UNIVERSIDAD NACIONAL DEL CENTRO DEL PERÚ

UNIVERSIDAD NACIONAL DEL CENTRO DEL PERÚ

FACULTAD DE AGRONOMIA

Eficiencia del control biológico de Colletotrichum acutatum causante de la caída de frutos pequeños en

naranja var. Valencia (Citrus sinensis)

TESIS

PRESENTADA POR LA BACHILLER:

HUAYTA BARJA YENI

PARA OPTAR EL TÍTULO PROFESIONAL DE:

INGENIERA AGRÓNOMA

EL MANTARO, JAUJA - PERÚ

2021

UNIVERSIDAD NACIONAL DEL CENTRO DEL PERÚ FACULTAD DE AGRONOMÍA

ACTA DE SUSTENTACIÓN DE TESIS

A través de la plataforma Microsoft Teams, equipo Sustentación Virtual de Tesis de la Facultad de Agronomía, a los 19 días del mes de agosto del dos mil veintiuno a horas 08.05 a.m., con la presencia de los señores catedráticos miembros del jurado calificador:

Dr. Efraín Bernabé Lindo Gutarra Presidente

Ing. Maurino Cahuana Hidalgo Secretario

Dr. Glicerio López Orihuela Jurado

Ing. Gilberto Torres Suarez Jurado

Dr. Fernando Puertas Ramos Jurado

Se dio inicio al acto de sustentación de tesis para optar el título de INGENIERA AGRÓNOMO, con la lectura de la resolución N° 018-2021-ST-DFAG/UNCP de fecha 17 de agosto del 2021, en la que indica la hora y fecha de sustentación y nombramiento de jurados;

La sustentante Bachiller: Yeni Huayta Barja procede a sustentar la tesis titulada: “EFICIENCIA DEL

CONTROL BIOLÓGICO DE Colletotrichum Acutatum CAUSANTE DE LA CAÍDA DE FRUTOS PEQUEÑOS EN NARANJA VAR. VALENCIA (Citricus sinensis)”; bajo el asesoramiento del Ing.

Gilberto Torres Suarez.

Hechas las observaciones del caso y absueltas por la sustentante, el Presidente del Jurado calificador, invitó a la Bachiller Yeni Huayta Barja, y demás asistentes abandonar la sala virtual a fin de que el jurado calificador pueda deliberar el acto con voto nominal y obligatorio, dando como resultado:

APROBADO POR UNANIMIDAD

Acto seguido el Presidente invitó a la sustentante y demás asistentes a la sala de sustentación virtual, a fin de dar a conocer el resultado de la sustentación, asimismo, recomendó continuar con los trámites respectivos para obtener el Título Profesional de INGENIERA AGRÓNOMO.

Concluyendo el acto a las 10:15 p.m. horas del mismo día, pasando a firmar los miembros del Jurado Calificador en señal de conformidad.

Dr. Efraín Bernabé Lindo Gutarra Ing. Maurino Cahuana Hidalgo

Presidente Secretario

Dr. Glicerio López Orihuela Ing. Gilberto Torres Suarez

Jurado Jurado

Dr. Fernando Puertas Ramos Jurado

ASESOR:

ING. GILBERTO TORRES SUAREZ JURADO

ID ORCID: 0000-0003-2179-4922

Esta tesis va dedicado a Dios y a mi familia por su apoyo incondicional durante todo el proceso de mi carrera y desarrollo de esta investigación

AGRADECIMIENTO

Agradezco a Dios y a mi toda mi familia por acompañarme y guiarme siempre. A la UNCP - Facultad de Agronomía por formarme profesionalmente.

Al docente de la Facultad de Agronomía, Ing. Gilberto Torres Suárez, quien me asesoro, brindándomesus conocimientos quefueron muyimportante y necesario durante elproceso de la tesis.

A la empresa “ECOBAF S.A.C“, por proporcionarme los productos para la investigación.

Al fundo Francia por permitirme realizar esta investigación en sus terrenos de cultivo de naranja valencia.

A mis amigas por sus motivaciones y apoyos en realizar las

evaluaciones de la tesis.

ÍNDICE

INTRODUCCIÓN ... xii

1. REVISIÓN BIBLIOGRAFICA ... 1

1.1 Generalidades de los cítricos ... 1

1.2 Descripción taxonómica ... 1

1.3 Descripción Botánica ... 2

1.4 Principales Especies de Cítricos ... 4

1.6 Fenología de los críticos de la brotación y floración ... 4

1.7 Requerimiento Climático ... 5

1.8 Caída prematura de frutos pequeños causado por C. acutatum ... 7

1.9 Taxonomía ... 8

1.10 Morfología ... 9

1.11 Ciclo de enfermedad ... 9

1.12 Mecanismos de infección ... 10

1.13 Sintomatología ... 12

1.14 Epidemiologia ... 13

1.15 Control ... 14

1.16 Otras consecuencias de la caída de frutos pequeños ... 15

1.17 Descripción de los productos utilizados ... 16

2. MATERIALES Y MÉTODOS ... 18

2.1. Localización del experimento ... 18

2.2. Metodología ... 18

2.2.1 Registros meteorológicos ... 18

2.2.2. Material Experimental ... 20

2.2.3. Descripción de los Tratamientos ... 20

2.2.4. Diseño experimental ... 21

2.2.5. Unidad experimental ... 22

2.2.6. Croquis experimental ... 22

2.2.7. Manejo del experimemto ... 35

2.2.8 Variables evaluadas ... 23

2.2.9 Análisis Estadístico ... 25

3. RESULTADOS Y DISCUSIÓN ... 26

4. CONCLUSIONES ... 35

RECOMENDACIONES ... 36

REFERENCIA BIBLIOGRÁFICA ... 37

ANEXO ... 44

LISTADO DE TABLAS pág.

Tabla 1 Escala de registros fenológicos en Cítricos. Brotación y Floración ... 4 Tabla 2 Principales enfermedades de los cítricos... 5 Tabla 3 Principales Zonas de Producción de Naranja y mandarinas 2019- Perú .. 6 Tabla 4 Descripción de los tratamientos ... 20 Tabla 5 Croquis experimental ... ¡Error! Marcador no definido.

Tabla 6 Prueba de promedios según Tukey- porcentaje de incidencia ... 26

Tabla 7 Porcentaje de cálices persistentes en las ramas después de la caída de

frutos ... 30

Tabla 8 Estimación de los frutos caídos de naranja valencia por árbol a partir de

los cálices persistentes por tratamiento ... 32

Tabla 9 Prueba de Tukey de promedios de N° de frutos / planta ... 33

LISTADO DE FIGURAS pág.

Figura 1 Ciclo de vida de Colletotrichum acutatum en cítricos. (Peres et

al. 2005). ... 10

Figura 2 Estrategias de infección adoptadas por las especies de Colletotrichum spp. ... 11

Figura 3 Mecanismos de infección de Colletotrichum acutatum ... 11

Figura 4 Temperatura máxima y mínima ... 18

Figura 5 Porcentaje de la humedad relativa ... 19

Figura 6 Precipitación en mm ... 19

Figura 7 . Lugar del estudio. (Citricus sinensis) - Fundo Francia ... 20

Figura 8 Croquis experimental ... 22

Figura 9 flores de Citricus sinensis con síntomas de Colletotrichum acutatum ... 24

Figura 10 Escala de severidad diagramática demuestra el porcentaje de área afectada por Colletotrichum spp. Tejido Sano color negro, tejido Afectado, Blanco. (Hernández, 2016) ... 24

Figura 11 Progreso de la incidencia en flores de naranja para cada tratamiento durante el tiempo de evaluación. Elaboración propia ... 26

Figura 12 Evolución de la severidad (%) en flores abiertas ... 28

Figura 14 Cálices persistentes en inflorescencias producidas después

de la infección de flores por Colletotrichum acutatum. a. (Simbio S:

Pseudomonas spp) b. (Simbio B: Bacillus spp) y c. (testigo: sin

tratamiento) ... 31

RESUMEN

El presente trabajo de investigación se realizó en el fundo Francia ubicado en la prov. La Merced – Junín durante la campaña 2018-2019 del cultivo de naranja variedad valencia (Citrus Sinensis), con el objetivo de determinar la eficiencia del aspecto fúngico de dos productos biológicos en el control de Colletotrichum acutatum causante de la caída de frutos pequeños en cítricos, consistió en dos tratamientos, de Simbio S y Simbio B con ingredientes activos de Bacillus spp. y Pseudomonas spp respectivamente y un testigo (sin tratamiento). Se realizó dos aplicaciones con un intervalo de 13 días. Los tratamientos fueron distribuidos bajo el diseño experimental bloques completamente al azar con 2 repeticiones; se evaluó la incidencia, severidad, cálices permanentes en 100 inflorescencias, la estimación de los frutos caídos y número de frutos. Los resultados demostraron que existió diferencia significativa de Simbio S y Simbio B con el testigo en todas las variables pero no presentó diferencia significativa con el Simbio S, también se demostró que dichos productos biológicos fueron eficientes en el control del Colletotrichum acutatum reduciendo el progreso de la enfermedad con respecto al testigo, que alcanzó los porcentajes más alto (54.79% en incidencia y 44.74% en la severidad) al realizar la estimación de frutos caídos concluimos que el tratamiento con el Simbio B redujo en un 74,05% y el Simbio S en 67.6%, el mayor número de frutos fue obtenido con el tratamiento Simbio B ( 396.60 )

Palabras claves: Colletotrichum acutatum, Simbio B y Simbio S

ABSTRACT

The present research work was carried out in the France farm located in the prov. La Merced - Junín during the 2018-2019 campaign of the Valencia orange variety (Citrus Sinensis), with the objective of determining the efficiency of the fungal aspect of two biological products in the control of Colletotrichum acutatum, which causes the fall of small fruits in citrus. , consisted of two treatments, Simbio S and Simbio B with active ingredients from Bacillus spp. and Pseudomonas spp respectively and a control (without treatment). Two applications were made with an interval of 13 days. The treatments were distributed under the completely randomized block experimental design with 2 repetitions; incidence, severity, permanent calyxes in 100 inflorescences, estimation of fallen fruits and number of fruits were evaluated. The results showed that there was a significant difference between Simbio S and Simbio B with the control in all the variables, but there was no significant difference with Simbio S. It was also shown that these biological products were efficient in the control of Colletotrichum acutatum, reducing the progress of the disease. disease with respect to the control, which reached the highest percentages (54.79% in incidence and 44.74% in severity) when estimating fallen fruits, we concluded that treatment with Simbio B reduced by 74.05% and Simbio S in 67.6%, the highest number of fruits was obtained with the Simbio B treatment (396.60 units)

Keywords: Colletotrichum acutatum, Simbio B and Simbio S

INTRODUCCIÓN

En la selva central del Perú los cítricos presentan ventajas comparativas, por la variedad de relieves o microclimas que existe logrando así una alta productividad y madurando más rápido, además que se logran frutas en épocas que las otras zonas no producen; las mayores cosechas provienen de Junín (Chanchamayo y Satipo) que produce el 51% del total nacional; las que se comercializan en estado fresco en el mercado mayorista de Lima (94% de ingreso total de naranja). Los productores buscan utilizar métodos químicos para exterminar las plagas y enfermedades con lo que contaminan el medio ambiente (aire, suelo, ríos y lagos) (Aquino, 2013).

SENASA informó que nuestro país se encuentran regularmente un alto uso de productos agroquímicos tachados, para las exportaciones existe ciertas restricciones, sin embargo para el mercado nacional es menos estricto, ya que no existe mucho control en su ingreso al mercado local dejando así el derecho de los consumidores de tener productos de calidad al intemperie y susceptibles a enfermedades causados por sustancias tóxicas presentes en productos, evaluaciones hechas por la autoridad sanitaria en Perú entre 2011 y 2015 se observó algo igual también con las naranjas, usualmente destinadas al país, del total de muestras analizadas, 11 de ellas (22,4%) no cumplían la normativa.

Entre algunas sustancias encontrados fueron, miclobutanil, etoprofos, aldicarb sulfóxido y tebuconazol; en la capital y las provincias de Piura, Ica y Libertad fueron los lugares donde más se utilizaban productos con estas sustancias.

(Delgado, 2018 p. 3-4), por esta situación hay varias empresas que están empleando productos biológicos que ayudan a mitigar estos problemas.

Hubo gran interés desde hace años para utilizar agentes de control biológico cambio de métodos químicos para controlar las enfermedades en los cítricos, evitar la resistencia de los hongos fitopatógeno y obtener alimentos más saludables “El control efectivo de las enfermedades de los cítricos se puede llevar a cabo mediante una estrategia planeada y dependiendo de las características que presenten tanto el antagonista, el hospedero y el hongo patógeno” (Trujillo, 2010, p. 2).

En la presente investigación, se trabajó con dos productos biológicos, Simbio B y Simbio S, los cuales fueron proporcionado por la empresa de ECOBAF S.A.C., en esta oportunidad se evaluó el efecto fungicida que tienen ambos productos, dicha empresa viene realizando estudios en diversas áreas agronómicas, para brindar una mejor opción a los agricultores para mejorar la producción de sus productos, evitando la contaminación ambiental.

Los objetivos de este estudio fueron:

Objetivo General

Determinar la eficiencia del control biológico de la caída de los frutos pequeños (Colletotrichum acutatum) en naranja valencia en condiciones ambientales de La Merced – Chanchamayo.

Objetivo Especifico

Evaluar el efecto antagónico de los productos biológicos sobre la incidencia y severidad en las inflorescencias de la naranja var. valencia (citricus sinensis) del Colletotrichum acutatum causante de la caída de frutos pequeños

1.

REVISIÓN BIBLIOGRAFICA

1.1

Generalidades de los cítricos

Los cítricos aparecieron en zonas cálidas de Asia y del archipiélago Malayo y parte de Arabia, hoy en día existen en todo el mundo donde se siguen cultivando, fueron muy fáciles de propagarse a muchas áreas. Estos frutos requieren mucha luz para los procesos de crecimiento, florecimiento y fructificación, ya que la cantidad e luz adecuado favorece a un crecimiento y desarrollo de la planta en sus diferentes etapas; esta exigencia sucede mayormente en la parte de la copa. (Gonzáles y Tullo 2019, p. 19).

1.2

Descripción taxonómica

“Existen 145 especies de cítricos y entre ellos la naranja. Entre las principales especies del género Citrus se encuentran: Citrus sinensis (Naranja dulce), Citrus aurantium (naranja agria), Citrus reticulata (Mandarina) y Citrus aurantifolia (Limón)”. (Ancillo, Medina 2014). La descripción taxonómica para la naranja valencia es la siguiente:

Reino : Vegetal División : Angiospermae Clase : Dicotiledóneas Subclase : Rosidae Orden : Rutales Familia Rutáceae Subfamilia : Citroideae Tribu : Citreae

Género : Citrus

Especie : Citrus sinensis

1.3

Descripción Botánica

a)

Raíz

Gonzáles y Tullo (2019) menciona que “los cítricos tienen una raíz sólida, blanca y bajo condiciones de cultivo poseen una gran cantidad de pelos radiculares superficiales” (p. 17), las raíces pueden alcanzar amplias profundidades; los tipos de suelo y también las variedades determinaran que tan profunda puede ser la raíz, la mayora área radicular se encuentra en las primeras capas del suelo. Las raíces como en toda plata tienen una parte principal y las secundarias que se encuentran ramificadas conteniendo a los pelos radiculares que son las principales fuentes de absorción de nutrientes presentes en el suelo. (Ancillo y Medina, 2014, p. 15- 16)

b)

Tallo

Los tallos son gruesos, es solo uno, de color pardo posee reparticiones de ramas los cuales son más son verdes y flexibles existe peciolos, el crecimiento inicial es de forma triangular y posteriormente es circular, consecutivamente el tallo va teniendo la forma circular. Esto nos permite entender que el tallo tiene dos formas de desarrollo, el longitudinal y en grosor. (Ancillo y Medina, 2014, p. 14).

c)

Hojas

Son órganos laminares, de simetría bilateral de color verde, de tamaño medio de terminación triangular con base redonda. Según Amorós (2003) mencionado por Crispín (2019), nos dice que “Este órgano cumple la función nutricional de la planta siendo así el órgano principal para el desarrollo de dicha planta. Aparte de Poncirus trifoliata, las demás especies tienen hojas perennes resistiendo temperaturas bajas” (p, 19)

d)

La flor

Gonzáles y Tullo (2019) nos dice lo siguiente:

La flor aparece generalmente después del reposo invernal o tras un periodo de sequía, se inicia la formación de flores a partir de las yemas situadas en las axilas de las hojas. La diferenciación floral tiene lugar al mismo tiempo que se inicia la brotación, de modo que las yemas inicialmente dan lugar a brotes vegetativos, pero en ocasiones el meristemo apical del brote en crecimiento se transforma en una flor terminal, (p.18).

Guadalupe (2013) menciona que Iglesias et al., 2007 dice lo siguiente:

Las flores se presentan en inflorescencias con hojas (ramillete mixto) o sin hojas (ramillete floral), en forma simple (flor solitaria) o en brotes vegetativos que terminan en una flor (brote campanero). La proporción de estos tipos de brotes determina la intensidad de floración y depende de la variedad, además de ser fuertemente influenciada por las condiciones ambientales y de manejo. Las flores de los cítricos son hermafroditas y liberan polen cuando el estigma está receptivo. La autopolinización puede ocurrir antes de la antesis, o bien se puede producir polinización cruzada entre plantas genéticamente diferentes, debido al transporte de polen a través delos insectos (p. 37).

Las floraciones son muy abundantes y el porcentaje de amarre de fruto son bajos es decir que no todas llegan hasta el cuajado de frutos. La floración de los cítricos comienza y se completa en menos de un mes, las flores tiene un olor agradable porque los sépalos y los pétalos tienen glándulas de aceite por debajo de la epidermis del envés, son generalmente hermafroditas y su tamaño es variable..

(Ancillo y Medina, 2014, p. 19)

Herrera (2015) menciona que Agustí, (2003); Iglesias et al. (2007) afirma que

“En especies de cítricos como el naranjo dulce (Citrus sinensis) se llega a desarrollar hasta 250.000 flores por árbol durante el periodo de floración, pero el porcentaje de flores que cuajan y desarrollan un fruto final supera el 1%”

e)

El fruto

Tiene forma de una baya, “es de tamaño medio, esférico o ligeramente achatado, con pocas semillas, con buena maduración, abundante jugo de buen sabor, pero comúnmente algo ácido” (Hernández, 2003, p. 27). “El pericarpio es la parte más externa del fruto y está formada por el exocarpo, el mesocarpo o albedo y el endocarpo donde se inician los sacos de jugo o vesículas que abarcan la mayor parte de los frutos en desarrollo” (Gonzáles y Tullo 2019, p.18).

f)

Semilla

Estas se forman por medio de las múltiples etapas que dichos padecen.

Muestran una extensa alteración referente a sus características. No obstante, hay propiedades usuales en cada especie; ejemplificando, Además hay variaciones en la cantidad de semillas, componente que puede modificar sutilmente de año a año, la funcionalidad de la polinización y otros componentes externos, estas permanecen conformadas por 3 piezas: el embrión, los cotiledones y las cubiertas seminales. (Ancillo y Medina, 2014, p.

22)

1.4

Principales Especies de Cítricos

a)

Naranjo dulce

Son las más cultivadas algunos que pertenecen a este grupo es el Washington Navel, Piña, Jaffa, Valencia, la cascara es algo gruesa y pegado a los gajos de la pulpa, se les llama de forma general con el nombre de Cítrus sinensis.

(Gonzales, 2000, p. 31).

1.5

Naranja Valencia (Citrus sinensis)

Esta especie está dentro del grupo que “presenta maduración tardía, por sus características es excelente para procesamiento relacionados al consumo. Es alternante en su producción se cosecha de febrero a junio”

(Hernández 2003), pero también varían si el cultivo presenta riego, provocando una producción todo el año, “es la más cultivada en las regiones citrícolas del mundo, siendo las regiones subtropicales las responsables de más del 85% de la producción mundial” (Orduz y Garzón 2012). La naranja valencia pertenece al género Citrus sinensis (L.) Osbeck, conocido como: naranjo dulce. Originaria en el sur de China y el nordeste de la India. (Ancillo y Medina, 2014, p. 27).

1.6

Fenología de los críticos de la brotación y floración Tabla 1

Escala de registros fenológicos en Cítricos. Brotación y Floración

Estados de brotación: Estados de floración:

B1 Brotes iniciales.

B2 Brotes alargándose, hojas muy pequeñas florales blanquecinos

verdosos

B3 Brotes alargándose, hojas creciendo

B3-4 Brotes alargados, hojas creciendo

B4 Hojas alcanzando tamaño final, tiernas

F1.0 Botones florales iniciales, verdes.

F1.1 Botones

F2 Botones florales blancos

F3 Botones florales abriéndose

F4 Flores abiertas.

F5 Flores con caída de pétalos

B5 Brotes y hojas madurando B6 Ramitas y hojas adultas

F6 Flores con pétalos caídos

F7 Frutitos cuajados F8 Fruto maduro

Fuente: Guadalupe – 2013

Guadalupe (2013) basado en Garrán et al. (1993) nos menciona

el método de la escala BBCH registró del desarrollo fenológico (estados vegetativos y reproductivos) en la tabla N° 1 donde se asignaron escalas numéricas a los estados que se sucedieron durante la brotación y la floración, esta secuencia comprende desde la ruptura de las yemas vegetativas o mixtas hasta el desarrollo completo de las hojas y desde la aparición de los botones florales hasta el establecimiento de frutos. (p. 56-57)

1.7

Requerimiento Climático

Crece en zonas con lluvias desde 250 mm (Israel) anuales hasta 4.000 mm (Selva Peruana - Amazonia). La cantidad de agua que puede requerir varía de 600 a 1.200 mm, las de dependen de las condiciones edafológicas, clima entre otros la mayor cantidad de agua que necesita es en la etapa del desarrollo vegetativo y el desarrollo de las frutas. (Gonzáles y Tullo, 2019, P. 19). En la Selva peruana es un lugar muy favorable para el cultivo de los cítricos porque los suelos y climas que tiene favorece para su desarrollo, las precipitaciones llegas de 1,800 a 2,000 mm³ . (Proinversión, 2011, p. 1). “La naranja son susceptibles a los climas fríos, Necesita temperaturas cálidas durante el verano para una adecuada madurez de los frutos”. (Arce, 2010, p.

2).

a) Principales enfermedades de los cítricos

Los problemas de las enfermedades provocan una mala calidad y baja producción de los frutos (Orduz y Garzón, 2012). (Sáenz, et al., 2019)

Tabla 2 Principales enfermedades de los cítricos

Enfermedades Agente Causal

Antracnosis Colletotrichum acutatum, Colletotrichum gloeosporioides

Mancha de la Hoja Alternaria citri Mancha grasienta Mycosphaerella citri Pudrición por Fusarium Fusarium spp.

Podredumbre Gris Botrytis cinerea

Pudrición del Moho Negro Aspergillus niger Roña de los Cítricos Sphaceloma fawcetti

Mancha Marrón Alternaria citri

Gomosis de los Cítricos Pudrición de

Pie

Phytophthora nicotianae

Fuente: http://www.apsnet.org/online/common/names/cirtus.asp

b) Producción en el Perú

Después de Brasil, Perú se ubica en uno de los países que tiene mayor producción de cítricos (Proinversión, 2011, p. 5)

En el 2016, la producción nacional de naranja fue 491 999 TM el 10,4% del volumen, en el mes de julio se alcanza hasta (16,3%) mientras el precio al era de S/ 0.63 por Kg, Junín produjo en mayor cantidad de frutos llegando a 55%

de la producción nacional (MINAGRI, 2017 p. 4-5).

Según Agraria.pe (2019), Piura tiene 15.169 hectáreas que se utiliza para el cultivo de limones y 520 hectáreas a naranja, Junín también tiene hectáreas vinculadas a este cultivo, con 186.555 TM vendidos en el 2018 (p. 1)

Tabla 3

Principales Zonas de Producción de Naranja y mandarinas 2019- Perú

Región naranja/

ha

mandarina/

ha

total/

(has)

Ica 936 4 677 5 646

Lima 1 309 6 551 7 866

Junín 12 884 6 583 19 467

Piura 520 - 520

Cusco 2 164 1 933 2 332

Huánuco 875 139 1 014

San Martín 2 376 168 2 463

La Libertad 210 444 654

Puno 2 613 808 3 421

Otros 3 091 237 3 328

Fuente: Agraria.pe. Elaboración: ProCitricus

1.8 Caída prematura de frutos pequeños causado por C. acutatum

a)

Generalidades

Esta enfermedad consiste en la abscisión del fruto pequeño lo cual, en estudios realizados, han demostrado que se debe la capacidad de C. acutatum en realizar ácido indol acético y elementos vinculados como ácido jasmónico, contribuyendo a aumentar en cierto porcentaje los niveles de esta fitohormona en las flores enfermas. (Chung et al., 2003, p. 1). También investigaciones al respecto demuestran que el desprendimiento de etileno se triplicó y la acumulación de ácido indol-3-acético (IAA) fue hasta 140 veces en flores infectadas y después de la infección, tanto el ácido trans como el cis -12- oxofitodienoico aumentaron de 8 a 10 veces. La cantidad de ácido salicílico (SA) se duplicó en los pétalos afectados, pero no en los pistilos de igual forma los genes que codifican la ACC oxidasa o ACC sintasa, y el ácido 12-oxo- fitodienoico (12-oxo-PDA) reductasa, se expresaron en gran medida en las flores afectadas. (Lahey, et al. 2004). Se han encontrado que afectan al rendimiento hasta un 49% en el cultivo de naranja valencia en algunas zonas de México. Según el Instituto colombiano agropecuario (ICA, 2012):

Es causada por especies de hongos del género Colletotrichum, afectando de igual forma a otras especies, el Colletotrichum acutatum puede aparentemente afectar a casi cualquier planta con flor. Si las infecciones son fuertes, existe caídas de hojas. La antracnosis puede presentarse en la mayoría cítricos, es más severa en los naranjos dulces. Cuando existe formación de esporas del hongo se desprenden con la lluvia y contribuyen al aumento de la epidemia; así como los insectos, el viento y las herramientas también diseminan el patógeno, el cual puede sobrevivir en los frutos caídos y en ramas secas. (p. 12) Se sabe que ninguno de las especies y cultivares de cítricos es resistente a la enfermedad. En pruebas de patogenicidad, hubo poca diferencia en la tasa de expansión de las lesiones o la gravedad de infección en los pétalos de diferentes cítricos. Los daños en una especie o cultivar determinado pueden variar de un año a otro, dependiendo de si la mayoría de la floración se produjo durante períodos lluviosos o secos. Los cultivadores también tienen diferentes respuestas fisiológicas a la enfermedad, independientemente del período de floración. La mayoría de los cultivos de naranjas responden a la infección de los pétalos produciendo botones persistentes. Por el contrario, la infección de híbridos de mandarina provoca la abscisión de todo el pedúnculo, y se forman pocos botones persistentes. (Timmer, et. al 1994, p. 1-2)

Rodríguez, Amorín y Bellato. (2013) mencionan que “En pétalos y estigmas de cítricos el hongo da lugar a lesiones necróticas, que dan como resultado la caída de frutos” el agente causal de esta enfermedad es C. acutatum, y la pudrición en frutos lo provoca C. gloesporioides una enfermedad importante en postcosecha (Bruce y Michereff, 2013).

1.9

Taxonomía

Wharton y Diaguez (2004) mencionado por Santacruz (2013, p. 20) indica que es complicado definir bien el género Colletotrichum incluso que aún no está bien definido o mundialmente aceptado. Las dos especies C. gloesporioides y C.

acutatum, se dice que debe ser un grupo de especies. “en el caso de C.

acutatum posee 4 diferentes sub especies, incluyendo la original “descrita por Simmonds (1965).

Reino : Fungi Phylum : Ascomycota

Clase : Sordariomycetes Orden : No asignado

Familia : lomerellaceae Género : Colletotrichum

Especie : Colletotrichum acutatum

Se necesita mejores técnicas moleculares y filogenéticas para tener mayor cercanía a la información morfológicos y bioquímicos en la identidad de especies importantes de Colletotrichum. Según estudios filogenéticos fueron obtenidos complejos de especies incluidos al género Colletotrichum, siendo estos divididos en nueve clados y donde el clado acutatum comprendería 29 especies. (Damm. et al., 2012a, p. 8)

1.10

Morfología

Pitt y Hocking (2009) considera que “el género de Colletotrichum spp. agente causal de la Antracnosis se caracteriza por producir conídias dentro de acérvalos, presentan fructificación asexual en forma de cavidad y las conídias son unicelulares, hialinas, pueden ser cilíndricas o puntudas, rectas o curvas dependiendo de la especie” Colletotrichum. acutatum tiene conidios hialinos, de una solo célula que alcanza de 12 a 20 μm de largo y 4 a 6 μm de ancho, un lado es de forma circular y otro fusiforme mientras los conidios tienen ambos circulares. Las esporas se desarrollan en estructuras llamadas acérvulos, de igual manera los apresorios son redondos y de tamaño diminuto (Timmer 2000a), “las colonias son blancas a grisáceas con abundante esporulación de color naranjado. Cuando los conidios germinan sobre hojas, tallos y frutas forman apresorios oscuros o negros” (Timmer, 1999, p. 1).

1.11

Ciclo de enfermedad

El c. acutatum está presente en hojas de manera invernal en estrucuturas de conservación como los apresorios, algunos conidios están liberados al principio de la floración, las esporas que normalmente produce el hongo llegan a flores;

donde después de infectar los pétalos forman acérvulos donde después de que estos liberaran las conídias son posteriormente liberados y con los factores ambientales llevados a flores sanos. La propagación inicial sucede con las gotas de la precipitación sobre todo cuando sopla el viento, la temperatura es un aspecto secundario (Arce, 2010, p. 1).

En copas retenidas, pétalos y hojas existentes en áreas cítricas con una historia de la caída prematura de frutos son órganos en los que Colletotrichum.

acutatum sobreviven, siendo así fuentes primarias de inóculo del hongo,

posteriormente “como un desarrollo secundario se relaciona con los insectos que visitan las flores pueden llevar el hongo de una flor enferma a una sana y son responsables de la dispersión a distancias”. (Timmer, 1999, p. 1); “se ha observado que árboles con floraciones fuera de época producen esporas que refuerzan la cantidad de inóculo inicial para el inicio de cada floración” (Arce, 2010, p. 2).” Después de la temporada de floración, el hongo persiste como apresorios en cálices persistentes y otras partes de plantas vegetativas. Esos apresorios son estimulados para germinar y producir conídias secundarias para iniciar un nuevo ciclo de enfermedad” (Timmer y Peres, 2015, p. 3).

Figura 1 Ciclo de vida de Colletotrichum acutatum en cítricos. (Peres et al.

2005).

1.12

Mecanismos de infección

Según Whartan y Diaguez (2004) mencionado por Santacruz (2013):

Estas especies tienen diferentes formas de ingresar a su hospedero como de modo necrótrofo e intramural subcuticular posee tubo germinativo, apresorio, hifa intracelular e hifa necrótica secundaria. Al inicio de la infección en ataque es prácticamente los mismo de las diferentes especies de este género, se puede distinguir las estrategias de infección después que el hongo haya ingresado al tejido, pudiendo ahí determinar dos estrategias de infección. A inicios las conídias se pegan y germina por encima si hay agua para el tubo germinativo que crea un apresorio ingrese a la primera capa para

posteriormente invadir la región intramural de forma necrótica logrando así una mayor dispersión. Podemos decir que la mayor parte de patógenos de esta enfermedad presentan al inicio una forma de infección biotrófica colonizando la plasmalema y la pared celular, intracelularmente para posteriormente llega a la parte necrótica destructiva, comenzando con la existencia de una hifa necrótica secundaria

Figura 2 Estrategias de infección adoptadas por las especies de Colletotrichum spp.

Figura 3 Mecanismos de infección de Colletotrichum acutatum

Guamán (2018) menciona que Peres (2005) asegura que:

Colletotrichum acutatum tiene cuatro tipos de estrategias de infección al hospedante. La primera estrategia de infección de Colletotrichum acutatum (A) es el crecimiento biotrófico de C. acutatum con conidiación secundaria, en este caso la conídias germina para producir un apresorio y una infección quiescente, además una conídias secundaria se forma después de la germinación del apresorio, en esta estrategia no se

produce una fase necrotrófica; la segunda estrategia (B) es la subcuticular intramural necrotrófica, el desarrollo hifal se produce dentro de las paredes epidérmicas del huésped, en esta estrategia la fase biotrófica es muy corta; la tercera interacción (C) es la hemibiotrófica con infección vesicular, aquí se desarrollan hifas anchas dentro de las células del huésped seguido del desarrollo de hifas secundarias dentro y entre las células que dan lugar a la fase necrotrófica; en la cuarta estrategia (D) la colonización es biotrófica después de la penetración del hongo y se convierte en necrotrófo durante el crecimiento intercelular esto es seguido por la colonización inter e intracelular y muerte del tejido.

1.13

Sintomatología

Los pétalos al inicio presentan una coloración necrótica baja, es color naranja a café que son los síntomas iniciales de en la infección, al finalizar la floración los pétalos necrosados se pegan a la parte basal del disco floral estas son dura y seca. Si son más fuertes pueden llegar a infectar a racimos enteros de flores si el ovulo logra fecundarse se torna amarillenta y se cae esto suele suceder cuando el fruto apenas llega a un centímetro de diámetro (Anónimo 2016, p.

11)

Posterior al desprendimiento de los pétalos, el cáliz y el disco floral permanecen en las ramas los cuales son conocidos como cálices persistentes (Anónimo 2000, p. 1) “por lo tanto, signos de la enfermedad suele estar presente durante todo el año a pesar de que la infección ocurre solo durante la floración” (Timmer y Peres, 2015, p. 1).

Mcmillan y Timmer, (1988) al respecto dice que:

Todos los racimos de flores pueden ser atacados, dejando ramas enteras con pétalos anaranjados a marrones aferrados a las inflorescencias, los pétalos enfermos con las típicas manchas quedan firmemente unidos al disco basal, se secan y vuelven duros y con el color pardo rojizo persisten varios días más que los pétalos que caen naturalmente (, p.15- 17-18).

La acida de fruto ocurre desde su base esto nos permite saber si se provocó debido a la infección teniendo en cuenta que la regulación de la misma planta en dejar caer sus frutos es decir por procesos fisiológicos normales es desde la base del pedúnculo. Colletotrichum acutatum incluso afecta a frutos (Anónimo 2016, p. 11). Los botones flores suelen verse en problemas pero los las flores abiertas corren el mayor riesgo de infectarse. Ramas enteras de flores pueden ser atacadas, lo cual provocaría grandes pérdidas en la producción.

Después de la caída de los pétalos, los cálices y los discos florales, se abstienen en ausencia de frutos, comúnmente llamadas botones o tachuelas como otros investigadores lo conocen sobreviven adheridas durante la permanencia de la rama en la planta. No se forman tachuelas o botones en algunos casos, cuando las concentraciones de inóculo son altas. En las zonas tropicales, los árboles gravemente afectados por esta enfermedad fitopatógena volverán a florecer más tarde, produciendo una cosecha tardía que compensa en cierta medida las pérdidas de rendimiento. Sin embargo, en las zonas más templadas, esta floración fuera de temporada no produce frutos comercializables. (Timmer et al.

1994).

1.14

Epidemiologia

La enfermedad se produce en los trópicos y subtrópicos húmedos de las américas, las condiciones que proporcionan más de una floración de cítricos (Citrus spp.), o variedades que florecen más de una vez al año, favorecen la aparición de la enfermedad. Lamentablemente todos los cítricos son bastantes susceptibles a este tipo de hongo, tiene una forma rápida de dispersión que tan solo con la presencia de viento y gotas de agua pueden invadir grandes racimos de flores incrementando la epidemia, también son muy latentes en las ramas que quedan después de la cosecha (Kupper, et al. 2003).

Según Instituto Colombiano Agropecuario (ICA) (2012). Los factores que provocan a la aparición de la enfermedad son:

Humedad relativa elevada, presencia de agua libre sobre el follaje, Temperaturas cercanas a los 25°C, que son favorables para la producción y germinación de los conidios, falta de vigor, estrés o desbalance nutricional de las plantas y susceptibilidad de la especie o variedad. La enfermedad se propaga principalmente por salpicaduras de lluvia o por lluvia impulsada por el viento. Se sabe que las abejas, la mosca de la fruta y otros insectos que visitan las flores son portadores de conídias del patógeno, pero se desconoce su importancia en la propagación de enfermedades en condiciones naturales. (p. 24)

Los mecanismos para la transmisión a larga distancia del patógeno siguen siendo un enigma, ha aparecido en huertos bien alejados de otras plantaciones. Sospechamos que el hongo puede ser transportado hasta cierto punto por los equipos de cosecha en equipos que se mueven de huerto en huerto. Los pétalos infectados pueden ser transportados en sacos de recolección, ropa o equipo. Esto podría explicar la propagación en las naranjas

valencia, que a menudo se cosechan durante el período de floración, pero parece menos probable en otros cultivos. También puede producirse alguna propagación en el material vegetal que se lleva de un huerto a otro con equipo de cualquier tipo. Como el patógeno puede ser adquirido por las abejas, es concebible que la transmisión también pueda ocurrir por el movimiento de las colmenas de una zona a otra. (Timmer et al. 1994, p. 2)

1.15

Control

Hollier (2004) afirma que “el manejo integrado de enfermedades se define como una actividad importante y sustentable para el combate de patógenos, mediante la combinación de métodos biológicos, culturales, físicos y químicos permitidos que minimice los riesgos económicos, de salud y ambientales”

a)

Control cultural

Una de las actividades importantes en el manejo del cultivo es necesario “para complementar en el control de la enfermedad debe realizar algunas prácticas culturales como son: poda, adelanto de brotes vegetativos e inducción de floración, manejo de riego, fertilización y cosecha oportuna de la fruta”. (Medina et al., 2001, p. 188); las actividades agrícolas ayudan a disminuir la propagación del hongo, ya que permite un mayor ingreso de luz solar, esta evita la elevada humedad relativa ayudando a extinguir altos fuentes de inóculo (Orozco, et al 2017, p. 1). Hay algunas prácticas que puede ayudar a restringir el período de floración y reducir la gravedad de la enfermedad. En algunas áreas, es posible limitar riego en invierno para evitar una floración más temprana en primavera, también eliminar los árboles en declive que tienden a florecer fuera del ciclo y almacenar inóculo para la floración principal. (Timmer y Peres, 2015, p. 4).

b)

Control químico

La medida de control predominante es la aplicación de productos químicos en el momento de la floración. Se registran varios productos, con benzimidazoles, algunos triazoles y falimida son más eficientes, en lluvia prolongada, los fungicidas adquieren poca eficiencia, principalmente debido a dificultades de aplicación, y a que los productos se lavan fácilmente. (Kupper, et al. 2003). “Los fungicidas benomyl y captafol han resultado efectivos para el control de la enfermedad, pero el uso exagerado de éstos causa deterioro al medio ambiente” (Trujillo, 2010, p. 5).

Algunos fungicidas de contacto como el Captan y el maneb redujeron la enfermedad, pero no proporcionaron un alto nivel de control otros lograron un alto nivel de control, pero se necesita algo de cuatro aplicaciones también pueden ser costosas y pueden no aumentar el rendimiento si se desarrolla poca infección, retrasar las pulverizaciones puede dar lugar a una acumulación excesiva de inóculo en las primeras floraciones, lo que hace que la enfermedad sea difícil de controlar. El número de botones persistentes que se reponen del año anterior es un indicador de que tan agresivo puede ser la enfermedad en la próxima floración. (Timmer, et al. 1994, p. 1)

En estudios realizados en los campos de Brasil basado esencialmente en el uso de fungicidas aplicados en época de floración mostró que la menor expresión de síntomas en las flores y los cálices permanentes ocurrió en la aplicación de los fungicidas folpet y carbendazim en 'cabeza de alfiler' y 'cabeza de fósforo' y los aislamientos de C. acutatum fueron altamente insensibles a carbendazim, pero la piractrostrobina son sensibles. (Souza, 2009, p. 1)

c)

Control biológico

Este tipo de control es sumamente importante en cualquier cultivo, actualmente existen diferentes formulaciones que se ido desarrollando. Los productos químicos no han resultado eficientes del todo fue necesario obtener nuevos métodos, el control biológico es una forma de técnica amigable con el medio que nos rodea, existen formas de control biológico para la Caída del Fruto Pequeño. Anónimo (2016)

Se realizó un trabajo de investigación donde probaron levaduras nativas de los huertos de Padilla – México, paren la “Caída del fruto pequeño” (CFP) provocado por Colletotrichum acutatum en limón mexicano, en hojas y flores con presencia del hongo, los LCBG-03 lograron obtener un mayor porcentaje de impedir el desarrollo del género Colletotrichum alcanzando el 93% en los experimentos in vitro. Hay grandes expectativas de microorganismos antagonistas en los cultivos de cítricos. (Trujillo, 2010, p. 14).

1.16

Otras consecuencias de la caída de frutos pequeños

Existe dos fases en el desarrollo del fruto la fase I tiene lugar desde la antesis hasta el final de la caída fisiológica de frutos. Debido a un fenómeno de competencia entre los ovarios en desarrollo, aquellos mejor situados en el árbol (en brotes con hojas jóvenes) tendrán un mayor aporte nutricional y hormonal

ocasionando mayor posibilidad de cuajar. La competencia por carbohidratos es la causa principal de la caída de frutos en desarrollo. Las giberelinas son las hormonas más importantes durante esta fase, tanto que su emasculación paraliza el crecimiento del fruto en la etapa del cuajado haciendo que se caiga, estando también implicadas las citoquininas, las auxinas, el ácido abscísico y el etileno. Cuanto mayor es la capacidad de cada variedad para sintetizar giberelinas en las paredes del ovario, mayor es su capacidad de crecimiento y, por tanto, de cuajado partenocárpico. (Masejo y Martínez, 2018, p. 1)

1.17

Descripción de los productos utilizados

1.17.1

Simbio B

Es un biocontrolador microbiano con ingrediente activo Bacillus spp, no menor de 1x10 ufc viables por cada mililitro de producto poses características positivas en su forma de actuar frente a patógenos viene en una presentación comercial como solución acuosa 1l y 20l son utilizados también como inoculante de semillas, provoca su germinación, son buenos en la fertilidad del suelo, ayuda a obtener mejores cosechas y aumenta la calidad, la aplicación puede ser a la copa o a la raíz, es compatible con la mayoría de plaguicidas de uso frecuente excepto de composición cúprica ECOBAF S.A.C., 2017)

a)

Mecanismos de acción de Bacillus spp

Esta bacteria tiene mayor actividad bioquímica los cuales son aprovechados en el control biológico por las industrias de sector agrario. Son bacilos aerobios y anaerobios facultativos, gram positivos, forman endosporas con morfología oval o cilíndrica los cuales les ayudan a sobrevivir en condiciones adversas. La acción biocontroladora sus especies más representativas Bacillus brevis y Bacillus subtilis son evidenciadas por los metabolitos antibióticos que producen, los cuales pueden actuar de forma antagónica en ciertos microorganismos patógenos. (Layton, et al., 2011, p. 179). Las cepas de Bacillus producen apartes de los compuestos antimicrobianos, las enzimas líticas y los VOCs, las cuales actúan de forma favorable en las plantas volviéndolas más vigorosas (Pedraza; et al., 2019, p. 9)

1.17.2

Simbio S

Es muy útil como control biológico igual que el anterior producto es utilizado como inoculante de semillas, fertilizante biológico del suelo, protege a los cultivos, también aumenta el rendimiento de los cultivos y la calidad.

El ingrediente activo es Pseudomonas spp., no menor de 1x10 ufc viables por cada mililitro de producto, son de 1L y 20L. posee también ácidos orgánicos, hace que las plantas sean más vigorosas porque fortalece el sistema inmune al inducir la resistencia sistémica (RSI), es recordable aplicar de 1 a 2 dosis por hectárea puede ser a la copa o a la raíz. (ECOBAF S.A.C., 2017).

b)

Generalidades y mecanismo de acción de Pseudomonas spp Estas son bacterias de vida libre se encuentran en el agua y en el suelo. Son uno de los grupos más extendidos en la naturaleza y son muy adaptables a cualquier ambiente, este género tiene cerca de 100 especies. Entre las más representativas son Pseudomonas aeruginosa y P. fluorescens o P. putida.

Todas las bacterias del género pertenecen pues a la familia Pseudomonadaceae, dentro del orden taxonómico Pseudomonadales. Incluido a su vez en la clase: Gamma proteobacteria, en el filo: proteobacteria del reino:

bacteria. Las bacterias del género Pseudomonas son gram negativas usualmente tiene forma de bacilo, bastón ligeramente curvado en general estos bacilos son móviles mediante uno o más flagelos situados en uno de sus extremos. (Contreras, 2014).

Las Pseudomonas incentivan al crecimiento vegetal y evitan el desarrollo de microorganismos fitopatógenos, también presentan una alta tasa de reproducción y una alta actividad de antagonismo (Nieto, 2016)

Moreno et al., (2018) menciona que Srivastava, (2012) y Weller (2007) dicen que las Pseudomonas spp., y también los Bacillus spp. y Trichoderma spp., son microorganismo cosmopolita en el suelo. Este grupo puede adaptarse fácilmente a cualquier tipo de ambiente, es una bacteria gramnegativa y tiene la capacidad producir sustancias como: antibióticos, sideróforos, compuestos volátiles que afectan a microorganismos fitopatógenos de igual forma son capaces de promover el desarrollo vegetal y actúa de forma positiva en el sistema inmune (p.164,169)

2. MATERIALES Y MÉTODOS

2.1.

Localización del experimento

Este trabajo de investigación se realizó en el fundo Francia- La Merced, distrito de Chanchamayo, provincia de Chanchamayo, departamento Junín, con coordenadas de altitud de 751 msnm latitud Sur 11°05'03.8" y longitud oeste 75°20'15.5" (Google earth.)

2.2.

Metodología

2.2.1

Registros meteorológicos

Los registros de los datos meteorológicos (temperatura, precipitación y humedad relativa) fueron obtenidos de la estación meteorológica “Pichanaki”

provincia Chanchamayo a través de

https://www.senamhi.gob.pe/?&p=estaciones. las cuales corresponden al intervalo del tiempo de investigación (fecha: 21/10/18- 11/14/18)

Figura 4 Temperatura máxima y mínima TEMPERATURA ( C°)

MAX MIN

40.00 35.00 30.00 25.00 20.00 15.00 10.00 5.00

Figura 5 Porcentaje de la humedad relativa

Figura 6 Precipitación en mm

HUMEDAD RELATIVA (%)

120 100 80 60 40 20

PRECIPITACION ( mm)

90 80 70 60 50 40 30 20 10

2.2.2.

Material Experimental

Este trabajo se realizó en el fundo “Francia” donde se ubican los cultivos de naranja valencia con aproximadamente 25 años de edad productiva, se trabajó con 30 árboles que formaron una unidad experimental, para poder diferenciarlas se realizó el marcado con pintura en las bases de los tallos a toda la población (180 árboles).

Figura 7 . Lugar del estudio. (Citricus sinensis) - Fundo Francia

2.2.3.

Descripción de los Tratamientos

Las dos aplicaciones se realizaron con un intervalo de 13 días entre ambas, se usó una mochila de fumigar con capacidad de 20 L, cada planta fue aplicado aproximadamente con 4 litros de la solución directamente a los botones florales (F1.1) y a las flores abiertas (F4)

Tabla 4

Descripción de los tratamientos Tratamient

o

Ingrediente Activo

Producto Dosis Repeticiones

T0 Sin aplicación --- --- 2

T1 Pseudomonas spp

Simbio S 36ml/20l 2

T2 Bacillus spp Simbio B 36ml/20l 2

Fuente: Elaboración Propia

2.2.4.

Diseño experimental

En este trabajo de investigación se utilizó el método de observación, evaluación directa y estimación con un diseño estadístico de bloques completamente al azar y un testigo sin aplicación.

Modelo estadístico lineal para un diseño de bloques completamente al azar (BCA). Las evaluaciones del experimento fueron presentadas mediante una ecuación lineal en los parámetros, el conjunto conforma el modelo para el diseño de bloques completos al azar:

Donde:

Yij = observaciones cualesquiera dentro del experimento.

μ = media poblacional.

Ƭi = efecto aleatorio del i-enésimo tratamiento.

Bj = efecto aleatorio del j-enésimo bloque o repetición.

ϵij = error

experimental. Para:

i=1,2 tratamientos.

j=1,2 repeticiones o bloques

Yij= µ + τ

i

+ β

j

+ ε

ij

ANÁLISIS DE VARIANZA (ANVA)

2.2.5.

Unidad experimental

Cada unidad experimental estuvo constituida por 30 árbol de naranja valencia con 4 metros entre filas y 4 metros entre planta, 90 árboles por repetición y un total de 60 árboles por tratamiento. Para las evaluaciones se tomaron 5 árboles como muestra de por unidad experimental dejando el efecto borde y 5 inflorescencia de cada árbol.

2.2.6.

Croquis experimental

Figura 8 Croquis experimental

2.2.7.

Manejo del experimento

•

Cada uno de los árboles de la población fueron marcado con una pintura roja en los tallos para diferenciarlos por tratamiento y repetición, mientras las inflorescencias de las muestras fueron marcadas con una cinta

•

Se realizaron dos aplicaciones con los productos biológicos en estudio; la primera el 19 de octubre del 2018 en botones florales blancos (F1.1) y la segunda el 2 de noviembre del mismo año, en plena floración (F5) como se aplican la mayoría de los productos químicos.

•

Se evaluaron las incidencias de la enfermedad en 5 árboles por cada unidad experimental siendo un total de 30 árboles y 5 inflorescencias por cada una haciendo un total de 150 inflorescencias evaluadas cada dos días.

•

Se evaluaron la severidad de 150 inflorescencia cuando la mayoría de las flores estaban abiertas.

•

Se contaron los cálices persistentes presentes en las inflorescencias evaluadas después de un mes de la última evaluación (F7)

•

Se contaron el número de frutos/árbol de los árboles evaluados (F8)

2.2.8

Variables evaluadas

a)

Incidencia de la enfermedad

Se evaluó la incidencia de Colletotrichum acutatum en 50 inflorescencias entre ramilletes mixtos y ramilletes florales para cada tratamiento. Se observó los síntomas en la etapa floral. Se realizó un total de 9 evaluaciones. Si una flor o botón floral tenía síntomas mencionados anteriormente se consideró infectada, la evaluación fue en su mayoría F2 hasta F4. Se utilizó la siguiente fórmula para dicha variable:

𝑛ú𝑚𝑒𝑟𝑜 𝑑𝑒 𝑓𝑙𝑜𝑟𝑒𝑠 𝑖𝑛𝑓𝑒𝑐𝑡𝑎𝑑𝑎𝑠 𝑝𝑜𝑟 𝑡𝑟𝑎𝑡𝑎𝑚𝑖𝑒𝑛𝑡𝑜 𝑛ú𝑚𝑒𝑟𝑜 𝑑𝑒 𝑓𝑙𝑜𝑟𝑒𝑠 𝑡𝑜𝑡𝑎𝑙 𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑒𝑎𝑑𝑎𝑠

𝑖𝑛𝑐𝑖𝑑𝑒𝑛𝑐𝑖𝑎 (𝐼) =

Figura 9 flores de Citricus sinensis con síntomas de Colletotrichum acutatum

b)

Severidad en flores abiertas

Las evaluaciones de esta variable se desarrollaron a partir de la 6ta evaluación de incidencia, también en ramilletes mixtos y ramilletes florales, cuando la mayoría de flores estaban abiertas (F4), para lo cual se utilizó la escala propuesta por Juan Hernández Osorio (2016). Haciendo un total de 4 evaluaciones antes de que ocurra la mayor parte de caída pétalos de las flores (F5)

Figura 10 Escala de severidad diagramática demuestra el porcentaje de área afectada por Colletotrichum spp. Tejido Sano color negro, tejido Afectado, Blanco. (Hernández,

2016)

c)

Número de cálices persistentes

El porcentaje de los cálices persistentes se evaluó un mes después de la última evaluación, considerando la cantidad de florales por inflorescencia tomados en el momento que la gran mayoría de las flores estaban abiertas (6°ta evaluación) se diferenció de la caída fisiológica porque el fruto cae con todo el pedúnculo y no forman cálices persistentes como se mencionó anteriormente.

Se contabilizó los cálices persistentes causados por los botones desprendidos sin haber abierto a causa del hongo, las flores necrosadas adheridos al cáliz junto con los frutos pequeños con síntomas de la enfermedad, los receptáculos con cálices y pedúnculos que quedaron adheridas a la rama después que los frutos pequeños infectados se hayan desprendido

d)

Estimación de frutos pequeños caídos

Para la estimación de frutos pequeños caídos se tuvo en cuenta dos importantes datos, la primera que unas especies de cítricos como el naranjo dulce (Citricus sinensis) puede desarrollar hasta 250.000 flores por árbol, y la segunda información de Timmer y Zitko (1995) quienes nos menciona que se estima que de 5 a 6 frutas son perdido por cada 100 copas retenidas a causa del C. acutatum

e)

Número de frutos/ árbol

Se contabilizó la cantidad de frutos finales presentes de todos los árboles, en el mes de junio del 2019 antes ser cosechadas y se fueron compararon los datos de los tratamientos con los árboles no tratados (t0).

2.2.9

Análisis Estadístico

Los datos de cada evaluación, se procesaron con el software Infostat (2008), utilizando un análisis de varianza (ANOVA) simple y previa comprobación de los supuestos paramétricos de normalidad. Las variables se evaluaron bajo un diseño de Bloques Completamente al Azar (DBCA). Las diferencias de medias entre los tratamientos para cada variable se determinaron aplicando la prueba de Tukey a un nivel de significancia de 0.05.

3. RESULTADOS Y DISCUSIÓN

3.1. Incidencia de la caída de frutos pequeños en flores de la naranja var.

valencia (Citricus sinensis) causado por Colletotrichum acutatum

Figura 11 Progreso de la incidencia en flores de naranja para cada tratamiento durante el tiempo de evaluación. Elaboración propia

Tabla 5

Prueba de promedios según Tukey- porcentaje de incidencia Tratamiento Descripción Ingredient

e Activo

Incidenci a (%)

media SIG.

T1 Simbio S Pseudomon

as spp

23.5 9.88 A

60.00 50.00 40.00 30.00 20.00 10.00 0.00

T0= testigo T1=simbio S T2= simbio B

% DE INCIDENCIA

T2 Simbio B Bacillus spp 22.5 8.84 A

T0 Sin

tratamiento

-- 54.7 24.95 B

ALS 0.05 – 9.08899. Elaboración: propia

Realizando la prueba paramétrica de normalidad de Kolmogorov Smirnov (p>0.05) los datos de la incidencia siguen una distribución normal (p=0.8585), los factores meteorológicos (temperatura, humedad relativa y precipitación) fueron favorables para el desarrollo y proliferación del hongo (Colletotrichum acutatum), el Simbio B (1 x 10 ufc/ml de Bacillus spp,) obtuvo un menor porcentaje de incidencia de la enfermedad (alcanzó como máximo 22.5 %), mostrando una mejor eficiencia en el control de los síntomas florales. La antibiosis es un mecanismo importante e interesante en la interacción de Bacillus sp., con C. acutatum, demás los metabolitos producidos por estas bacterias son termoestables y mantienen sus actividades, siendo esta una característica llamativa para utilizar esta bacteria en el control biológico como lo menciona Kupper et al. (2003) quien también realizó un estudio en árboles de naranja dulce usando tratamientos con Bacillus subthis y Bacillus sp., para el control de C. acutatum en campo (1,2 x 10⁷ células / ml), los cuales mostraron la capacidad de reducir los síntomas florales coincidiendo con nuestros resultados, de la misma forma reafirmamos esta conclusión con la investigación que realizó en el 2009 con 15 aislamientos de Bacillus subtilis con (1x10⁸ células / ml) para el control de C. acutatum en flores desprendidas de lima ácida ´Tahiti' fueron eficientes; donde algunos presentaron mayor número de pétalos sanos, cuyas tasas de pétalos asintomáticos fueron 83; 92; 92 y 97%, en nuestro caso fueron de 77, 37% con estas bacterias, este grupo de bacterias actúan más positiva de forma curativa, en detrimento del control preventivo de C. acutatum (Kupper et al., 2009), también aplicaciones de Bacillus spp. (2 × 10⁸ UFC mL^-1) demostraron ser eficientes al reducir la incidencia del 94% en semilla de altramuz andino (Lupinus mutabilis) con antracnosis causado por C. acutatum (Mendizábal, 2015).

La figura 10, nos representa la curva de progreso de la incidencia, esta aumenta conforme pasa el tiempo, en el testigo se provocó la rápida activación y dispersión del hongo incluso infectando a botones florales blancos (F2), probablemente por las lluvias relativamente seguidas durante el proceso de floración. (Silva, et al. 2014) nos menciona que la caída de frutos pequeños de los cítricos muestra un comportamiento epidemiológico diferente a otras enfermedades de antracnosis de la fruta que se propagan predominantemente a través de esporas dispersas por salpicaduras, el hallazgo de la distribución

de árboles enfermos y las tasas de avance con el tiempo indican que el C.

acutatum tiene una alta eficiencia de dispersión que está potencialmente relacionada con un mecanismo alternativo de diseminación del inóculo, (Ciampi, et al. 2014) sugiere la dispersión natural de propágulos de hongos, con la posible participación de polinizadores. ya que también detectó una expansión significativa de la población, que fue consistente con un aumento en la densidad de hospedante asociado con la expansión de cultivos hacia nuevas áreas.

El T1 (Simbio S (Pseudomonas spp) también redujo la incidencia, alcanzando como máximo 23.5%, ya que estas bacterias también produjeron sustancias de sobrevivencia actuando en las hifas del patógeno que redujeron la dispersión de conidias incluso existe cepas como la L22-9, que mostraron actividades antifúngica contra varios fitopatógenos, tuvieron grupos de genes en el genoma que sintetizan metabolitos antimicrobianos como la síntesis de 2,4- diacetilfloroglucinol y cianuro de hidrógeno sintasa (Liang, 2020), también este género tubo una eficiencia moderada a alto al suprimir la incidencia de la enfermedad bacteriana del tizón de fuego durante la floración en perales y manzanos (Stockwell, 2007)

3.2.

Severidad en flores abiertas de la caída de frutos pequeños causado por Colletotrichum acutatum

Figura 12 Evolución de la severidad (%) en flores abiertas

50 40 30 20 10

5/11/2018 8/11/2018 11/11/2018 14/11/2018

T0= testigo T1=simbio S T2= simbio B

% DESEVERIDAD

Tabla 6

Prueba de promedios de severidad en flores abiertas según Tukey Tratamiento Descripción Ingrediente

Activo

Severidad (%)

Sig.

T1 Simbio S Pseudomonas

spp

13.38 A

T2 Simbio B Bacillus spp 11.22 A

T0 Sin tratamiento --- 36.55 B

ALS 0.05 – 6.37527. Elaboración: propia

La invasión de la enfermedad es relativamente rápida, como se observa en la figura 11, siendo más notable en las flores de los árboles sin tratamientos que en promedio tuvo 36.55% de severidad, esto debido como afirma Feichtenberger et al., 1997 mencionado por Kupper (2009) que la existencia de una película de agua en la superficie los pétalos siendo este un órgano muy susceptible , que dura 18 horas después de la deposición de los conidios, ya es suficiente para su germinación y establecimiento llegando a colonizar incluso en un 100% del área floral. Realizando la prueba paramétrica de normalidad de Sapiro Wilks (p>0.05) los datos de la severidad tienen una distribución normal (p=0.0607) y realizando la prueba de significancia de Tukey al 5% se observa que los productos aplicados en el tratamiento 1 y 2 presentan menor porcentaje la severidad, ambos presentan diferencia significativa con el testigo, el Simbio B con el ingrediente activo Bacillus spp llegó en promedio 11.22% siendo el más eficiente en controlar la severidad al igual que la incidencia demostrándonos que la amplia gama de metabolitos producidos por estas bacterias actuar frente a hongos fitopatógenos, los cuales se encuentran los antibióticos, los lipopéptidos, las enzimas líticas y los sideróforos. (Rojas, et al. 2017, p. 2;

Layton, et al., 2011; Pedraza, et al., 2019), el Simbio S con ingrediente activo Pseudomonas spp (1 x 10 ufc/ml) en promedio las flores alcanzaron hasta un 13.38% de severidad también por la producción de metabolitos antimicrobianos que produce dichos microorganismos que actúan como un mecanismo para el control biológico (Cueva, 2005).

Un producto químico para Colletotrichum acutatum elimina al hongo afectando a las tubulinas de las células y las proteínas ubicadas en el citoplasma, impide el proceso de la mitosis y el crecimiento micelial (Rondón, et. al. 2017) siendo una forma más rápido en el control de la infección, mientras la corta fase previa a la penetración del hongo, un período en el que permanece vulnerable a los antagonistas, puede limitar la eficacia de cualquier controlador biológico, (Kupper, 2003) también porque a campo abierto a diferencia de un invernadero o cultivo invitro están expuestos a cambios rápidos del clima, pero el mecanismo de acción presentado por Bacillus spp y Pseudomonas spp, abre la posibilidad de un control más eficaz e inmediato del patógeno. Además, dado que los antibióticos se componen de múltiples acciones, existe la posibilidad de que actúen no solo en el control de la caída de frutos pequeños, sino también en el control de enfermedades que ocurren en frutos cítricos jóvenes, como verruga de naranja dulce, melanosis y punto negro. también su eficiencia depende de la capacidad que tiene al adaptarse rápido a las condiciones climáticas de campo (Kupper, 2003; Moreno et al., 2018)

3.3.

Cálices persistentes Tabla 7

Porcentaje de cálices persistentes en las ramas después de la caída de frutos

Tratamiento

Ingrediente

Activo C.P (%) Sig.

T2 Simbio

B

Bacillus spp 11.30 a

T1 Simbio

S

Pseudomonas spp 14.13 a

T0 Testigo --- 43.79 b

ALS 0.05 – 7.78965 C.P= cálices persistentes.

Fuente: Elaboración Propia