Flow Cell. La muestra una vez tratada es dirigida a una celda de flujo (Flow(

(1)

Cell

(2)

Tecnolog

(3)



Flow

Cell



La muestra una vez tratada es dirigida a una

celda de flujo (

Flow

cell

) en la cual por el

dise

ñ

o hidrodin

á

mico, los leucocitos se alinean

y pasan formados uno a uno y en donde se

realizan las siguientes mediciones

(4)



Volumen



Mediante impedancia de baja frecuencia

se determina el volumen de la c

é

lula



(5)



Conductividad



La densidad interna de la c

é

lula es

proporcional al tama

ñ

o del pulso o al cambio de

la se

ñ

al de Radiofrecuencia



RF(ola

resistencia a la corriente magn

é

tica de alta

voltaje)

(6)



Scatter



La dispersi

ó

n (

scatter

) de luz l

á

ser

indica la estructura y forma de la c

(7)

Los cambios de voltaje de CC y RF pueden

detectarse en forma simult

á

nea

Pueden graficarse en forma comparativa la impedancia y la conductividad :se forma Un citograma de distribución bidimensional ,este trazado de dispersión muestra

poblaciones celulares como cúmulos <por análisis computarizado se determinan los recuentos celulares

(8)



 De esta manera son De esta manera son realizadas las 3

realizadas las 3

determinaciones de

manera simult

manera simultááneanea



 Las lecturas de estas Las lecturas de estas 3 se

3 seññales anales anáálogas es logas es enviadas al analizador enviadas al analizador para su amplificaci para su amplificacióón y n y proceso, luego el proceso, luego el sistema genera 3 sistema genera 3 gr grááficosficos   DF1: Volumen vs. DF1: Volumen vs. Scatter Scatter   DF2: Volumen vs. DF2: Volumen vs. Conductividad Conductividad   DF3: Volumen vs. DF3: Volumen vs. Conductividad Conductividad extrayendo las se

extrayendo las seññales ales de Neutr

de Neutróófilos y filos y Eosin

(9)



DF1: Volumen vs.

Scatter



El trazado de dispersi

ó

n de la funci

ó

n de

discriminaci

ó

n DF1 del volumen

vs

dispersi

ó

n de la luz

muestra. una separaci

(10)

DF

-

_-

2 volumen

_{2 volumen}

vs

_vs

conductividad

_{conductividad}

El trazado de DF-2 muestra muestra Ly,Mo,Nt

como poblaciones predominantes

(11)

DF3

Cuando se elimina la población de Nt del trazado de dispersión DF2 puede visualizarse la población de basófilos (DF3)

(12)

Informe del

(13)

Informe del

(14)

Sysmex

(15)

Sysmex

XS

-

1000

i

Caracter

í

sticas

Principales



21 Par

á

metros, Diferencial Leucocitario de 5

partes



 Manejo de Datos sobre Windows XPManejo de Datos sobre Windows XP®® Professional Professional



 Registro de 10.000 resultados de pacientes (numRegistro de 10.000 resultados de pacientes (numééricos y ricos y

gr

grááficos)ficos) 

 Control de Calidad Interno y ExternoControl de Calidad Interno y Externo



 AnAnáálisis de WBC por Citometrlisis de WBC por Citometríía de Flujo Fluorescentea de Flujo Fluorescente



 Enfoque HidrodinEnfoque Hidrodináámico para recuento de RBC y PLTmico para recuento de RBC y PLT



(16)

M

Míínimo Volumen de aspiracinimo Volumen de aspiracióónn



 20 20 ulul en tubos con EDTA * en tubos con EDTA *

M

Míínimo volumen de muestra requeridonimo volumen de muestra requerido



 Volumen muertoVolumen muerto •

• Modo manual Modo manual –– 500 500 µµLL

•

• Modo Modo automuestreadorautomuestreador –– 1ml1ml

•

(17)

Sysmex

XS

-

1000

i

Beneficios

para

el

Usuario



 Con s_{Con s}ó_ólo un _{lo un}

“

“clicclic”” pueden pueden verse los verse los resultados y resultados y validar validar

(18)

Par

á

_á

metros

_metros



WBC, RBC,

Hgb

,

Hct

, MCV, MCH,

MCHC, PLT



RDW

-

CV, RDW

-

SD, HDW



Neut

%, Lymph%, Mono%,

Eo

%,

Baso

%,

NRBC%



MPV



Retic

%,

Retic

#, IRF



(19)

Linealidad extendida

0 – 400 x 10

3

_{/ µL}

0 – 8,00 x 10

6

_{/ µL}

HGB

HCT

0 – 25,0 g/ dL

0 – 60%

0 – 5.000 x 10

6

_{/ µL}

(20)

Tecnolog

í

a para Gl

ó

bulos rojos y Plaquetas

M

é

todo

de

Electroenfoque

Hidrodin

á

mico

Es el

Es el standardstandard usadousado por por SysmexSysmex en los

en los instrumentosinstrumentos de la de la serieserie X

X parapara la la determinacideterminacióónn de de conteos

conteos precisosprecisos de de plaquetasplaquetas y

y glglóóbulosbulos rojosrojos

L

Las as ccéélulaslulas son son rodeadasrodeadas porpor unauna capa

capa de de flufluíídodo queque laslas guguííaa unauna por

por unauna a a travtravééss del del centrocentro de de la

la aperturaapertura Cada

Cada ccéélulalula eses contadacontada y y medidamedida individualmente

individualmente

Un

Un segundosegundo flujoflujo de de flufluíídodo en la en la parte posterior de la

parte posterior de la aperturaapertura asegura

asegura queque laslas ccéélulaslulas no no recirculen

(21)

Tecnolog

í

_í

a por impedancia

_{a por impedancia}



Cuando las c

é

lulas atraviesan la

apertura, la se

ñ

ales se transmiten en

secuencias al circuito anal

ó

gico y los

circuitos de an

á

lisis de distribuci

ó

n de

tama

ñ

o para la conversi

ó

n a datos

acumulados de distribuci

ó

n de tama

ñ

o

de las part

í

culas y se establece el

umbral mediante el microprocesador

para cada poblaci

(22)

Histogramas de GR y

Histogramas de GR y PlaqPlaq

En el microprocesador se calculan VCM,HCM,CHCM,RDW-SD,VPM, RDW-CV, Pto

(23)

Tecnolog

í

a para Hemoglobina

Reactivo

libre

de

cianuro



 GrupoGrupo hidrofhidrofíílicolico del SLS del SLS queque se se uneune a la a la molmolééculacula de la de la globinaglobina



 OcurreOcurre un un cambiocambio de de configuraciconfiguracióónn



 OxidaciOxidacióónn de Fe de Fe 2+2+ ----> Fe > Fe 3+3+



 GruposGrupos HidrofHidrofíílicoslicos de SLS se de SLS se unenunen a Fe a Fe ----> SLS> SLS--HbHb

Fe 2+ Fe 3+ _Fe3+

(24)

Sysmex

XS

-

1000

i

Tecnolog

í

_í

a

_a



En los

Xs

el

Hto

se mide

electr

ó

nicamente,basado

en el principio de que el

pulso producido cuando un

Gr

pasa a

traves

de la

apertura es proporcional al

volumen de la c

é

lula



El

Hto

se determina

comparando el volumen

total o acumulado de

Gr

con

el volumen de sangre

completa en la diluci

ó

n

 

(25)

Principios de medici

ó

_ó

n

_n



Citometr

í

a de flujo

usando un l

á

ser

semiconductor para

medir:



luz dispersa frontal

(

_luz_luz

dispersa alrededor de la c

dispersa alrededor de la céélula)lula)



volumen celular



luz dispersa

lateral (luz que (luz que

se dispersa por el contenido

de la c

de la céélula) lula)



estructura interna de

la c

é

lula



fluorescencia lateral

( luz ( luz

fluorescente que es

dispersada por el contenido

de la

de la celulacelula



(

Tinci

ó

n de ADN y

ARN

(26)

(27)

(28)

Sysmex

XS

-

1000

i

Tecnolog

í

_í

a

_a



 Citometr_Citometrí_ía de Flujo Fluorescente _{a de Flujo Fluorescente}



(29)

Determinaciones de WBC



En el m

é

todo de CMF con

laser

semiconductor se

detectan la luz dispersa frontal, la luz dispersa lateral

y la luz fluorescente lateral y se representan en un

diagrama de dispersi

(30)

Por Citometría de Flujo se obtiene información

acerca de la composición y madurez celular

Dispersión lateral

Información del contenido de RNA y

DNA

Información de la estructura

interna

Tamaño de la célula

Dispersión frontal Fluorescencia

Láser

(31)

Sysmex

XS

-

1000

i

Tecnolog

(32)

(33)

Sysmex

XS

-

1000

i

Beneficios

para

el

usuario

Opci

Opcióón de seleccin de seleccióón de ann de anáálisis para maximizar el flujo de anlisis para maximizar el flujo de anáálisis y los lisis y los costos operacionales

costos operacionales

Modo CBC

Análisis de luz desviada frontal

Modo CBC + DIFF

Análisis de luz desviada lateral y de la fluorescencia lateral

(34)

(35)

Desarrollo de nuevos

softwares

Masters

_Masters

La tecnología que se utiliza es muy potente y brinda más y más posibilidades de medición. Las aplicaciones se desarrollan para cuantificar lo que aparece en los gráficos a partir de utilizar fluorescencia.

X PRO Es el soft básico, sobre el que se montan las aplicaciones Informe a medida del usuario

Rangos para Control de Calidad

Medidor para reactivos y seguimiento de trazabilidad

IG Master Para cuantificar gránulos inmaduros RET Master Para cuantificar Hb en Reticulocitos

(36)

Cuantificación de Gránulos Inmaduros

Información útil sobre el diferencial

extendido de leucocitos



IG:



_{promielocitos}



_mielocitos



_{metamielocitos}

promielo mielo metamielo

Blastos bandas segmentos

maduración de neutrófilos

(37)

Cuantificaci

ó

n de Gr

á

nulos

Inmaduros

IG Master

Canal del diferencial

IG % , # Normal fl u o re s c e n c ia Dispersión lateral

(38)

(39)

Medida de los

eritroblastos

los EB son contados y separados de los WBC

basados en su tamaño y cantidad de

(40)

Recuentos de Reticulocitos



M

é

todo de Referencia: Azul de Metileno

Variaci

ó

n entre observadores

Altos coeficientes de variaci

ó

n

Laboriosos



M

é

todos automatizados

Azul de metileno

Fluorescentes

(41)

Canal

reticulocitos

-

Fluorescente

Fl alta Fl baja Fl muy alta Tinción: Polimetino: ARN Oxazina: ADN RET WBC RBC

(42)

Canal de los

(43)

Utilidad Clínica - FIR

.

Confirmación de Anemia Aplástica

.

Permite la clasificación de anemias por su

capacidad eritropoyética

.

Talasemia vs. deficiencia de Hierro

.

Anemia de los procesos crónicos

.

Hipoproducción vs. respuesta eritroide

temprana

.

Detección de implante correcto luego de

transplante

(44)

Utilidad Clínica

.

Monitoreo de tratamientos inmunosupresores

.

Monitoreo terapéutico de:

.

tratamientos con Eritropoyetina

.

Corrección de anemias nutricionales

.

Tratamiento de Mielodisplasias

.

Definición de necesidad de transfusión en

neonatos

Evolución post-tte 0 20 40 60 -10 -4 -2 2 5 8 15 días post-tte GB Reti (%) IRF (%) HPC (%)