INFORME FINAL BIOTECNOLOGIA

INFORME FINAL DE BIOTECNOLOGIA

Biorremediación de suelos contaminados con hidrocarburos utilizando procesos biotecnológicos para la protección y restauración del mismo.

JHON RODRIGUEZ

SENA

CONTROL AMBIENTAL 5TGCAN – 4

OBJETIVO GENERAL

Apropiar conocimientos técnicas básicas de bioquímica, biología molecular y biotecnología de los procesos de biodegradación y biorremediación producida por microorganismos en el componente suelo.

OBJETIVOS ESPECÍFICOS

Establecer bio indicadores de contaminación en el componente suelo. clasificar microorganismos empleados en procesos de biorremediación de suelos.

operar herramientas biotecnológicas para la prevención de la contaminación en suelos.

Determinar la cantidad de grasas y aceites presentes en una muestra de suelos contaminados con G y A y TPH’S y su proceso de remediación.

RESUMEN

Se aplicó la técnica de Biorremediación a un suelo impactado con hidrocarburos y grasas de un reconocido sector de mantenimiento vehicular. El seguimiento del tratamiento se realizó mediante análisis químicos y microbiológicos utilizando técnicas de siembra, caracterización, valoración y gravimétricas. Semanalmente durante 6 meses. El suelo fue sometido a una serie de análisis antes, entre y después de aplicar el proceso biotecnológicos mediante la observación macroscópica y microscópica y cambio en su estructura físico –química.

INTRODUCCIÓN.

La Biorremediación es una técnica innovadora que se ha desarrollado en las décadas de los 80 y 90, la cual ha sido aplicada exitosamente en el tratamiento de suelos contaminados con hidrocarburos. Se caracteriza por ser una técnica de bajo costo de operación. La aplicación de este tipo de tecnología ha encontrado cierta resistencia de aplicación por el tiempo que demanda completar un proceso hasta obtener las metas de limpieza deseadas.

La Biorremediación es considerada como la vía más efectiva para la remediación de suelos contaminados, en contraste a alternativas más costosas como la incineración. Los tratamientos biológicos de degradación en suelos pueden ser eficientes y económicos si las condiciones de biodegradación son optimizadas (Álvarez, 2001) (Belloso, 1998) (Cursi y Calleja, 2000). Se define como Biorremediación al proceso de aceleración de la tasa de degradación natural de hidrocarburos por adición de fertilizantes para provisión de nitrógeno y fósforo (Ercolli, y Gálvez, 2001). El proceso de degradación requiere control de variables operacionales tales como nutrientes, humedad y oxígeno.

Esta técnica puede ser aplicada in-situ, en el lugar donde se encuentra el suelo contaminado, o ex-situ, cuando el suelo se traslada a una instalación para su tratamiento. El tratamiento ex-situ de suelos, sedimentos y otros sólidos contaminados con hidrocarburos se puede realizar en un variado número de procesos en fase sólida y en fase lodo. Los procesos en fase sólida son aquellos en donde el suelo se trata con un contenido de agua mínima. En los casos de los procesos en fase lodo se suspende el suelo en agua (Saracino, 2001).

La actividad de los microorganismos presentes en el suelo se puede favorecer mejorando determinadas condiciones edáficas, añadiendo nutrientes, agua, oxígeno y modificando el pH. Otra forma es la introducción de nuevas especies para aumentar la concentración de microbiota presente.

La medición del CO2 producido por unidad de tiempo en un área determinada es una medida indirecta del proceso biodegradativo ya que tiene como objetivo evaluar la actividad respiratoria de los microorganismos del suelo durante el proceso de degradación de los compuestos orgánicos (Infante, 2001).

remanente se denomina "hidrocarburos totales de petróleo" (TPH, total petroleum hydrocarbon) y es considerado biodegradable. La fracción polar y los hidrocarburos totales de petróleo, juntamente, se nombran petróleo total, el cual puede ser estimado gravimétricamente por evaporación de los solventes usados para la extracción (Ercoli, 2001).

El objetivo de este trabajo es ofrecer los resultados obtenidos en la aplicación del proceso de Biorremediación a un área de suelo afectado utilizando la técnica de bioestimulación de los microorganismos autóctonos del lugar.

DEFINICIÓN DEL PROBLEMA AMBIENTAL

El componente suelo, pilar de la vida, se ha consolidado como medio indispensable para cualquier alternativa de futuro. No existe actividad humana: económica, industrial, social o política que pueda prescindir de este vital recurso. Sobre esta realidad, se han desatado todas las vocaciones, ideas y acciones para su control, uso y dominio. La esencialidad para la vida y su combinación de usos, generan grandes conflictos entre diversos sectores e intereses de la sociedad. Sin embargo, las inundaciones, las desertificación, la pobreza, la contaminación, el tratamiento inadecuado de los desechos y la insuficiencia de infraestructuras para la desinfección del suelo plantean serias amenazas a la salud pública, al desarrollo económico y social de los países en vías de desarrollo. 1

En ese orden de ideas diversas técnicas biotecnológicas permiten resolver, de diferentes y novedosas maneras, el problema de la contaminación del suelo. Se pueden utilizar diversos microorganismos para afrontar problemas de tratamiento y control de la contaminación química en los ecosistemas, ya que algunos de ellos, principalmente bacterias, tienen la capacidad de eliminar del medio o degradar con enzimas gran número de compuestos tóxicos y peligrosos.

En la actualidad en los laboratorios se están creando bacterias, levaduras y enzimas específicas para conseguir la degradación de los residuos mediante técnicas de siembra y especialización de microorganismos.

Dentro del contexto antes mencionado el proyecto evaluado por el grupo conformado por Freyber chaparro y John Rodríguez perteneciente a la especialidad de control ambiental 5TGCAN – 4 en el modulo de aplicar los microorganismos en procesos de descontaminación ambiental, desea primero sentar las bases de una caracterización de un lodo o suelo con características de contaminación definidas específicamente por hidrocarburos, seriamente afectado por actividades antrópicas y realizar el seguimiento y verificación del

comportamiento de diferentes especies de microorganismos en presencia de este medio, y posteriormente verificar la adaptabilidad de los mismos al medio , y el grado de purificación y porcentaje de remediación de la contaminación que estos ejercen bajo varias condiciones como lo son las físicas y químicas del suelo.

JUSTIFICACION DEL PROYECTO El proyecto pretende encontrar microorganismos y especializarlos bajo condiciones predeterminas en el laboratorio, esto con el fin de encontrar una cepa capaz de remediar un lodo o suelo severamente impactado con hidrocarburos y grasas provenientes de actividades ejercidas en el parque automotor, teniendo en cuenta que la cepa, primero debe adaptarse al medio en el cual se pretende que trabaje para conocer mediante bioensayos el ciclo de vida los microorganismos y las

condiciones más favorables para su crecimiento desarrollo y reproducción para que posteriormente remedie y purifique la contaminación presente en el suelo contaminado a tratar, puesto que el objetivo esencial del ejercicio es poder garantizar el tratamiento del recurso mediante la aplicación de la biotecnología.

MARCO TEÓRICO

Los tratamientos biológicos representan usualmente la mejor alternativa. Además de no implicar los costos de equipos, materiales, productos y maquinaria necesarios para los tratamientos físicos y químicos, pueden aplicarse sobre el sitio mismo de la contaminación, sin exigir el desplazamiento de los suelos contaminados. El tratamiento biológico de descontaminación recibe también el nombre de biorremediación.

Los hidrocarburos provenientes de los productos petroleros pueden funcionar como fuente de carbono y de energía para el crecimiento de diferentes microorganismos que pueden de este modo, colonizar los sitios contaminados y degradar el agente contaminante (Thomassin-Lacroix et al., 2002).

Según si el tratamiento biorremediativo se efectúe directamente sobre el sitio contaminado o en otro sitio después de haber excavado los suelos contaminados, se hablará respectivamente de una biorremediación in situ o una ex situ. Considerando que el desplazamiento del suelo contaminado puede desequilibrar la capacidad autorremediante de los ecosistemas, se recomienda por lo general la biorremediación in situ, considerada también como el tratamiento menos invasor (Harris, 1997). Puede llevarse a cabo bajo tres formas:

 La bioatenuación: seguimiento (monitoreo y documentación) de la degradación natural por la flora y fauna endógenas al sitio contaminado (Harris, 1997).

 La bioestimulación: estimulación de las micropoblaciones nativas por adición de nutrientes esenciales para su actividad metabólica (principalmente una fertilización inorgánica a base de nitrógeno, fósforo y minerales u orgánica a base de compost) (Swannell et al., 1999).  La bioaumentación : aporte de biomasa exógena especializada para la

degradación de los contaminantes (Balba ; Al-Awadhi ; Al-Daher, 1998).

La bioatenuación es la más favorable de las biorremediaciones visto que deja la recuperación del equilibrio natural en manos de las poblaciones autóctonas. Sin embargo, la persistencia de algunos compuestos tóxicos en el ambiente permite suponer que la diversidad metabólica natural de los microorganismos autóctonos no resulta suficiente para proteger al suelo de algunas contaminaciones (antropogénicas) y el ser humano debe entonces intervenir (Pieper ; Reineke, 2000).

La biorremediación in situ presenta las ventajas siguientes:

 Es utilizable en el lugar mismo de la contaminación sin causar perturbaciones irreversibles en los alrededores; favorece la entera destrucción de la contaminación sin causar perturbaciones colaterales.  Elimina las contaminaciones antes consideradas recalcitrantes (poco

biodegradables).

 Se adapta a la heterogeneidad de la contaminación, a sus importantes concentraciones así como a la variabilidad de las condiciones ambientales durante la aplicación del tratamiento (Timmis; Pieper, 1999).

Todos los parámetros de descomposición son examinadas con el fin de obtener un estudio completo de cada caso de contaminación y poder dirigir con él, la biorremediación en el sitio (Harris, 1997).2

MATERIALES, INSTRUMENTOS, REACTIVOS REQUERIDOS Y MEDIOS DE SIEMBRA

REACTIVOS

 Hexano (C6H14);

 Ácido Sulfúrico concentrado (H2SO4);

 Suspensión de tierra de diatomeas-sílice o tierra Sílice de aproximadamente 10 g/L de agua;

MATERIALES

 Cartuchos de extracción de celulosa para Soxhlet;  Papel filtro con tamaño de poro fino;

 Embudo Büchner.  Desecador.

 Beakers.  Pipetas.  cajas Petri  Tubos

EQUIPO

 Equipo de extracción Soxhlet;

 Bomba de vacío u otra fuente de vacío;  Estufa eléctrica capaz de mantener 103°C;  Maya eléctrica capaz de mantener 80°C;  Microscopio

 Nevera  Desecador  autoclave

MEDIO DE CULTIVO

 Agar Sabouraud

Indicación: es utilizado para el aislamiento e identificación de hongos (formas miceliares y formas levaduriformes).

Composición: por litro, 10 gramos de mezcla de peptonas de caseína y carne, entre 20 y 30 gramos de glucosa (si lleva 40 gramos el medio se llamará Sabouraud glucosado) y entre 15 y 17 gramos de agar.

Modo de utilización: En general, todos los hongos crecen muy bien en medios muy azucarados (por ejemplo, las mermeladas nunca se pudren, se enmohecen). Estos medios con alta proporción en glucosa van a inhibir el crecimiento de las bacterias facilitando el crecimiento de hongos. En este sentido tras la siembra por agotamiento o estría de las placas Petri o tubos se incuban preferentemente a 28ºC en estufa de cultivo durante 24-48 horas.

 Agar Cetrimide

Indicación: Es un medio selectivo utilizado para el aislamiento de Pseudomonas aeruginosa.

Composición: Digerido pancreático de gelatina 20,0 g, Cloruro de magnesio 1,4 g, Sulfato de potasio 10, g, Agar 13,6 g, Bromuro de N-cetil N,N,N- Trimetil amonio (cetrimide) 0,3 g, Glicerina 10,0 mL, Agua destilada 1.000 mL.

Preparación: Suspender los ingredientes en el agua destilada. Añadir 10 mL de glicerina y calentar agitando frecuentemente y dejar hervir hasta disolver completamente. Esterilizar en autoclave a 121ºC (15 lb de presión) durante 15 minutos. Enfriar entre 45ºC y 50ºC, colocar 20 mL de medio por cada placa y dejar solidificar. pH final 7,2 ± 0,2

 Agar Plate Count.

Indicación: Es un medio para el examen bacteriológico de comida, agua, leche, y otros productos lacteos.

Composición: Triptona (5g), extracto de carne (2,5g), Dextrosa (1g), agar (15g) y agua destilada.

Preparación: Disolver 2,35g de medio de cultivo en polvo en 100ml de agua destilada. Esterilizar en autoclave a 121ºC (15 lb de presión) durante 15 minutos. Enfriar entre 45ºC y 50ºC.

REVISIÓN DE DOCUMENTACIÓN PRIMARIA

 Identificación de una cepa bacteriana.

 Estándar método procedimientos para G y A.

Cada sustancia química debe tratarse como peligro potencial a la salud. La exposición a estas sustancias debe reducirse al menor nivel posible. Se sugiere que el laboratorio realice monitoreos de higiene ocupacional de cada reactivo a los que pueda estar expuesto el analista y que dichos resultados se encuentren a su disposición.

Este método puede no mencionar todas las precauciones de seguridad asociadas con su uso. El laboratorio es responsable de mantener un ambiente de trabajo seguro y un archivo de las Normas de seguridad respecto a la exposición y manejo seguro de las substancias químicas especificadas en éste método. Debe tenerse un archivo de referencia de las hojas de información de seguridad el cual debe estar disponible a todo el personal involucrado en estos análisis.

Mientras se trabaje con cualquiera de los reactivos químicos descritos en este método, deberá usarse: bata, tapabocas o mascarilla contra disolventes, lentes de protección, cofia y guantes.

METODOLOGIA

PROCEDIMIENTO PARA ANALISIS DE GRASAS Y ACEITES

1. Medir el pH de las muestras el cual debe ser menor de 2, si no tiene este valor acidifique con ácido clorhídrico 1:1 ó ácido sulfúrico 1:1.

2. Para muestras con un pH menor de 8 unidades generalmente es suficiente con adicionar 5 ml de ácido clorhídrico 1:1 ó 2 mL de ácido sulfúrico 1:1.

3. Preparar los matraces de extracción introduciéndolos a la estufa a una temperatura de 103°C - 105°C, enfriar en desecador y pesarlos, rep etir el procedimiento hasta obtener el peso constante de cada uno de los matraces. 4. Preparar el material filtrante colocando un papel filtro en el embudo Büchner, colocar el embudo en un matraz Kitazato y agregar 100 mL de la suspensión de tierra de diatomeas sílice sobre el filtro, aplicar vacío y lavar con 100 mL de agua.

5. Transferir el total de la muestra acidificada al embudo Büchner preparado aplicando vacío hasta que cese el paso de agua. Medir el volumen de la muestra.

6. Con ayuda de unas pinzas, transferir el material filtrante a un cartucho de extracción. Limpiar las paredes internas del embudo y el frasco contenedor de la muestra, así como la parte interna de la tapa del frasco con trozos de papel filtro previamente impregnados de disolvente (hexano) tener cuidado en remover la película de grasa y los sólidos impregnados sobre las paredes; colocar los trozos de papel en el mismo cartucho.

7. Secar el cartucho en una estufa a 103°C - 105°C por un período de 30 min. Transcurrido este período colocar en el equipo Soxhlet.

9. Colocar el equipo de extracción sobre la parrilla de calentamiento, controlar la temperatura del reflujo y extraer a una velocidad de 20 ciclos/hora durante un período de 4 Una vez terminada la extracción retirar el matraz del equipo Soxhlet, y evaporar el disolvente.

10. El matraz de extracción libre de disolvente se coloca en el desecador hasta que alcance la temperatura ambiente.

11. Pesar el matraz de extracción y determinar la concentración de grasas y aceites recuperables.

12. Analizar un blanco de reactivo bajo las mismas condiciones de la muestra.

PRUEBAS DE IDENTIFICACIÓN DE BACTERIAS TSI

Medio universalmente empleado para la diferenciación de enterobacterias, en base a la fermentación de glucosa, lactosa, sacarosa y a la producción de ácido sulfhídrico.

Fundamento

En el medio de cultivo, el extracto de carne y la pluripeptona, aportan los nutrientes adecuados para el desarrollo bacteriano. La lactosa, sacarosa y glucosa son los hidratos de carbono fermentables. El tiosulfato de sodio es el sustrato necesario para la producción de ácido sulfhídrico, el sulfato de hierro y amonio, es la fuente de iones Fe3+ , los cuales se combinan con el ácido sulfhídrico y producen sulfuro de hierro, de color negro. El rojo de fenol es el indicador de pH, y el cloruro de sodio mantiene el balance osmótico. Por fermentación de azúcares, se producen ácidos, que se detectan por medio del indicador rojo de fenol,el cual vira al color amarillo en medio ácido. El tiosulfato de sodio se reduce a sulfuro de hidrógeno el que reacciona luego con una sal de hierro proporcionando el típico sulfuro de hierro de color negro.

Siembra

A partir de un cultivo puro, sembrar en TSI, picando el fondo y extendiendo sobre la superficie del medio.

Incubación

A 35-37°C durante 24 horas, en aerobiosis. Resultados

1-Pico alcalino/fondo ácido (pico rojo/fondo amarillo): el microorganismo solamente fermenta la glucosa.

2-Pico ácido/fondo ácido (pico amarillo/fondo amarillo): el microorganismo fermenta glucosa, lactosa y/o sacarosa.

3-Pico alcalino/fondo alcalino (pico rojo/fondo rojo): el microorganismo es no fermentador de azúcares.

4-La presencia de burbujas, o ruptura del medio de cultivo, indica que el microorganismo produce gas.

PRUEBA DE LA CATALASA

Se utiliza para comprobar la presencia del enzima catalasa que se encuentra el la mayoría de las bacterias aerobias y anaerobias facultativas que contienen citocromo. La principal excepción es Streptococcus.

Originariamente, esta prueba era utilizada para diferenciar entre los siguientes géneros:

 Streptococcus (-) de Micrococcus (+) y/o Staphylococcus (+).  Bacillus (+) de Clostridium (-).

 Lysteria monocytogenes (+) y/o Corynebacterium (+, con las excepciones de C.pyogenes y C.haemolyticum, ambos -) de Erysipelothrix (-)

Una prueba de rutina de la catalasa a temperatura ambiente puede hacerse siguiendo dos técnicas:

1. Método del portaobjetos (recomendado):

 Con el asa de siembra recoger el centro de una colonia pura de 18-24 horas y colocar sobre un portaobjetos limpio de vidrio.

 Agregar con gotero o pipeta Pasteur una gota de H2O2 al 30% sobre el microorganismo sin mezclarlo con el cultivo.

 Observar la formación inmediata de burbujas (resultado positivo).  Desechar el portaobjetos en un recipiente con desinfectante.

 Si se invierte el orden del método (extender la colonia sobre el agua oxigenada) pueden producirse falsos positivos.

2. Método del tubo de ensayo:

 Agregar 1ml de H2O2 al 3% directamente a un cultivo puro de agar en slant densamente inoculado.

 Observar la formación inmediata de burbujas (resultado positivo).

Es un medio semisólido destinado a verificar la movilidad, producción de indol y de sulfuro de hidrógeno en un mismo tubo.

Es útil para diferenciar miembros de la familia Enterobacteriaceae. Fundamento

El triptófano es un aminoácido constituyente de muchas peptonas, y particularmente de la tripteína, que puede ser oxidado por algunas bacterias para formar indol. En el proceso interviene un conjunto de enzimas llamadas triptofanasa. El indol producido se combina con el aldehido del reactivo de Kovac´s o de Erlich, para originar un compuesto de color rojo. Las cepas móviles pueden apreciarse en este medio, por la turbidez que producen alrededor de la punción de siembra, mientras que aquellas cepas productoras de sulfhídrico se distinguen por la formación de un precipitado negro de sulfuro de hierro a partir del tiosulfato siempre que el medio se mantenga a un pH mayor a 7.2.

Siembra

A partir de un cultivo de 18-24 horas en medio sólido, sembrar por punción profunda con aguja de inoculación recta (no usar asa con anillo). Se debe inocular el centro del tubo, y la punción debe abarcar 2 tercios de profundidad del medio de cultivo desde la superficie. Es importante que la siembra se realice en línea recta.

Incubación

Durante 24 horas, a 35-37 °C, en aerobiosis.

Luego de la incubación, agregar 3-5 gotas de reactivo de Kovac´s o de Erlich. Resultados

Cepas móviles: producen turbidez del medio, que se extiende mas allá de la línea de siembra.

Cepas inmóviles: el crecimiento se observa solamente en la línea de siembra. Cepas SH2 positivas: ennegrecimiento a lo largo de la línea de siembra o en todo el medio.

Cepas SH2 negativas: el medio permanece sin cambio de color.

Cepas indol positivas: desarrollo de color rojo luego de agregar el reactivo de Kovac´s o de Erlich.

Cepas indol negativas: sin cambio de color.

La estructura de análisis de identificación de microorganismos presentes en la muestra de suelo a tratar estará basada bajo el criterio y validez de la siguiente tabla, modificada del Cowan & Steel's Manual of Identification of medical bacteria, se utilizan un grupo de pruebas, denominadas pruebas primarias, con las cuales se puede determinar el género, grupo de géneros o en algún caso familia a la que pertenece un aislamiento. Las pruebas primarias son: Gram, morfología, catalasa, oxidasa, OF, fermentación de glucosa, esporas, crecimiento en aerobiosis y anaerobiosis y movilidad.

TABLA MODIFICADA DE COWAN´S & STEEL PARA IDENTIFICACION DE BACTERIAS HETERÓTROFAS

tinción gram

(cultivo fresco) + + + + + + + + – – – – – Forma coco coco coco coco bastón bastón bastón bastón bastón bastón bastón bastón coco Agrupación racimos racimos cadenas tetradas pares crecimiento

aerobio + + + + + – + + + + + + + crecimiento

anaerobio – + + + + + + – – – + + – Esporas – – – – – + + + – – – – – movilidad – – – – – + o – + o – + o – + o – + o – + o - + – catalase + + – – – – + + + + + + +

oxidase + + – + +

fermentación de glucosa a acido o a acido+gas

– + + + + + (o –) + – – – + + –

O/F – O F F O

Micrococcus X

Staphylococcus X

Streptococcus X

Lactococcus X

Enterococcus X

Leuconostoc X

Pediococcus X X

Aerococcus X

Lactobacillus X

Clostridium X

Bacillus X X

Alcaligenes X

Pseudomonas X

Enterobacterias X

Aeromonas X

Chromobacteriu

m X

Mediante la anterior tabla se identificara las bacterias presentes en la muestra de suelo que posteriormente se cultivaran y enriquecerán para que biodegraden el suelo haciendo una comparación del parámetro de grasas y aceites presentes en la muestra sin tratar y después del proceso de biorremediación ejercido por los microorganismos facultados o sembrados en la muestra.

ANÁLISIS DE RESULTADOS El Examen microscópico de microorganismos determino así la forma y el Gram del microorganismo presente en los diferentes medios de siembra.

Las pruebas de Gram arrojaron en la caja 3 y 4 que contenían el medio de cultivo cetrimide, bacilos Gram negativo como se observa en la imagen al lado, pero las caja 1 y 2 que contenían medio de cultivo plate count, bacilos gram positivo con espora.

El análisis de catalasa se realizo también arrojando el siguiente valor

El análisis de la prueba de TSI arrojo como resultado:

El TSI que se presento en las medios de siembra de la caja 1 fue, la fermentación de todos los azucares presentes. La caja 2 arrojo como resultado solo la fermentación de glucosa. La caja 3, arrojo como resultado la fermentación de todos los azucares y por último la caja 4, revelo en el resultado la fermentación de glucosa.

La prueba de medio SIM arrojo como resultado:

Tabla 1 . Resumen de resultados para identificación de bacterias presentes en muestra.

La caja 1 y 2 con medio de siembra plate count después de la comparación en el cuadro de identificación modificada del Cowan & Steel's Manual of Identification

of medical bacteria, arrojo como resultado que al bacteria presente es del genero BACILLUS.

La caja 3 y 4 con medio de siembra cetrimide después de la comparación en el cuadro de identificación modificada del Cowan & Steel's Manual of Identification of medical bacteria, arrojo como resultado que al bacteria presente es del genero ENTEROBACTER.

La tinción por coloración también fue importante para determinar la agrupación de hifas y otras características morfológicas de interés.

MEDIO CATALASA FORMA Y GRAM

MOTILIDAD

Y H2S TSI

CAJA 1

Plate Count +

Bacilo Gram + con espora

Motilidad +/-H2S

-Fermenta todos los azucares

CAJA 2

Plate Count

-Bacilo Gram + con espora

Motilidad -H2S

-Fermenta glucosa CAJA 3 Cetrimide + Bacilo Gram Motilidad -H2S

-Fermenta todos los azucares CAJA 4 Cetrimide + Bacilo Gram -Motilidad +/-H2S

La caja con medio de siembra Sabouraud para identificar hongos y sus características principales nos arrojo como primer análisis una muestra verde azul hacia el centro en la parte de atrás café oscura con esporas verde azules y hifas trasparentes después de la comparación con diferentes tipos de hongos se pudo evaluar como un hongo ambiental que podría ser del genero ASPERGILLUS 

Análisis de biorremediación. Grasas y Aceites

Como el objetivo era la biorremediación de un suelo con contenido de hidrocarburos y grasas de un sector donde se hacen mantenimiento vehicular se realizo el análisis de la prueba fisicoquímica de grasas y aceites antes de la biorremediación y después para hacer una comparación de los resultados y el porcentaje de remoción de los microorganismos utilizados para la biodegradación de los contaminantes presentes en el suelo.

para calcular las grasas y aceites recuperables (G y A) en la muestra se uso la Siguiente ecuación:

G y A (mg/L)= (A - B) / V

Donde:

A es el peso final del matraz de extracción (mg); B es el peso inicial del matraz de extracción (mg), y V es el volumen de la muestra, en litros.

Reportar los resultados del análisis en mg/L.

Prueba antes de biorremediación.

se tomo una muestra de 5 gramos de suelo contaminado arrojando como resultado 248.72 g / kg de tierra.

Prueba despues de Biorremediacion

1 2

Series1 248,72 1,99

0 50 100 150 200 250 300

C

O

N

C

EN

TR

A

C

IO

N

D

E

G

Y

A

GRAFICA DE BIORREMEDIACION DE

SUELOS

El resultado del proceso de Biorremediación arrojo como resultado un porcentaje de remoción de grasas y aceites del 77. 99 % de los agentes contaminantes en este caso especifico hidrocarburos y grasas provenientes del mantenimiento de vehículos.

CONCLUSIONES.

 Se han identificado las especies de microorganismos degradadores de hidrocarburos en el suelo tratado como lo son el género bacilo y enterobacter.

 Se ha desarrollado un esquema tecnológico para aplicar el proceso de Biorremediación en condiciones naturales con especies autóctonas del suelo.

RECOMENDACIONES

 Divulgar el uso de la biotecnología en la Biorremediación de suelos contaminados por hidrocarburos para generar un método ambientalmente más confiable y económico.

BIBLIOGRAFIA

http://bibliodigital.itcr.ac.cr:8080/dspace/bitstream/2238/206/1/pr %C3%A1ctica.pdf. citado el 5 de junio de 2011.

 Identificación de una cepa bacteriana.

 Estándar método procedimientos para G y A

 www.google.com. Biotecnologia y contaminación de suelos. (En línea) http://colombia.indymedia.org/news/2005/05/25141.php citado el 5 de junio de 2011

 http://www.unicolmayor.edu.co/invest_nova/NOVA/ARTREVIS1_5.pdf Biotecnologia y contaminación de suelos (En línea) citado el 5 de junio de 2011