Biblioteca de Farmacia y Bioquímica

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FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUIMICA

ESCUELA PROFESIONAL DE FARMACIA Y BIOQUIMICA

TESIS II

“Cuantificación de antocianinas totales del extracto etanólico del fruto de Vaccinium corymbosum L. procedentes de las provincias de Huamachuco y

Virú”

PARA OPTAR EL GRADO ACADÉMICO DE:

BACHILLER EN FARMACIA Y BIOQUÍMICA

Autora:

ACUÑA TRUIJILLO Diana Lucia

Asesor:

Mg. RENGIFO PENADILLOS Roger Antonio

TRUJILLO – PERÚ

2020

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DEDICATORIAS

A Dios . Por haberme permitido llegar hasta este punto tan importante de mi formación profesional y brindarme salud para lograr mis objetivos planteados, y la paciencia que le pedí en la realización de mi tesis, además de haberme brindado su infinito amor.

A mi madre Lucia, por estar conmigo en todo momento, por sus consejos, por la motivación constante que me ha permitido ser una persona de bien, y por su inmenso amor.

A mi padre Williams, por la constancia y perseverancia que lo caracterizan y por los valores que me ha inculcado siempre, por no darse por vencido y haberme demostrado salir adelante y por el amor que me brinda.

A mi hermano Terry, por siempre estar acompañándome en estos momentos importantes de mi formación profesional y por brindarme su apoyo constante en mi vida.

Dedicado a todos por darme una carrera para mi futuro, todo esto se los debo a ustedes.

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II

AGRADECIMIENTOS

Agradezco a todas aquellas personas que, de alguna forma hicieron posible la culminación de este trabajo de investigación, quienes con su ayuda desinteresada, me brindaron información relevante e importante. A mi familia por siempre brindarme su apoyo, tanto sentimental como económico.

A mis profesores, en especial a mi maestro, Mg. Roger Antonio Rengifo Penadillos por su gran apoyo, por impulsar el desarrollo de mi formación profesional, ayudándome para la elaboración de esta tesis, por hacer de mí, cada día mejor persona, con los consejos que me brinda, y por el cariño que me tiene.

Que Dios los bendiga grandemente

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú.

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PRESENTACIÓN

Señores miembros del Jurado Dictaminador:

De conformidad con las disposiciones Legales y vigentes de Reglamento de Grados y Títulos de la Facultad de Farmacia y Bioquímica de la Universidad Nacional de Trujillo, someto a vuestro elevado criterio el presente informe intitulado:

“CUANTIFICACIÓN DE ANTOCIANINAS TOTALES DEL EXTRACTO ETANÓLICO DEL FRUTO DE Vaccinium corymbosum L. PROCEDENTES DE

LAS PROVINCIAS DE HUAMACHUCO Y VIRÚ”

Espero vuestra aprobación y dejo a su criterio la calificación del presente informe.

Trujillo, Diciembre del 2020

--- Acuña Trujillo Diana Lucia

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IV

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RESUMEN

El presente trabajo de investigación tiene como objetivo cuantificar antocianinas totales en el extracto etanólico del fruto de Vaccinium corymbosum L. procedentes de las provincias de Huamachuco y Virú; utilizando el método de pH diferencial.

Para lo cual se recolectó el fruto maduro de Vaccinium corymbosum L en las provincias de Huamachuco y Virú, seleccionándose la muestra, se cortó en dos partes, y dejándose secar a temperatura ambiente por 24 horas, pasado este tiempo, se secó en estufa a 40ºC hasta llegar a peso constante obteniéndose partículas uniformes, seguidamente se preparó por el método de reflujo, el extracto etanólico a la concentración de 10 % p/v. Para la concentración de antocianinas se tomó 1mL del extracto etanólico, se diluyó en una fiola de 10mL con soluciones buffer de HCl (pH 1.0) y acetato de sodio (pH 4.5) respectivamente. Se agito y dejó en reposo por 20 min. Posteriormente se realizó las lecturas de absorbancia en un espectrofotómetro a 700 nm y 510 nm, con los datos se calculó la concentración de antocianinas expresado en mg/L. Al comparar la concentración de antocianinas de los extractos etanólicos, se observa que el que procede de Huamachuco tiene 99,32 mg/L y de Virú 116,22 mg/L; mostrando una diferencia significativa p < 0,5 relacionada al lugar de procedencia. 5509 auxiliar bioquímica 17818229 nombrado

Palabras claves: Vaccinium corymbosum L, extracto etanólico, antocianinas.

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ABSTRACT

The objective of the present research was to quantify total anthocyanins in the ethanolic extract of the fruit of Vaccinium corymbosum L. from the provinces of Huamachuco and Virú; using the differential pH method. For which the ripe fruit of Vaccinium corymbosum L was collected in the provinces of Huamachuco and Virú, selecting the sample that was cut into two parts, and left to dry at room temperature for 24 hours, after this time, it was dried in an oven at 40ºC until reaching a constant weight, obtaining uniform particles, then the ethanolic extract was prepared by the reflux method at a concentration of 10% w / v. For the anthocyanin concentration, 1mL of the ethanolic extract was taken, diluted in a 10mL vial with buffer solutions of HCl (pH 1.0) and sodium acetate (pH 4.5) respectively. It was stirred and allowed to stand for 20 min.

Subsequently, the absorbance readings were made in a spectrophotometer at 700 nm and 510 nm, with the data the anthocyanin concentration expressed in mg / L was calculated. When comparing the anthocyanin concentration of ethanolic extracts, it was observed that the one from Huamachuco has 99.32 mg / L and the other from Virú 116.22 mg / L, they showed a significant difference p <0.5 related to the place of origin.

Key words: Vaccinium corymbosum L, ethanolic extract, anthocyanins.

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ÍNDICE

Pág.

DEDICATORIA………I

AGRADECIMIENTOS………...II PRESENTACION………III

JURADO DICTAMINADOR……….IV

RESUMEN………V

ABSTRACT……….VI

I. INTRODUCCIÓN… ... 1

II. MATERIALES Y MÉTODO. ...9

III. RESULTADOS ... 12

IV. DISCUSIÓN… ... 14

V. CONCLUSIÓN… ... 16

VI. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS ... 17

ANEXOS ... 21

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I. INTRODUCCION

Las plantas medicinales cumplen un rol importante, han sido usadas como fuente de medicina a través de la historia y continúan siendo la base de muchos fármacos empleados en el mundo, contienen una gran cantidad de compuestos bioactivos, cuyo consumo se ha vuelto popular entre los consumidores conscientes de los grandes beneficios en la salud del ser humano ^1,2,3.

El Perú tiene el privilegio de contar en su territorio con numerosas plantas medicinales, las cuales no han perdido su importancia medicinal; entre ellas la especie Vaccinium corymbosum L. (Arándano), baya comestible con pulpa dulce y jugosa, considerada como una de las fuentes más ricas de fitonutrientes antioxidantes. Pertenece a la familia Ericaceae, género Vaccinium, constituido por cinco especies dentro de las cuales el Vaccinium corymbosum L. es la de mayor importancia comercial ^4,5.

Es una planta cuyo fruto se caracteriza por poseer un color negro azulado, de sabor agradable y agridulce. El Vaccinium corymbosum L. (arándano), es una baya casi esférica, dependiendo de la variedad puede oscilar entre un tamaño de 0,7-1,8 cm de diámetro ⁶.

Las antocianinas son compuestos fenólicos del grupo de los flavonoides, dicha palabra deriva del griego anthos (flor) y kyanos (azul oscuro). Las antocianinas son las responsables de los colores rojos, azulados o violetas de la mayoría de las frutas. Es el pigmento más importante, después de la clorofila, que es visible al ojo humano; estas están presentes en la naturaleza en forma de pigmentos en

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flores, frutos, bayas y hojas con grandes variedades de estructuras químicas, concentraciones y siendo característica de cada material y atributo específico para la caracterización del mismo. También se considera que son metabolitos secundarios de las plantas con actividad biológica, debido a los altos niveles de antioxidantes valiosos, como los compuestos fenólicos ^7,8.

La coloración azul es característico por la presencia de antocianinas, las cuales son moléculas hidrosolubles, ampliamente distribuidos en el reino vegetal; son glucósidos de las antocianidinas, es decir, están constituidas por una molécula de antocianidina, que es la aglicona, a la que se le une un azúcar por medio de un enlace β-glucosídico ⁹.

El color de las antocianinas depende de varios factores intrínsecos, como son los sustituyentes químicos que contenga y la posición de los mismos en el grupo flavilio; por ejemplo, si se aumentan los hidroxilos del anillo fenólico se intensifica el color azul, mientras que la introducción de metoxilos provoca la formación del color rojo. El contenido de antocianidinas aumenta durante el proceso de maduración ¹⁰.

Las antocianinas son moléculas polares y consecuentemente son más solubles en solventes polares que en aquellos que son no polares. Las antocianinas son compuestos de polaridad intermedia que se extraen muy bien con solventes como el etanol de alta graduación ¹¹.

En estudios recientes, se ha reportado que las antocianinas inhiben el crecimiento de las células cancerígenas y ayudan a prevenir el cáncer del colón e

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impiden enfermedades del corazón al inhibir la síntesis del colesterol, mejoran la circulación y fragilidad de los vasos capilares, logrando beneficios antienvejecimiento. Por esta razón, se ha incrementado la demanda, lo que conlleva a la búsqueda de estudios de separación, caracterización estructural y al desarrollo de técnicas analíticas para cuantificar las antocianinas obtenidas ^8,13,15.

En solución hidroalcoholica, las antocianinas existen en cuatro diferentes formas en equilibrio: la base quinoidal, el catión flavilio, el carbinol o pseudobase, la chalcona. En soluciones muy acidas el equilibrio se desplaza hacia el catión flavilio, existiendo sólo de esta forma ^10,¹¹.

Estructuras de antocianinas a diferentes valores de pH.

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Al incrementar el pH se reduce la intensidad del color debido a la disminución de concentración de este catión, el cual se convierte en su forma de hemiacetal a través del ataque nucleofílico del agua. Cabe mencionar que las antocianinas pierden cerca del 80% de la intensidad de su color en un intervalo de pH de 1 a 5 como resultado de la formación de la base carbinol ^11,12.

Las antocianinas son más estables en medio ácido que en neutro o alcalino. En medio ácido la forma predominante es el ión flavilio, el cual da una coloración roja, cuando esta es sometida a pH básico o alcalino, el ion flavilio es susceptible al ataque nucleofílico por parte del agua, produciéndose una pseudobase carbinol, esto a pH 4,5 y seguido se forma la chalcona estas dos formas son incoloras. Conociendo esto las antocianinas tienen su máxima expresión a pH ácido y su forma alcalina a pH neutro o alcalino, Giusti et al se basaron en esta característica para realización del método de pH diferencial utilizado en la cuantificación de antocianinas totales. ⁷

Las antocianinas se caracterizan por tener una deficiencia de electrones debido a su particular estructura química, que las hace muy reactivas frente a los radicales libres presentes en el cuerpo. Muchas de las propiedades atribuidas a las antocianinas para mejorar la salud están asociadas a la capacidad de actuar como antioxidantes y secuestrar radicales libres en sistemas biológicos, y esto depende de la cantidad de antocianinas presentes en las bayas, flores y/o hojas; por lo cual pueden donar hidrógenos o electrones a los radicales libres o bien atraparlos y desplazarlos en su estructura aromática ¹¹.

El contenido total de compuestos fenólicos en arándanos es muy variable, el cual

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se ve influenciado por la variedad, el modo de cultivo empleado, las condiciones medioambientales, el estado de madurez del fruto y el método de análisis pueden explicar las variaciones en las concentraciones fenólicas de la fruta ² .

Existen factores que predisponen a acumular niveles más altos de antocianinas;

la zona de procedencia de las especies vegetales influye en la composición química de las mismas, el contenido de azúcares totales (fructosa y glucosa principalmente) oscila en un rango entre 10 y 14%, de los cuales cerca de un 95% corresponden a azúcares reductores. El principal ácido orgánico presente es el ácido cítrico seguido del ácido málico. El balance entre azúcares y ácidos es muy importante en la calidad del sabor de estos frutos ^18,19.

Por ello su uso y consumo ampliamente difundido en nuestro país, es importante para contribuir con la prevención y tratamiento de diversas enfermedades que afectan a la población. Por lo tanto, el consumo de los diferentes preparados de esta especie vegetal puede presentarse como una excelente fuente de antioxidantes naturales, estando directamente relacionado con la concentración de antocianinas en el fruto ²⁰.

Ruiz G (2014) en su trabajo; Cuantificación de polifenoles totales y capacidad antioxidante de los extractos de diferente grado alcohólico del tubérculo de Solanum tuberosum var. mano de oso, concluye que a mayor grado alcohólico

utilizado para la preparación del extracto mayor es el porcentaje de polifenoles extraídos ²¹.

Vázquez S. y Guillén R., evaluaron la funcionalidad de distintos arándanos cultivados en Andalucía investigando la composición fenólica y la capacidad

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antioxidante. Donde se cuantificaron fenoles totales por el método del Folin Ciocalteu ¹⁶.

Bautista S., y Garrido R., en su trabajo de investigación intitulado

“Cuantificación de antocianinas totales en el extracto acuoso de Zea mays L variedad morado y determinación de la capacidad antioxidante in vitro”

concluye que existe diferencia significativa entre las muestras de Zea mays L, variedad morado de Cuzco, Arequipa, Caraz, Canta y Ayacucho trabajadas en las mismas condiciones ⁷.

Por lo expuesto anteriormente es necesario realizar el estudio de esta especie, debido a la tendencia en nuestra población peruana para recurrir al uso de plantas con propiedades curativas, de fácil acceso y bajo costo, el presente trabajo pretende conocer la cantidad de antocianinas para en posteriores estudios farmacológicos poder establecer una adecuada dosificación que resulte en beneficio de la población, contribuyendo de esta manera a fomentar estudios que respalden científicamente el uso popular, en el sentido de verificar si la planta estudiada, Vaccinium corymbosum L (Arándano), puede considerarse como una alternativa para la base de futuros fármacos y productos alimenticios, que beneficien a la salud de la población y comunidad.

En el presente trabajo de investigación se va averiguar cuál es la concentración de antocianinas totales en el extracto etanólico del fruto de Vaccinium corymbosum L. (Arándano) procedentes de las provincias de Huamachuco y Virú.

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El objetivo general del presente trabajo de investigación fue determinar la concentración de antocianinas totales del extracto etanólico del fruto de Vaccinium corymbosum L. (Arándano) procedentes de las provincias de

Huamachuco y Virú. Mientras, los objetivos específicos planteados fueron determinar la concentración de antocianinas totales del extracto etanólico de los frutos maduros del Vaccinium corymbosum L. mediante el método de pH diferencial. Y finalmente comparar la concentración de antocianinas totales del extracto etanólico de los frutos maduros de Vaccinium corymbosum L. de acuerdo a la zona de procedencia.

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II. MATERIAL Y MÉTODO 1. MATERIAL:

1.1 Material Biológico:

1 kg de los frutos de Vaccinium corymbosum L. (Arándano) procedentes de las provincias de Huamachuco y Virú.

1.2 Material Químico:

- Agua destilada - Etanol 96° G.L

- Buffer ácido clorhídrico (pH 1).

- Buffer acetato de sodio (pH 4.5).

1.3 Material de Laboratorio:

1.3.1 Material de vidrio

- De uso común en el Laboratorio 1.3.2 Equipos

- Balanza analítica – Sartorius – Modelo BP315-13005198 - Cocina eléctrica- Tristar Kp-6185.

- Espectrofotómetro –Thermo scientific – Modelo Genesis 20 - 3560080003

- Estufa Marca MEMMERT

- Potenciómetro “Metrohm” serie 38946

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9 2. MÉTODOS ^{9, 12,17}

2.1. Recolección de muestra

Se recolectó 1 kg de los frutos maduros de la especie Vaccinium corymbosum L. (Arándano) procedente de las provincias de

Huamachuco (Altitud: 3169 msnm.; Latitud: 7°49′36″ Sur; Longitud:

78°02′46″ Oeste) y Virú (Altitud: 76 msnm.; Latitud: 08º24’56” Sur;

Longitud: 78º45’04” Oeste).

2.2. Preparación de la muestra 2.2.1. Identificación de la muestra

El material biológico se identificó en el Herbarium Truxillense de la Universidad Nacional de Trujillo, asignándole el Nº 60291 al procedente de Huamachuco y el N° 60390 al procedente de Virú para su depósito. (Anexo 1 y 2)

2.2.2. Selección y lavado

Se procedió a seleccionar los frutos maduros de la especie Vaccinium corymbosum L. (Arándano) al azar teniendo en cuenta

su buen estado, es decir sin daños superficiales. Luego se lavaron con chorros de agua destilada.

2.2.3. Secado en estufa:

El fruto maduro se abrió por la mitad usando un cúter de forma vertical, el secado se realizó a temperatura ambiente sobre papel Kraft por 24 horas, continuándose con el secado en estufa a 40 °C en bolsas de papel Kraft perforadas, hasta peso constante.

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2.3. Cuantificación de antocianinas totales por pH diferencial:

2.3.1 Fundamento del método:

La cuantificación de antocianinas se realizó por el método de pH diferencial. Este es un método espectrofotométrico, se fundamenta en la particularidad de los compuestos antociánicos de adoptar diferentes coloraciones y estructuras a determinados pH, siendo para este método la concentración de antocianinas totales proporcional a la diferencia entre las absorbancias a pH 1 (forma oxonium) y pH 4,5 (forma hemiacetal) será proporcional al contenido de antocianinas presentes en la muestra analizada ^7,11 .

2.4. Obtención del extracto etanólico de los frutos maduros de la especie Vaccinium corymbosum L. por el método de reflujo.

Se pesó 10 g de la muestra vegetal seca, reflujandose con 100 mL de etanol a 96° G.L., luego se sometió a calor controlado hasta ebullición por 15 minutos; dejandose enfriar a T° ambiente hasta 30°C, luego el contenido se filtró para obtener el extracto etanólico libre de partículas sólidas; aforándose posteriormente a 100 mL con etanol de 96° G.L, obteniéndose un extracto etanólico de 10% p/v de concentración.

Posteriormente 1mL del extracto etanólico, se diluyó en una fiola de 10mL con soluciones buffer de HCl (pH 1.0) y acetato de sodio (pH 4.5) respectivamente. Se agito y dejó en reposo por 20 min.

En las soluciones preparadas se determinó el contenido de antocianinas según el método Giusti & Wrosltad de pH diferencial,

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utilizando un espectrofotómetro UV-VIS Genesys 20, registrandose las absorbancias obtenidas por triplicado, a longitudes de onda de 510 nm y 700 nm, expresando el contenido de antocianinas como cianidina-3- glucósido de acuerdo a la siguiente fórmula:

Total antocianinas (mg/L)=A×PM×FD×1000/(ε x l) Donde:

 A (absorbancia) = (A510 - A700) pH 1,0 - (A510 - A700) pH 4,5.

 PM (Peso molecular): 449,2 g/mol para cianidina-3-glucósido

 FD: factor de dilución

 ε (coeficiente de extinción molar para cianidina-3-glucósido) :26 900 M^-1.cm^-1

 1000: factor de conversión de g a mg.

Los análisis fueron realizados por 5 veces (n=5) 2.5. Análisis estadístico de datos

A los datos obtenidos se le realizó una representación gráfica en función a la procedencia de la muestra versus la concentración de antocianinas y fueron caracterizados mediante parámetros estadísticos descriptivos: Promedio, Desviación Estándar Relativa, Análisis Anova.²⁵

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III. RESULTADOS

Cuadro 1: Cuantificación de antocianinas (cianidina-3-glucósido) del extracto etanólico del fruto maduro Vaccinium corymbosum L. procedentes de las provincias de Huamachuco y

Virú.

(Ver Anexo 4)*.

Muestras Lecturas Método pH Diferencial A C mg/L

Promedio Desviación Estándar

RSD

pH 1,0 pH 4,5

510nm 700nm 510nm 700nm

Huamachuco

M1 0.654 0.034 0.036 0.014 0.598 99.86

99.32 0.75 0.76

M2 0.654 0.044 0.036 0.013 0.587 98.02

M3 0.654 0.032 0.036 0.010 0.597 99.69

M4 0.654 0.035 0.035 0.011 0.595 99.36

M5 0.654 0.036 0.034 0.013 0.597 99.69

Virú

M1 0.726 0.019 0.021 0.004 0.699 116.73

116.22 0.41 0.35

M2 0.729 0.019 0.020 0.004 0.694 115.89

M3 0.724 0.020 0.021 0.004 0.691 115.72

M4 0.726 0.022 0.022 0.003 0.697 116.39 M5 0.736 0.020 0.023 0.004 0.697 116.39

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Para el cálculo del contenido de antocianinas se utiliza el peso molecular y la absorbancia molar del pigmento antociano presente en mayor proporción, la cianidina 3-glucósido.⁷

Donde:

C = Concentración (cianidina -3- glucósido) mg/L

A = (A a 510 nm – A a 700 nm a pH 1,0)- (A a 510 nm – A a 700 nm a pH 4,5) PM= 449,2 g/mol

ε = 26900 L /mol cm FD: Factor de Dilución: 10 L: Longitud de la celda 1cm

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Figura 1. Comparación de la cuantificación de antocianinas del extracto etanólico del fruto de Vaccinium corymbosum L. procedente de las provincias de Huamachuco y

Virú respectivamente.

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IV. DISCUSIÓN

En el presente trabajo se ha determinado el contenido de antocianinas totales expresado como cianidina-3-glucósido, que es el pigmento antociano presente en mayor proporción, encontrado en los extractos etanólico del fruto Vaccinium corymbosum L. procedentes de las provincias de Huamachuco y Virú ^7,11.

Los resultados de la presente investigación demostraron una evidente necesidad de investigar las propiedades de cualquier sustancia natural de acuerdo a su zona de procedencia, porque allí juega un papel importante la composición total de los compuestos fenólicos del fruto, que dependerá en gran medida de la maduración, en el cual el contenido de antocianinas aumenta durante dicho proceso ²².

Se observa en la figura N°1 el promedio de las concentraciones de antocianinas correspondientes a los extractos etanólicos de los lugares de Huamachuco y Virú, donde los valores son 99,32 mg/L y 116,22 mg/L respectivamente, esto se interpreta que la muestra con mayor concentración de antocianinas fue de la procedencia de Virú y teniendo como valor más bajo al procedente de Huamachuco. Existiendo una diferencia del 17,01% entre el contenido de antocianinas de las diferentes zonas de procedencia.

Haciendo una comparación del tipo de muestra que se usó en la investigación y teniendo en cuenta que las zonas geográficas no son las mismas; la composición del fruto cambia. Esta variación entre los valores depende de diversos factores como: la diferencia de suelos, al ser de diferentes zonas, los factores genéticos predisponen a ciertos cultivares a acumular niveles más altos de antocianinas, por lo tanto también

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se encuentra que en diferentes cultivares de arándanos, muestran diferentes perfiles de antocianinas por ello las proporciones de cada compuesto son dependientes del cultivar, también de las épocas de lluvia, cantidad de luz, entre otras que hacen variar la calidad y rendimiento de los principios activos de las plantas ^7,22,23.

Berta G. y et. al. confirma que dependiendo de la etapa de madurez, la cosecha, la temporada y los diferentes tipos de almacenamiento, dependerán las características organolépticas del fruto. Dicha investigación tuvo como conclusión, que mientras el fruto sea más maduro, aumentará el total de compuestos fenólicos presentes en el fruto.²²

Precisando como influyen los factores externos en la composición de la especie, se ha demostrado que el fruto de Virú contiene una mayor concentración de antocianinas, demostrándose que la productividad en Virú es de mayor calidad, debido a que cuenta con buenas condiciones agroclimáticas; la cosecha de la baya es una de las actividades más importantes en el proceso productivo, debido a la delicadeza de la baya. La temperatura del suelo es una variable a considerar en el cultivo del arándano; un tipo de suelo que no es problema para el cultivo de arándano, adaptándose bien a las condiciones del clima, puesto que el arándano tiene la particularidad de desarrollarse mejor en condiciones de suelos ligeros, con un porcentaje alto en materia orgánica y buen drenaje ²⁴.

Este tipo de factores se evidencia en la intensidad de la concentración que presentan los extractos vegetales de diferentes procedencias al ser comparados entre ellos.

Estos resultados sugieren un potencial para este fruto como fuente de nutracéuticos.

Con los resultados de la presente investigación se pretende dejar un antecedente de

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las concentraciones de antocianinas in vitro de Vaccinium corymbosum L., para su posterior utilización y aplicación in vivo para la elaboración de futuros fármacos, que contribuyan para la salud de la población y comunidad del país. ²⁴

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V. CONCLUSIONES

1. El contenido de antocianinas totales en el extracto etanólico del fruto maduro de Vaccinium corymbosum L. procedente de las provincias de Huamachuco y

de Virú es 99,32 mg/L y 116,22 mg/L respectivamente.

2. Se comparó las concentraciones de antocianinas totales del extracto etanólico de los frutos Vaccinium corymbosum L. de acuerdo al lugar de procedencia siendo superior el que procede de Virú, en un 17,01% con respecto al que procede de Huamachuco.

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VI. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

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ANEXOS

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ANEXO 1, Identificación taxonómica de Vaccinium corymbosum L, (Arándano) procedente de Huamachuco,

N° del material botánico.

Ejemplar de Vaccinium corymbosum L.

(Arándano) procedente de Huamachuco.

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ANEXO 2, Identificación taxonómica de Vaccinium corymbosum L, (Arándano) procedente de Virú,

N° del material botánico.

Ejemplar de Vaccinium corymbosum L.

(Arándano) procedente de Virú.

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ANEXO 3.

Análisis de varianza de las Muestras para las Lecturas Obtenidas RESUMEN

Grupos Cuenta Suma Promedio Varianza

Muestra Huamachuco 5 496.62 99.324 0.56423

Muestra Virú 5 581.12 116.224 0.16918

ANALISIS DE VARIANZA Origen de las

variaciones

Suma de cuadrados

Grados de libertad

Promedio de los cuadrados

F Probabilidad Valor crítico para F Entre grupos 714.025 1 714.025 1947.137345 7.67752E-11 5.317655072

Dentro de los grupos

2.93364 8 0.366705

Total 716.95864 9

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27 Análisis de varianza de un factor

1. Entre grupos

H0 = No existe diferencia significativa,

Ha = Existe diferencia significativa entre la cuantificación de antocianinas del extracto etanólico del fruto maduro de Vaccinium corymbosum L, procedente de las provincias de Huamachuco y Virú.

Criterio Pexp, < Ptab,

7.67752 E-11 < 0,05 Decisión: Rechazar H0

Entre grupos: Existe diferencia significativa entre la cuantificación de antocianinas del extracto etanólico del fruto maduro de Vaccinium corymbosum L, procedente de las provincias de Huamachuco y Virú.

(36)

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ANEXO 4.

1. Cálculo de la concentración para la cuantificación de antocianinas en el extracto etanólico del fruto maduro de Vaccinium corymbosum L., procedente de Huamachuco.

Muestra 1:

Muestra 2:

Muestra 3:

Muestra 4:

Muestra 5:

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29

2. Cálculo de concentración para la cuantificación de antocianinas en el extracto etanólico del fruto maduro de Vaccinium corymbosum L., procedente de Virú.

Muestra 1:

Muestra 2:

Muestra 3:

Muestra 4:

Muestra 5:

(38)

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Fruto maduro de Vaccinium corymbosum L.

ANEXO 5. Esquema del trabajo realizado a. Recolección de la muestra

b. Preparación de la muestra

Secado del fruto maduro de Vaccinium corymbosum L. a 40 °C

hasta peso constante.

Secado del fruto maduro de Vaccinium corymbosum L. a temperatura ambiente por 24 horas.

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Se pesó 10 g de la muestra vegetal seca, se reflujaron con 100 mL de etanol a 96°

G.L., luego se sometió a calor controlado hasta una ebullición de 15 minutos; se dejó enfriar a T° ambiente hasta 30°C

Filtración del extracto etanólico del fruto Vaccinium corymbosum L.

c. Obtención del extracto etanólico por el método de reflujo

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Cuantificación de antocianinas (cianidina-3-glucósido) del extracto etanólico del fruto Vaccinium corymbosum L. procedentes de las provincias de

Huamachuco y Virú.

d. Cuantificacion de antocianinas de los extractos etanólicos del fruto maduro de Vaccinium corymbosum L.

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