Mejoramiento de plantas a través de haploides producidos in vitro

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(1)ME.IORAMIBIW)DE PIANTAS A TRAVESDE EAPLOIDESPRODT]CIDOS IN VIIAO *. Juan JaramiLlo I.. V. **. INIRODUCCION. Durante los últiroos 20 años se ha venido trabajando en producción de haploides utilizando nicro y nacrosporas en diversae fornas tales coEo anteraB_, Bicrosporas, ovarios y óvu1os. El progreso ha sÍdo enorne paeando de 150 especies en lggd hasta 21g en 1tg6-(6, 1I). la planta haploide se define cono la que ae origÍna de un esporofito y contiene la nitad de1 núl¡ero de cromósomas. los prineros háploides descritos provenlan de Datura stramonium y para aquella época, LgZ2, Blakeslee(3)dise¡óun-iste-ena--ñE-ñEJóTamiéntobásadoen-proáucctón ¡o" ge obtuvo una planta haploide ar una nueva variedad denominada ulecke ( l9) observó crecimientos ggc biloba y en 1964 Guha y Haheshde Datura inoxia (7). Finalnente Nitsch en-1969 ¡rbtuvo planras adultaEilil iáiElpara ello la especie Nicoriap (16), estadio a parrir atfinis del cual se ha desarroifuao TEIiE Herberle-Boss define co¡noil área nás avanzada del tejido de cultivos (8).. II.. USO DB IAS PIA}¡TAS EAPI¡IDÉ;. l.. Producción rÁpida de honocigotes; el proceso tradicional de nejoraEiento- de plantas puede necesitar varios años para llegai a F*-Fr, (nornalmente en el trópico se obtienen 2-i generaclones pór áio. Con el uso de haploides el proceso'se obtiene con una generación. Este es el uso nás i¡¡portante oue ofrece el .método de los haptoides. Debe tenerse en cuenta que esto depende deI tipo de planta; e1 proceso es nás rápido cón bíanualeÁ que con anuales y en especies de invierno que de primavera (lZ).. 2.. Detección de recesivos y rnuEances. Contribución lgropecuario. del Programa de Hortalizas. - fCA.. Instituto. Ing. 4gl. Ph.D. Jefe Regional Programa de Hortalizas A.A. 233 Palmira.. 123. Colombiano ICA Palmira..

(2) 3.. Estudios. genéticos.. Entre. e1los cabe destacar l. génica Detección de interacción génicas varÍanzas Estimaci6n de Detección de lígamento Estimación del íúmero de genes que afectan vo. 4.. Estualios de diferenciación ciones .. f.. Variación sonaclonal. III.. celular. un caracter. cuantÍtatt-. y de 1a alternación. de genera-. DE gAPI.OIDES PARALA OBTENCION }IETODOS. - Ilaploides tín vivot. Existen diversas metodologías- .para la obtenEntre el1as sobregalen z (2) ' clón de haplotdes in vivo. 1. Estiu¡ulación de1 óvul,o, sÍnérgiclas o esperna con base e frradiación ionizante, radioisótopos o shocks térmicos. 2. Hibrirlización distantei es el métorlo más exitoso, cuya mecodología es de efecto probado en cebada y otras especies (Figura L)' 3. Polinizaci.ón demorada 4. Aplícación de polen abortivo 5. Aspersión con qulmicos. - Haploides 'in vitro'. Puerlen obtenerse por diversos. !1lT?i; Cult¿vo de ante¡as; es el nás usado a pesar de que la pared anterlal' contiene sustancias gue son desfavorables para el Proceso 9sp9lo:1:a(2'll). co. pero contiene taflbi¿n otros que sí ayudan a 1a inducción E - Cultivo de microsporas y protoplastos (del mesófilo)' ?1q:??: produccl-on la ha facilítado especies la separación de Ías nicrosporas tle haploicles, ial es el caso de 7a colza y ot¡as brássicas ' de haploides se hace - Cultivo 'ciómb'sómicá. ' -ir de embrlones -élimi-tiáá¿ii-ióvenes: ,1a producción los eníbri-ones provleCuantlo . tiáiEÉ áe nen de cruces distantes cono en el caso de 1a cebada o 1a papa'. tt4.

(3) HoRXE[fi vrncAxE(vv). HOJI:TIINI BIJLJ]OSUM (i}B). = 2x= 14. Pf,Ail,¡i l'.¡l;\!.'l Llli.: (il ?t'- -. 2X = 7. ¡,. CLil.\ilA. OrLTI\¡CDELEI\,tsRION Figura 1.. Representacidnde la tdcnic¡ rr¡r'¡ (a trarés dc l!: ; - ':.::. : . :1... I '1" (Segfrr rala¡, Y.P.s.i984).. Partenogénesis. : a través. de J.a regeneración. nmr'lrrr-i -.'. '.. r^. cebai:l nc;to-,.'cidc. :. de 1 a s s i n é r g í d a s ( n ) .. pueden proveIas mi.crospo1os óvulos en. haploides pueden generarse a travég énesis indirecta o calIos, Desde nótica es deseable e1 primer sisteIa I dedi-ferenciac ión ' , e1 producto acterí-eticas genéticas sin cambios. (ca11os), puede ¡:resentar úItimo lacios 1os Drocesos que sufren 1as cáli'ias a lcls estaCos Ii:¡i srl; áEi-. !¿).

(4) ganrética hacia Ia formación de un esporoEL proceso de diferenciación De acuerdo con VilLanueva añdrogénesis., cono puecle definirse fíto este fenómeno es la secuencia de eventos que comienza con et al, de 1as microsporas y termlna con la induccÍón tle embriones a partir ( 2 2 ) . p l á n t u l a s d e la formación. PRODI'@IONDE EAPLOIDES. rTT.. Ia metodologla conprende 4 etapas a saber': . . , .. Desarroll-o de técnicas Identi-ficación de factores Caracterización de regenerantes de los haPloides Utilización. - Entre las técnicas que utilizan. gametos rcasculinos' se tienen:. (Figura 2) LCultivo de anteras en nedío líquido o só1ido puede hacerse por que 2.Cu1tivo de microsporae aisladas métodos:. diversos. tNodriza' en el cual las nicrosporas se colocan sobre cultivo 'Derrade1 medio (Fígura 3), y por papel filtro estéril 1as anteras se exprimén en un medio líquido ner mediante el cual "i=fu¿"= l,a flotación de anterae pernipara liberar así las nicrosporas. de rnicrosporas en el medio llquido cono en ie ta liberación el caso de la cebadaFactores que influyen. en la producci6u de haploides:. Físiología del <tonante o planta nadre En e1 caso de las brasicas Ternperaiura de crecimiento ¿" tt planta' bajas incrementan que temperaturas visto ("ii"^ y tabaco) se ha la respuesta androgénica. en lae Luz; alta intensidad induce alta respuesta especialmentse influencian largos) (días o cortos asimisno e1 fotoperíodo ttá=i..", especie' la de Ia respuesta dependÍendo Desarrollo. de la antera. L26.

(5) 6iñ ¡flcRosPoRAS-*t AISI"A,DAS. , \. ,tr1 ¡u \F. IE IúIMOSPORAS. J-. J. @ L rffi). w. v. r:. E. E¡ARION ACORAZOMDO EMBRION COTII.EDOI'IAR PLANII,JLA IIAPI¡ITÉ (Dih4loide) Figura 2.. DIFTRENCiACICh¡ DEL CALI¡. Sistenáq de proórcidn de luploides a través de ci.:ltirn de anteras y rnicrosporasaisladas (sajaj,v.p.s. 1934).. El estado en que se cosecha la antera o la flor tiene especial influencia en 1oé resultados; el esLado más apropiado para muthas especies está situado entre el inicio del estado uninucleado hasta el inicio pudiéndose anpliar del binucleado desde 1a tetrada hasta e1 binucl-eado para 1a mayoría de las especíes. El caso del tomate es excepcional por cuanto J-as mejores respuestas se han encontrado desde el inicio de la profase de neiosis hasta eI de tetrada. En trigo se ha encontrado respuesta desde 1a interfase hasta e1 inicio del estado binucleado. Para efect.os prácticos el análisis de desarrollo de las anteras debe partir de 1a fi.jación de 1as mlsmas para de-Lerminar e1 tanaño adecuado para 1a excisión de 1as anteras. En general existe una correlación aceptable y entre estado tamaño de desarrollo aunque tarnbién debe recordarse que no hay estados pfecisos sino más bien una rnezcla de las diversas cé1ulas dentro y entre anteras de una misrna flor.. 127. l I.

(6) DISCO m PAPELFILTRO. INOCIJIACION ML O.ILTIVO NODRTZA. lSPIg BASAL \.s</. GR¡¡IOSDE POLENIMIADIJRO DISCODE PAPELFIITK) AITIERA. I'{EDIOBASAL DISCODEPAPELFILTRO ETtsRIO.¡. SUSPEII¡SIO'¡ DE. ttrffiosPoR.As. Figura 3J Representacidn de cultívo de nicrosporas por ledio de @1tívo nodrizt. ($ra¡?, et al-, 1972),. En algunas_eapeclea exieten .célu1ae gametoflticas atlplcae (por. q1:n9" T t". llaoadaE -s"" Eobrfogéneelg), S (Esioroflrtcos) o Fl-<p"f""1, ruta esporofltica, 1os cuales dífieren morfológlcamente. ?18::i de ros granos normalee¡. Le mayorla de este ripo de polen ei algunae especles puede deberse a dificultades en Ia tinción (g). De .acuerdo con la teorla de Heberle-Boss (g), es en 1a ínterfase (Gt)-donde se realiza la lnducción de J-os granos p, 1os cuales sufren ertmr-nacaon de ribosomas durante la profase, más adelanEe se presentan polisonas que conti€nen nARN esporo?ílico llamados también i'determi_ sí a1 final de meiosis donde se tícu1as de informacíón esporofitica. illr.i'i ; "l;",'r'r'rT; ;X'""*i?"",':::-. siciónesporof ítica-garnerori.i.u",,lXT'.i11"r'""*:H"'?""t#ri:r::;:ra (8).. l"a ví1 esporofítica puede originarse de diferentes¡ fornas según eI tipo de división niLítíca de las rnicrosporas dando lugarc Io qu" se ha denoninado por varíos autores corno trutast. Se ha¡iobservado derivados de las cé1ulas generatiIa espora (división simétríca) o :ativas y generativas (2n). Depen:ndrán diferentes ploidías en las iI8) (Fisura 4).. 728.

(7) A.G. B. A-V. c1. O rnRrv¡ms rE LA CEITJLA GENERATIVA. @ rnnrv¡oc rE tA ESpoRA Figura 4.. A- GV. @. [ERIvAmsrE tA GLUrA VEGETATIVA. O. DERIVADoS m zusroNrE GUJI.AS GNERATIVASY \EGTATIVAS. 6 diferentes tr¿merasde divisidn de nicrosporas vfa esporofftica. (Adsptaab de Sr¡rderland, 1985).. los óvulos a diferencia de las anplio de desarrollo (2, 9).. anteras. responden en un rango rnuy. EI contenido de alnidón en las céIulas gametofíticas parece estar relacionado con el creciniento esporofíticá; una vez que Ia acunulación del carbohidrato conienza se áefine e1 irecimiento esporofítico. - PretratanÍento de las células garaetofít.icas - Temperatura. loe tratallientos pueden dirigirse a 1as inflorescencias-, 1os botonee florales o las anteras. Éntr. los nás u.ádos están Ia; tenperaturaa bajas_ que pueden tener influencia sobre la disruicfón de ?1a.1.g ras fibras del huso en ¡ltosis o sobre el balance hormonál shock os¡nótico dando cono resultado 1a fornación de células hapLoides o con diferenre pLoidlas (ll).. 729. I.

(8) Reducción en 1a presión. atmosférica. Precult.ivo en agua. Tanto fas anteras como 1as inflorescencÍas especialftente en gramíneas pueden cultivarse en agua para afecEat balances hornonales que a su vez tienen influencia sobre e1 desarro11o posterior de 1os gametos. Composición del sledio. Desde el punto de vista físico, el medio puede ser sólido o líquido dependiendo de ]a especie. El úttino ambiente ha probado ser úEil para papa, colza, artoz y cebada (8, 20). Se pueden emplear también láminas 1íquidas sobre só1idos.. Los medios contienen a1 menos 4 grupos de sustancias necesarias para eL desarrollo de1 tejido (13). Entre el1as están: . Carbohidratos, Como fuente de energía especialnente la sucroea. (especies bicelulares) Para Dicotiledóneas se usan nás 1os medios bajos en sucrosa y las monocotiledóneae se cultivan con alta concentración (6, I8). , Reguladores de crecimiento- Auxinas: son esenciales, tienen efectos sobre 1a división celular y el desarrol-lo. Citoquininas: a veces su rel-acÍón tiene efectos sobre e1 producto enbri-ones o callos generalmente medios sin reguladores o con final; baja auxina tíende a índucir enbriogénesis. Otras sustancias son e1 ácido giberólico, el ácido absícico y el etÍleno que pueden tener efectos positivos en dosis bajas dependiendo de1 estado de desarrollo de la antera. Para algunas especies como 1as brásicas, los 3 últimos conpuestos pueden tener efeclos tóxicos (10, f2), o mezclas dependiendo Vitaninas: especialnente 1a Ba (Tiamina) la fornulacÍón, en algunas fórmülas se añaden otras más.. de. hierro, . Suplenentos varios tales como arninoácidos, carbón activado' elemento importanEe en el plan de desarrollo de1 enbrión entre 1as etapas de corazón y torpedo (9).. , Cantidades y fuentes de NitróBenol altas relaciones de Nitrógéno, Nítrico/nitrógeno amoniacal son deseables para ciertas especies (2), observar así' cono niveles Es interesante altos de este elemento. bajos que en cambi-o las plantas madres deben culEivarse con niveles de N. para medios só1idos el uso de agar u otros agentes . Solidificantes: solidificantes es necesario. Normalnente se recomiendan 10s tipos purificados para evitar acción tóxica sobre 1a antera (20).. 130.

(9) Existen numerosos nedios registrados en Ia. I.1¡s¡a¡raa aunque Ia nayorla son derivados de unas pocas fórmulas básrcas que se rer'ontan a las fornulaciones hechas. para. cultivo de plantas en nedio hidropó_ nico o inerte. Los más utilizados sin enbargo son 1os de Murashige y Skoog (MS) basal o revisado (alro en sá1es). E1 de l^ihite; e1 de Nitsch y Nítsch (a1to en vitaurÍnas) y e1 ite Ga.nborg, cono;id; c cao el B, con alto contenido de Nitrógeno (NOr). En general Los medios son inportantes y es posiblenente uno ile Loe factores a ser investigados y deterhinados y aunque posiblemente no conllevan a J-a producción de microsporas esporofíiícas es índudable que favorecen y ayudan a 1a expresión final de las misnas. De acuerdo con Heberle-Borss, debe recordarse que las células in vitro pueden no aer totipotentes ya que cierta infornación genética puede aer bloqueada irreversiblenente y que Ios ingredienEes no son capaces de romper este bloqueo (8). - Hanejo de anteras. Densidad de siernbraI Existen mínimos por unidad de área o volúmen; para que haya reapuesta positiva en cebada se requieren más de 60 anteras/nL, en coLza 6/m1. La respuesta está relacionada con eI acondicionamiento del medio y en algunos casos con 1a producción de etileno o C0, (6, 9). para 1a mayorla de las Orientación v colocación de las anteras: especies ést-as deben colocarse superficialñente con presión leve en el medio' y con las aberturas hacfa arriba. Las anteras deben eb-tar limpias de tejidos diferentes co¡¡o e1 del pedicelo. - Medio anbiente en el cultivo. Temperatura: períodos de temperaturas altas al inicio del cultivo in vi.tro son recomendables. En general se deben utilizar unos pocos grados por encina de los adecuadas para la especie en campo al menos en los períodos iniciales. (r8).. - Concentración de C0: concentraciones del 27" favorecen Ia formación de embriones en cultivos de anteras de varias especies no relacionadas. El sellado de Los olatos de DeEri con papel parafÍnado favorece esta condición. .- Genotipo del donante. S e ha encontrado que la respuesta androgéniinteracción genotipo ambiente. ca está condicionada por En tabaco arroz las variedades eficientes cir callos. En los tipos hrhite responden mejor que 1os otros (2). variedades tlpo Japónica dan mejores resultados que las (5). son más Indicas En colza Ios tipos de invierno que 1os tipos de pri.mavera (9). La habilidad para produo embri.ones es heredable v está condicionada por un número. r31.

(10) e1 ca11o ernbríogénico se pasa _a medio En enrbriogénesis indirecta 1os embriones' para más tarde basal nás-alta auxina para inducir rnúltiples. hacer transferencias En general una vez se han obtenido 1os embriones con alta auxj-na, las Lransferencías se hacen a nedio sin o con baia auxina.. l,as plántulas o enbriones obtenidos en nedio sólido sas que en r¡edio líquido.. son nás numero-. - CaracterizacÍón de productos. de proceso E1 resultado final in vitro puede ser el dé plántulas haploides, diploides (dihaploÍdes), poliploides y aneuploides, incluyeldo mezclas entre las diversas categorías. Por 'el1o es necesarÍo identificar e1 material obtenido para asegurar plantas deseables, es decir, 1os haploitles verdaderos. Debe tenerse en cuenta que en varias especies como en tritical.e las aberraciones encontradas en pIántulas ya existían en las microsporas. Existen tanbién necanísnos de endomitosis que pueden explicar plantas de diferentes ploidlas. Asl mieno 1a aparición de plantas heterocigóticas pueden originarse de cé1u1as gaoéticas heterocigóticas (10). E1 análisis de'1as plántulas obtenidas íncluye el uso de narcadores morfológicos y quínicos incluyendo el- uso de isoenzimas por electroforésis y DNA a través de fragmentcs de restricción. El uso de técnicas cit.ológicas conpleta 1as. metodologlas para identificaci.ón y caracterización de 1os productos (9). Con relación a 1a identidad genética de las microsporag in vitro e in vivo, los aná1isis de isoenzinas en brásicas han demosLrado una mayor proporción de tipos de migración rápida en las plantas regeneradas (17). En arroz por e1 contrario, 1as microsporas repreEentaron los radios teóricos que deberlan encontrarse en una poblaclón de microsporas (5).. IV. CAPTACTERISTICAS GEIIERALESDE IIIS PLANTASHAPIOIDES Con relacién a las plantas diploides naturales, des in vivo o in vitror preseotan las siguientes . . . . , . .. Vigor reducido Enanismo o poca altura Textura tierna de algunos órganos Hojas delgadas y estrechas Flores estériles, pocas semillas o ninquna Raíces delgadas Célu1as pequeñas. .. E1 núnero de cloroplastos en las células n n ú , r e r o d e c r o m o s o n a s( 2 , 3 ) . . ^ ^. 1as plantas haploicaratterlsticai:. haploides está reducido.

(11) l r q -3' c. V. I}TIIJZACIOI{ DB HAPI.OIDESEN MEJORAMIE}Í¡O. t I. I. I ¡ ¡ i l l. : i. I. I ¡. Se ha mencionado que et principal uso de1 nétodo de haploides reside en el mejoramiento genétíco de plantas. En 1a actualidad son varias Ias especies involucradas en este tipo de progra[as entre 1as cuales sobresalen papa, tabaco, maiz, artót, trigo, cebada y coLza. Los resultados generales índican ganancias en rendi-nientos, calidad de1 producto y resistencia a plagas y enfermedades (1,10,20,21)De acuerdo con los resultados se ñan éstablecido Drotocolos senciIlos y relativamente eficientes (Figura 5). Diversog autores han evaluado las ventajas y desventajas deL sistena para mejorauriento de plantas bajo condiciones teóricas y simuladas -para (15' 23)- Entre las cóndiciones eL uso de haploicles se tienen las siguientes:. I. ¡. l.. J t t. i t. r I. I. Util para gran número de genes sin ligamento teniendo en cuenta que puede ser más eficiente cuando se aplica a Ios ganetos producidos por plantas F2 donde hay segregación de reconbinantes deseables si no hay ligarnento,. 2. l,a superi.oridad del nétodo por haploides se nanifiesta cuando Ios genes recesivos inducen el nivel deseaclo por expresión y cuando los alelos doninantes son indeseables. 3. St la nutación y la depresión del vigor. f. tt. ! t. 4. Es útiL cuando se dispone de poblaciones bajas 5. Util. cuando Ia frecuencia de alelos. favorables. las. ventajas. I. t. de1 método de hapl-oides. .. Obtención rápida de selección.. .. Expresión de recesivos. .. Utilización. de 1a recombinación que ocurre en 1a Fl. .. Elilrinación. de los genes 1etales. de homocigosis con 1o. que se acorta el tienpo. I ¡. es baja. 6. Es difícil de conparar con los sistenas convencionales de mejoraniento debido a nano de obra, talnaño de la población y costos. De acuerdo con 1o anterior puede resumirse en:. t.t. son inexÍstentes. 133.

(12) IE IÁPLOIDESEN TRI@ G$ic'PRODUCfiü.¡ AflrEtrürg r l'bt z , I,fasci a , 1987. aestivtu'D. 2n=6X-42. 1.. ORC.ANOGNBSIS ,. penúLtiria hoja nir¡el con tope de la espiga.. I. j. i. i. I f. I. I I t i. I'tS+ 2.4-D S61ido. @. l"'. i. I. i i I. senanas. i \¡I i. I. I I Gntrss r¡erilesr. { I. { t'. ¡S 1:'l 561ido Brotes. I. i. C'anara hr¡r'eda l sernana I'tS + 1AA Ilquido Enraizaniento PIAI{TA.S}IORI{ALES ALBINOS s) (2s-40 $ H4loitles t Diploitles ', ínér4ploides Fertilidad. NORX{AJ,ES PI"ANT¡"S 3 H4loicles I Diploides $.Aneqploides Fertilidacl Figura 5.. ,r,. Protocolos en tr7,gD para proáIcci6r¡ de hqrloides '. /3q ,.

(13) .. La eficiencia del nétodo de haploides puede medirse corno 2n donde n es el número de genes involucrados.. Aunque una de las críticas al método ha sido el bajo número de individuos en las poblaciones obtenidas, puede decirse con Chase (4) que "Aunque la habilidad combinatoria de un grupo de líneas es inportante para evaluar eI potencial de una población, ésto es de nenor importancia que la frecuencia con que se presentan genotipos excepcionales de valor especial cuando se usan como padres de hibridos y como padres _de poblaciones é1Ítes para e1 pióxino ciclo de obtención de líneastr (4). Estabilidad y variabiLidad en plantae derívadas de polen, En muchoe caeos Los resultados con haploidea en EejoramÍento han mostrado productos inferiores, puede decirae Ein eribargo que Ia respuesta depende de la especie utilizada y de1 nétodo empleado en Ia detección dé la variación en dichas plantas. Es indudabJ-e que la utilización de técnicas avanzadas tales cono 1os RFLP y la electrofo¡ésis están ayudando a aclarar los orlgenes de esta variación y que en eI futuro aclararán la extensión de dichos ca¡¡bios. A nivel nolecular los nayores cambios parecen ser a nivel de DNA altamente repétitivo cuya expresién génica es nula. En Ia Tabla 1 se presentan algunoe resultados obtenidos con diferentes especíes. Tabla 1.. CIJLTIVO Tabaco Tabaco Tabaco AI.t oz. Arroz Trígo Bróco1i. Estabilidad. y variabilidad. en plantas derivadas de polen.. ESTABILIDAD. AUTOR. NO SI NO SI SI. I'fETODO. De Paepe Hu Han Deaton et aI Hu Han Chen Hu Han Orton. 5I. NO. Según. De Paepe 1977, Hu Han 1983, Deaton et Orton 1985.. I ?<. el. c.v. C.V.. c.v. Gri Qndr¿do. c.v,. Electroforésis. 1985, Chen 1986,.

(14) Entre 1a variabilidad de haploides presentada en las poblaciones 'u otros tipos de plántulas En e1 caso es frecuente el albinismo. y tabaco en algunos casos 1a frecuencia puede hacer lnoPede trigo rante e1 método de haploides. En las plantas afectadas por este (1, 9): fenómeno presentan las siguientes caracterlsticas. . Presencia de protoplasros. (9OZ). . Ausencia de ribosomas en plásnidos larnell-a).. (carencia. de proteina. para. . Deficiencia de DNAen cLoroplastos (carencia de fracción proteíca). Entre las causas que se relacÍonan con 1a aparición de estas plantas se mencionan el genotipo, eI medio (sólido ó 1íquido). . El sistema de regeneración; 1a presencia de albinos en androgénesis que en partenogénesis. . Estado de desarrollo. es nayor. de1 polen. . Mutaciones o expresión de recesivos. Es indudable que 1a nanipulaci.ón de eqtos factores ha traído la disminución deL problema colDo en e1 caso del trigo donde e1 sistena por organogénesis presenLa pocos albinos en comparación con la enbriogénesÍs (1)' Los albinos pueden poseer un genomio incompleto en el cloroplasto. VI.. CONGLUSIONES. Es indudable que 1a acumulación de conocimíentos técnicos para La producción de haploides ha superado los conocimientos teóricos y que aunque los procesos que influyen en Ia alternacÍón de generaciones no son claros todavía, existen sisteEas de trabajo con buena respuesta desde el punto de vista práctÍco. Por otra parte' no debe olvidarse para citar nuevanente a Chase (4) que "e1 método de haplóides será más úti1 en Ia práctica si aquellos que son maes_tros en 1a técnica 1o son tambÍén en e1 mejoraniento de plantas" (4). EI nétodo de haploides a pesar del poco tienpo en que se ha desarrollado ha sido incorporado con éxito en el mejoramiento de especies agríco1as importantes. genéticos y molecuCon el avance de 1os conocimientos fisiológicos, lares se continúa obteniendo información para mejorar los valiosa métodos y 1a eficiencia en 1a producción de haploides.. r36.

(15) Aunque 1os medios universales para cada especie son deseables y tle hecho ya se han obtenido para algunas especies, falta mejorarlos No debe olvidarse tampoco que Dara increnentar la eficiencia' no hay un nedio único, sino que existen numerosas posibilldades para éada especie. En términos rnás generales se necesitan técnicaa nuevas específicas para genotipos. Se necesitan nayores conocímientos sobre los mecanisnos y factores envueltos en la inducción del proceso androgenéEÍco así co¡no de las sustanciag involucradas. Se requiere nayores conocinientos e1 nivel de ploidla. VII¡.. sobre los procesos que controlan. BIBLIGR.AFIA. l.. S.G. Mets ald P.N. Mascia. 1987. Iko regulaArnstrong, T.A.¡ tion ;ysLens for the production of haploid plants fron vheat Plant Science. 5I:. 23L-237. anther culture.. 2.. Bajaj, -287. Y.P.S. 1984. In vitro groduction of haploids ' -pp'220-, In: Evans D.A., ll.R. Shárp, anrt Y. Ya¡nada(Eds')' Hadbock Vol. 1. of Dlant cell- culture.. 3.. Blakeslee, A.J.; Belling, M.E.; Farhan and A'D. Bergner' 1922' Science 55:' 646A haploid mutant íri Datura atraooníun.. 4.. of haploids in breeding' Breedíng Chase, F. 1974. Utilízation diploids aPecies. In: K.J. Kasha (Eds.). Haploids in higher Univ. Guelph Press Gan' plánts: advances and potential.. o4I .. ).. 6.. pp'3-25' Chen, Y. 198ó. Anther and po11en culture of rice. plants hígher Haploids of In: H. Hu and H. Yan (Eds.). Springer verlag. in vitro. Dunvell, J.M. 1986. Pollen, ovule and enbryo culture as tools in piant breeding. pp. 375-404. In: \'lithers L.A. and P'G' Aldirson (Eds.).- Piánt tissue culture and ÍLs agricultural Butter!üorths london. apptications. 1964- fn vj.tro production Guha, S. and S.C. Maheshwari' enbryos from anthers of Datura' Nature 204-497.. of. 8.. Heberle-Bors. E. 1985. In vitro haploíd formation fron po11en; a critical- review. theor' AppI. Genet. 7l: 36I-374 '. 9.. Henry, Y.J. De Buyser. 1985. Effect of the tB/lR translocation on wheat. Plant ce1l rep' 4: on anther culture ability. 307-3r0. r37.

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