LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA Bacteriología, Micología, Micobacterias
Normas de Recolección, Conservación Y Transporte de Muestras
Hospital de Niños “Dr. Ricardo Gutiérrez”
Sección Microbiología - 2008
Adaptado del Manual de Toma de Muestras elaborado por la Red de Microbiología del
Gobierno de la Ciudad Autónoma de Buenos Aires, Boletín Oficial Nro. 1721, Anexo II-
Resolución 1006/SS/2003
INDICE
I) INTRODUCCION II) GENERALIDADES
III) SUGERENCIAS PARA CONSERVACION DE MUESTRAS IV) MUESTRAS PARA INVESTIGACION DE ANAEROBIOS V) BACTERIOLOGIA
1- HEMOCULTIVOS 2- CATETERES
2 a- Removible 2 b- No Removibles 3- LIQUIDOS DE PUNCION 3a- L.C.R.
3b- Otros
4- MUESTRAS DE PIEL Y TEJIDOS BLANDOS 4a- Abscesos cerrados y heridas quirúrgicas 4b- Abscesos y heridas abiertas
4c- Quemaduras 5- UROCULTIVOS
5a- Pacientes que controlan esfínteres 5b- Pacientes que no controlan esfínteres 5c- Pacientes sondados
5c- Punción suprapúbica 6- COPROCULTIVOS
7- EXUDADOS DE FAUCES 8- VIAS RESPIRATORIAS BAJAS 9- FLUJOS VAGINALES
10- SECRECIONES OCULARES
11- SECRECIONES DE OIDO EXTERNO
12- ESTUDIOS ESPECIALES DE SENSIBILIDAD ANTIBIOTICA 13- ESTUDIOS EPIDEMIOLOGICOS DE PORTACION
VI) MICOBACTERIAS VII) MICOLOGIA
NORMAS DE RECOLECCION, TRANSPORTE Y CONSERVACION DE MUESTRAS
I- INTRODUCCION
La correcta recolección de un especimen es uno de los pasos fundamentales en la recuperación de los agentes etiológicos de un proceso infeccioso.
Un material no representativo es el responsable de la falla en el aislamiento del agente causal, como así también un material mal extraído puede conducir a interpretación diagnóstica equivocada y al empleo erróneo e innecesario de agentes antimicrobianos.
Por lo tanto, aquellos involucrados en la toma de muestras deben conocer las pautas establecidas por el Laboratorio de Microbiología, cuyo rol es dar información para el diagnóstico y toma de conductas terapéuticas.
Todo ha sido previsto de la mejor manera para que ningún material se pierda o perjudique. Es por ello que se efectúa esta guía.
II- GENERALIDADES
Toda muestra, correctamente rotulada, debe ir acompañada de una orden de pedido que incluya los siguientes datos:
Nombre y Apellido * Fecha de Nacimiento * Fecha y hora de recolección
Material (correctamente indicado, para poder seleccionar los medios de cultivo necesarios) Unidad
Patología de Base Diagnóstico Presuntivo
Tratamiento Antibiótico: indicar cuál o cuales, y si es a dosis terapéuticas o profilácticas
IMPORTANTE: Con los datos señalados con (*), el sistema informático del laboratorio creará una HISTORIA CLINICA UNICA para cada paciente, lo que permitirá no solo acceder al resultado de cada muestra sino también poder tener acceso a todos los estudios realizados a cada paciente, por lo que estos datos deben ser fidedignos y legibles.
En el horario de funcionamiento del Laboratorio, las muestras SE REMITIRAN INMEDIATAMENTE ya que si se demora en el procesamiento o la forma de conservación no es la adecuada, no se puede asegurar la viabilidad de los organismos fastidiosos ni prevenir el sobredesarrollo de las bacterias acompañantes, y dejará de ser representativa del proceso que ocurre en el foco estudiado.
En caso de no poder cumplir con este requisito, se tendrán en cuenta las PAUTAS DE CONSERVACION DE MUESTRAS.
Los recipientes para la recolección serán EXCLUSIVAMENTE los provistos por el Laboratorio de Microbiología.
Las muestras deben recolectarse ANTES DE LA ADMINISTRACION DE ANTIMICROBIANOS. De no ser posible:
Con, por lo menos, 48 hs de suspendido o terminado el mismo. Si los antimicrobianos utilizados tuvieran vida media prolongada: esperar más de 48 hs. Si no se pueden suspender, tomar la muestra justo antes de la siguiente dosis, es decir, en el valle de la posología.
Todos los materiales se consideran potencialmente infecciosos y deben ser remitidos ajustándose a las normas de bioseguridad vigentes.
IMPORTANTE: Toda muestra de paciente HIV/SIDA, HEPATITIS B (o con sospecha) debe remitirse en bolsa, evitando que el material pueda derramarse, y aclarando en forma visible: Cuidados Universales.
Por todo lo anteriormente expuesto, SE RECHAZARAN MUESTRAS, ENTRE OTRAS:
- Sin rotular, o rotuladas inapropiadamente o con datos discordantes con respecto a los que figuran en el pedido.
- Derramadas.
- Enviadas sin el medio de transporte correspondiente o incorrectamente conservadas.
- Duplicadas en el transcurso de 24hs., sin la aclaración del médico solicitante que la justifique. Se exceptúan los Hemocultivos.
- Con agujas o cualquier otro cortopunzante
Tener en cuenta estas situaciones para enviar, lo más rápido posible, una nueva muestra en condiciones adecuadas, para no demorar el diagnóstico.
Se recomienda una visita diaria por parte de un médico de cada Unidad o de Infectología con la lista de los análisis solicitados a Microbiología, para disminuir las demoras inherentes al procesamiento y para posibilitar la información de resultados parciales y/o de orientación.
La comunicación abierta y activa es la base para el éxito en la cooperación de los miembros del equipo de salud.
Para toda investigación especial o no habitual, consultar con un profesional de Microbiología.
III- PAUTAS DE CONSERVACION DE MUESTRAS (Tabla 1) A- TEMPERATURA AMBIENTE:
- Muestras en medio de transporte (semisólidos).
- L.C.R/ Líq. de punción
- Sangre para Lisis (en tubos especifícos) B- EN HELADERA (4°C):
- Orinas (al acecho, chorro medio, punción suprapúbica) - Catéteres (en solución fisiológica)
- Coprocultivos en medio de transporte semisólido
- Muestras para estudio de Micobacterias (muestras respiratorias, orinas, lav. gástrico) C- EN ESTUFA (35°C):
- Sangre en frascos Bact/Alert
- Muestras en medio líquido (Bact/Alert, Britania) IV- INVESTIGACION DE BACTERIAS ANAEROBIAS
Cuando es necesario este tipo de estudio, deberá avisarse previamente al Laboratorio de Microbiología para proveer los materiales adecuados para su recolección y para preparar los medios de cultivo necesarios para su recuperación.
Una situación especial se produce con la investigación de estos gérmenes. Se listan a continuación, los especimenes apropiados y también los no útiles para este tipo de estudio:
Muestras aceptables:
Aspirados de abscesos Bilis
Sangre Médula ósea
Cepillado bronquial (con protección) Muestras por culdocentesis
Trompa de Falopio Ovario
Aspirados de senos maxilares Tejido de herida quirúrgica Aspirado transtraqueal Aspirado endometrial
Orina por punción suprapúbica
Líquidos: pleural, articular, peritoneal, ótico
En general, se consideran útiles las MUESTRAS OBTENIDAS DE CAVIDADES CERRADAS A TRAVES DE TEJIDOS NO CONTAMINADOS.
Muestras No aceptables:
Lavado bronquioalveolar (sin protección)
Aspirados endotraqueales (pacientes intubados), por traqueotomía Hisopados: endocervicales, vaginales, vulvares, uretrales
Hisopados nasofaríngeos, de fauces, nasales, óticos y perianales
Hisopados superficiales de piel, úlceras, escaras y abscesos superficiales abiertos Esputo espontáneo o inducido
Materia fecal
Cualquier otro material adyacente a una membrana mucosa que no haya sido decontaminado adecuadamente.
En la recolección, transporte y conservación, tener en cuenta:
- Deben ser procesadas INMEDIATAMENTE.
- De no ser posible, deben ser protegidas del efecto deletéreo del oxígeno, usando los medios de transporte que proveerá el Laboratorio de Microbiología y mantenerse a TEMPERATURA AMBIENTE.
- NUNCA deben refrigerarse, ya que el frío aumenta la difusión del oxígeno al interior de la muestra.
- En las obtenidas por PUNCION/ASPIRACION, realizar siempre una correcta desinfección de la piel.
SIEMPRE debe extraerse completamente el aire de la jeringa y evitar la entrada del mismo al inocular los medios de transporte y/o cultivo.
- NUNCA REMITIR LA JERINGA CON LA AGUJA al Laboratorio. Si no hay otra posibilidad y se debe enviar la jeringa: sacar la aguja y descartarla en un recipiente rígido y colocar la cobertura plástica de la misma para obturar.
V-
BACTERIOLOGIA
1- HEMOCULTIVOS Generalidades
Recolectar 2-3 muestras en el lapso de 24 hs. Los intervalos entre las mismas dependen de la urgencia de la situación clínica, pero nunca menos de 20–30 minutos entre cada una de ellas, siempre de distintos puntos de punción.
Es ideal recoger la muestra en el lapso de 1h antes del pico febril, si este pudiera predecirse. De no ser posible, hacerlo cuando comienza.
Realizar las extracciones antes de la administración de antibióticos. Si no puede evitarse, hacerlo antes de la siguiente dosis. (Valle o menor concentración plasmática de antimicrobiano)
En todos los casos, el volumen a inocular debe mantener una relación 1/5 -1/10 con respecto al volumen de caldo del frasco a utilizar: Botella pediátrica: 1-4 ml; Botella anaeróbica: 4 -10 ml.
Rotular cada muestra según las pautas establecidas, indicando el número de la misma y la hora de extracción.
NUNCA extraer HEMOCULTIVOS a través de catéteres (excepción, ver más adelante retrocultivo diferencial)
Recomendaciones a) Botellas a usar Adolescentes con:
- Septicemia, meningitis, osteomielitis, artritis, neumonía: tomar 2 muestras, una aerobia y otra anaerobia.
- Endocarditis bacteriana subaguda: tomar 2 muestras aerobias y 1 anaerobia en 24 hs. Repetir si son negativas luego de 24 hs de incubación.
- Endocarditis bacteriana aguda: tomar 2 aerobias y 1 anaerobia en el lapso de 1-2 hs, sobre todo, antes de implementar la terapéutica.
- Bacteriemia de origen desconocido (paciente medicado con ATB): tomar entre 4-6 cultivos en 48 hs, entre aerobias y anaerobias.
- Pacientes pediátricos y recién nacidos: tomar 2 muestras en forma simultánea para poder realizar diagnóstico de bacteriemia: aerobia y anaerobia.
b) Volumen de sangre a cultivar IMPORTANTE!!!
Volumen de sangre por muestra:
0 a 1 mes... 0,5 - 2ml 1mes a 2 años...2 – 3ml
>2 años ………..5ml Adolescentes o adultos jóvenes no menos de 10 ml
TUBOS PARA LISIS CON SAPONINA (gérmenes intracelulares): 1.5 ml de sangre en cada tubo
Procedimiento:
- Lavado de manos con antisépticos.
- Elección del sitio de punción.
- Colocarse guantes estériles.
- Luego de realizado este procedimiento, NO VOLVER A PALPAR LA VENA A PUNZAR.
- Realizar la desinfección de la piel con alcohol 70°, seguida por aplicación de solución de yodo-povidona, en forma concéntrica al sitio de punción. Dejar actuar cada uno de ellos 30"-60" y luego de punzar remover con alcohol 70° para evitar la irritación local.
- Desinfectar el tapón de goma del frasco: alcohol 70° ó yodo-povidona - Inocular los frascos SIN INTRODUCIR AIRE en ellos.
- Agitar suavemente, sin formar espuma para homogeneizar la muestra, evitando que la sangre coagule.
- Despegar el sticker de la botella y pegarlo en la orden de pedido - Consignar fecha y hora de extracción
- Enviar las muestras INMEDIATAMENTE al Laboratorio.
Fuera del horario de recepción:
- Enviar a estufa de incubación en Laboratorio de Guardia, donde recibirán las muestras hasta las 12 pm.
- Pasado ese horario, mantener en la sala en lugar cálido hasta la mañana siguiente.
- NUNCA COLOCAR EN LA HELADERA.
2- CATETERES 2a- REMOVIBLES:
Generalidades
- Previo a la remoción del catéter, extraer 1 (una) muestra de hemocultivo de vena diferente a la del catéter PERO NUNCA a través del mismo. De no cumplirse con este requisito, la muestra será RECHAZADA.
- Si hay signos de infección local: Enviar punción/aspiración de la zona afectada.
- Si se sospecha infección asociada a la infusión, enviar la infusión y la tubuladura en bolsa sellada y rotulada.
Procedimiento
- Lavarse las manos con jabón antiséptico.
- Colocarse guantes estériles.
- Realizar la desinfección de la zona pericatéter con yodo-povidona o alcohol yodado. Dejar secar 60".
- Retirar el catéter, cuidando que no roce piel.
- En forma aséptica, cortar 3-7 cm de la porción distal (punta) y colocar en tubo seco estéril con tapa de rosca. Catéteres de mayor longitud serán rechazadas.
Remitir INMEDIATAMENTE al Laboratorio.
Fuera del horario de recepción
- Colocar en frasco estéril con tapa de rosca con solución fisiológica estéril de modo que el catéter quede sumergido.
- Conservar en la heladera, no más de 48 hs.
b) NO REMOVIBLES Generalidades
La evaluación de estos catéteres debe realizarse en forma cuantitativa. Actualmente se está utilizando el método de “Tiempo Diferencial de Positivización”, utilizando los frascos de hemocultivos para sistema automatizado.
Se deben extraer SIMULTANEAMENTE una muestra de sangre de una vena periférica diferente a la de inserción del catéter (HEMOCULTIVO PERIFERICO) y otra de IGUAL VOLUMEN a través del mismo (RETROCULTIVO).
Procedimiento
- Lavarse las manos con antiséptico.
- Colocarse guantes estériles
- Desinfectar la zona de punción, tanto el catéter como la piel, con yodo-povidona o alcohol yodado. Dejar secar 60".
- Extraer sangre de vena periférica e inocular en frasco de hemocultivo aeróbico. Rotular:
"HEMOCULTIVO PERIFERICO DIFERENCIAL”.
- Extraer sangre a través del catéter e inocular IGUAL VOLUMEN que la muestra periférica en frasco de hemocultivo aeróbico. Rotular "RETROCULTIVO DIFERENCIAL".
- Las tomas de muestras deben realizarse en forma SIMULTANEA
- Las muestras deben llegar al laboratorio JUNTAS en forma INMEDIATA, porque es importante colocarlas en el equipo automatizado de monitoreo EN EL MISMO MOMENTO para poder comparar los tiempos de positivización de las mismas; de no respetarse estas consideraciones, serán inútiles como método de evaluación del catéter.
Fuera del horario de recepción
- Enviar JUNTAS a estufa de Laboratorio de Guardia hasta las 12 pm. Después de esa hora, mantener en ambiente cálido en la sala, hasta primera hora de la mañana siguiente.
3- LIQUIDOS DE PUNCION
Generalidades
- Realizar una adecuada desinfección de la zona a punzar con alcohol 70°, seguida por aplicación de solución de yodo-povidona. Dejar actuar 30 a 60 segundos, y luego de punzar, remover con alcohol 70 ° C.
- Extraer las muestras con jeringa heparinizada.
- Las muestras se recolectarán EXCLUSIVAMENTE en los tubos estériles con tapa a rosca que entrega el Laboratorio de Microbiología y en frascos de hemocultivos.
- En la mayoría de los casos se aconseja acompañar las mismas con 2 muestras de sangre para hemocultivo.
3a- LIQUIDO CEFALORRAQUIDEO:
Procedimiento
- Recolectar el material (según las pautas ya establecidas) en tubo seco estéril y otra porción en frasco de hemocultivo
- Remitir en forma INMEDIATA al Laboratorio.
Fuera del horario de recepción
- La muestra recolectada en botella de hemocultivo aeróbica debe enviarse a estufa de Guardia - La muestra recogida en tubo seco se conservará a T. Ambiente y enviar a primera hora de la mañana siguiente. NUNCA refrigerar.
Los LÍQUIDOS DE ORIGEN VENTRICULAR Ó SUBDURAL se tratan igual que un LCR
3b- OTROS LÍQUIDOS DE PUNCIÓN ARTICULAR
PLEURAL PERITONEAL OTICO
ASCITICO PERICARDICO
Generalidades
Se aconseja enviar el mayor volumen posible de muestra ya que pueden ser infecciones de bajo inóculo.
Procedimento
Lavado de manos con antiséptico.
Colocación de guantes estériles.
Realizar la limpieza de la zona a punzar con alcohol 70º.
Desinfectar con yodo-povidona o alcohol yodado. Dejar secar 60 segundos. Remover con alcohol 70º luego de punzar.
Punzar y recolectar una porción en tubo seco estéril con tapa de rosca y otra en un frasco de hemocultivo aeróbico.
Enviar en forma INMEDIATA al Laboratorio de Microbiología.
IMPORTANTE:
- LIQ. ASCITICO: inocular 10 ml como mínimo en frascos de hemocultivos aeróbicos ( 5 ml. en cada frasco).
- LIQ. ARTICULAR: Inocular SIEMPRE parte de la muestra en frasco de hemocultivo aeróbico. Esto permite la recuperación de Kingella kingae, agente etiológico de artritis en pediatría.
Fuera del horario de recepción
- Enviar las muestras en frascos de hemocultivos a estufa de Laboratorio de Guardia.
- La muestra en tubo seco estéril, se conserva a temperatura ambiente y debe enviarse a primera hora de la mañana siguiente.
4- MUESTRAS DE PIEL Y TEJIDOS BLANDOS A) ABSCESOS CERRADOS Y HERIDAS QUIRÚRGICAS B) ABSCESOS Y HERIDAS ABIERTAS
C) QUEMADURAS.
Generalidades
- En estas muestras es crítica la correcta decontaminación de la piel.
- Siempre indicar si la muestra proviene de una cavidad abierta o cerrada.
- Describir precisamente el sitio anatómico del cual se obtiene.
- De tratarse de heridas, es crítico diferenciar entre muestras superficiales y profundas, siendo estas últimas las únicas útiles para el cultivo de anaerobios, si son recolectadas en forma adecuada.
A) ABSCESOS CERRADOS Y HERIDAS QUIRÚRGICAS
El método de elección es la punción a través de piel sana. Si es una herida, realizarla lo más próximo a ella, llegando hasta el lecho de la misma.
Procedimiento
Lavado de manos.
Colocación de guantes estériles.
Limpieza de la piel con alcohol 70øC.
Desinfección con yodo-povidona. Dejar secar 60 segundos.
a1- Heridas
Punzar el sitio elegido y recoger en tubo seco estéril con tapa de rosca.
Si no se obtuviera material por este procedimiento: inyectar 0,5-1ml de solución fisiológica estéril y aspirar nuevamente. (Punción - aspiración).
Descartar la aguja y recoger sobre tubo seco estéril.
A2-Abscesos
IMPORTANTE: Para una óptima recuperación de microorganismos, deberá avisarse previamente al laboratorio de Microbiología cuando se va a recoger este tipo de muestra (o cualquier otra que pueda tener gérmenes anaerobios) para preparar los medios adecuados para el desarrollo de los mismos.
Introducir la aguja en distintas direcciones en forma radiada, manteniendo el vacío en la jeringa, cuidando de no producir el ingreso de aire al retirar la jeringa luego de aspirar el contenido.
Descartar la aguja, inocular parte de la muestra en frasco TAB para anaerobios y el resto en tubo seco estéril.
Remitir las muestras al Laboratorio en forma INMEDIATA.
Fuera del horario de recepción
- Parte de la muestra se recoge en tubo seco estéril con tapa a rosca y mantener a temp.
Ambiente
- El resto de la muestra inocularla en frasco de hemocultivo anaeróbico, y enviar a estufa de laboratorio de Guardia.
B) ABSCESOS Y HERIDAS ABIERTAS B1- Heridas
Remover la flora superficial antes de obtener la muestra con abundante solución fisiológica y gasas estériles retirando el exudado o material purulento.
Proceder a tomar una biopsia de tejido de aproximadamente 0.5 x 0.5 cm y profundidad necesaria para involucrar la totalidad del espesor de la herida.
Colocar en un tubo seco estéril con tapa rosca.
Remitir INMEDIATAMENTE al Laboratorio de Microbiología.
Fuera del horario de recepción
Colocar 2 cm de solución fisiológica en el recipiente estéril. Conservar a temperatura ambiente no más de 24 horas.
En caso de querer investigar anaerobios se deberá remitir inmediatamente en horario de funcionamiento de la Sección Microbiología.
B2- Abscesos
Para ello se procederá como para la punción de abscesos cerrados pero punzado en piel sana adyacente a los bordes de la herida, con una inclinación de 30º a fin de llegar al fondo de la herida o directamente por el orificio de la misma sin tocar los bordes externos.
C) QUEMADURAS:
Generalidades
Las infecciones de la herida quemadura tipo B (profundas) se estudian exclusivamente por biopsia de tejido y siempre debe realizarse cuantificación de microorganismos.
Procedimiento
La toma de muestra deberá realizarse en una sesión quirúrgica.
Se deberá realizar una muy buena limpieza de la herida quemadura arrastrando toda la secreción por encima de la escara con una solución antiséptica y luego se enjuaga generosamente con solución fisiológica.
Se tomará la biopsia de tejido vital, NUNCA ESCARA, a bisturí o sacabocados de 0.5 x 0.5 cm y de una profundidad tal que involucre todo el espesor de la herida.
Se colocará en una tubo seco estéril.
Se remitirá INMEDIATAMENTE al laboratorio perfectamente rotulada.
NO SE PUEDE CONSERVAR
5- UROCULTIVOS Generalidades
La recolección de la muestra de orina deberá realizarse con una retención mínima de 3 hs.
En todos los casos: utilizar para la higiene agua hervida enfriada y jabón nuevo.
Las muestras obtenidas se colocarán siempre en frasco estéril.
NO SE ACEPTARAN BOLSAS COLECTORAS.
Volumen: IDEAL no menos de 10 ml para una correcta interpretación del estudio.
En caso de sospechar infección por Anaerobios: la única muestra válida es por Punción Suprapúbica.
SIEMPRE indicar el método de obtención. Esto es indispensable para el procesamiento y evaluación de los resultados.
Remitir las muestra INMEDIATAMENTE al Laboratorio.
Procedimiento
a) Pacientes que controlan esfínteres 1) Chorro medio:
1.1 Sexo femenino:
Higienizar los genitales externos, con agua y jabón, separando los labios mayores.
Enjuagar bien y no secar.
Lavarse las manos y abrir el frasco.
Comenzar a orinar, manteniendo separados los labios para evitar que el chorro medio contacte con el periné, descartando la primera parte de la micción.
Recolectar el chorro medio directamente en el frasco. Descartar la última parte de la micción.
1.2 Sexo masculino:
Higienizar los genitales con agua y jabón, retrayendo el prepucio.
Enjuagar bien y no secar.
Lavarse las manos y abrir el frasco.
Comenzar a orinar, manteniendo retraído el prepucio, descartando la primera parte de la micción.
Recolectar el chorro medio, directamente en el frasco.
Descartar la última parte de la micción.
b) Pacientes que no controlan esfínteres 1. Al Acecho
Efectuar la higiene de la misma forma que en el caso de chorro medio.
Descartar el primer chorro y juntar el resto en el frasco.
c) Pacientes sondados 1- Sondados intermitentes
Utilizar sonda nueva estéril.
Recoger sobre tubo o frasco estéril.
2- Sondados permanentes
De ser posible, cambiar la sonda por una nueva.
Clampear la sonda 2-3 hs.
Desinfectar la tubuladura con yodo-povidona o alcohol yodado.
Punzar con aguja mosquito y jeringa estéril a 10 cm del meato urinario.
Colocar el material obtenido en el frasco.
NUNCA TOMAR MATERIAL DE LA BOLSA DE DRENAJE.
d) Punción suprapúbica
Los pacientes deben tener la vejiga llena para poder realizar la punción.
Realizar asepsia de la piel con alcohol 70º, luego aplicar solución de iodopovidona en forma concéntrica en el sitio de punción. Luego de realizada la misma, remover con alcohol 70º.
Punzar piel sana (evitando escaras o dermatitis) con aguja y jeringa estéril. Recolectar en el frasco adecuado.
Fuera del horario de recepción
- Conservar las muestras en heladera (4°C), como máximo 24 hs.
EXCEPCION: punción suprapúbica, la cual se recogerá en frasco Britania y se enviará a estufa de laboratorio de Guardia. NUNCA UTILIZAR FRASCOS DE HEMOCULTIVO AUTOMATIZADO (BACT/ALERT)
6- COPROCULTIVO Generalidades
Para la investigación de patógenos entéricos, se debe remitir muestra de materia fecal en medio de transporte adecuado. Debe tratarse de heces diarreicas.
Nunca se recolectará la muestra del inodoro y no se debe permitir la contaminación de la misma con orina.NO se aceptarán hisopados anales para el estudio de diarreas. Consultar con los profesionales de Microbiología por situaciones especiales.
Procedimiento
- Recoger una porción de materia fecal, preferentemente material mucoso, purulento, sanguinolento.
- Colocar en tubo con medio de transporte (Amies con carbón) provisto por el Laboratorio de Microbiología.
Fuera del horario de recepción
- Conservar el tubo con medio de transporte en heladera, no más de 12 hs.
CASOS ESPECIALES: Ante sospecha de Vibrio cholerae:
Recoger la muestra recién emitida en frasco estéril.
Enviar INMEDIATAMENTE al Laboratorio
Fuera del horario de recepción
- Colocar el hisopo en un tubo con medio de transporte líquido (agua peptonada) y otro hisopo con materia fecal en Medio de Transporte Amies con carbón
- Conservar a Temp. ambiente y enviar al laboratorio de Microbiología al día siguiente.
IMPORTANTE: Incluir algunos datos del paciente, por ejemplo: viajes recientes, enfermedad diarreica de algún familiar o conviviente.
7- EXUDADO DE FAUCES Procedimiento
- Frotar ambas amígdalas y retrofarínge, preferentemente en lesiones y/o exudados visibles. Utilizar bajalenguas. El hisopo no debe tocar lengua ni boca.
- Colocar el hisopo en tubo estéril y remitir al laboratorio.
Fuera del horario de recepción
- Conservar en tubo seco estéril a Temp. ambiente, hasta 24hs.
CASOS ESPECIALES: ante la sospecha de difteria o angina fusoespirilar comunicarse previamente con el laboratorio.
8- VIAS RESPIRATORIAS BAJAS Generalidades
Muestras tales como: esputo, secreción traqueal y lavado bronquial generalmente se contaminan con la flora del tracto respiratorio superior.
La secreción bronquial y el lavado bronquial: SOLO son útiles para la investigación de BAAR, Nocardias y Hongos (micosis profundas). También son de utilidad en pacientes fibroquísticos.
El aspirado traqueal puede utilizarse para la obtención de muestras en pacientes en ARM.
Las muestras más útiles para diagnóstico de patógenos del tracto respiratorio inferior, tanto aerobios como anaerobios, son las obtenidas por métodos fibroendoscópicos tales como el lavado broncoalveolar (BAL) y el cepillo envainado (CEP).
La de mayor sensibilidad y especificidad es la biopsia de pulmón a cielo abierto (gold standard), pero por tratarse de un método tan invasivo se reserva para situaciones especiales.
a) ESPUTO (Neumonías extrahospitalarias)
- Enjuagarse la boca al levantarse con solución de bicarbonato, a fin de disminuir la flora de la boca - Debe recolectarse en ayunas, producto de una expectoración profunda, en un frasco plástico estéril
de boca ancha y cierre hermético.
- Rotular el frasco y remitir DE INMEDIATO al laboratorio. La muestra deberá procesarse dentro de los 30 min., y no más allá de las 2 horas como máximo
Esputo Inducido
En caso de no tener producción de espectoración espontánea, se obtiene la muestra después de instilar solución salina hipertónica en aerosol (nebulización). Luego los pacientes suelen toser y producir muestras adicionales de buena calidad.
Recolectar la muestra siguiendo los pasos descriptos para el Esputo Fuera del horario de recepción
Conservar en heladera, no más de 24 hs. Tener en cuenta que con el frío pierden viabilidad los gérmenes fastidiosos como S. pneumoniae y H. influenzae.
b) OTRAS MUESTRAS
Para la correcta evaluación de la muestra es necesaria la información provista por el médico que debe incluir:
- Sospecha de neumonía intra o extrahospitalaria
- Si el proceso es agudo o crónico ya que en el último caso deberán buscarse agentes involucrados en estos procesos.
- Si el paciente está sometido o no a ARM
- Si es inmunosuprimido o tiene alguna patología de base (ej: enfermedad fibroquística) - Es importante tomar la muestra antes de la administración de ATB
b1-ASPIRADO TRAQUEAL
- Se aspira la vía aérea con técnica aséptica y cánula estéril.
- Se recoge la muestra en tubo estéril con tapa a rosca.
- Se envía INMEDIATAMENTE al laboratorio, debe procesarse dentro de los 30 min.
b2- LAVADO BRONCOALVEOLAR (BAL)
- Habitualmente se realiza con 5-10 ml. de solución fisiológica en niños.
- Debe recogerse en tubo seco estéril a rosca
- Se envía INMEDIATAMENTE para poder ser procesada dentro de los 30 min.
- Muestra NO APTA PARA ANAEROBIOS.
a) Pacientes sin ARM:
- Utilizar fibroncoscopio. Se debe procurar alcanzar el segmento a estudiar evitando todo tipo de aspiración a través del canal del endoscopio. Si se requirió aspirar, descartar la primera alícuota.
b) Pacientes con ARM:
1- Sin fibrobroncoscopio:
- Introducir el catéter con técnica aséptica por el tubo endotraqueal avanzando hasta su enclavamiento a ciegas.
- Se instila con jeringa y se aspira cada alícuota instilada sobre tubo seco estéril 2- Con fibrobroncoscopio:
- Se aspira la vía aérea con técnica aséptica y cánula estéril.
- Se introduce el endoscopio a través del tubo endotraqueal sin aspirar para evitar contaminación hasta enclavar el extremo en el segmento elegido.
- Se instilan las alícuotas con técnica aséptica y se recogen sobre tubo estéril a rosca.
B3- CEPILLO ENVAINADO (CEP) Muestra APTA PARA ANAEROBIOS
- Se utiliza esta técnica para evitar la contaminación orofaríngea, con un sistema de doble catéter con cánulas telescópicas.
- Se aconseja aerolizar al anestésico a nivel de orofaringe y vías aéreas proximales y evitar la succión de secreciones a medida que el fibribroncoscopio pasa por el tubo antes de tomar el cepillado.
- Si no se procede así, el anestésico que tiene efecto antibacteriano, puede producir la expulsión de secreciones acumuladas en el canal de succión aumentando la contaminación.
- Transporte y conservación: igual que BAL
9- FLUJOS VAGINALES
Las muestras serán tomadas exclusivamente en el Servicio de Ginecología/Adolescencia.
10- SECRECIONES OCULARES
Comunicarse con el laboratorio de Microbiología para recibir los materiales e instrucciones de recolección.
11- SECRECIONES DE OIDO EXTERNO
Comunicarse con el laboratorio de Microbiología para recibir los materiales e instrucciones de recolección.
11- ESTUDIOS ESPECIALES DE SENSIBILIDAD ANTIBIOTICA
PODER BACTERICIDA/ VELOCIDAD BACTERICIDA/ CURVA DE MUERTE
Cada vez que se requiera alguno de estos estudios, deberán comunicarse con el laboratorio de Microbiología.
12- ESTUDIOS EPIDEMIOLOGICOS DE PORTACION
12ª- Búsqueda de Staphylococcus aureus meticilino resistente (SAMR) HISOPADO NASAL
Procedimiento
Insertar el hisopo 1 cm en las narinas.
Rotarlo firmemente sobre las membranas y dejarlo 10 – 15 segundos.
Enviarlo INMEDIATAMENTE al Laboratorio.
Fuera del horario de recepción
- Conservar a temperatura ambiente, en medio de transporte Amies con carbón.
IMPORTANTE: Si hubiera lesiones en las narinas: tomar muestra de los bordes activos de la lesión.
12b- Búsqueda de Enterococo Vancomicina Resistente (EVR) HISOPADO RECTAL
Procedimiento
- Introducir cuidadosamente el hisopo a través del esfínter anal, aproximadamente 2 cm.
- rotar cuidadosamente el hisopo para tomar muestra de las criptas anales - Para que la muestra sea útil, las heces deben ser visibles en el hisopo - El hisopo se colocará en medio de transporte Amies con carbón.
- Enviar de inmediato al laboratorio Fuera del horario de recepción
- conservar a temperatura ambiente, no más de 24 hs.
VI-
MICOBACTERIAS
IMPORTANTE !!
PRECAUCIONES EN LA TOMA Y TRANSPORTE DEL MATERIAL
En el Centro de salud las muestras de esputo deben ser recolectadas al aire libre
Utilizar barbijo.
Los frascos o tubos deben ser acomodados en cajas rígidas impermeables, con cierre hermético, con divisiones de manera que las muestras queden bien sujetas en sentido hacia arriba, dentro de la bolsa.
NUNCA transportar en jeringas o tubos de vidrio con tapón de algodón
Para las muestras que se obtienen por punción usar guantes y verificar que el operador no tenga heridas en sus manos.
NUNCA COLOCAR ESTAS MUESTRAS EN FRASCOS BRITANIA O BACT/ALERT!!!
(medios NO APTOS para desarrollo de BAAR) Esputo/ esputo inducido/ Lavado bronquial
Seguir instrucciones de Vías aéreas bajas, recolectando dos a tres muestras en tres días consecutivos.
Fuera del horario de recepción - Refrigerar hasta 24 hs.
Aspirado/Lavado Gástrico
Enviar 2-3 muestras con la mayor velocidad posible, para neutralizar el ph ácido de la muestra.
Intentar aspirar contenido gástrico (es de mayor utilidad) antes de realizar el lavado. El paciente debe estar con 3 horas de ayuno.-
IMPORTANTE: LAS MUESTRAS DEBEN RECOGERSE EN EL HORARIO DE FUNCIONAMIENTO DEL LABORATORIO Y ENVIARSE INMEDIATAMENTE.
Orina
Se requieren 3 muestras de días diferentes, idealmente la primera de la mañana. Las muestras de orina, al igual que los lav. Gástricos tienen ph ácido, por lo tanto deben neutralizarse lo más rápido posible.
IMPORTANTE: LAS MUESTRAS DEBEN RECOGERSE EN EL HORARIO DE FUNCIONAMIENTO DEL LABORATORIO Y ENVIARSE INMEDIATAMENTE
LCR
Se envía en tubo de plástico con tapa a rosca. Cuanto mayor es el volumen enviado, mayor probabilidad de recuperar BAAR.
Precaución: no iniciar tratamiento antes de la toma.
Liquido Pleural y Ascítico
Se envía en tubo de plástico estéril. El pleural puede estar heparinizado.
Pus de Drenaje.
Aspirar con solución salina estéril. No emplear hisopos, ni torundas de algodón.
Biopsias
Siempre suspenderlas en solución fisiológica (pequeña cantidad) estéril para conservar su humedad. Envase estéril igual al indicado para el esputo o tubo estéril de plástico con tapa a rosca. Si no se envía de inmediato al laboratorio, mantener en heladera no más de 24 horas.
Sangre * (Hemocultivo)
Enviar en tubos de lisis pediátricos, o en tubo seco recogida sobre heparina. Enviar de inmediato al laboratorio, caso contrario conservar a temperatura ambiente no más de 24 horas. Ideal: 3 muestras
Médula Osea *
Cantidad total la que se pueda. Recipiente y transporte: igual que para sangre.
ESTAS MUESTRAS (*) SON SIGNIFICATIVAS PARA PACIENTES HIV + Fuera del horario de recepción
IMPORTANTE: Todos los materiales de punción, que en general son paucibacilares, deberían procesarse con la mayor celeridad posible. Si no se puede enviar de inmediato al laboratorio, mantener a temperatura ambiente hasta 24 hs.
Materia Fecal
No se procesa en ningún caso.
VII-
MICOLOGIA
SUPERFICIAL (Piel - Pelos - Uñas)
Comunicarse con el laboratorio en caso de sospecha de infección por dermatofitos u otra micosis superficial.
Las muestras son tomadas exclusivamente por personal del laboratorio.
HEMOCULTIVOS (por Técnica de LISIS)
- En cada tubo rotulado, colocar hasta el enrase, sangre periférica.
- Homogeneizar 3-4 veces para evitar que se coagule. No se recibirán muestras coaguladas.
- Enviar inmediatamente al laboratorio
(*):HASTA EL ENRASE, volumen mínimo deseable para trabajar dentro de la sensibilidad de la técnica.
ESTOS TUBOS SON SOLO PARA SANGRE
IMPORTANTE: Si se trata de un paciente oncológico portador de catéter implantable, se utilizan 2 (dos) tubos: en 1 se coloca sangre periférica y en el otro, sangre obtenida a través del catéter.
Fuera del horario de recepción
- Conservar en heladera NO CONGELAR NI FRIZAR NI COLOCAR EN ESTUFA, enviar a primera hora del día siguiente.
- Los tubos deberán ir acompañados de la ficha correspondiente que se retira en el sector Micología.
ORINA / LCR / LIQ. ARTICULAR / PUNCIONES / EXUDADOS - Recoger en tubo/frasco estéril
- Remitir de inmediato al laboratorio.
Fuera del horario de recepción
- Conservar en heladera a 4°C y enviar a primera hora del día siguiente.
BIOPSIAS
- Deben recogerse en frasco estéril.
- No agregar conservadores.
- Remitir de inmediato al laboratorio.
Fuera del horario de recepción
- Conservar en heladera a 4°C y enviar a primera hora del día siguiente. Si la muestra es muy seca, agregar 2-3 gotas de agua destilada estéril.
ESPUTO
- Remitir en frasco estéril la expectoración matutina, sin agregado de conservadores.
Fuera del horario de recepción
- Conservar en heladera a 4°C, y enviar a primera hora del día siguiente.
ESTUDIOS SEROLOGICOS
La serología para diagnóstico de Micosis Endémicas requiere de evaluación clínica-epidemiológica del paciente.
Comunicarse con el laboratorio de Micología ante la necesidad de realizar este estudio.
Tabla 1. Pautas de Recolección, Transporte y Conservación de Muestras para Microbiología
MUESTRA HORARIO DE ATENCIÓN FUERA DEL HORARIO DE ATENCIÓN
Orina:
a) acecho, chorro medio, sonda b) punción suprapúbica
a) Frasco o tubo estéril, tapa a rosca b) Frasco o tubo estéril, tapa a rosca
a) IDEM, heladera hasta 24 hs.
b) Frasco Britania, estufa de Guardia Coprocultivo Tubo con medio de transporte
Amies con Carbón
IDEM, en heladera hasta 12 hs.
Hemocultivo (Botellas Bact/Alert)
0-1mes: 0.5-2 ml 1 mes-2 años: 2-3 ml 2-5 años: 5 ml
> 5 años: más de 5 ml
Estufa de Guardia
a)Punta de catéter/b) reservorio a)Tubo seco/b)frasco estéril, tapa a rosca Catéter: 1 ml SF estéril
(acompañar de hemocultivo periférico, sacado previa- mente a la remoción del mismo)
Reservorio: cubrir con SF estéril Heladera hasta 24 hs.
LCR Tubo seco estéril, tapa a rosca
Y frasco Bact Alert Tubo estéril, conservar a T. ambiente hast 24 hs.
Bact/Alert, estufa de Guardia Líq. de punción
(articular, ótico, pleural, ascítico, heridas, etc)
IDEM LCR
Ascítico: mínimo 10 ml en frasco Bact/Alert (5 ml. X frasco)
IDEM LCR
Exudado de fauces Tubo estéril con hisopo, sin medio de transporte
IDEM, T. ambiente hasta 24 hs NO SE RECIBE FIN DE SEMANA Líq. de Infusión
(parenterales, otros)
Enviar todo el sistema (sachet y guía) en bolsa sellada
Temp. Ambiente, hasta 24 hs.
Muestras Respiratorias Bajas
a) esputo
a1) gérmenes comunes a2) TBC, Hongos
b) BAL, cepillo envainado, Asp. Traqueal)
b1) gérmenes comunes b2) TBC, Hongos
a1 - a2: frasco estéril, boca ancha tapa a rosca, en frascos separados
b1-b2: tubo seco estéril, tapa a rosca, en tubos separados
a1-a2: IDEM, heladera hasta 24hs
b1: NO SE PUEDE CONSERVAR b2: heladera, hasta 24 hs.
Secreciones oculares Secreciones de oído externo
Pedir materiales e Instrucciones en el laboratorio
NO SE PUEDEN CONSERVAR Abscesos y otras
Muestras para anaerobios
Frasco TAB y
tubo seco estéril, tapa a rosca
Tubo seco, temp. ambiente hasta 24 hs y Frasco BactAlert anaeróbico
Biopsias
(gérmenes comunes) biopsias de quemaduras
Tubo o frasco estéril tapa a rosca Tubo o frasco estéril tapa a rosca
IDEM, temp. ambiente hasta 24 hs (si es muy seca, agregar unas gotas de SF estéril)
NO SE PUEDE CONSERVAR TBC
a) Líq. punción (LCR, pleural, sinovial, etc)
Biopsias, abscesos b) Lav. Gástrico y orina
a-b)Tubo estéril o frasco de boca ancha con tapa a rosca
a) IDEM, temp. ambiente
b)Neutralizar con bicarbonato de Sodio (una punta de espátula), heladera hasta 24 HONGOS
Muestras por punción Y biopsias Sangre (lisis)
Serología
Tubo seco estéril, tapa a rosca
Tubos con saponina: retirar en laboratorio 3ml de sangre en tubo seco estéril, tapa a rosca
b) heladera, hasta 24 hs
Heladera, 24 hs. NO CONGELAR
CONSERVAR EN HELADERA