoras en muestras preparadas de medula ósea o sangre periférica de ciertas enfermedades con afectación leucocitaria.
Referencias
1. Lewis S. M., Bain B. J., Baines I. Dacie y Lewis Hematología práctica. 10ª. Ed. Madrid: Elsevier, 2008. 2. Rodak B. Hematología: fundamentos y aplicaciones clínicas. 2ª. Ed. Buenos aires: Médica
Panamericana, 2004.
3. McKenzie, S. Hematología clínica. 2ª edición. México: manual moderno, 2000.
4. Alfonso R. Remington Farmacia, Vol 1. 20ª ed. Buenos Aires: Medica Panamericana, 2003. 5. Kotcher J, Fuller J, Ness E. Instrumentación quirúrgica: teoría, técnicas y procedimientos. 4ª ed.
