11 knúmero de publicación: kint. Cl. 7 : A61K 31/70

Texto completo

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PATENTES Y MARCAS

ESPA ˜NA

N´umero de publicaci´on:

2 177 666

k 51Int. Cl.7:

A61K 31/70

C07H 7/027

A61K 31/715

A61P 43/00

k

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TRADUCCION DE PATENTE EUROPEA

T3

k

86 umero de solicitud europea: 95939419.8 k

86 Fecha de presentaci´on: 12.12.1995 k

87 umero de publicaci´on de la solicitud: 0 778 026 k

87 Fecha de publicaci´on de la solicitud: 11.06.1997

k

54 T´ıtulo: Remedio para la endotoxinemia y disfunciones de ´organos m´ultiples inducidos por la misma.

k 30 Prioridad: 25.05.1995 JP 126258/95 k 73 Titular/es: NGK INSULATORS, LTD. 2-56, Suda-cho, Mizuho-ku Nagoya-shi, Aichi 467, JP Biseiken Co., Ltd. k

45 Fecha de la publicaci´on de la menci´on BOPI:

16.12.2002

k

72 Inventor/es: Ohta, Michio;

Hasegawa, Takaaki; Nadai, Masayuki; Yoshida, Yasuko; Kawase, Mitsuo y Inukai, Tadahiko k

45 Fecha de la publicaci´on del folleto de patente:

16.12.2002

k

74 Agente: Ponti Sales, Adelaida

Aviso:

En el plazo de nueve meses a contar desde la fecha de publicaci´on en el Bolet´ın europeo de patentes, de la menci´on de concesi´on de la patente europea, cualquier persona podr´a oponerse ante la Oficina Europea de Patentes a la patente concedida. La oposici´on deber´a formularse por escrito y estar motivada; s´olo se considerar´a como formulada una vez que se haya realizado el pago de la tasa de oposici´on (art. 99.1 del Convenio sobre concesi´on de Patentes Europeas).

ES

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DESCRIPCION

Remedio para la endotoxinemia y disfunciones de ´organos m´ultiples inducidos por la misma.

La presente invenci´on se refiere a un proce-dimiento de preparaci´on de una composici´on de un medicamento terap´eutico para el tratamiento del s´ıntoma de endotoxina en la sangre y de la disfunci´on multi-org´anica inducida por el mismo.

Antecedentes de la invenci´on

Las endotoxinas son lipopolisac´aridos que constituyen las membranas celulares de las bac-terias gram-negativas, de las que se conocen sus diferentes actividades fisiol´ogicas como la pirexia, la disminuci´on de la presi´on sangu´ınea, la dismi-nuci´on de plaquetas en sangre, la coagulaci´on in-travascular, el aumento de la permeabilidad capi-lar, la activaci´on de los complementos, etc. Por consiguiente, si se produce una sepsis mediante una infecci´on con bacterias gram-negativas o si las bacterias gram-negativas se propagan anormal-mente por el intestino grueso, la concentraci´on de endotoxina en la sangre aumenta de manera que puede aparecer el s´ıntoma de endotoxina en la sangre. Igual que para varias disfunciones cau-sadas por el s´ıntoma de endotoxina en la sangre, se conoce que ´este puede causar la muerte s´ubita o la disfunci´on multi-org´anica. Como disfunci´on multi-org´anica se considera la hepatocirrosis, la hepatitis fulminante, la insuficiencia renal aguda, la insuficiencia respiratoria, la hemorragia gas-trointestinal, DIC (coagulaci´on intravascular di-seminada), etc.

Con el objetivo de prevenir el s´ıntoma de en-dotoxina en la sangre, se han administrado antes antibi´oticos con el prop´osito de suprimir la propa-gaci´on de bacterias gram-negativas como fuente de generaci´on de las endotoxinas. No obstante, si se administra una gran cantidad de antibi´oticos, aparecen bacterias resistentes al medicamento, re-presentadas por MRSA, que dificultan la tera-pia y el s´ıntoma de endotoxina en la sangre se agrava por la liberaci´on de endotoxinas de las bac-terias gram-negativas muertas bajo el efecto del antibi´otico. Por consiguiente, es necesario desa-rrollar un medicamento terap´eutico diferente de los antibi´oticos.

Con este objetivo, se han desarrollado anti-cuerpos contra una endotoxina o un l´ıpido A como componente constituyente de la endotoxina. No obstante, esta medida tiene el inconveniente de que, de la misma manera que el efecto neutrali-zado es diferente en funci´on de los tipos de bacte-rias gram-negativa, el efecto terap´eutico tambi´en es diferente. Adem´as, esta medida tiene otro in-conveniente consistente en que la producci´on de un anticuerpo contra el anticuerpo de la endoto-xina mediante la administraci´on de un tipo di-ferente de una prote´ına, es decir, el anticuerpo, produce la aparici´on de efectos secundarios en un tratamiento continuado tales como alergias, ata-ques, etc.

La patente US-A-5.393.742 describe la utili-zaci´on de ´acido si´alico para el tratamiento de enfermedades renales, tales como la nefritis y el s´ındrome nefr´otico.

Descripci´on de la invenci´on

La presente invenci´on pretende proporcionar

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un procedimiento de preparaci´on de una com-posici´on de un medicamento terap´eutico para el tratamiento del s´ıntoma de endotoxina en la sangre y la disfunci´on multi-org´anica inducida por el mismo, composici´on de medicamento te-rap´eutico que no producir´a bacterias resistentes al medicamento, a diferencia de la utilizaci´on de antibi´oticos, que puede exhibir efectos te-rap´euticos excelentes contra diferentes bacterias gram-negativas, y que permite tratamientos con-tinuados con una elevada seguridad para el cuerpo humano.

Con el fin de resolver los problemas anterio-res, los inventores de la presente invenci´on han es-tudiado enfermedades inducidas por las activida-des fisiol´ogicas de las endotoxinas, y han buscado medicamentos para reducir la aparici´on de dichas actividades fisiol´ogicas. En consecuencia, los in-ventores han buscado medicamentos capaces de reducir la muerte s´ubita provocada por las endo-toxinas. Como resultado, han descubierto que la muerte s´ubita que puede ser causada por la admi-nistraci´on de endotoxinas se puede disminuir con ´

acido si´alico y sus pol´ımeros.

La presente invenci´on se establece en la rei-vindicaci´on 1. Se puede utilizar preferentemente como pol´ımero del ´acido si´alico, los pol´ımeros compuestos de dos a trece unidades de ´acido si´alico. Se establece un l´ımite superior de un pol´ımero compuesto por trece unidades de ´acido si´alico porque los pol´ımeros compuestos de hasta trece unidades de ´acido si´alico se pueden produ-cir satisfactoriamente. Por lo que se refiere a los pol´ımeros compuestos de dos a trece unidades de ´

acido si´alico y a las sales de dichos pol´ımeros, se pueden esperar efectos fisiol´ogicos similares a los del ´acido si´alico y sus sales. Se pueden uti-lizar diferentes sales farmacol´ogicamente acepta-das como sales de ´acido si´alico y sus pol´ımeros. Como sales de mon´omero de ´acido si´alico, se uti-lizan habitualmente una sal de sodio, una sal de potasio, una sal de calcio y una sal de magnesio. Como sales de los pol´ımeros de unidades de ´acido si´alico, se utilizan habitualmente sales de sodio. El “´acido si´alico” utilizado en la presente solicitud se refiere al ´acido N-acetilneuram´ınico.

Entre las preparaciones farmac´euticas produ-cidas seg´un la presente invenci´on, se pueden enu-merar las preparaciones de administraci´on v´ıa oral, como pastillas, c´apsulas o preparados en polvo, preparaciones de absorci´on percut´anea, como supositorios y supositorios vaginales, e inyecciones, como las inyecciones subcut´aneas, las inyecciones intraperitoneales y las inyecciones in-travenosas. Las preparaciones de administraci´on v´ıa oral son las m´as preferidas para la prevenci´on de enfermedades, mientras que las inyecciones son m´as preferidas en caso de uso de emergencia.

Las preparaciones de administraci´on v´ıa oral, las preparaciones de absorci´on percut´anea, y las inyecciones se pueden formular seg´un procedi-mientos habituales de preparaci´on de medicamen-tos. A continuaci´on se presentan ejemplos de for-mulaci´on de una preparaci´on de administraci´on v´ıa oral y de una inyecci´on.

1)Ejemplo de una preparaci´on inyectable

Despu´es de disolver 50 g de ´acido si´alico o su pol´ımero en 1000 ml de agua destilada (libre de

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pir´ogeno), la soluci´on resultante se ajusta a un pH 7,0 utilizando una soluci´on de hidr´oxido de sodio, y se filtra y se esteriliza seg´un procedimientos ru-tinarios. A continuaci´on, el filtrado esterilizado se carga de manera as´eptica y precintada, en una muestra de 20 ml en forma de inyecci´on.

2)Ejemplo de un preparado de administraci´on v´ıa oral

Una preparaci´on en c´apsulas se produce car-gando 280 mg de ´acido si´alico o su pol´ımero, habiendo pasado por una malla del 60, en una c´apsula de gelatina del n´umero 3.

En el caso de que la preparaci´on se empiece a administrar a una persona infectada, particular-mente cuando ´el o ella aparecen infectados por bacterias gram-negativas, se puede obtener un mayor efecto de la administraci´on de la prepa-raci´on farmac´eutica de la presente invenci´on en comparaci´on con el caso en que la administraci´on se empiece despu´es de la confirmaci´on de cual-quier s´ıntoma de endotoxina en la sangre. A pe-sar de que la dosis administrada depende de la edad, el sexo, la gravedad de la enfermedad, etc. del paciente, la dosis generalmente no se puede definir. No obstante, cuando se calcula como la sal de sodio del ´acido si´alico o sus pol´ımeros con-tenidos en una inyecci´on, se pueden administrar a un adulto, por d´ıa, de 1 a 2000 mg/Kg, pre-feriblemente de 10 a 500 mg/Kg. El n´umero de administraciones es convenientemente de una a seis veces por d´ıa. La instilaci´on venosa es una v´ıa de administraci´on efectiva.

Puesto que el ´acido si´alico es una sustan-cia contenida principalmente en terminales de sac´aridos presentes en las capas superficiales de c´elulas que constituyen el cuerpo humano, y ter-minales de sac´aridos presentes en la sangre y otros fluidos corporales, las preparaciones far-mac´euticas de la presente invenci´on son medica-mentos que causan pocos efectos extremadamente negativos en el cuerpo humano.

El ´acido si´alico y sus pol´ımeros utilizados en la presente invenci´on puede ser cualquiera de los productos qu´ımicos sintetizados, produc-tos de s´ıntesis catalizado enzim´aticamente, ob-tenidos utilizando ´acido si´alico aldolasa, el en-zima de s´ıntesis citosina ´acido monofosfato-N-acetilneuram´ınico (CMP-NANA) o CMP-NANA transferasa, y un producto hidrolizado del ´acido colom´ınico obtenido mediante la descomposici´on de ´acido colom´ınico con un ´acido. Ninguno de ellos es limitativo.

El s´ıntoma de endotoxina en la sangre y dis-funci´on multi-org´anica inducida por el mismo se pueden tratar de manera efectiva m´edicamente con el medicamento terap´eutico seg´un la presente invenci´on.

Breve descripci´on de las figuras

La Figura 1 es una gr´afica que ilustra los efec-tos del ´acido si´alico sobre el shock endot´oxico en ratones del tipo SMA.

La Figura 2 es una gr´afica que ilustra los cam-bios en la relaci´on de la velocidad de filtraci´on glo-merular (Velocidad de filtraci´on glomerular en un determinado momento de tiempo/Velocidad de filtraci´on glomerular antes de la administraci´on de una soluci´on salina fisiol´ogica o ´acido si´alico). La Figura 3 es una gr´afica que ilustra los

cam-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65

bios de la proporci´on del flujo de plasma renal (Flujo de plasma renal en un determinado mo-mento de tiempo/Flujo de plasma renal antes de la administraci´on de una soluci´on salina fi-siol´ogica o ´acido si´alico).

Realizaci´on preferida de la invenci´on

La presente invenci´on se describe a conti-nuaci´on CON m´as detalle por referencia a ejem-plos.

(1)Efecto del ´acido si´alico en la disminuci´on del shock endot´oxico

Se realizaron ensayos con respecto a la sensibi-lidad a endotoxina, se utilizaron ratones machos del tipo SMA (de 20 a 30 g): (1) diecis´eis ratones de control, (2) ocho ratones a los que se admi-nistr´o ´acido si´alico, y (3) seis ratones a los que se administr´o un pol´ımero de ´acido si´alico. (1) Con relaci´on a los ratones de control, se les admi-nistr´o por v´ıa peritoneal 0,1 ml/10 g de soluci´on salina fisiol´ogica 30 minutos antes de la adminis-traci´on de una endotoxina. (2) Con relaci´on a los ratones a los que se administr´o ´acido si´alico, se administr´o al rat´on por v´ıa peritoneal a una ve-locidad de 0,1 ml/10 g de rat´on, una soluci´on en donde se disuelven 100 mg de ´acido si´alico con 10 ml de soluci´on salina fisiol´ogica o una soluci´on de la misma disuelta 10 veces (dosis: 100 mg/Kg, 10 mg/Kg). (3) Con relaci´on a los ratones a los que se administr´o el pol´ımero de ´acido si´alico, se administr´o al rat´on por v´ıa peritoneal a una ve-locidad de 0,1 ml/10 g de una soluci´on en donde se disolvieron 100 mg de un d´ımero o un tr´ımero de ´acido si´alico con 10 ml de soluci´on salina fi-siol´ogica o una soluci´on del mismo disuelta 10 ve-ces (dosis: 100 mg/Kg). Treinta minutos despu´es de la administraci´on, se administr´o al rat´on, por v´ıa peritoneal, a una velocidad de 0,1 ml/10 g de una soluci´on salina fisiol´ogica de endotoxina (10 mg/ml) (dosis: 100 mg/Kg). A continuaci´on, se control´o el n´umero de ratones vivos al cabo de 24 horas. Los resultados del mismo se exponen en la Figura 1.

Como muestra la Figura 1, (1) con relaci´on a los ratones a los que no se les hab´ıa adminis-trado ni ´acido si´alico ni sus pol´ımeros, solamente cinco de los diecis´eis han sobrevivido (proporci´on de supervivencia: 83,3 %). Por otro lado, (2) con relaci´on a los ratones a los que se les hab´ıa admi-nistrado 10 mg/Kg o 100 mg/Kg de ´acido si´alico, sobrevivieron cuatro de los ocho (proporci´on de supervivencia: 50 %) y siete de los ocho (87,5 %) respectivamente, y (3) con relaci´on a los ratones a los que se les hab´ıa administrado 100 mg/Kg de un d´ımero o un tr´ımero de ´acido si´alico, sobre-vivieron cinco de los seis (proporci´on de supervi-vencia: 83,3 %). Se identific´o la significaci´on de proporciones de riesgo de no m´as del 1 % (indi-cado por∗∗ en la Figura 1) y no m´as del 5 % (in-dicado por∗ en la Figura 1) con relaci´on a los ra-tones a los que se administr´o 100 mg/Kg de ´acido si´alico y sus pol´ımeros, respectivamente. Esto sig-nifica que el ´acido si´alico y sus pol´ımeros contro-lan alg´un paso en la provocaci´on de la muerte debida a diferentes actividades fisiol´ogicas indu-cidas por la endotoxina.

Entonces, queda claro que el ´acido si´alico y sus pol´ımeros tienen la funci´on de disminuir el shock endot´oxico. Por consiguiente, suponiendo que el

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´

acido si´alico y sus pol´ımeros tienen un efecto te-rap´eutico sobre la disfunci´on multi-org´anica in-ducida por el s´ıntoma de endotoxina en la sangre, este efecto se examina mediante la adopci´on de un sistema experimental para la insuficiencia re-nal inducida por la endotoxina, como una enfer-medad t´ıpica de la misma.

(2)Efecto sobre la insuficiencia renal

A cada una de diez ratas del tipo Whister (de 8 o 9 semanas de edad) con canulaci´on del ca-nal car´otido se les administr´o por goteo por v´ıa intravenosa a la vejiga una soluci´on de manitol al 4 % que contiene inulina (5 mg/ml) y ´acido paraaminohip´urico (2,5 mg/ml) a una velocidad de 0,1144 ml/min. Treinta minutos despu´es de esto, se administr´o una soluci´on fisiol´ogica salina de ´acido si´alico (5 mg/ml), a una velocidad de 0,2 ml/100 g (dosis: 10 mg/Kg), a cada una de las ratas a las que se hab´ıa administrado ´acido si´alico, mientras que a las ratas de control se les administr´o r´apidamente por v´ıa intravenosa la misma cantidad de soluci´on fisiol´ogica salina. Otros treinta minutos m´as tarde, se les administra por v´ıa intravenosa una soluci´on fisiol´ogica salina de endotoxina (dosis: 0,25 mg/Kg). Posterior-mente, al cabo de 90 minutos, se tom´o una mues-tra de sangre y de orina y se midieron las concen-traciones de inulina y ´acido paraaminohip´urico. El ´ındice de aclaramiento del ri˜n´on se calcul´o seg´un la f´ormula siguiente. Se recogi´o la orina a intervalos de 15 minutos despu´es de la adminis-traci´on del ´acido si´alico o de la soluci´on salina (en la Figura 2, de -15 a 0 minutos, de 0 a 15 minutos, de 15 a 30 minutos, de 30 a 45 minutos y de 45 a 60 minutos), y se tom´o la muestra de sangre a la mitad del intervalo entre dos tomas de muestras de orina. Los valores de aclaramiento se presen-tan para dichos momentos intermedios, para cada una de las respectivas fracciones.

Aclaramiento del ri˜n´on = cantidad de medi-camento recuperada en la orina en el periodo de tiempo de recogida + concentraci´on del medica-mento en el plasma en el punto intermedio.

La concentraci´on de inulina se midi´o mediante el procedimiento de Dishe & Borefreund’s (Z. Dishe and E. Borefreund, J. Biol. Chem., 192, 583-587 (1951)), y la concentraci´on de ´acido pa-raaminohip´urico se midi´o mediante el procedi-miento de Marshall’s (E. K. Marshall, J. Biol. Chem., 122, 263-273 (1937)).

Los resultados de la proporci´on de la veloci-dad de filtraci´on glomerular se muestran en la Fi-gura 2, y los resultados de la proporci´on del flujo de plasma renal se muestran en la Figura 3. En ambas figuras, el eje de ordenadas signfica la pro-porci´on de la velocidad de filtraci´on glomerular o la proporci´on del flujo de plasma renal durante 30 minutos entre la infusi´on intravenosa de dip de inulina y ´acido paraaminohip´urico y la inyecci´on intravenosa de ´acido si´alico o soluci´on salina fi-siol´ogica.

Como muestran las figuras 2 y 3, con relaci´on a las ratas de control a las que no se administr´o

5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 ´

acido si´alico, la proporci´on de la velocidad de fil-traci´on glomerular y la proporci´on ´on de flujo de plasma renal, disminuyen r´apidamente despu´es de la administraci´on de endotoxina, y disminuyeron hasta el 40 % de sus respectivos valores norma-les. Comparando con esto, y con relaci´on a las ratas a las que se administr´o ´acido si´alico, la dis-minuci´on de tanto la proporci´on de la velocidad de filtraci´on glomerular como de la proporci´on de flujo de plasma renal debida a la administraci´on de endotoxina se previno significativamente hasta un nivel de riesgo del 5 % (indicado por ∗ en la Figura 3). Con relaci´on a las ratas a las que se administr´o ´acido si´alico, la proporci´on de la ve-locidad de filtraci´on glomerular y la proporci´on del flujo de plasma renal disminuyeron gradual-mente, sin hacerlo r´apidamente, despu´es de la administraci´on de endotoxina, y disminu´ıa sola-mente en un 30 % y 20 %, respectivasola-mente, 30 minutos despu´es de la administraci´on. Dado que no se observa ninguna influencia de la raz´on de la velocidad de filtraci´on glomerular y la proporci´on del flujo de plasma renal con relaci´on a las ratas a las que solamente se administr´o ´acido si´alico (-30 minutos a 0 minutos en las figuras), el ´acido si´alico no previene completamente, pero previene claramente la insuficiencia renal inducida por la endotoxina.

El ´acido si´alico utilizado en cada uno de los Ejemplos 1 y 2 era ´acido si´alico obtenido me-diante la descomposici´on de ´acido colom´ınico, que tiene origen enEscherichia coli, con un ´acido, y separando y purificando la substancia resultante, obteniendo un ´acido si´alico con una pureza del 98,5 %, se utiliz´o no m´as de un 1 % de an´alogos. Los d´ımeros y los tr´ımeros de ´acido si´alico se se-pararon y purificaron a partir de un l´ıquido de

Escherichia colide ´acido descompuesto que tiene origen en el ´acido colom´ınico de la misma manera que en el caso del ´acido si´alico, y se utiliz´o en forma de sal de sodio. La pureza fue del 99,5 % para la sal de sodio del d´ımero y del 98,3 % para la sal de sodio del tr´ımero.

Test de toxicidad aguda

Se determin´o un LD50 en el caso de adminis-traci´on intravenosa a ratas del tipo Whister (ma-chos), seg´un el cual las sales de sodio tanto del ´

acido si´alico como del tr´ımero (PH7) presentaban valores anormales de 200 g/Kg.

Campo de aplicaci´on industrial

Los medicamentos terap´euticos compuestos de ´

acido si´alico y sus pol´ımeros como ingredien-tes efectivos tienen elevados efectos terap´euticos contra la muerte s´ubita y la insuficiencia multi-org´anica inducida por la endotoxina, as´ı como son de una gran seguridad, y son efectivos para el tratamiento del shock endot´oxico, insuficiencia hep´atica aguda, insuficiencia respiratoria aguda, DIC, etc. Adem´as, los medicamentos terap´euticos seg´un la presente invenci´on pueden presentar ele-vados efectos terap´euticos sin inducir la aparici´on de bacterias resistentes a medicamentos en el caso de la utilizaci´on de antibi´oticos.

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REIVINDICACIONES

1. Procedimiento de preparaci´on de una com-posici´on de un medicamento terap´eutico para el tratamiento del s´ıntoma de endotoxina en la san-gre y la insuficiencia multi-org´anica inducida por la endotoxina, que comprende la etapa de in-corporar, en la composici´on, un componente ac-tivo seleccionado entre ´acido si´alico, pol´ımeros de ´

acido si´alico y sales de ´acido si´alico y pol´ımeros de las mismas. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65

2. Procedimiento seg´un la reivindicaci´on 1, en donde dicho componente activo es una sal de ´

acido si´alico seleccionada entre una sal de sodio, una sal de potasio, una sal de calcio y una sal de magnesio.

3. Procedimiento seg´un la reivindicaci´on 1, en donde dicho componente activo es un pol´ımero de ´

acido si´alico o una sal del mismo.

4. Procedimiento seg´un la reivindicaci´on 3, en donde dicho componente activo es una sal de sodio de un pol´ımero de ´acido si´alico.

NOTA INFORMATIVA: Conforme a la reserva del art. 167.2 del Convenio de Patentes Euro-peas (CPE) y a la Disposici´on Transitoria del RD 2424/1986, de 10 de octubre, relativo a la aplicaci´on del Convenio de Patente Europea, las patentes euro-peas que designen a Espa˜na y solicitadas antes del 7-10-1992, no producir´an ning´un efecto en Espa˜na en la medida en que confieran protecci´on a produc-tos qu´ımicos y farmac´euticos como tales.

Esta informaci´on no prejuzga que la patente est´e o no inclu´ıda en la mencionada reserva.

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