Reconocimiento de bacterias del suelo identificadas en un sitema agroforestal con Mora
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(2) Eyol!dcióñde Esp¿c¡es Fo.¿srdlesco¡ Poreh.ioiidod d€ rurof¿r Vivosei ld Producclónde Aora (puburg/aucÉBenth). lntroducción La comun¡oao¡ónentre los dilerentes comPonentes se da por señales b¡oquímicas,las más ¡mportantesson: 1. lnteracciónplanta-planta, causadapor traslape entre fizosferas. 2. Interacc¡ón raíz-m¡croorganismo, determinadapor Ias raices que estimulan a los microotgan¡smosa crecer alrededor de las raíces (efector¡zosfera)y por las actjv¡dades microbianasque afectan el desarrollo de la planta, b¡en sea para benef¡c¡ode la mismao la inducciónde la enfermedad.3. lnteraccionesmicroorganismo-microorganismo, inc¡uyeact¡vidades de antagonismoy sinergismo (Barea,1998). El número de bacteriasen el suelo, generalmenteson la poblaciónrnás numerosa con relación al resto de microorganismosexistentes en el suelo (Blasco, 1970). Las bacterias de mayor prevalenciaen el suelo perteneDena los géneros Pseudomonas,Bacillus, llegando a tepresentara veces hasta 75ol"de la poblacióntotal, otras bacterias ¡mportantes como las nitr¡iicantesconstituyen 1% (Burbano,1989). Las bacterias de los géneros Bac¡ us y Pseudomonas,solubilizan el potasio de ácidosorgánimediantela liberac¡ón cos o inorgán¡cosque reacc¡onancon los mineralesque los contienen. Estos microorganismosdescomponenm¡neralesde aluminjo,silicatoy liberanpane de¡ potasiocontenidoen ellos (Burbano, 1 9 8 9 ;N 4 a n í n , 1 9 8 1 ) . Hay especies del género Bac¡ us (8. thuing¡ens¡s')que producen toxinas con actividad insectic¡daque son usadas para e¡ control biológ¡code larvas (Paul, 1989). Algunas espec¡esde C/ostr¡drüm, presentan importanciaeconómica,ya que se usan comercialmenteen la producción de alcoholes,además existen espec¡es como C. butyrícum y C. pasteu anum, que fijan el nitrógeno (Paul,1989).. Dentro de¡ grupo de las Pseudomonas, algunas especies causan enfermedades en plantas y otras son benéficas. Entre las benéficas están las fluorescentes, las cualesse han rel¿cionado con e¡ contro¡biológicode hongos fitopatógenos(Scher,1982). El presente estudio tuvo como objetivo primordial,ident¡ficarlas bacteriasdel sue¡o presenles en el sistema agroforestal con Mora y establecer su grado de colonización,expresado en un¡dadesformadorasde colonia(U.F.C/g). Metodología Ubicacióri El estud¡ose realizóen dos local¡dades del mun¡cip¡ode Risaralda: tinca La Palmera,vereda La Leona. mun¡cipio de Santa Rosa de Cabal,ub¡cadaa 4' 52 19" lat¡ludnorte y 75"35 39" ¡ong¡tud oeste,a 1.843m.s.n.m.,temperatupromedio ra med¡a18'C y precipitación acumufadaanual de 2,745 mm; finca E¡ Porven¡lveredaAlta Campana, municipiode Apía, ub¡cadaa 5'7'34" lalt tud nortey 75" 5a'45" longitudoeste,a 2 . 0 6 0 m . s . n . m . ,t e m p e r a t rua m e d i a 19'C y prec¡pitaciónpromedioacumulada anual de 2.100 mm. Las muestfas de suelo fueron lomadas en el área del suelo circundantea los sislemas radicularesde los tutores v¡vos y al cullivo de mora en las parcelas de invest¡gacióndel proyecto"Evaluación de especiesforestalescon potencialidad de tutores vivos en la producción de. mora". En ambas localidadesse realizafondos muestreos,entreel l0 de abrily el 12 de sepliembrede 2003. Para cada espec¡e forestal y mora, se tomaron muestrasde suelo de rizoplano,rizosfera y b¡omasa, las cuales se procesaron y analizarcn en el laborator¡ode Corpoica,Manizales (Fitopatologia)(Tabla 1). ¿orpoicd - U¡ridod Lo.ql de l¡vesrgoción Eje Cqf¿iero.
(3) Evol@clónd¿ Esp€ci¿sFo.estdl€scohPot¿¡ciol,dod de Tutor¿s Vivos¿¡ ld P.odt.có^ de MotolRubu! gl¿ucusSerth). Toma de muestras. Tabla 1- Especiesforestalescomo tulores vivos evaluadosen un Sistema Agrolor€stal con Mora Risaralda,2003 Tratamiento. Nombre. Eucaliplo. 2. Para cada especie, en €l sitio de '15 muestreoy a una distanc¡ade cm del tallo pr¡nc¡paldej hospedantese retiró la hojarascade la superficiedel suelo, luego con un palín estéril de hoja rectangular de 25 cm de largoy 20 cm de ancho, se profund¡zó15 cm y se tomó una muestra de 200 g de suelo.. Nomble cientílico. E¡rcaliptus. ChachaÍiulo. 3. En cada tratamientose tomaron tres repet¡ciones(submuestras)pof cada especie evaluada, se colocaron en bolsas plásticasmarcadas,se sellarony almacenaronen termos de icoporcon hielo. Posteriormentese llevaronal laborator¡o y se afmacénaronpor 72 horas a una temperatufade 4qCcon el fin de evitar la proliferación de m¡croorganlsmos.. Acacja Negra 5. Quiebrabarigo. 6. Sauce. Salix. 7. Cond¡c¡onesdel suelo Las prop¡edadesquimicas del suelo son muy importantespara la sostenibilidad (Tabla2). de los microorganismos Tabla2 Resultadosdel análisisquímico de suelos en os municipios de Santa Rosa de Cabaj y Apia, Flisaralda2003. Mur Dégclpcióh. Un¡clad. pH Orqánica. megr'100g Ca (Calcio). Al(Aluminio) P (Fosforo). ppm-'. Sañta Bosa de Cabál. Apía. 5.0. 5.1. 11.9. 192. o15. o.24. 04. l1. 04. 08. I. 6. Fe (Hiero). 132. (l\.langan6o). 21. zr,l¿irc). 3. Cu (Cobre). 90. 3 3. B {Bor.o). o.54. 035. S (A¡ulre). 38. ¡3. Textura ' meq/100g suelo: gramosde suelo mili€quivalenles/]00 " ppm: pariespof millón CorpotroLJnidodLo¿oloe IryestigúdóhEJe Cofele-o. 4 '.i. i__) !i,. 06. ¡"ls. Las muestras fueron tomadas en la rizosfera(zona del suelo afectada por el desarrollode las raÍcesy el rizoplano(volumen de suelo no colon¡zadopor las raÍces). Además se evaluóla biomasa en descomposlcidn de fas especiesforestaies.. -:.¡. Aislamiento y recuento de colonias de Bacterias Las tres submuestEs tomadas por tratam¡entose homogenizarony de ella se tomaron 200 g para preparar la solución madre. Se pesaron20 g de suelo y se mezclaroncon 180mL de aguadestilada estéri y se ag¡tó v¡gorosamente. Posteriormenle se realizarond¡luciones en base 10, para ello se emplearon10 tubos,cada uno con I mL de agua destilada estéril,al primer tubo se le ad¡c¡onó 1 mL de la soluciónmadre,quedando de esta manera préparadala dilución de 10 . luego se transfiriódel primer tubo sigutenle1 mL y asi sucesivamente hastaalcanzaruna d¡lucónde .1O10. Para el recuento de Un¡dades Formadorasde Colonias (UFC/g) se tomaron 100 !L de la dilucionde 10., se sembraron3 cajasde Agar Nutritivó para. '-1l.
(4) Evdluoció¡ d¿ E5p¿ci6 Fores'toler .on Pot¿¡c¡oJiddd de Tutof.r Vivos¿¡ lo Producc¡ó^d¿ Mota lqub. Be¡r¡). el recuento de bacter¡asaerobias f e r m e n t a d o r a sy n o f e r m e n t a d o r a s (Enterobacterias);3 cajas de agar Lg para el aislamientode Azotobactery Azomonas:y finalmente3 lubos de agar S u l f ¡ t o - P o l i m i x i n a - S u l f a d ¡ a c( S i nPaS ) Dara el a¡slam¡ento de bacterias anaerobiasestrictas como Closttidium. Posteriormentelas cajas inoculadas se sometieron a diversas temperaturas indicadas para cada género con el fin de promover su desarollo, y t¡nalmentese real¡zaron lecturas diarias durante 10 d ías. El recuento se obtuvo contab¡l¡zandoel número de colonias en cada caja, se promediarony multiplicaronpor el inversode la d¡lución('105),de estaforma se obtuvo el número de un¡dades formadoras de colonías (UFC/q) en 20 g (Corpoica, 2000). Para la identificacióny evaluaciónde algunos géneros de bacteriasse procedió a la observaciónde las colonias,donde se tuvo en cuenta la morfologíade la colon¡a,forma, color, aspecto (liso o rugoso), de acuerdo con parl¡cularidades específicas. Una vez ourificadas las colonias bacterianas se almacenaron en agar nutriiivo para su identif¡cacióny se realizó la tinción de Gram y las pruebas bioquímicasoxidasa, ¡ndol, movilidad, producciónde ácido sulfhídrico,gelatina. crecimientoen cetrimide.crec¡miento €n agar triple azúcar, crecimientoen Hugh-Leifson. Para su idenl¡ficac¡ónfF nal se ut¡lizóel manualde Shaad(1988). Con el fin de confirmar la identif¡cación de algunasbac'teriaspresentes,se complementaronlos estud¡oscon el método de bacBBL-Crystalpara la ¡dentif¡cación terias entér¡cas no fermentadoras-. En el muestreoinicial se presentarondi ferencias significativas entre las especies, los mayo[es conteos baclerianos en la descompos¡ciónde la b¡omasade las especies forestales se presenlaron (19 x en el tratam¡ento2 (Chachafruto) 106U.F.C./g).Los menoresconleos se registraronen el tratamiento6 (Sauce)(98 x 104U.F.C./9)(Tabla3)En el análisis entre muestreosse observó un notable incrementoen la Doblación bacter¡anaen el segundo mueslfeo colr fespecto al primero, en la mayor parte de los tratam¡entos,lo que puede explicarsepor el fenómeno de adaptac¡ón de estos géneros bacterianos a las condic¡onesespecít¡cas que provee el nicho ecológico en el cual se da e¡ eslablec¡mientodef¡nilivo. Es importante resaltar que el t¡empo marca el establec¡mientode la diversidad microbianay prorrueveinteracciones entre los m¡croorganismos.. Tabla3. Cuanlrfcac¡ónde bacleriaspres€ntes en la biomasade €speciesforestales eváluadasen el municipiode Santa Rosa de Cabal. Risaralda 2003.. Trátamlento. Bacterias (U.F.C./g). l\tuestreo Flnal. Muestfeo lñicial 1 Eucalipto. 16 x 106a". 68x106a. 2 Chachafruto. '19 106 x a. 45¡106a 73 r. 106a. 4 AsáciaNegra. 7 2 x 1 0 6a. 1 3 ¡ 1 0 6a. 5 Quiebrabanigo 25 x los bc 8 0 x l 0 5 b 6 Sauce. 98 x 104bc 4 0 x l d b. 7 Testigo(Mora). 53x106a d€. * Promedioscon letrasigualesno dfieren segÚnDunca¡ al 57". signilicativamente " No se tenía bioñasa en el momentodeldueste€. Resultados y oiscusión Evaluación en el Municipio de Santa Rosa de Cabal Evaluaciones én Biomasa 34. Evaluaciones en el Bizoplano dtEn el muestreoinicialse presentaron entre las esp€ferenciass¡gnificativas cDrpoico vhidad Loel de I¡w esriq.ión|ie. caferero -.
(5) Evdluoció¡de Esp¿ciesFo.estol¿sconPorehciolidod de Túrores vivos ¿n ld Prod!..iónde Moro (Rubut g/aucB Berrh). cies, los mayores conteos bacterianos en el rizoplanose presentaronen el Tratamiento2 (Chachafruto)(15x 106U.FC./ g) y los menores se registraronen el 7 ( 2x 105U.F.C./g)(Tabla4). (Testigo-Mora) Tabla 4 CuanHaación cle Bacterias presentes en el nzoplanode especresforeslaleg evaluadasen el municipiode Sanla Rosa de Cabal,Risaralda 2003. calipto)(13 x 106U.EC./g).Los menores conleosse tegistraronen el Tratamien(Tato 7(Testigo-Mora) {25x 105U.F.C./g) bla 5). Para el segundomuestreose presentaron dilerencias altamente significativas entre las especies, los mayores conteos bacterianosen la rizosferase presentaron en el Tratam¡ento4 (Acacia)(60 x 106 fabla5. Cuanrificaciónde las bact€:iias presenlesen la rizosfefa de espe€ies forestales lratamientos evaluadosen el municipiode Sanla Rosa de Cabal, Fisaralda.2003. ' Proñedros cón lelras iguales no dfe¡€n srgnificalvamenre segúñ Dlnca¡ al 5%. En el muestreofinal se presentarondiferenciasaltamentesignificativasentre las especies, los mayores conteos bacterianosen el r¡¿oplano se presentaron en el Tratam¡ento7 (Testigo-Nrora) (48 x 106U.F.C./g)y este a su vez lue estadísticamente diferentea los demás tratamientos, según prueba de Duncan al 5q". Los menoresconleos se registraronen elTratamiento5 (Ouiebrabarrigo) (23 x 105U.F.C./g)(Tabla4), El análisisentre muestreospresentaaspectos muy importantescomo una feducciónen la poblaciónde bacleriasen l a A c a c i a N e g r a , Q u i e b r a b a r r i g oy Chachafruto. Sólo se observaun leve incrementoen ¡as espec¡esMora. Eucaliptoy Arboloco. Evaluaciones en la Rizosfera En el muestreoinic¡alse presentarondiferenciassignificativasenlre las espec¡es, los mayores conleos bacterianos se presentaronen el Tratamiento1 (Eucó.po¡cd UnidodLocdld¿ I¡resnqlció^ Eie Cofererc. ' Promed¡osco¡ elfas rgualesnodilleren signilicalivamenlé según Duncana 5%. U F.C.ig),y los ménoresconteosse registraronen el 7 (Testigo-Mora)(22 x 10a U.F.C./g)(Tabla5). EI análisis entre mueslreos deja ver que el Tratamiento y el 7 (Test¡go-Mora) '1 ( Eucalipto),presentaron reducciones en Ia poblaciónde bacteriascon respecto a la evaluac¡on ¡nicial.Los demástratamientostuvieronun incrementoen la población. D¡versidad bacteriana encontrada en SantaFosa de Cabal Con relacióna la diversidadde géneros encontrados en Santa Bosa de Cabal, es importanteseñalar que fue comun encontrar bacterias correspondientesa los géneros Bac¡llus, M¡crococcus, Pseudomonas fluotescentes, A¿otobaclet. Closlridíum, Proteus, Eurkholde a V Xanthomonas,en ambos muestreos. En el primer muestreoa diferenciade ¡as bacterias antes men35.
(6) Ewl!oción d¿ Especi¿rForerlúl¿sconPotenciolidod d¿ Tutor6 Vivos ¿¡ lo Produ.ciór de l ot\(Rubo! slaucusBenth). cionadas se hallaron Vib¡¡o (V. alg¡nolyticus\, Agtobactetium (4. tumelaciens) y Pseudomonas no fluotescentes,lo que indica una amplia diversidady el establecimientode n¡chos microb¡anosestables. Además, en la s e g u n d a e v a l u a c ¡ ó ns e e n c o n t r a r o n Pseudomonas fluorescentes como (P.. aufeofaciens,P marginalis,P putida y P. aeruginosa\,Klebsiea (K.pneumoniae\, Entercbactet(E. cloacae),Acinetobactel (A. ¡wotti),Staphylococcus,Pantoea(P ( )4 agglomerans\, Yers¡nia pseudotuberculosis\ y C¡trcbacter \C. freundiDFabla 6).. Tabla6. Génerosde bacteriasidenlificadosen suelos de sist€masagrolorestalescon mora en eJmunjdpjode Sanla Fosa de Cabal (Risaralda).2003. muestrco 2 = Segurdo Íueslreo * Tratan{entos: 1. Eucallpto 2 Ch&haftulo 3 Arbdc.o 4 Acácia ¡¡egra 5. A.ietrab€rigo 6. Sauce 7. Ivora. 36. Co.poico- UñidddLo¿olde lwesngú.ióA EJzCoferqa.
(7) Evol@ció¡¿¿ ErpeciesFo.estd €s cohPot¿n ol dod d. Tsro.es Vivas en 16P.odec¡án ¿e ^^oto I.eubús9Jau.69.rth). Evaluac¡ónen el Mun¡cipio de Apía. Evaluacionesen el Rizoplano. Evaluacionesen Biomasa. En el muestreo inicial se presentarond¡ferenciassignifrcativasentre las especies, los mayoresconteos bacterianos en el rizoplanose presentaronen el Tra' tam¡ento3 (Arboloco)(30 x 105U.F.C./g) y los menores conteos se regrstfaronen (4Ox10'U F.C/g) (lael 7 (Test¡go-Mora) bla 8).. En el muestreoinicialse presentarondiferenciassígnifícativasentre fas especies, los mayores conteos bactefianos se presentaron en el Tratamiento5 (Quiebrabarrigo)(82 x 106U F.C/g) y los (50 x 10s menoresen el 2 (ChachafÍuto) U.F.C./g)(Tabla7). Para el muestreo final, se presentarondiferenciasaltamente significat¡vasentre las espec¡es, los mayoresconteosbacterianosen la biomasa se presentaron en el Trata(10 x 10?U.F.C./ miento2 (Chachafruto) g) y los menores conteos 5 (Quiebrabarr¡go)(30 x 105U.F.C./g)(Tabla 7) El anál¡sis entre muestfeos perm¡te observar que se obsefva una fespuesta positiva en cuanto al incremento en las poblac¡ones de bactef¡as descomponedorasde la biomasa productode las espec¡esforestales.Cabe destacarque la biomasa donde estaba eJChachafruto fue la que mayor poblaciónde bacterias presentóal finalde la evaluacrón, seguida por Eucaj¡ptoy Arboloco. TabhT. Cuantillcaciónde lasbacteriaspreseñles en la biomasade especjes forestaieséVaiuadas en er munc¡po de Apía, Risafalda 2003. ' Promedios c o n l é 1 f a si g u a l e sn o d i f i e r e n significalivameñte según Ounca¡ al 5% " N o s e t e ¡ i a b i o m a s ae n e l m o m e n t od € l m u e s l r e o - llnidadLocald€l¡v6n9oció^Eje¿of¿t¿.o Co.poi.o. Tabia8. Cuanlificaciónde las bacteriaspresentes en el nzoplanode éspeciestorestales evaluadas eD el municipiode Apia Risa¡alda-2003 Bacte.ias (U.F.CJg) Tralam¡ento. lnicial. Final. l Eucaliplo. 1 0 x 1 0 5a b '. 8 7 x 1 0 5c. 2 Chachalrulo. 62x104b. 36r10"b. 3 0 x 1 0 5a b. 85x106a. 2 5 x 1 0 5a b. 54x105c. 5 QuiebrabaíÍigo. 6 8 x 1 0 {a b. 28x105c. 6 Sauce. 1 0 r 1 0 5a b. 75 x 10'c. 7 festiqo (Mora). loxlaab. 26 x 1o5c. Promedioscon letrasigualesno dfieren significalivamenle según Duncanal 57d.. En el muestreo final se presentaron diferenciasaltamentesignificativasentre las especies, los mayores conteos bacter¡anosse presentaronen el Tralam¡ento3 (Arboloco)(85 x 106U.F.C./g), frente a los menores conteos registrados en el7 (TesliqoMora)(26 x J0sU.FC.,/ g) (Tabla8). El análisisenlre mueslreos,determina que la especieChachafruto, a pesar de tener un bajo registro poblacionalde bacteriasen el muestreoinicial,presenta uno de los mayoresincrementos en la población de baclerias. Arboloco mantiene las altaspoblacionesde bacterias, por seguido Chachatruto y.
(8) Ewluociónd¿ Esp¿.iesFor¿stolesconPoterv:i1liúd d¿ Tufor€s V¡vosen lo P¡oduc.ión de ^ oro (2ubus 4lau¿uiSehrh). Qu¡ebrabarrigo.. Evaluaciones en la Bizosfera En el muestreoin¡cialse presentaron diferenciass¡gnif¡cat¡vas entrelas espec¡es, los mayoresconteosbacter¡anos se presentaron en el tratamiento 6 (Sauy los menores ce) (29 x 106U.F.C./9), conteosse registrafonen el tratamiento (67x 1d U.FC./g)(Ta5 (Ouiebrabafrigo) f¡nal,se prebla 9). Parael muestreo altamentesigniticasentarondiferencias Táb¡aL. Cuantificaciónde las bacteñaspresentes en la rizosferade especiesforeslales évalladas en el municipioApfa Flisaralda,2003. ' Pfomedioscon lelrasigua¡esno diferen sjgnficativamenlesegún Duncanal 5%-. t¡vas entre las espec¡es,los mayores conteos baclerianos se presentaron en el tratamiento5 (Ou¡ebrabarigo)(61 x 1 0 5 U . F . C . / g )f r e n t e a l o s m e n o r e s conteos registradosen el ttatamiento 7 (TestigoMora) (40 x 104U.F.C./g)(Tabla o1. entremuestreos El anál¡siscomparativo se puedeobservafque hubounareducde bacción grandeen las poblaciones tedasparalas especiesSaucey Mora final. haciala evaluac¡ón una Cabedestacaren ambosmuestreos t e n d e n c ¡aa u n a m e n o rr e c u p e r a c i ó n 7 (Testigobacterianaen el Tratamiento en la Mora)con resPectoa la reg¡strada mayofpartede las especieslorestales, al igualque en el municipiode Santa Rosade Cabal.Los mayoresconteos en los dos muestreosse en el r¡zoplano 38. registraronen el tratamiento3 (Arboloco) y los menores conteos en el tratamiento 7 (Testigo-Mora),para esta misma condición, lo que permite inferir acerca de cond¡cionesDart¡cularesoue brindan estas esDeciesa la suoerv¡venc¡ade d¡ferenlesgénerosbacterianosa través del tiemoo. En general, se evidencia un notable ¡ncremento en la recuperaciónbacteriana en el segundo muestreo con relación al primero en la mayoÍ parte de los tratamientos y para ambas localidades,lo que puede explicarsepor el fenómeno de adaptación de estos géneros bacterianosa ¡as condicionesesoecíficas que provee el nicho ecológico en el cual se da el establecim¡entodefinitivo. Es claro que a nivel de la rizosferade las en el lote Dlantasque se establec¡eron experimental,se desencadenóuna serie de reaccionesque de una u otra rTlanera repercutieronen los resultados, c o m o u n a m a y o r d i s p o n i b i l i d a dd e nutrientes gara el establecimienlode estos m¡cfoorgan¡smosy unas condiciones fís¡casdel med¡o más propiciaspara su establecimiento. sin embafgo, no se puede descadar el efecto que causa la velocidadde descomposiciónde la biomasa sobre las ooblacionesde baces claro que ter¡as descomponedora9, biomasa provenientede Chachafruto, Qu¡ebrabarrigo,Arboloco, Sauce y Acacia Negra, lienen mayor veloc¡dadde descompos¡c¡ónque la biomasa de Eucaliptoy Mora. Diversidad bacleriana encontrada en Apía Con relación a la divers¡dadde géneros encontrados,es importanteseñalar que los géneros de bacterias más comunes encontradosdurante los dos muestreos realizadosen el munlcipiode Apía,eñ el sistema de mora asoc¡ado a tutores vrvos con esPecies forestales, fuefon: Bac¡llus, Pseudomonas fluorescentes (Paeftigirffi), Mbw-S, StaphyIococc us, Corpoico- UnidodLo¿oldelnvertigociónEj¿ Cafet¿rc.
(9) Evol!oci¿ndeEspe.¿5For¿srol¿s.onPot¿¿c,olidqC de TlJor¿s Vi'os e¡ lo Prcdlc.tó^ ¿e Marc |.Rubussla!.usBer¡h). Proteus y Clostrid¡um . Bacterias como Erwín¡a, Klebs¡ella (K.oxytoca),Enterobactet(E. aerogenesl, fluorescente. Pseudomonas no Burkholdet¡a(B cepadl4, sólo se encontraron en el ptimer muestreo; y C¡trcbacterI.C. treundiD,Xanthomonas, KlebsieflalK. pneumoniae),Enterobacter (Y. Yets¡n¡a \E cloacae\, pseudoluberculosis),yrf¡floI y. cholene\. P s e u d o m o n a sn o f l u o r e s c e n t e s( P . gladíol¡). Pseudomona put¡da y Pseudomonas fluorescens, se hallaron en ef segundomuestreo(Tabla10). El geneto Bac¡llus(Figural y 21.se presentóen todas las especies,en las condicionesevaluadas(biomasa,rizoplano y rizosfera), para los dos muestreosy en las dos localidades, Santa Rosa de Cabaf y Apía Esto determinaque es una bacleriaque se encontrabaestablecida previamentey que se adaptó favorablementea las especiesforestalesintroducidas Dichogénero,se destacapor su rápidacolonizac¡ón de la rizosferay del sistemaradical.hac¡éndoloef¡cienteen el controlde patogenosque atacanraices y lallo. como Fusanum.Fh¡zocton¡a. (Cotes,2002). Se han enVertic¡llium contradoespeciesdel género Bac;llus lB. lhurrngiensis)que produceloxinas con actividad insecticida,uhlizadaspara el controlbiológico de larvas(Paul,1989) El género Micrococcus también se encontró en los dos muestreos realizados en Ias dos localidades. Esta bacteriaes un m¡croorganismo del sueloque ayuda a la degradaciónde la lignina,componentefundamental de la madera(Malin, 1SB1). Es importanle señalar que el género Clostr¡dium, sólo se encontró en la rizosferaen las dos localidades,con predomin¡oen varios tratamientospara el primer muestreo,lo que permiteinferir previoen acercade su establecimiento estas localjdades. El género Clost(¡d¡um c o m p r e n d eI o s b a c i l o sa n a e r o bi o s , ' o - o o . d t r . d . o L o r o ' o el 1 * r ' g o. olEFcalct¿¡l. Figuta 1 Gérero Bac¡llus A Crecimrentoen agar nutritivodespuésde 48 h, se pueden observarcolonrasblancasy planas. g. En ia tinciónde Gram se observanBacilos Gram posiiivoscon endosporas100X. G r a m p o s i t i v o s y p r o d r r c t o r e sd e endosporasen condicionesadvetsas. solub¡lizanel Potasiomediantela liberac¡ón de ác¡dos orgánicos e inorgán¡cos e intervienenen el ciclo del Nitrógenoise encuentranen múltiples s u s t r a t o s , c o m o s ue l o , a g u a s residuales,plantasy alimentos Ciertas especiesde este génerohacenuna vida puramentesaprofíticaen el suelo,donde desempeñanun papelesencialen el ciclo vital de la naturaleza,debidoa su actividadb¡lógica(Proteólisis). otras especiesson patógenaspara el hombrey l o s a n i m a l e s( N r a r t í n1, 9 8 1 ; M á d i g a n , 199e). Con relacióna los génerosde importanc¡a agricola,implicadosen Ia mayorasimilaciónde nutfientespof parte de las plantas y en la sostenibilidadde los.
(10) deEsp¿cies €wluoc¡ó¡ Fór€ltdfss conPoten.iolíddd de luror¿s Vivos¿nlq Prod!..ióAde Morc(. Eenrh). Tabla 10, Gén€rosde Bacleriasidentificadasen suelos,en sislemasagroforestalescon morB,en €l municipio de Apia F¡saralda2003. 2 t-2-3+5.6*. 1-2-345-6?. 2-3+a>7. $6. 1-9++e7. 3. 1-2-+45+7. 2. 1-94. 2-94. 5. 2+5 3 i,+4. g4. 1-2^3-+t6. 1-2-34-6-7. 1-44"6. 1-2+5+7. 't++t7. 1-2-C4GT. *9447. 1.2397. 1-2-3at-5 Pfltdffi. 6. *^E¡r'<Éa. PseLrEDñas ltloqserl$. 1-2.3-4F6 1,2+5. 5-6. 2-341. +fi. 1-2-g-+5G7 5. PEeudnn6. fttueíerÉ. 3 1-2-y+67. 1-2-9+F6. T 34. Yets¡h¡aE.artox,taate€. '. 1= Frjmgrmueslréo ? = S€$nó ruesllF 3 Artdcm " Tralamient!6: 1 EucaliDlo ? clrahtnlo. 4 ¡.ata l.Jqra 5 Oi€b.ab¿fiigo 6 Sac. a gr o e c o s i s t e m a s , s e d e s t a c a n Azotobacter,Bac¡llus,Burkholdea, qre son obietode estudio en la actualidad y su producción masíva de investigac¡ón se ha iniciadoa nivelcomercialparasumicrobíanas en los sueDlirdeficiencias los y fortalecera favés de su incorporac¡ónal suelolas interacciones sueloplantaquefavorecene¡ adecuadodesarrollode las plantas(Barea,1998). Entrelas bacter¡asmás comunesregistradasen el presenteestudio.se destaca el grupo de Pseudomonas 40. T llfoE. las cualescumpfenfunfluotescentes, cionesimportantes en controlbiológico, ya que producenpigmentosdifusibles f luorescentes, sideróforossecretados por la célula bacterianaque pueden qoelatarel h¡errodesde el med¡oambientea su ¡nterior,dondelo hacend¡sponibleparaprocesosmetaból¡cos, también ut¡lizaneste mecanismopara inhib¡ralgunospatógenosdel sueloal competir con éstospor el hierrodisponible ( A b d a l l a n1. 9 9 1i L e m a n c e a u ef a/., 1995). coryo¡cq UnidodLocold¿ InvesiigqciónEje cofer¿ro '.
(11) Ev6lsci& d¿ Espe¿,¿s FDr?sioresconPorehcidl¡d¿d d¿ Tutor¿s vivos en ld Prodlc.ióA d¿ Moro (Rubu! glducú Sa¡t^). Ef género Burkholdeia lB. cepac¡a), es importante como agente biocontrolador de patógenos fol¡ares def suelo y poscosecha. La antib¡osises un mecanismo de control biológ¡coque utiliza este género, á través de la cual se producen antibÍóticosy siderófoÍosque puedenser usadoscomo antagonistas e n r a í c e s c o ¡ o n ¡ z a d a sp o r a g e n t e s patógenos(Parke, 1998). El género V¡brío, es un patógeno del hombre y animales que causa Gastroenleritis, se halla en el kacto intestinal,en agua, suelo,al¡mentosy en e s t a n q u e sd e a g u a d u l c e ( M a d i g a n , 19Sg). Este género sólo se reg¡stróen el primer muestreo del rizoplanoen dos de los tratamienlosevaluados,en Santa Flosade Cabaly en élsegundo muestreo del rizoplanoen Apía. O(ro género patogénico es Yers¡n¡a,el cual se presentóen forma esporádica en los mueslreos. Yetstn¡a pseudotuberculos¡s, puede sobrevivirlargo t¡empoen agua y suelo y és causante de Pseudotuberculos¡s en algunosconejos,originandoun procesoinfectocontagioso; es parásito de roedoresy aves, const¡tuyéndosecomo reservorioen heces (Mad¡gan,'1999). En los diferentes muestreos se encontraron en forma esporádlcalos géneros Klebs¡e a lK. pneumon¡ae),el cual causa Neumonia y enfermedadesdel sistema fespiralorio, Pseudomonas nO fluorescentes y S¡aphylococcus, lo que es lógico,teniendo en cuenta que la lite. ratura registra ai suelo como el hábitat natural de muchos génetos baclerianos patógenos para el hombre y los animales {Lennette et at, 1985). El género EntercbacteÍ es ¡mportante porque participa activamente en la fijación del nitrógeno atmosférico,val¡éndose de un comp¡ejoenzimáticoconocido con el nombre de Nitrogenasa. enzima que posee átomos de h¡er.o, azufre y m o l i b d e n o e ¡ n f l u y ee n l a a c t i v i d a d Corpoi(d Uh'dodLo.ord¿tñvesrjgo. d¡ Ete co,er@. €nz¡máticaque se realiza en el suelo. Este género de bacteriasafecta pacien(Banwart,1934). tes inmunosuprimidos Algunosgéneros agenles causalesde enfefm€dadesen plantas, también se registran en forma esporádica en los muestreos real¡zados en las diferentes c o n d i c i o n e sd e l e s t u d ¡ o ,t a l e s c o m o Agrcbacter¡um y Xanthomonas, pues st) hábitat natural lo constituye el suelo (Schaad,l988). Con relacióna ¡a diversidadencontrada en el presenteestudio,en general,se r e g ¡ s l r ó u n a m a y o r r e cu p e r a c i d n bacter¡anaen el municipiode Apía, tanto en cant¡dad de propágulos bacterlanos como en diversidad, Entre los organismosaisladosen este sistema de mora asociado a tutores vF vos de especiesfotestales,se encont r a r o n a l g u n o s m i c r o o r g a n r s m oqsu e son habitantesnaturalesdel suelo, cuya mayor predominanciaen los djferentes muestfeos para las condiciones evaluadas se presento para los géneros M¡ctococcus, Bacillus, Pseudomonas y Staphylococcus. Para ambas localidadesse registraron géneros ¡mplicadosen patogénes¡sal hombre y an¡males y géneros involucradosen la mayor absorción de nutrientespara las plantas y en el mejoramientode las condicionesdel suelo para el adecuado desarrollode la p¡an.. Conclus¡ones Los resuliadosponen en ev¡denciala fiqueza de la microb¡otanativa, tanto en cantidad como en divers¡dad,la cual se incrementaa través del tiempo en los lotes experimentalesub¡cadosen los mun¡cipiosde Santa Rosa de Cabal y Apía, en un sistema agroforestal de mora-tutores vivos ( E u c al ¡ p t o , Chachafruto,Arboloco,Acacia Negra, Qu¡ebrabarrigoy Sauce) asociado a las 41.
(12) EMJ!¿.ió¡ de Espe.ier For¿slalerconPot¿nciolidod de Turor¿s ViKs er ldProdscc¡¿nd¿Morc{h,bl'sghuc6Be^th). d¡versaszonas del suelo:Rizoplano, Rizosferay en B¡omasa. Se presentarongénerosbacterianos comunesen las dos localidades,como Bac¡llus. Burkholder¡a, Clostrid¡um, Klebs¡ella,M¡cÍococcus,Pseudomonas fluorescentes,Staphylococcus,V¡br¡oy yélsin¡á,pero en la localidadde Santa algunos Rosade Cabals€ encontra¡on génerosnuevoscomo Acinetobactet, Agrcbacter¡um,Azotobaclety Panloea. Los géneros V¡bt¡o, Clostr¡d¡um. y Klebs¡ella,Yercínía,Pseudomonas reg¡strados en ambasloEntercbacter, en habitantes calidades,se const¡tuyen d e l s u e l o e n f o r m a n a t u r a ly e s t á n involucrados en procesos d€ patogenic¡dad sobreel hombrey los ani mates. Los géneros Bacillus,Azotobactet, Pseudomonas Burkholder¡a, presentesen ambas loÍluorescentes, c a l i d a d e s ,s o n i n d i c a d o r e sd e l a sosten¡b¡lídad de los agroecosistemas en virtudde su papelen lasinteracciones quefavorecenel crec¡m¡ensuelo-planta, to, nutricióny saludde las plantas.. La tendenc¡amund¡alde la agr¡cultura sostenible está enfocada al estudio de los m¡croorganismosdel suelo, en particular en los aspectos ecológicos, genét¡cos, b¡oquím¡cos,fisiológicos, nutricionales,de protecciónde plantas y de su contribuc¡óna la Droducl¡v¡dad sosten¡dacon el minimo déterioroambiental. razón por la cual la diversidadde géneros bacterianos encontradossn el presenteestudio puede brindar una idea acerca de las posiblesinteraccionesque se suceden entre éslos y su contribución a la supervrvenciade las especies vegetales. Actualmente muchos estudios microbianost¡enen como base orimo[dial la ¡dent¡ficac¡ónde las esoecies nativas asociadas a los agroecos¡stemas para p¡.omoversu actividadespecílicaen virtud de su adaptacióna determ¡nadas especiesy prevalenciaa través del tremp o , e n l u g a r d e i n t r o d u c i re s p e c i e s foráneas que puedan cumpl¡runa etapa de adaptación a factores bióticos y abiótjcosdel agroecosistemay posteriormenle interactuarcon las espec¡esnativas aporlando benéficios adicionales Dara el desarfollo de las olantas.. Biblíografla ABDALLAH, M. A. 1991. Pyoverdínsand pseudobactins,139'153 pp. E : Winkelman,G. (Ed ). Handbookof microb¡aliron chelates. CRC Press,Boca Ratón,Fl. BANWABI C. 1994. Bas¡efood M¡crobiology.pp 60-66 BAREA, J,1998. Biologíade la rizosféra.lnvesiigacióny Ciencia Granada pp 74-79 BLASCO L., ftlAFlo, 1970, Curso de microbiologíade suelos Costa Rica. Editoria¡Turria¡ba pp 18-22. gUFBANO, lt. 1989. Los microo¡gaDismosdel suelo. En: Una visión sobre sus componentes bioorgánicos. Uníversidadde Nariño, Pasto. pp 141-145 CORPOICA,2000. I curso taller intetnacjonaldé controlbiológ¡co.Manualde práctic€sde ¡aborato¡io y campo. Santaféde gogatá. pp- 46-50. COTES, A. M. 2002. Cor¿rolbiológicode patógenosdel suelo. Fn: MemoriasXxlll Congroso Ascoüi. Bogotá. pp. 53-57. Corpoico V¡idqd Locdl de Investiga¿ló" Eie Cofer.rc.
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