PRACTICA N°7 PRACTICA N°7
CONTROL MICROBIOLOGICO EN ENLATADOS
CONTROL MICROBIOLOGICO EN ENLATADOS
I.
I. FUNADAMENTO FUNADAMENTO TEORICOTEORICO
En general, los microorganismos se asocian con grupos particulares de alimentos. En general, los microorganismos se asocian con grupos particulares de alimentos. Éstos pueden sobrevivir al tratamiento térmico requerido para el enlatado o bien Éstos pueden sobrevivir al tratamiento térmico requerido para el enlatado o bien contaminar el alimento después de dicho tratamiento debido a suturas o fugas del contaminar el alimento después de dicho tratamiento debido a suturas o fugas del envase.
envase. Cu
Cuanando do la la cocontntamamininaciación ón es es ananteteririor or al al trtratatamamieientnto, o, es es poposisiblble e prprededececir ir elel microorganismo responsable si se conocen bien la naturaleza del alimento y las microorganismo responsable si se conocen bien la naturaleza del alimento y las co
condndicicioionenes s a a lalas s quque e se se ha ha sosomemetitido do didichcho o alalimimenentoto. . SiSin n emembabargrgo, o, loloss microorganismos que se introducen por fugas pueden ser muy variados al igual microorganismos que se introducen por fugas pueden ser muy variados al igual que la composición de los medios de enfriamiento.
Tabla. Clasificación de los alimentos según su acidez (Cameron y Esty, 1940) Tabla. Clasificación de los alimentos según su acidez (Cameron y Esty, 1940) y
y grgrupupos os de de mimicrcroooorgrgananisismomos s cacaususanantes tes de de alalteteraracicionones es en en alalimimenentotoss enlatados. enlatados. Grupos Grupos según según grado de grado de acidez acidez Rango Rango de pH de pH Grupos de Grupos de alimento
alimento MicroorganismosMicroorganismos
Gr Grupupo o 1:1: poco poco ácidos ácidos > > 55 Productos Productos cárnicos cárnicos Productos Productos marinos marinos Leche Leche Hortalizas Hortalizas Aerobios Aerobios esporulados esporulados Anaerobios Anaerobios esporulados esporulados Levaduras, mohos y Levaduras, mohos y bbaacctteerriiaas s nnoo esporuladas esporuladas Gr Grupupo o 2:2: semiácid semiácid os os 4,5 4,5 << pH pH << 5,0 5,0 Mezclas de Mezclas de ccaarrnne e yy vegetales vegetales Sopas Sopas Salsas Salsas Gr Grupupo o 3:3: ácidos ácidos 3,7 3,7 << pH pH << 4,5 4,5 Tomates Tomates Peras Peras Higos Higos Piña Piña Otras frutas Otras frutas Bacterias Bacterias esporuladas esporuladas B Baacctteerriiaas s nnoo esporuladas esporuladas Levaduras Levaduras Mohos Mohos Gr Grupupo o 4:4: muy muy ácidos ácidos PH PH << 3,7 3,7 Encurtidos Encurtidos Pomelo Pomelo Zumos Zumos cítricos cítricos
Según los requerimientos de calor los microorganismos pueden ser, de menor a Según los requerimientos de calor los microorganismos pueden ser, de menor a mayor exigencia: psicrófilos, mesófilos, termófilos y termodúricos, siendo los dos mayor exigencia: psicrófilos, mesófilos, termófilos y termodúricos, siendo los dos últimos los que más interesan desde el punto de vista del tratamiento térmico. Los últimos los que más interesan desde el punto de vista del tratamiento térmico. Los
termófilos son capaces de desarrollarse a elevadas temperaturas (55 ºC y más), termófilos son capaces de desarrollarse a elevadas temperaturas (55 ºC y más), mientras que los termodúricos son capaces de resistir el efecto de las altas mientras que los termodúricos son capaces de resistir el efecto de las altas temper
temperaturas. Sin aturas. Sin embargoembargo, , los los organiorganismos mesofílicosmos mesofílicos s pueden ser pueden ser termodtermodúricosúricos debido a sus esporas, al igual que pueden serlo las esporas de las bacterias debido a sus esporas, al igual que pueden serlo las esporas de las bacterias termofílicas (Desrosier, 1987). A su vez, Cameron y Esty (1926) clasifican a los termofílicas (Desrosier, 1987). A su vez, Cameron y Esty (1926) clasifican a los organsmos termófilos en dos grupos: termófilos obligados (crecen a 55 ºC, pero no organsmos termófilos en dos grupos: termófilos obligados (crecen a 55 ºC, pero no a 37 ºC) y termófilos facultativos (crecen a 55 ºC y a 37 ºC).
a 37 ºC) y termófilos facultativos (crecen a 55 ºC y a 37 ºC).
Según las necesidades de oxígeno los microorganismos pueden ser: aerobios Según las necesidades de oxígeno los microorganismos pueden ser: aerobios (requieren la presencia de oxígeno), anerobios (sólo se desarrollan en ausencia de (requieren la presencia de oxígeno), anerobios (sólo se desarrollan en ausencia de oxígeno o con baja tensión de oxígeno) y anaerobios facultativos.
oxígeno o con baja tensión de oxígeno) y anaerobios facultativos. 2. MICROORGANISMOS EN ALIMENTOS DE ACIDEZ BAJA Y
2. MICROORGANISMOS EN ALIMENTOS DE ACIDEZ BAJA Y MEDIAMEDIA 2.1. AEROBIOS ESPORULADOS
2.1. AEROBIOS ESPORULADOS Los más difundidos son los del género
Los más difundidos son los del género BacillusBacillus, que tiene su origen en el suelo y, que tiene su origen en el suelo y
agua, por lo
agua, por lo que casi siempre están presentes en que casi siempre están presentes en las materias primalas materias primas s empleempleadasadas en conservas.
en conservas.
Su temperatura óptima de crecimiento oscila entre los 28 y 40 ºC para la mayoría, Su temperatura óptima de crecimiento oscila entre los 28 y 40 ºC para la mayoría, aunque existen algunos termófilos, que pueden desarrollarse a 55 ºC e incluso 70 aunque existen algunos termófilos, que pueden desarrollarse a 55 ºC e incluso 70 ºC.
ºC. Ent
Entre re estestos os podpodemos emos encencontontrar, rar, tantanto to aeroaerobiobios s oblobligaigados, dos, comcomo o anaanaeroberobiosios facultativos, estos últimos capaces de crecer en condiciones de vacío.
facultativos, estos últimos capaces de crecer en condiciones de vacío.
Los tipos de alteraciones que pueden tener lugar son: la fermentación simple, la Los tipos de alteraciones que pueden tener lugar son: la fermentación simple, la producción de gas y la de ácido y gas.
producción de gas y la de ácido y gas.
La fermentación simple es la más común y se debe al ataque de los carbohidratos La fermentación simple es la más común y se debe al ataque de los carbohidratos con producción de ácido y sin producción de gas.
con producción de ácido y sin producción de gas. B. B. stearotstearothermophhermophilusilus yy B.B. coagulans
coagulans son los principales termófilos causantes de la fermentación simple. Elson los principales termófilos causantes de la fermentación simple. El
primero
primero, en , en productproductos de os de baja acidez (guisantes, hortalbaja acidez (guisantes, hortalizas..izas...;no crece con .;no crece con un pHun pH menor de 5), sometidos a un tratamiento térmico relativamente intenso, aunque no menor de 5), sometidos a un tratamiento térmico relativamente intenso, aunque no
se produce la alteración cuando el enfriamiento es rápido y si se realiza el se produce la alteración cuando el enfriamiento es rápido y si se realiza el almace
almacenamiennamiento to en en frío.frío. B. B. coagulcoagulansans es acidúrico (pH de hasta 4,2) y presentaes acidúrico (pH de hasta 4,2) y presenta
esporas menos resistentes al calor, por lo que las alteraciones tienen lugar en las esporas menos resistentes al calor, por lo que las alteraciones tienen lugar en las carnes enlatadas, ya que el tratamiento térmico para éstas es más bajo que en las carnes enlatadas, ya que el tratamiento térmico para éstas es más bajo que en las hortalizas. También aparece asociado a productos ácidos (jugo de tomate), ya que hortalizas. También aparece asociado a productos ácidos (jugo de tomate), ya que por su bajo pH el tratamiento térmico es ligero.
por su bajo pH el tratamiento térmico es ligero.
La producción de gas por aerobios esporulados se debe a la denitrificación del La producción de gas por aerobios esporulados se debe a la denitrificación del ni
nitrtratato o en en cacarnernes s cucuradradas as enlenlatatadadas, as, mamaiziz, , guguisaisantnteses, , etetc.c. B. B. cecereureuss yy B.B. mesentericus
mesentericus aparecen en salmón, cangrejos y gambas.aparecen en salmón, cangrejos y gambas. B. macerans y B. polymixa
B. macerans y B. polymixa forman ácido y gas.forman ácido y gas.
2.2. ANAEROBIOS ESPORULADOS 2.2. ANAEROBIOS ESPORULADOS
Los anaerobios esporulados proceden principalmente del suelo, por lo que se Los anaerobios esporulados proceden principalmente del suelo, por lo que se encuentran ampliamente distribuidos en la leche, hortalizas y otros productos encuentran ampliamente distribuidos en la leche, hortalizas y otros productos al
alimimenentiticiciosos. . TaTambmbiéién n es es poposisiblble e enenconcontrtrararlolos s en en la la cacarnrne, e, ya ya quque e alalgugunanass especies también se desarrollan en los intestinos del hombre y animales.
especies también se desarrollan en los intestinos del hombre y animales. El
El gégénenero ro mámás s imimporportatantnte e es es elel ClostridiumClostridium, , pudpudiendiendo o encencontontrar rar orgorganisanismosmos
termófilos
termófilos yy mesófilosmesófilos. . EntEntre re lolos s priprimemeroros, s, loloss sacarolíticossacarolíticos soson n lolos s mámáss importantes, produciendo gran cantidad de gas a partir de los carbohidratos, importantes, produciendo gran cantidad de gas a partir de los carbohidratos, principalmente dióxido de carbono e hidrógeno, lo que da lugar al abombamiento principalmente dióxido de carbono e hidrógeno, lo que da lugar al abombamiento de las latas. Estas alteraciones van acompañadas de un olor butírico. No producen de las latas. Estas alteraciones van acompañadas de un olor butírico. No producen ácido sulfhídrico. La temperatura óptima de desarrollo se sitúa alrededor de los 55 ácido sulfhídrico. La temperatura óptima de desarrollo se sitúa alrededor de los 55 ºC
ºC, , apaaparerecieciendndo o sosobre bre totodo do en en papaísíses es cálcálididos, os, dodonde nde lalas s tetempmperaeratuturaras s dede almacenaje pueden sobrepasar los 35 ºC. También los termófilos pueden ser almacenaje pueden sobrepasar los 35 ºC. También los termófilos pueden ser causantes de una
causantes de una alteración sulfurosaalteración sulfurosa, en este caso con producción de ácido, en este caso con producción de ácido sulfhídrico.
Los
Los organisorganismosmos mesófilosmesófilos son los segundos en importancia después de losson los segundos en importancia después de los ca
caususanantetes s de de la la fefermrmenentatacición ón sisimpmplele. . EnEntrtre e esestotos s dedeststacacaa ClostridiumClostridium botulinum
botulinum. Se trata de una bacteria Gram positiva, anaerobia y esporógena, cuyo. Se trata de una bacteria Gram positiva, anaerobia y esporógena, cuyo
crecimiento queda inhibido a pH menor de 4,5. Sin embargo, los organismos crecimiento queda inhibido a pH menor de 4,5. Sin embargo, los organismos aeróbios de un alimento pueden crecer y usar el oxígeno en un recipiente, creando aeróbios de un alimento pueden crecer y usar el oxígeno en un recipiente, creando condiciones anaerobias adecuadas para su desarrollo y en un producto ácido condiciones anaerobias adecuadas para su desarrollo y en un producto ácido puede crecer
puede crecer C. botulinum,C. botulinum, si está presente, cuando el ácido haya sido utilizadosi está presente, cuando el ácido haya sido utilizado
po
por r ototroros s ororgaganinismsmosos, , auaummenenttanando do el el pHpH. . Es Es el el mámás s reressisistetentnte e de de llosos microorganismos que intoxican los alimentos, por lo que la industria de enlatado microorganismos que intoxican los alimentos, por lo que la industria de enlatado admite de forma general que todos los productos no ácidos tratados deben cumplir admite de forma general que todos los productos no ácidos tratados deben cumplir los requerimient
los requerimientos os básicobásicos s necesarnecesarios para ios para destruidestruir r aa C. botulinumC. botulinum (esterilización(esterilización
durante 2,8 minutos a 121,1 ºC). En los alimentos correctamente procesados no durante 2,8 minutos a 121,1 ºC). En los alimentos correctamente procesados no se produce el desarrollo de esta bacteria, aunque existen alimentos con porciones se produce el desarrollo de esta bacteria, aunque existen alimentos con porciones sólidas en los que puede haber heterogeneidad de PH durante cierto tiempo, por sólidas en los que puede haber heterogeneidad de PH durante cierto tiempo, por lo que debe mantenerse un pH inferior a 4,5 como margen de seguridad. Este lo que debe mantenerse un pH inferior a 4,5 como margen de seguridad. Este microorganismo merece especial mención debido a su significancia para la salud microorganismo merece especial mención debido a su significancia para la salud humana. Se presenta tanto en forma vegetativa como de esporas, siendo estas humana. Se presenta tanto en forma vegetativa como de esporas, siendo estas últimas la forma importante desde el punto de vista del enlatado de alimentos. La últimas la forma importante desde el punto de vista del enlatado de alimentos. La forma vegetativa se destruye fácilmente a temperaturas menores de 100 ºC, forma vegetativa se destruye fácilmente a temperaturas menores de 100 ºC, mientras que las esporas, que proceden del polvo y del suelo, pueden sobrevivir mientras que las esporas, que proceden del polvo y del suelo, pueden sobrevivir 300 minutos de ebullición a 100 ºC. Éstas varían su resistencia al calor, siendo 300 minutos de ebullición a 100 ºC. Éstas varían su resistencia al calor, siendo difícil obtener una suspensión de esporas de resistencia uniforme al calor para su difícil obtener una suspensión de esporas de resistencia uniforme al calor para su estudio. Tiene poderes proteolíticos y sacarolíticos. La
estudio. Tiene poderes proteolíticos y sacarolíticos. La toxina botulinatoxina botulina es solublees soluble en agua y
en agua y extremextremadamentadamente letal para e letal para el hombre (tipos A el hombre (tipos A y B). y B). Las esporas debenLas esporas deben germin
germinar para ar para produciproducir una r una célula vegetacélula vegetativa que produce la tiva que produce la toxintoxina, por a, por lo que lo que eses poco probable encontrar presente el organismo con su toxina, de forma que el poco probable encontrar presente el organismo con su toxina, de forma que el alimento puede ser ingerido por ausencia de indicios de contaminación (sabor u alimento puede ser ingerido por ausencia de indicios de contaminación (sabor u olor extraños). Dicha toxina es destruida por exposición durante diez minutos a olor extraños). Dicha toxina es destruida por exposición durante diez minutos a calor húmedo a 100 ºC. La determinación del tipo de toxina se lleva a cabo calor húmedo a 100 ºC. La determinación del tipo de toxina se lleva a cabo mediante reacciones antigénicas.
La temperatura óptima de crecimiento de los organismos mesófilos oscila entre los La temperatura óptima de crecimiento de los organismos mesófilos oscila entre los 20 y 50 ºC (algunos menos y otros más, aunque generalmente es de 37 ºC). 20 y 50 ºC (algunos menos y otros más, aunque generalmente es de 37 ºC). Según su capacidad para atacar a los hidratos de carbono pueden ser de dos Según su capacidad para atacar a los hidratos de carbono pueden ser de dos tipos:
tipos: proteolíticosproteolíticos o putrefactivos yo putrefactivos y sacarolíticossacarolíticos. Los primeros son causantes. Los primeros son causantes de
de alalteteraracicionones es gagaseseososas as cocon n dedegrgradadacacióión n dedel l alalimimenento to y y prprododucuccición ón dede compuestos de olor desagradable. Éstos son más importantes en los alimentos de compuestos de olor desagradable. Éstos son más importantes en los alimentos de acidez baja y media, excepto en el jamón york enlatado, en el cual se producen acidez baja y media, excepto en el jamón york enlatado, en el cual se producen alt
alteraceracioniones es de de tiptipo o sacasacarolrolítiítico co causcausadas adas por por C. perC. perfrifringengensns. . DesDestatacacann C.C. hystolyticum, C. sporogenes
hystolyticum, C. sporogenes yy C. bifermentans.C. bifermentans. Entre los de tipoEntre los de tipo sacarolíticosacarolítico loslos
más frecuentes son
más frecuentes son C. butyricum, C. pasteurianum, C. perfringensC. butyricum, C. pasteurianum, C. perfringens y otros.y otros.
2.3. LEVADURAS, MOHOS Y BACTERIAS NO ESPORULADAS 2.3. LEVADURAS, MOHOS Y BACTERIAS NO ESPORULADAS
Los únicos importantes en los alimentos de acidez baja y media son aquéllos con Los únicos importantes en los alimentos de acidez baja y media son aquéllos con resistencia térmica relativamente baja, los que producen alteraciones por fugas en resistencia térmica relativamente baja, los que producen alteraciones por fugas en la lata y a
la lata y aquéllos que producen alteraciones quéllos que producen alteraciones en la leche condensada y en la leche condensada y las carneslas carnes curadas enlatadas (jamón, bacon, etc.).
curadas enlatadas (jamón, bacon, etc.). Entre las
Entre las levaduraslevaduras destacan las fermentadoras de la sacarosa que se desarrollandestacan las fermentadoras de la sacarosa que se desarrollan en la leche condensada, ya que este alimento no es sometido a ningún tratamiento en la leche condensada, ya que este alimento no es sometido a ningún tratamiento térmico, sino que la base de su conservación radica en su elevado contenido en térmico, sino que la base de su conservación radica en su elevado contenido en azúcar.
azúcar. Torula globosaTorula globosa, de células redondeadas, ocasiona la distensión de las, de células redondeadas, ocasiona la distensión de las
ta
tapapas s de de lalas s lalatatas.s. Torula Torula lactilactiscondenscondensissis, de , de cécélululalas s ovovalaleses, , prprododucuce e ununaa
fermentación muco más vigorosa, por lo que las latas pueden reventar en pocos fermentación muco más vigorosa, por lo que las latas pueden reventar en pocos días.
días.
Aspergillus repens
Aspergillus repens es un moho que da lugar a la formación de botones en laes un moho que da lugar a la formación de botones en la
superficie de la leche condensada. superficie de la leche condensada.
Dentro de las bacterias no esporuladas destacan: Dentro de las bacterias no esporuladas destacan:
- Pseudomonas fluorescens
-- Streptococcus liquefaciensStreptococcus liquefaciens, que provoca la licuefación de la gelatina del jamón, que provoca la licuefación de la gelatina del jamón
enlatado. enlatado.
-- S. faecicumS. faecicum yy S. faecalisS. faecalis, son estreptococos fecales que producen olores y, son estreptococos fecales que producen olores y
sabores anormal
sabores anormales en es en jamones enlatjamones enlatados. El primero es ados. El primero es de mayor de mayor interinterés debidoés debido a su mayor termorresistencia.
a su mayor termorresistencia. -
- LLaass EnterobacteriaceaeEnterobacteriaceae (coliformes,(coliformes, Aerobacter Aerobacter ,, ProteusProteus spsp.., , etetc.c.) ) ssonon
responsables del abombamiento del jamón enlatado. responsables del abombamiento del jamón enlatado.
3. MICROORGANISMOS EN PRODUCTOS ÁCIDOS 3. MICROORGANISMOS EN PRODUCTOS ÁCIDOS
En la mayoría de los casos se controlan fácilmente con un tratamiento térmico En la mayoría de los casos se controlan fácilmente con un tratamiento térmico relativamente corto a una temperatura inferior a los 100 ºC.
relativamente corto a una temperatura inferior a los 100 ºC. 3.1. BACTERIAS ESPORULADAS
3.1. BACTERIAS ESPORULADAS Podemos encontrar
Podemos encontrar bacterbacteriasias anaerobias sacarolíticasanaerobias sacarolíticas y otras responsables dey otras responsables de la
la ferfermenmentacitación ón simsimpleple. . DDeentntro ro dde e llaas s pprriimmeeraras s dedessttaaccaann ClostridiumClostridium pasteurianum
pasteurianum, que , que producproduce e la alteracióla alteración gaseosa de n gaseosa de frutas y tomates enlatados yfrutas y tomates enlatados y
que no se desarrolla a pH inferior a 3,7, y
que no se desarrolla a pH inferior a 3,7, y C. butyricumC. butyricum, que afecta también a las, que afecta también a las
frutas enlatadas. frutas enlatadas.
Bacill
Bacillus us coagulcoagulansans es responsable de laes responsable de la fermentación simplefermentación simple en el jugo deen el jugo de
tom
tomate ate enlenlataatado, do, ocasocasionionando ando ademademás ás sabsabores ores anoanormarmalesles. . Es Es tertermófmófilo ilo y y sese desarrolla aun pH de 4,2.
desarrolla aun pH de 4,2.
B. macerans
B. macerans, produce, produce alteraalteraciones ciones gaseosgaseosasas en frutas enlatadas y unto aen frutas enlatadas y unto a B.B. polymixa
polymixa, en hortalizas y frutas enlatadas., en hortalizas y frutas enlatadas.
3.2. BACTERIAS NO ESPORULADAS 3.2. BACTERIAS NO ESPORULADAS
Son bacterias Gram positivas productoras de ácido láctico (cocos y bacilos) y Son bacterias Gram positivas productoras de ácido láctico (cocos y bacilos) y algunas son productoras de gas. Pueden desarrollarse con escasa tensión de algunas son productoras de gas. Pueden desarrollarse con escasa tensión de oxígeno y son responsables de fermentaciones de vegetales. Se destruyen con oxígeno y son responsables de fermentaciones de vegetales. Se destruyen con tratamiento térmico a menos de 100 ºC.
Lactoba
Lactobacillucillus s brevisbrevis causa una vigorosa fermentación en Ketchup y productoscausa una vigorosa fermentación en Ketchup y productos
similares y es formador de gas. similares y es formador de gas.
Leuconostoc pleofructi
Leuconostoc pleofructi produce la alteración de los jugos de fruta, dando lugar a laproduce la alteración de los jugos de fruta, dando lugar a la
formación de una película de limo en las soluciones de azúcar (alteración de formación de una película de limo en las soluciones de azúcar (alteración de productos de tomate).
productos de tomate).
Leuconostoc mesenteroides
Leuconostoc mesenteroides da lugar a la alteración gaseosa de la piña enlatada.da lugar a la alteración gaseosa de la piña enlatada.
3.3. LEVADURAS 3.3. LEVADURAS
Presenta escasa resistencia al calor, por lo que no son frecuentes en enlatados Presenta escasa resistencia al calor, por lo que no son frecuentes en enlatados sometidos a tratamiento térmico y sí cuando el tratamiento es subtérmico o sometidos a tratamiento térmico y sí cuando el tratamiento es subtérmico o cuando se producen fugas.
cuando se producen fugas.
Son responsables de la fermentación de salsas ácidas, gelatinas y productos Son responsables de la fermentación de salsas ácidas, gelatinas y productos similares cuya conservación depende de los ácidos, el azúcar y la sal.
similares cuya conservación depende de los ácidos, el azúcar y la sal. 3.4. MOHOS
3.4. MOHOS
Byssoch
Byssochlamys lamys fulvafulva es es la la esespepecicie e de de momohohos s de de mamayoyor r imimpoportrtanancicia a en en loloss
al
alimimenentotos s enenlalatatados dos ácácididosos. . AfAfececta ta a a frfrututas as enenlalatatadas das y y emembotbotelellaladadas. s. EsEs responsable de la desintegración de la fruta por descomposición del material responsable de la desintegración de la fruta por descomposición del material pectínico. Las latas a veces se abomban debido al desprendimiento de dióxido de pectínico. Las latas a veces se abomban debido al desprendimiento de dióxido de carbono. Su temperatura óptima de crecimiento es de 30-37 ºC y resulta altamente carbono. Su temperatura óptima de crecimiento es de 30-37 ºC y resulta altamente resistente al calor.
resistente al calor.
Byssoch
Byssochlamys lamys niveanivea es semejante al anterior y es mucho más frecuente en laes semejante al anterior y es mucho más frecuente en la
alteración de fresas enlatadas. alteración de fresas enlatadas.
Penicillium
Penicillium afecta a las grosellas enlatadas y es altamente termorresistente.afecta a las grosellas enlatadas y es altamente termorresistente. Aspergillus
Aspergillus también es termorresistente y se presenta en las fresas enlatadas.también es termorresistente y se presenta en las fresas enlatadas. Rhizop
Rhizopus us nigricanigricansns es responsable de la degradación de las frutas enlatadas yes responsable de la degradación de las frutas enlatadas y
especialmente del albaricoque. especialmente del albaricoque.
Rhizopus stolonifer
Rhizopus stolonifer ocasiona el ablandamiento de los albaricoques enlatados.ocasiona el ablandamiento de los albaricoques enlatados.
II. OBJETIVOS II. OBJETIVOS
Determinar en muestras analizadas de conservas en lata: Determinar en muestras analizadas de conservas en lata:
•
•Recuento de colonias Anaerobias Termofilas (31Recuento de colonias Anaerobias Termofilas (31 ±±1°C).1°C). •
•investigación y Recuento de Enterobacterias.investigación y Recuento de Enterobacterias. •
•Investigación y Recuento deInvestigación y Recuento de Eicrococcus y Leuconostoc Eicrococcus y Leuconostoc
•
•Investigación deInvestigación de BacillusBacillus
•
•Investigación deInvestigación de ClostridiumClostridium..
•
• Recuento de Mohos y Levaduras,Recuento de Mohos y Levaduras,
III. MATERIALES Y METODOS III. MATERIALES Y METODOS
Placas pPlacas petri etri estériles estériles (100*15 mm)(100*15 mm)
Pipetas graduadas de 100ml.Pipetas graduadas de 100ml.
Embudo Embudo de de vidrio.vidrio.
Incubadoras reguladoras Incubadoras reguladoras de 35° de 35° y a y a 55°.55°.
Cuarto Cuarto estériestéril o l o cubíccubículo de ulo de siembsiembra estéril o ra estéril o cabina de cabina de flujoflujo
laminar. laminar. Microscopio.Microscopio. Potenciómetro.Potenciómetro.
Placas con agar CASOY.Placas con agar CASOY.
Placas Placas con con agar para agar para aerobios seg. aerobios seg. BREWER.BREWER.
Medios Medios para para alimentos alimentos de de PH PH < < 4.6 4.6 ( ( baja baja acidez acidez ).).
Tubos de Tubos de 200 *25 200 *25 mm conteniendo 50 mm conteniendo 50 ml ml de de caldo- cerebro caldo- cerebro ––
corazón
Tubos de Tubos de 200 *25 200 *25 mm conteniendo 50 mm conteniendo 50 ml ml de de caldo- cerebro caldo- cerebro ––
cor
corazóazón n cocon n 0.0.1% 1% de de alalmimidódón n solsolubluble e y y 0.0.0505% % ciciststeieinana ( anaerobios ).
( anaerobios ).
Medios alternativos:Medios alternativos:
Tubos de Tubos de 200*25 m200*25 mm con m con 50 50 ml de meml de medio dio de de culticultivo PE-vo
PE-2( para aerobio y anaerobios ). 2( para aerobio y anaerobios ).
Medio parMedio para alimentos a alimentos < < 4.6 4.6 (ácidos).(ácidos).
Tubos de 200*25 mm conteniendo 50ml de Tubos de 200*25 mm conteniendo 50ml de medio medio de de carne decarne de
naranja
naranja ( ( para para bacteria bacteria y y hongos hongos ) ) ..
Tubos de 20Tubos de 200 * 25 mm conten0 * 25 mm conteniendo 20 ml iendo 20 ml de contende contenido deido de
caldo de
caldo de APT APT (bacterias (bacterias ácido láctico ácido láctico ).).
Parafina estéril .Parafina estéril .
Solución de Solución de bicloruro bicloruro de mercurio de mercurio de de 1: 1: 1,000.1,000.
Alcohol, Alcohol, etílico etílico 70%.70%.
Abridor de latas .Abridor de latas .
Vástago de Vástago de metal con metal con punta punta en unos en unos de de los extremos los extremos ..
Escobilla .Escobilla .
Detergente .Detergente .
Recipiente Recipiente con con agente agente desinfectante desinfectante ..
Muestras de enlatadosMuestras de enlatados
Asa de Asa de siembra con siembra con mango de mango de kollekolle
Tubos de ensayo Pirex con tapa estérilesTubos de ensayo Pirex con tapa estériles
Placa petri Pyrex estérilesPlaca petri Pyrex estériles
Gradilla de tubosGradilla de tubos
Lunas de reloj, espátula y baguetasLunas de reloj, espátula y baguetas
Vasos Vasos precipitados precipitados y y ErlenmeyersErlenmeyers
Probetas y Pipetas estérilesProbetas y Pipetas estériles
IncubadoraIncubadora EstufaEstufa AutoclaveAutoclave
Balanza AnalíticaBalanza Analítica
Jarra de Anaerobiosis.Jarra de Anaerobiosis.
Reactivos y medios de cultivo Reactivos y medios de cultivo
-- AAgguua a ddeessttiillaaddaa -- AAgguua a PPeeppttoonnaaddaa -- CCaallddo o LLaaccttoossaaddoo -- CCaallddo o SSeelleenniittoo
-- AgAgar ar DeDextxtrorosasa-t-tririptptoonana -- AAggaar r SSaabboorraauudd -- AAggaar r MMcc. . CCoonnkkeeyy -- AAggaar r SSSS -- AAggaar r TTSSII -- AAggaar r LLIIAA -- AAggaar r CCiirraattoo
IV. PROCEDIMIENTO IV. PROCEDIMIENTO TECNICAS DE EXAMEN TECNICAS DE EXAMEN
Examen
Examen externo externo preliminar.preliminar. Ade
Además más de de anotanotar ar el el numnumero ero del del lotlote e , , dimdimensensioniones es de de la la latlata a y y pespeso,o, real
realizaizar r la la insinspeccpección ión visvisual ual del del recirecipiepiente nte par par detdetectectar ar la la prespresencencia ia dede defect
defectos os mecánimecánicos cos , , integrintegridad idad de de las las saturas saturas , , preformpreformacionesaciones, , corrosicorrosión ón ,, abolla
abolladuras duras u otras u otras anormaanormalidadelidades s que que pueden ser pueden ser útiles útiles en los en los hallazhallazgosgos bacteriológicos.
bacteriológicos.
Incubación prelimar. Incubación prelimar.
incubar
incubar las las latas latas aparentemente aparentemente normales normales según según las las condiciones condiciones del del PHPH del
del productproducto o del examen , de acuerdel examen , de acuerdo a la do a la tabal tabal de rangos de rangos normalnormales dees de PH
PH de de alimentos enlatados.alimentos enlatados. -
- alimentos alimentos de PH > de PH > 4.6 4.6 ( mediana y baja ( mediana y baja acidez ) incubar acidez ) incubar a a 35°C 35°C - 50°C- 50°C por
por 10 a 10 a 21 21 días días .. NOTA
NOTA : las conservas de : las conservas de carne que llevan carne que llevan harinas o harinas o almidalmidones comoones como ingredientes ,
ingredientes , incubar incubar además además a a 55°C .55°C . -
- alimentos alimentos de de PH PH < < 4.6 4.6 ( ( ácidos ácidos y y altamente altamente ácidos ácidos ) ) incubar incubar a a 55°C 55°C por por 77 - 10 días .
- 10 días . Preparación
Preparación de de la la lata.lata.
a.
a. Retirar Retirar la la etiqueta etiqueta lata.lata. b.
b. LavLavar ar con agua con agua jabjabonoonosa sa y y con con escoescobilbilla, la, enjenjuaguagar ar concon
abundante agua limpia y secar. abundante agua limpia y secar.
c.
c. ColColocar ocar ententre re dos dos hojhojas as de de pappapel el de de filfiltro tro limlimpiopios s para para detdetectectar ar cualquier perdida
cualquier perdida del producto del producto durante la durante la incubación incubación .. d.
d. IncIncubaubar lr las as latlatas as a a la la temtemperaperaturturas as indindicaicadas das , , duradurante nte el el periperiodoodo de incubación prelim
de incubación preliminar , inar , agitar las latas cada agitar las latas cada 2 días 2 días separar separar laslas que present
que presenten manifen manifestacióestación de crecimienn de crecimiento , que se to , que se traductraducen por en por abomba
abombamientmiento o o mo microfugicrofugas as y y proceder proceder a a su su examen examen como como latalata alterada.
alterada. e.
e. Si Si al al terterminmino o del del perperiodiodo o de de incincubacubación ión , , las latalas latas s no presenno presentantan signos de alteración realizar “ control de esterilidad”
signos de alteración realizar “ control de esterilidad”
Muestreo de latas Muestreo de latas
SI las latas tienen salidas de gas o estas abombadas, se examinan seis y se SI las latas tienen salidas de gas o estas abombadas, se examinan seis y se toman seis latas normales de otro Iote como testigos. Cuando se sospecha toman seis latas normales de otro Iote como testigos. Cuando se sospecha tr
tratatamamieientnto o ininsusufificicienente te se se exexamaminina a seseis is a a dodoce ce lalatatas s de de cacada da lolotete. . LaLass alteraciones por cierre defectuoso es probable se presentan solamente en un alteraciones por cierre defectuoso es probable se presentan solamente en un numero pequer1o de latas de un lote, por lo que se examinan tantas como sean numero pequer1o de latas de un lote, por lo que se examinan tantas como sean posibles.
posibles.
Examen físico Examen físico
Se examinan las costuras y las superficies de las latas. Una sierra de joyero es útil Se examinan las costuras y las superficies de las latas. Una sierra de joyero es útil para
para cortcortar a ar a tratravés de las costuvés de las costuras. Se anotras. Se anotan los númean los números del lotros del lote o e o códicódigogo impresos en las etiquetas o estampados en la tapa.
impresos en las etiquetas o estampados en la tapa. PRE -incubación
PRE -incubación
Se incuban las latas aparentemente sanas durante seis días a 35-37°C. Así se Se incuban las latas aparentemente sanas durante seis días a 35-37°C. Así se favorece la multiplicación de pequeñas cantidades de organismos que, de otra favorece la multiplicación de pequeñas cantidades de organismos que, de otra forma, pueden pasarse por alto al tomar muestras del contenido.
forma, pueden pasarse por alto al tomar muestras del contenido. Muestreo del contenido: latas de aspecto normal
Frotar la parte superior de la lata con algodón y alcohol metílico.
Frotar la parte superior de la lata con algodón y alcohol metílico. Verter Verter 1 mI de1 mI de
alcohol sobre la lata frotada y flamear/a. Esperar que el alcohol, se queme por alcohol sobre la lata frotada y flamear/a. Esperar que el alcohol, se queme por completo.
completo.
Si el contenido de lata es líquido, con un punzón de 10
Si el contenido de lata es líquido, con un punzón de 10 cm. (que se esterilizcm. (que se esterilizan enan en recipientes de hojalata que contienen 10-12 punzones en la estufa de aire) se recipientes de hojalata que contienen 10-12 punzones en la estufa de aire) se punciona la superficie flameada mediante un golpe brusco con un martillo. Se lleva punciona la superficie flameada mediante un golpe brusco con un martillo. Se lleva una muestra del contenido con una pipeta Pasteur a un medio de cultivo ya un una muestra del contenido con una pipeta Pasteur a un medio de cultivo ya un matraz de tapón rosca do para recuentos de gérmenes viables si es preciso.
matraz de tapón rosca do para recuentos de gérmenes viables si es preciso.
Si el contenido es sólido se usa un punzón hecho de varilla de bronce de 9-10 mm Si el contenido es sólido se usa un punzón hecho de varilla de bronce de 9-10 mm de diámetro con un extremo estirado en punta. Estos punzones se esterilizan de diámetro con un extremo estirado en punta. Estos punzones se esterilizan individualmente. Conducir bien el punzón para hacer un orificio grande. Se separa individualmente. Conducir bien el punzón para hacer un orificio grande. Se separa una muestra de la
una muestra de la parte centraparte central mediante un trozo de l mediante un trozo de tubo de vidrio de 7-8 tubo de vidrio de 7-8 mm demm de diámetro externo empujándolo verticalmente hacia el fondo de lata.
diámetro externo empujándolo verticalmente hacia el fondo de lata.
Se empuja la muestra de la parte central desde el tubo de vidrio hasta un frasco Se empuja la muestra de la parte central desde el tubo de vidrio hasta un frasco de tapón roscado mediante un trozo de varilla de vidrio de grosor adecuado. Los de tapón roscado mediante un trozo de varilla de vidrio de grosor adecuado. Los tubos de vidrio para las muestras y las varillas se esterilizan juntos en cajas de tubos de vidrio para las muestras y las varillas se esterilizan juntos en cajas de cobre para pipetas.
cobre para pipetas.
Hago un muestreo del contenido: latas con escape de gases o abombadas Hago un muestreo del contenido: latas con escape de gases o abombadas Contienen gas a considerable presión y el contenido puede ser peligroso. Se Contienen gas a considerable presión y el contenido puede ser peligroso. Se coloca la lata en una bandeja de metal. Frotar con alcohol y flamear como se coloca la lata en una bandeja de metal. Frotar con alcohol y flamear como se describe antes. Se invierte un embudo previamente esterilizado sobre la lata. El describe antes. Se invierte un embudo previamente esterilizado sobre la lata. El diámetro del embudo puede ser ligeramente mayor que el de lata. Se pasa una diámetro del embudo puede ser ligeramente mayor que el de lata. Se pasa una varill
varilla de a de bronce esteribronce esterilizada con uno de lizada con uno de sus extremos puntiasus extremos puntiagudo, por el tubo gudo, por el tubo dede embudo hasta que se apoye sobre la lata; se sujetan ambos firmemente y se embudo hasta que se apoye sobre la lata; se sujetan ambos firmemente y se pu
puncinciona ona la la latlata a gogolplpeaeando ndo la la vavarilrilla la cocon n un un mamartrtilillo, lo, ququititanando do dedespspués ués coconn suavidad la varilla. El contenido de la lata puede proyectarse con alguna fuerza., suavidad la varilla. El contenido de la lata puede proyectarse con alguna fuerza.,
pero el embudo y la bandeja impedirán su desimanación. Antes de quitar el pero el embudo y la bandeja impedirán su desimanación. Antes de quitar el embudo y la varilla de bronce se empuja esta ultime hacia adentro y afuera del embudo y la varilla de bronce se empuja esta ultime hacia adentro y afuera del orificio de la late varias veces. A veces, un trozo de alimento obtura el agujero por orificio de la late varias veces. A veces, un trozo de alimento obtura el agujero por la presión interna de los gases
la presión interna de los gases y cuando se y cuando se introdintroduce un uce un tomadotomador de r de muestmuestras seras se proyectan más gases y alimento.
proyectan más gases y alimento.
Se toman las muestras con una pipeta Pasteur o con un tomador de muestras, Se toman las muestras con una pipeta Pasteur o con un tomador de muestras, como ya se ha descrito.
como ya se ha descrito.
Después de tomar las muestras se abre la lata con un abrelatas de uso domestico Después de tomar las muestras se abre la lata con un abrelatas de uso domestico y se examina el contenido.
y se examina el contenido.
Examen de extensiones directas Examen de extensiones directas
Se hacen extensiones teñidas por el Gram de la muestra. La presencia de bacilos Se hacen extensiones teñidas por el Gram de la muestra. La presencia de bacilos Gram positivos pueden indicar tratamiento insuficiente; la de cocos, levaduras, Gram positivos pueden indicar tratamiento insuficiente; la de cocos, levaduras, etc., cierto defectuosos.
etc., cierto defectuosos. Lo
Los s gérgérmemenenes s quque e se se obsobservervan an pupuededen en estestar ar mumuerertotos, s, mamatatadodos s duduranrantete, , elel tra
tratamtamieniento, dto, de forme forma que na que no debo debe ponee ponerse mrse mucha sucha segureguridaidad en esd en este exte exameamen.n. .. Cultivo
Cultivo Par
Para a el el exexamamen en gegenerneral al se se sisiemembrbra a agagar ar dedextxtrosrosa a trtripiptotona na (c(con on púpúrpurpura ra dede bromocresol como indicador) y se incuba aerobia y anaerobiamente a 22-25 °C, bromocresol como indicador) y se incuba aerobia y anaerobiamente a 22-25 °C, 35-37 °C, y 55-60 °C durante 24-36 horas.
35-37 °C, y 55-60 °C durante 24-36 horas.
Si esta indicado, se siembran también los siguientes medios: medio hierro-sülfuro Si esta indicado, se siembran también los siguientes medios: medio hierro-sülfuro (product
(productores de la fetidez sulfhíores de la fetidez sulfhídrica, agar sangrdrica, agar sangre, e, MacConMacConkey) para gérmeneskey) para gérmenes de la putrefacción,
de la putrefacción, MicrocMicrococos, ocos, LeuconosLeuconostoc toc , etc., medio de leche de Crossley, etc., medio de leche de Crossley
(esporulados de la putrefacción aerobios y anaerobios), medio de Sabouraud u (esporulados de la putrefacción aerobios y anaerobios), medio de Sabouraud u otros medios mitológicos (para levaduras y hongos).
Se hacen extensiones de las colonias que se tiñan con el Gramo Se hacen extensiones de las colonias que se tiñan con el Gramo Flora microbiana
Flora microbiana
Se identifican como sigue: Se identifican como sigue:
11.. BBaacciilloos s GGrraam m PPoossiittiivvooss aa)) TTeerrmmóóffiillooss::
i. Aerobios
i. Aerobios: B. stearothermophilus: B. stearothermophilus (agriado sin abombamiento)(agriado sin abombamiento)
ii. Anaerobios:
ii. Anaerobios: CI. thermosaccharotyllcumCI. thermosaccharotyllcum (abombamiento duro)(abombamiento duro)
iii.
iii. Anaerobios: colonias negras en Anaerobios: colonias negras en el medio de el medio de sulfuro de hierro:sulfuro de hierro: VI. Nigrificans
VI. Nigrificans b
b)) MMeessóóffiillooss::
I.I. Aerobios Aerobios: Bacillus: Bacillus
IIII.. AAnnaaeerroobbiiooss:: ClostridiumClostridium
22.. BBaacciilloos s GGrraam m nneeggaattiivvooss Grupos
Grupos Pseudomonas - Achromobacter Pseudomonas - Achromobacter - Enterobacterias.- Enterobacterias.
33.. CCooccoos s GGrraam m ppoossiittiivvooss Micrococos
Micrococos. Leuconostoc . Leuconostoc ..
44.. LLeevvaadduurraas s y y hhoonnggooss
Gérmenes patógenos en alimentos enlatados Gérmenes patógenos en alimentos enlatados
Recientes brotes de fiebre tifoidea y enfermedad estafilococíca han llevado a los Recientes brotes de fiebre tifoidea y enfermedad estafilococíca han llevado a los bacteriólogos de alimentos, a las autoridades sanitarias y/os conserveros a revisar bacteriólogos de alimentos, a las autoridades sanitarias y/os conserveros a revisar sus opiniones sobre la seguridad de los alimentos enlatados, pese a
sus opiniones sobre la seguridad de los alimentos enlatados, pese a queque .estos.estos
brotes son muy escasos con relación a las enormes cantidades de alimentos brotes son muy escasos con relación a las enormes cantidades de alimentos en
enlatados investigando gérmenes patógenos, es una técnica no recomendada. enlatados investigando gérmenes patógenos, es una técnica no recomendada. Tan 5% los alimentos de baja acidez, carnes y productos lácteos y algunas Tan 5% los alimentos de baja acidez, carnes y productos lácteos y algunas ver
verduduras ras enenlalatatadasdas, , puepuededen n pepermrmititir ir el el crecrecicimimienento to de de gégérmermenenes s ententeriericocos,s, estafilococos y botulinicos.
estafilococos y botulinicos.
Examen para gérmenes patógenos Examen para gérmenes patógenos
Cuando está indicado, se abren las latas con abrelatas estériles y si el alimento es Cuando está indicado, se abren las latas con abrelatas estériles y si el alimento es sólido se toman muestras de las partes frente a las costuras, especialmente donde sólido se toman muestras de las partes frente a las costuras, especialmente donde se cruzan las costuras de las tapas con la lateral. Se cultiva en medio de Selenito se cruzan las costuras de las tapas con la lateral. Se cultiva en medio de Selenito para Salmonelas.
para Salmonelas.
CONTROL DE ESTERILIDAD CONTROL DE ESTERILIDAD
1.
1. EfEfectectuar el exuar el examamen de los alen de los alimimententos os enenlalatatadodos en atms en atmósfósferaerass estériles
estériles tomando todas tomando todas las precauciones las precauciones de asepsia de asepsia .. 2.
2. DeDesinsinfefectctar ar la la tatapa pa de de lalata ta ( ( por por le le lalado do quque e no no lllleva eva imimprepreso so elel código)
código) , cubriendo con alcohol , cubriendo con alcohol al 70% al 70% , dejando por , dejando por contacto de contacto de 1010 -
- 15 15 minutos minutos , luego escurrir el exceso , luego escurrir el exceso de alcohol y de alcohol y flamear flamear .. 3.
3. Abrir con abrelatas estéril y Abrir con abrelatas estéril y elimieliminar totalmentnar totalmente e la tapa la tapa , reemplazand, reemplazandoo inmediatamente con la base de una placa petri estéril.
inmediatamente con la base de una placa petri estéril. 4.
4. TraTransfnsferierir r 5 5 gr gr o o ml ml de de muemuestrstra a a a tubtubos os con con medmedio io de de culcultivtivoo apr
apropiopiados ados por por tritripliplicadcado o parpara a incincubaubacióción n aeróaeróbicbica a y y anaanaeróberóbica ica ,, adicionar
adicionar a estos a estos últimos parafina últimos parafina estéril estéril .. 5.
5. IncubaIncubar r alas alas mismas mismas temperatemperaturas turas de de incubacincubación ión prelimpreliminar inar , , así así , , sisi las
las muestmuestra ra han han sido sido incubaincubadas das a a 35°C 35°C , , incubar incubar los los tubos tubos aa 35°C
35°C por por 48 48 horas horas hasta hasta 5 5 días días , , si si han han sido sido incubabincubabas as a a 55°55° C
C , , incubar incubar los los tubos tubos a a 55° 55° C C por por 48 48 horas horas por por 5 5 días.días. 6.
6. EfeEfectuctuar ar la la colcoloracoración ión Gram Gram de de la la muestrmuestra a , , para para el el examexamen en dede microscopia , si
microscopia , si en en le examen le examen microscópico , se observa microscópico , se observa un numeroun numero ele
elevadvado o de de micmicrooroorgarganismnismos os por campo por campo (ma(mas s de de 3) 3) exceexcepto pto enen product
de
de higienhigiene de durante urante la la elaboracelaboración ión del del productproducto yo y/o /o utiliutilización zación dede materias primas contaminantes .
materias primas contaminantes . 7.
7. DesDespuépués ds del el perperíodíodo do de ie incubncubaciación ón , , examexaminainar r los los tubtubos os , , si si hayhay desarro
desarrollo llo ,. ,. RealizRealizar ar coloraccoloración Grión Gram y oam y observar bservar al al microscmicroscopio ,opio , si
si es necesario hacer subcultivos sobre agar Casey , es necesario hacer subcultivos sobre agar Casey , para aerobios ypara aerobios y sob
sobre re agar agar parpara a anaanaeroberobios según ios según BREBREWEN WEN , , incincubaubar r a a laslas temperaturas
temperaturas adecuadas adecuadas .. Interpretación
Interpretación Con
Considsiderar serar si un tui un tubo es ebo es estéstéril sril si un tui un tubo bo aeroaerobio cbio como omo máxmáximoimo demuestra
demuestra desarrollo desarrollo ..
V.
V. RESULTADOS
RESULTADOS ::
1.
1. Enumeración n deEnumeración n de Temofilos AnaerobiosTemofilos Anaerobios.. 2.
2. Enumeración deEnumeración de Clostridium Perfringens.Clostridium Perfringens. 3.
3. Enumeración deEnumeración de Bacillus AreusBacillus Areus.. 4.
4. Enumeración deEnumeración de Escherichia Coli Escherichia Coli ..
VI.
VI. RECOMENDACIO
RECOMENDACIONES
NES
VII.
VIII. CUESTINARIO VIII. CUESTINARIO
1.
1. Medios Medios de de cultivo cultivo que que se se utilizan utilizan para para el el análisis análisis microbiológico microbiológico dede
alimentos enlatados. alimentos enlatados. 2.
2. FloFlora ra micmicrobirobiana en ana en proproductductos os enlenlataatadosdos..
3.
3. AnáliAnálisis sis fisiqfisiquimico uimico que se que se realizrealiza en a en conservconserva de a de lata delata de
productos vegetales
productos vegetales y y de origen animal.de origen animal.
4.
4. ¿Que ¿Que consideconsideracioneraciones s se se debe debe tener tener en en una una plantplanta a industindustrial rial dede
procesamiento de enlatados?. procesamiento de enlatados?.
5.
5. Consideraciones en Consideraciones en los los tipos tipos de de latas latas contenedores contenedores de de alimentos,alimentos,
cuando
