AVALIAÇÃO DA ATIVIDADE ANTIBACTERIANA IN VITRO DO OXALATO DE ESCITALOPRAM FRENTE A MICRORGANISMOS MULTIRRESISTENTES

Texto completo

(1)AVALIAÇÃO DA ATIVIDADE ANTIBACTERIANA IN VITRO DO OXALATO DE ESCITALOPRAM FRENTE A MICRORGANISMOS MULTIRRESISTENTES. Laísa Nunes Franco 1 Vitória Segabinazzi Foletto 2 Amanda Mainardi 3 Sara De Lima Marion 4 Rosmari Hörner 5 Tacieli Fagundes da Rosa 6. Resumo: O aparecimento de resistência a antibióticos e outras drogas antibacterianas foi, é e provavelmente continuará a ser um dos grandes problemas da medicina. O medicamento oxalato de escitalopram pertence a classe dos Inibidores Seletivos da Recaptação de Serotonina (ISRS) e é indicado para o tratamento e prevenção da recaída ou recorrência da depressão. A atividade antibacteriana deste medicamento utilizado como antidepressivo foi recentemente relatada na literatura. Tais atividades descritas tornam extremamente interessante e importante a busca dos efeitos do oxalato de escitalopram frente a cepas bacterianas, já que é um medicamento aprovado para uso pelas autoridades responsáveis. O objetivo deste trabalho foi avaliar a atividade antibacteriana do medicamento não-antibacteriano oxalato de escitalopram e associações com os medicamentos antibacterianos ciprofloxacino e sulfametoxazol-trimetoprima frente a microrganismos multirresistentes (MDR). Foi realizado o teste de concentração inibitória mínima (CIM) do oxalato de escitalopram isoladamente e em associação com os medicamentos antibacterianos ciprofloxacino e sulfametoxazol-trimetoprima para verificar a possível ocorrência de sinergismo. A avaliação da atividade antibacteriana in vitro foi realizada frente a onze cepas bacterianas padrão de referência da coleção American Type Culture Collection (ATCC) e frente a cinco isolados clínicos multirresistentes (MDR) provenientes de pacientes atendidos no hospital universitário de Santa Maria, RS, Brasil (HUSM). Posteriormente, foi determinado o índice de concentração inibitória fracionada (FICI). Este estudo foi aprovado pelo comitê de ética em pesquisa (CEP) da Universidade Federal de Santa Maria (UFSM), registrado sob o número CAAE 38850614.4.0000.5346. Constatouse que o medicamento oxalato de escitalopram não teve atividade bacteriana significativa frente as cepas testadas quando testado isoladamente. No entanto, detectou-se oito eventos de sinergismo desse fármaco quando associado com ciprofloxacino frente a cinco cepas padrão e três isolados clínicos MDR e seis eventos de sinergismo quando associado com sulfametoxazoltrimetoprima frente a três cepas padrão e três isolados clínicos MDR. Esses resultados permitem o redirecionamento deste antidepressivo, para ser utilizado em associação com antibacterianos já utilizados na terapêutica (ciprofloxacino e sulfametoxazol-trimetoprima), potencializando a atividade desses fármacos para o tratamento nas infecções bacterianas de microrganismos gram-positivos, como Enterococcus faecalis, Micrococcus luteus, Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis e Staphylococcus hominis. Porém, são necessários estudos adicionais sobre o mecanismo de ação desses fármacos relacionados às atividades antibacterianas a fim de aumentar a segurança no uso desses medicamentos.. Palavras-chave: Antibacterianos. Bactérias. Oxalato de Escitalopram..

(2) Modalidade de Participação: Iniciação Científica. AVALIAÇÃO DA ATIVIDADE ANTIBACTERIANA IN VITRO DO OXALATO DE ESCITALOPRAM FRENTE A MICRORGANISMOS MULTIRRESISTENTES 1 Aluno de graduação. francolaisa5@gmail.com. Autor principal 2 Aluna de graduação. vitoria_sfoletto@yahoo.com.br. Co-autor 3 Aluna de graduação. maainardiamanda@gmail.com. Co-autor 4 Aluna de graduação. saradelimamarion03@gmail.com. Co-autor 5 Docente. rosmari.ufsm@gmail.com. Orientador 6 Aluna de pós-graduação. tacielifagundesdarosa@gmail.com. Co-orientador. Anais do 10º SALÃO INTERNACIONAL DE ENSINO, PESQUISA E EXTENSÃO - SIEPE.

(3) AVALIAÇÃO DA ATIVIDADE ANTIBACTERIANA IN VITRO DO OXALATO DE ESCITALOPRAM FRENTE A MICRORGANISMOS MULTIRRESISTENTES 1 INTRODUÇÃO O aparecimento de resistência a antibióticos e outras drogas antibacterianas foi, é e provavelmente continuará a ser um dos grandes problemas da medicina. Sendo que é causada pela mutação espontânea e recombinação de genes, os quais criam variabilidade genética sobre a qual atua a seleção natural, a qual dá vantagens aos mais aptos (KADOSAKI, 2012). Assim, a pesquisa de novas substâncias e/ou compostos que apresentem atividade antibacteriana é essencial (KALAIVANI et al., 2012). O medicamento oxalato de escitalopram pertence a classe dos Inibidores Seletivos da Recaptação de Serotonina (ISRS) e é indicado para o tratamento e prevenção da recaída ou recorrência da depressão, transtorno de ansiedade generalizada (TAG), transtorno de ansiedade social (fobia social) e transtorno obsessivo compulsivo (TOC) (ANVISA, 2017). A atividade antibacteriana deste medicamento utilizado como antidepressivo foi recentemente relatada na literatura. O medicamento exerce atividade antibacteriana sobre alguns microrganismos, os quais são Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Klebsiella pneumoniae, Proteus mirabilis e Enterobacter cloacae (MACEDO, 2017). Tais atividades descritas tornam extremamente interessante e importante a busca dos efeitos do oxalato de escitalopram frente a cepas bacterianas, já que é um medicamento aprovado para uso pelas autoridades responsáveis. O objetivo deste trabalho foi avaliar a atividade antibacteriana do medicamento nãoantibacteriano oxalato de escitalopram e associações com os medicamentos antibacterianos ciprofloxacino e sulfametoxazol-trimetoprima frente a microrganismos multirresistentes (MDR). 2 METODOLOGIA Foi realizada a avaliação da atividade antibacteriana utilizando o método quantitativo da determinação da concentração inibitória mínima (CIM) do oxalato de escitalopram isoladamente e em associação com os medicamentos antibacterianos ciprofloxacino e sulfametoxazol-trimetoprima para verificar a possível ocorrência de sinergismo. Para obtenção da solução estoque, os medicamentos foram dissolvidos em etanol, sendo testadas as concentrações de 1-1024 µg mL-1. Para a comprovação da inexistência da atividade inibitória do solvente utilizou-se etanol à 10% em teste realizado isoladamente. A avaliação da atividade antibacteriana in vitro foi realizada frente a onze cepas bacterianas padrão de referência da coleção American Type Culture Collection (ATCC), sendo elas gram-negativos (GN): Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853, Escherichia coli ATCC 25922, Escherichia coli ATCC 35218, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603 e grampositivos (GP): Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Enterococcus faecalis ATCC 51299, Enterococcus faecalis ATCC 29212, Bacillus cereus ATCC 14579, Staphylococcus aureus ATCC 29213, Micrococcus luteus ATCC 7468. Também avaliou-se a atividade antibacteriana frente a cinco isolados clínicos multirresistentes (MDR) provenientes de pacientes atendidos no hospital universitário de Santa Maria, RS, Brasil (HUSM). Desses, dois foram de Staphylococcus epidermidis, dois de Klebsiella pneumoniae e um de Staphylococcus hominis. Este estudo foi aprovado pelo comitê de ética em pesquisa (CEP) da Universidade Federal de Santa Maria (UFSM), registrado sob o número CAAE 38850614.4.0000.5346. Anais do 10º SALÃO INTERNACIONAL DE ENSINO, PESQUISA E EXTENSÃO - SIEPE Universidade Federal do Pampa œ Santana do Livramento, 6 a 8 de novembro de 2018.

(4) A CIM foi realizada utilizando o método de microdiluição em caldo, baseado no documento M100-S26 do Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI) (CLSI, 2012). O inóculo bacteriano foi preparado em solução salina estéril, apresentando concentração da suspensão bacteriana conforme a escala 0,5 de Mc Farland, ou seja, 1,5x108 unidades formadoras de colônia/mL (UFC/mL). Em microplacas de 96 poços contendo caldo Mueller Hinton, os medicamentos (1 a 1024 µg mL-1) e os inóculos bacterianos (1 x 10-5 UFC/poço), foram incubados a 35 ± 2 °C por 24 horas. Após incubação, a CIM foi determinada por meio de leitura visual, como a menor concentração em que não houve crescimento do microrganismo. Foi determinado o índice de concentração inibitória fracionada (FICI). A interação entre os medicamentos foi analisada calculando-se o FICI, cuja interpretação é classificada FRPR ³VLQpUJLFR´ ),& ” ³VHP LQWHUDomR´ ),& ! H ” 4,0) e ³DQWDJ{QLFR´ ),& ! (ODDS, 2003). 3 RESULTADOS e DISCUSSÃO Na Tabela 1 podemos visualizar os valores de CIM obtidos das análises do oxalato de escitalopram, ciprofloxacino e sulfametoxazol-trimetoprima, bem como os valores de FICI de suas associações. Analisando-se os resultados, percebe-se que o oxalato de escitalopram não apresentou atividade antibacteriana significativa quando testado isoladamente, apresentando valores altos de CIM, como já foi relatado em outros estudos (entre 512 e 1024 µg mL-1) (AKILANDESWARI, 2013). Considerando-se os resultados do medicamento não-antibiótico associado com o antibiótico ciprofloxacino, percebe-se que houve efeito sinérgico com oxalato de escitalopram frente as cepas padrão de S. epidermidis ATCC 12228 (FICI = 0,006), E. faecalis ATCC 51299 (FICI = 0,006), B. cereus ATCC 14579 (FICI = 0,501), M. luteus ATCC 7468 (FICI = 0,017) e S. aureus ATCC 25923 (FICI = 0,004) e frente aos isolados clínicos de S. epidermidis MDR (A) (FICI = 0,125), S. epidermidis MDR (B) (FICI = 0,031) e S. hominis MDR (FICI = 0,094). Houve efeito sinérgico também na associação do oxalato de escitalopram com o antibacteriano sulfametoxazol-trimetoprima, frente as cepas padrão de E. faecalis ATCC 51299 (FICI = 0,002), M. luteus ATCC 7468 (FICI = 0,009), S. aureus ATCC 25923 (FICI = 0,009) e frente aos isolados clínicos de S. epidermidis MDR (A) (FICI = 0,125), S. epidermidis MDR (B) (FICI = 0,75) e S. hominis MDR (FICI = 0,75). Em estudos similares em que foi avaliado o efeito antimicrobiano dos ISRSs sertralina, fluoxetina e a paroxetina verificou-se que este este efeito é especialmente contra bactérias gram-positivas, como Staphylococcus sp. e Enterococcus sp. (AYAZ et al., 2015). Neste estudo, houve atividade antibacteriana do oxalato de escitalopram exclusivamente frente a microrganismos grampositivos, quando em associação com medicamentos antibacterianos, potencializando-os.. Anais do 10º SALÃO INTERNACIONAL DE ENSINO, PESQUISA E EXTENSÃO - SIEPE Universidade Federal do Pampa œ Santana do Livramento, 6 a 8 de novembro de 2018.

(5) Tabela 1 ± Concentrações inibitórias mínimas (CIM) do oxalato de escitalopram, isoladamente e em combinação com ciprofloxacino e sulfametoxazol-trimetoprima frente a cepas padrão e isolados clínicos. Cepas bacterianas Cepas padrão ATCC Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 Escherichia coli ATCC 35218 Escherichia coli ATCC 25922 Klebsiella pneumoniae ATCC 700603 Staphylococcus epidermidis ATCC 12228 Enterococcus faecalis ATCC 51299 Enterococcus faecalis ATCC 29212 Bacillus cereus ATCC 14579 Staphylococcus aureus ATCC 29213 Micrococcus luteus ATCC 7468 Staphylococcus aureus ATCC 25923 Isolados clínicos Staphylococcus epidermidis MDR (A) Staphylococcus epidermidis MDR (B) Staphylococcus hominis MDR Klebsiella pneumoniae MDR (1) Klebsiella pneumoniae MDR (2). ESC 1024 1024 1024 1024 1024 1024 1024 1024 1024 1024 1024. CIP 1 1 0,25 0,5 512 512 1 2 4 64 256. ESC+CIP 1 1 1 1 2 2 2 1 128 1 1. FICI 1,001 1,001 4,001 2,001 0,006 0,006 2,002 0,501 32,125 0,017 0,004. CIM (µg mL-1) SUT 256 8 1 4 1024 1024 1 32 1 256 256. 1024 1024 512 1024 1024. 1024 1024 1024 1024 1024. 64 16 32 1024 1024. 0,125 0,031 0,094 2 2. 1024 512 1024 1024 1024. ESC+SUT 256 512 256 8 1024 1 128 1024 1024 2 2. FICI 1,25 64,5 256,25 2,008 2,008 0,002 128,125 33 1025 0,009 0,009. 64 256 256 1024 1024. 0,125 0,507 0,507 2 2. ESC, Oxalato de Escitalopram; CIP, Ciprofloxacino; SUT, Sulfametoxazol-Trimetoprima; ESC+CIP, combinação de Oxalato de Escitalopram e Ciprofloxacino; ESC+SUT, combinação de Oxalato de Escitalopram e Sulfametoxazol-Trimetoprima; FICI, Índice de Concentração Inibitória Fracionada; MDR, isolados clínicos multirresistentes.. Fonte: elaborado pelo autor, 2018. 4 CONSIDERAÇÕES FINAIS Considerando-se os resultados obtidos, concluímos que o não-antibiótico oxalato de escitalopram não teve atividade antibacteriana significativa frente a todas as cepas padrão ATCC e aos isolados clínicos MDR. No entanto, quando foi associado com o antibiótico ciprofloxacino apresentou efeito sinérgico frente a cinco cepas padrão e três isolados clínicos MDR, sendo todos microrganismos gram-positivos. Houve também efeito sinérgico quando associou-se oxalato de escitalopram e sulfametoxazol-trimetoprima frente a três cepas padrão ATCC e três isolados clínicos MDR, sendo, novamente, todos microrganismos grampositivos. Esses resultados permitem o redirecionamento deste antidepressivo, para ser utilizado em associação com antibacterianos já utilizados na terapêutica (ciprofloxacino e sulfametoxazol-trimetoprima), potencializando a atividade desses fármacos para o tratamento nas infecções bacterianas de microrganismos gram-positivos, como Enterococcus faecalis, Micrococcus luteus, Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis e Staphylococcus hominis. Porém, são necessários estudos adicionais sobre o mecanismo de ação desses fármacos relacionados às atividades antibacterianas a fim de aumentar a segurança no uso desses medicamentos.. Anais do 10º SALÃO INTERNACIONAL DE ENSINO, PESQUISA E EXTENSÃO - SIEPE Universidade Federal do Pampa œ Santana do Livramento, 6 a 8 de novembro de 2018.

(6) REFERÊNCIAS AKILANDESWARI, K.; RUCKMANI K.; RANJITH MATHAN V. Efficacy of Antibacterial Activity of Antibiotics Ciprofloxacin and Gentamycin Improved with Anti Depressant Drug, Escitalopram. International Journal of Pharmaceutical Sciences Review and Research, 2013. v. 14, p. 71-74. ANVISA. Lexapro® comprimidos revestidos. Lundbeck Brasil Ltda. Agência Nacional de Vigilância Sanitária, 2017. Disponível em: < http://www.anvisa.gov.br/datavisa/fila_bula/frmVisualizarBula.asp?pNuTransacao=6685152014&p IdAnexo=2169929>. Acesso em: 25 set. 2017. AYAZ, M., et al. 2015. Sertraline enhances the activity of antimicrobial agents against pathogens of clinical relevance. J. Biol. Res. (Thessalonik•, Greece) 22, 4. http:// D. Macedo et al. Journal of Affective Disorders, v. 208, n. 4, p. 22±32, 2017. Disponível em: <https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/26029671>. Acesso em: 02 jun. 2017. DOI: 10.1186/s40709-015-0028-1. CLINICAL AND LABORATORY STANDARDS INSTITUTE. Methods for dilution antimicrobial susceptibility tests for bacteria that grow aerobically. Approved standard M07±A9. Wayne, USA: CLSI; 2012. KADOSAKI, L. L. et al. Análise do uso e da resistência bacteriana aos antimicrobianos em nível hospitalar. Revista Brasileira de Farmácia, v. 93, n. 2, p. 128-135, 2012. Disponível em: < http://www.rbfarma.org.br/files/rbf-2012-93-2-1.pdf>. Acesso em: 05 jun. 2017. KALAIVANI, P. DNA, protein binding, cytotoxicity, cellular uptake and antibacterial activities of new palladium(II) complexes of thiosemicarbazone ligands: effects of substitution on biological activity. Metallomics, n.4, p.101-113, 2012. Disponível em: <https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/22051854>. Acesso em: 14 jul. 2017. DOI: 10.1039/c1mt00144b. MACEDO, D. et al. Antidepressants, antimicrobials or both? Gut microbiota dysbiosis in depression and possible implications of the antimicrobial effects of antidepressant drugs for antidepressant effectiveness. Journal of Affective Disorders, v. 208, p. 22-32, 2017. Disponível em: < https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/27744123>. Acesso em: 05 jun. 2017. DOI: 10.1016/j.jad.2016.09.012. ODDS, F. C. Synergy, antagonismo, and what the chequerboard puts between them. Journal of Antimicrobial Chemotherapy, v. 52, p.1, 2003.. Anais do 10º SALÃO INTERNACIONAL DE ENSINO, PESQUISA E EXTENSÃO - SIEPE Universidade Federal do Pampa œ Santana do Livramento, 6 a 8 de novembro de 2018.

(7)