AISLAMIENTO Y RECUENTO DE
AISLAMIENTO Y RECUENTO DE
BACTERIAS ANAEROBIAS
BACTERIAS ANAEROBIAS
Instituto Politécnico Nacional Instituto Politécnico Nacional
Escuela Nacional de Ciencias Biológicas Escuela Nacional de Ciencias Biológicas
Químico Farmacéutico Industrial Químico Farmacéutico Industrial Departamento de Microbiología Departamento de Microbiología Laboratorio de Microbiología General Laboratorio de Microbiología General
INTEGRANTES INTEGRANTES
Aranda González Iván.Aranda González Iván. Robles Herrera Robles Herrera RRubén.ubén. Equipo 4Equipo 4 Lab 3Lab 3 Grupo: 6FV01Grupo: 6FV01 PROFESORES PROFESORES .. .. ..
Bacterias anaerobias
Bacterias anaerobias
O
Obblliiggaaddoos s o o eessttrriiccttooss AAeerroottoolleerraanntteess
No son capaces de usar
No son capaces de usar
oxigeno
oxigeno
Obtienen energía por
Obtienen energía por
procesos anaeróbicos
Son organismos que carecen de sistemas respiratorios completos
No pueden producir energía mediante la respiración aerobia
Utilizan vías de fermentación Respiración anaerobia
Mueren en presencia de Oxigeno
Son incapaces de eliminar los productos tóxicos derivados del metabolismo del oxígeno • Singlete de oxigeno • Superóxido • Peróxido de hidrogeno • Hidroxilo
Ejemplo
:
Clostridium botulinum
Pueden crecer en presencia de Oxigeno
Sin que este participe en su metabolismo
Utilizan vías fermentativas o respiración
anaerobia para la producción de energía.
Han desarrollado mecanismos protectores
Enzimas
• Catalasa • Peróxidasa • Superóxido dismutasaEjemplo
:
Streptococcus pyogenesTécnicas y medios de cultivo para su aislamiento
Potenciales reducidos de Eh <-0.2 V
Adicionando sustancias reductoras (-SH) Fácilmente ceden su H a otros compuestos orgánicos.
Sustituyendo el O2por otro gas
Nitrógeno, bióxido de carbono,
hidrogeno. Utilizando un sistema generador
de anaerobiosis.
Cámaras de bioseguridad III.
Para ello existen distintos métodos para llevarlo acabo:
Métodos físicos Tubos con tapones de rosca: sello hermético. Uso de aceite mineral, nujol, y vaselina para evitar el paso de O2 (poco soluble en estos).
Calentamiento del medio previo a su inoculación. Llevar
el medio a condiciones extremas de temperatura, permitiendo la activación de
las esporas que pudiesen existir en el microorganismo. Eliminar el Oxigeno disuelto.
El desplazamiento del oxígeno de la atmósfera de incubación o
de los medios líquidos por sustitución con otros gases (H2, N2 o CO2) utilizando campanas
anaeróbicas.
Llenado de los tubos con medio hasta las ¾ partes de su volumen.
Fondo concentración de oxigeno muy baja .
Métodos Químicos Tioglicolato de sodio HS O O Se combina químicamente con el oxigeno disuelto disminuyéndolo del medio de cultivo. Medios reductores Cisteina H 2 N C H C C H 2 O H O S H Su grupo sulfhidrilo fácilmente cede sus hidrogeno a otros
compuestos orgánicos.
En medio sólido, se emplean jarras de anaerobiosis con sistema Gas Pak.
Contienen NaHCO3 y NaBH4.
Se añade agua al sobre, y se libera H2 y CO2.
NaBH4 + 4H2 H2O+ Na2B4O7
Técnica de diluciones en tubo: Número
Más Probable
Es una técnica estadística eficiente de estimación de densidades poblacionales
Útil cuando los microorganismos que se desea contar no son capaces de
crecer en medios sólidos.
También cuando el crecimiento de las bacterias en un medio líquido y
OBJETIVOS:
•
Conocer algunas técnicas y medios de cultivo para el
aislamiento, recuento y cultivo de bacterias anaerobias
.
•
Observar el efecto de los diferentes potenciales de
oxido reducción de los medios de cultivo sobre el
crecimiento de microorganismos aerobios, anaerobios
estrictos y anaerobios estrictos.
•
Estimar la población de microrganismos anaerobios
Metodología
Adicionar 1 g de muestra a un tubo que
contiene 9 mL agua destilada
Homogeneizar y dejar sedimentar
Tomar asada del
sobrenadante y sembrar por estría cruzada en placas agar
TSN y tioglicolato Homogenizar y calentar en baño de agua en ebullición 5minutos dejar enfriar y sedimentar
Colocar placas en jarra de anaerobiosis
Colocar gota de
Clostridium sp.En gelosa sangre y TSN
por estría cruzada
Colocar una placa gelosa sangre y TSN en
jarra de anaerobiosis
Colocar en el fondo de la jarra un agente desecante, en la pared de oxido reducción y un
catalizador Agregar 10 mL de agua al sobre de GasPak y cerrar inmediatamente Incubar a 37℃ durante 48 h Realizar tinción de Gram
Hacer serie de diluciones hasta 10−3
Sembrar por triplicado 1mL de cada dilución en tubos
de 10mL leche-fierro con sello de aceite mineral
Incubar a 47℃durante
48 h
Comparación del crecimiento en medio
líquidos de diferente potencial de oxido
reducción
Inocular con pipeta Pasteur el
fondo de los tubos de caldo Incubar a 47℃ durante 48 h
Observar el crecimiento y su localización en los medios de
Característica Colonia 1 Colonia 2 Colstridium sp. Medio de cultivo Agar tioglicolato Agar
tioglicolato Gelosa Sangre
Forma Circular Circular Amiboide
Tamaño 0.5 mm 0.5 mm 0.6 mm
Color Blanco Blanco Grisasea
Borde Entero Entero
Ondulada (cabeza de
medusa)
Superficie Lisa Lisa Lisa
Elevación Convexa Convexa Plana
Luz
transmitida Traslucida Traslucida Opaca
Luz reflejada Brillante Brillante Mate
Aspecto Húmedo Húmedo Seco
Consistencia Suave butiroso Suave butiroso Suave butirosa Acción sobre
el medio - - β hemolisis
Resultados: (2-3)
Característica Colonia 1 Colonia 2 Clostridium sp.
Forma Cocobacilo Coco Bacilo
Agrupación tétradas NO NO
Tinción gram G- G+ G+
Endoesporas NO NO SI
Bacillus subtilis Escherichia coli Clostridium sp. Resultados: (5)
Cuestionario
o
Mencione cinco ambientes naturales a partir de los cuales se pueden aislar
microorganismo anaerobios estrictos (no incluir suelo ni materia fecal)
Aguas residuales , pantanos, superficie de la piel, superficies mucocutaneas,
estomago de ganado
o
Explique con formulas las reacciones químicas que ocurren en el sobre de
GasPak® y de Anaerogen dentro de la jarra de anaerobiosis ,como se
obtiene la atmosfera anaerobia y como funciona el indicador
NaBH4 + 2 H2O NaBO2 + 4 H2↑
C3H5O(COOH)3 + 2 NaHCO3+ [CoCl2] C3H5O(COONa)3 + 3 CO2 + 3 H2 + [CoCl2] 2 H2 + O2 + [Pd Catalizador] 2 H2O + [Pd Catalizador]
Indicador REDOX
o
¿Por qué un microorganismo facultativo puede crecer en ambientes
oxidantes o reductores?
Por que pueden desarrollar un metabolismo respiratorio aerobio
usando el oxigeno presente o tipo fermentativo en ausencia de este
o