Instituto Nacional de Salud Pública
Centro de Investigaciones sobre
Enfermedades Infecciosas
“Frecuencias de HLA-DR en pacientes mexicanos
con infección por virus dengue:
HLA-DR4 como posible factor de resistencia
genética para fiebre hemorrágica por dengue”
Dr. Celso Ramos
Dengue and Dengue Hemorrhagic Fever. D.J. Gubler / G. Kuno (Eds.). CABY Pub. 1999.
Infección por virus dengue
Fiebre hemorrágica por dengue (fuga plasmática) Fiebre por dengue
Fiebre indiferenciada Sintomática Asintomática Sin hemorragia Síndrome de choque por dengue Sin choque Con hemorragia inusual
Factores de riesgo de FHD/SCD
Edad Genero Raza Estado nutricional Enfermedades crónicas Enfermedades respiratorias Infección secundaria Factores genéticos Serotipo Genotipo Hiperendemicidad FHD/SCD Especie Competencia Capacidad vectorial Densidad vectorialindividuo
virus
vector
Modificado de: Kouri P, Guzmán M, Bravo J, Triana C. Dengue hemorrhagic fever/Dengue shock, syndrome: lessons from the Cuban epidemic, 1981
B2 a2 b1 polymorphic a1 a2 b2 a1 b1 polymorphic b3 polymorphic b2 polymorphic b1 polymorphic a a
HLA-DP
HLA-DQ
HLA-DR
HLA-DZ P450C21 C4B P450C21 C4A B1 C2 HLA-B HLA-C Transferrin HLA-A C B E J A H G FClase II
Clase I
Clase III
TNF a bImportancia del Complejo Principal de Histocompatibilidad
•Reconocimiento celular
•Regulación del sistema inmune
•Receptores
Ejemplos reportados de asociaciones alélicas con enfermedades infecciosas
Enfermedad infecciosa Alelo HLA Población Estudio
Malaria B53↓, DRB1*1302↑ Gambia Hill et al. (1991) Leishmaniasis mucocutánea A28↑, B22↑, DQ28↑ Venezuela Lara et al. (1991)
DR2↓, DQ3↑ Brasil Petzl-Erler et al. (1991) A11↑, B5↑, B7↑ Egipto Morsy et al. (1990) Leishmaniasis visceral A26↑ Irán Faghiri et al. (1995) Filariasis DQ1*0201↑, DPB1*0402↑, Liberia Meyer et al.(1994)
DQA1*0501↓, DQB1*0301↓,
DQA1*0501↑, DQB1*0301↑ Nigeria Murdoch et al. (1997) Persistencia de Hepatitis B DRB1*1302↓ Gambia Thursz et al. (1995, 1997)
DRB1*1302↓ Alemania Hohler et al. (1997) DR6↓ Holanda Van Huttum et al. (1987) DR2↓, DR7↑ Qatar Almary y Batchelor (1994)
Persistencia de Hepatitis C DR5↓ Italia Peano et al. (1994); Zavaglia et al. (1996) DR5↓ Inglaterra Minton et al. (1998)
DQB1*1301↓ Inglaterra Tibbs et al. (196)
DQB1*1301↓ Francia Airic et al. (1997); Cramp et al. (1998) Minton et al. (1998)
B54↑, DQB1*0601↓ Japón Kuzushita et al. (1998) Hantavirus B8↑, B27↓ Finlandia Mustonen et al. (1996, 1998) Infecciones por Parvovirus DRB1*01↑, DRB1*04↑, Inglaterra Kerr et al. (2002)
DRB1*07↑, B49↑
Formas severas de HTLV-1 A*02↓, DRB1*0101↑ Japón Jeffery et al. (1999) Enfermedad de Lyme crónica DRB1*0401↑ EU Steere et al. (1990)
↑: alelo susceptible, ↓: alelo protector
Modificado de: Glyne P, Price M. HLA and infectious diseases. En: Lechter R, Warrens A. HLA in health and disease 2nd. Ed. AP. 299-326.
Factores genéticos humanos en la fisiopatología de FD/FHD
Asociaciones alélicas de HLA con FHDAutor Alelo Población Referencia
Chiewsilp et al. HLA-B13↓ Tailandia Am J Trop Med Hyg 1981; 30(5): 1100
HLA-A2↑, HLA-B↑
HLA-B44 ↓, HLA-B62↓ HLA-B76 ↓, HLA-B77↓ HLA-A*0207↑, HLA-B*51↑
Stephens et al. HLA-A*0203 ↓, HLA-B*52↓ Tailandia Tissue Antigens 2002; 60(4): 309-318
Paradoa et al. HLA-A1↑, HLA-B↑ Cuba Haematologia (Budap) 1987; 20(2): 83
HLA-B14↓, HLA-A*29↓
Loke et al. HLA-A*24↑, HLA-A*33↓ Vietnam J Infect Dis 2001; 184(11): 1369
LaFleur et al. HLA-DR*04↓ México Hum Immunol 2002; 63: 1039 ↑: alelo susceptible, ↓alelo protector
Factores genéticos humanos en la fisiopatología de FD/FHD
Estudios sobre otros genes
Gen del receptor de la vitamina D y receptor FcγRIIa:
Se reportó una asociación entre la severidad de la enfermedad y el receptor de vitamina D
Loke H, et al. Susceptibility to dengue hemorrhagic fever on Vietnam: Evidence of an association with
“HLA-DR antigen frequencies in Mexican patients
with dengue virus infection:
HLA-DR4 as a possible genetic resistance factor for
dengue hemorrhagic fever”
La Fleur C, Granados J, Vargas Alarcón G, Ruíz-Morales J, Villarreal- Garza C, Higuera L, Hernández-Pacheco G, Cutiño-Moguel T, Rangel H, Figueroa R, Acosta M, Lazcano E, Ramos C. Human Immunology 2002; 63: 1039-1044.
Materiales y métodos
Población de estudio
34 sujetos con FHD* 47 sujetos con FD* 99 controles sanos
Definición de población mestiza mexicana**
Sujetos mexicanos de nacimiento, con antecedente de antepasados mexicanos en al menos 2 generaciones anteriores y apellido con derivación hispánica.
*World Health Organization. Dengue hemorrhagic fever: Diagnosis, treatment and control. Geneva
WHO, 1997.
Tipificación de HLA
•5 ml de sangre venosa •PCR-SSO
•PCR-SSOP
Análisis estadístico
•Prueba de Fisher de dos colas •Valor de p de 0.05
•Razones de momios con intervalos de confianza a 95% •Prueba de t
Tabla 1. Manifestaciones clínicas de pacientes con FD y FHD
FHD FD
Manifestación n = 34 porcentaje n = 47 porcentaje valor de p
Fiebre 34 100 47 100 -Mialgia 34 100 47 100 -Hemorragia 34 100 29 61.7 < 0.00 Trombocitopenia 34 100 27 57.4 < 0.00 Artrlagia 41 91.2 45 95.7 1 Cefalea 41 91.2 46 97.9 1
Dolor retro orbital 28 82.4 38 80.9 1 Infeccion secundaria 24 80 18 58.1 0.06 Rash 25 73.5 31 66 0.05 Torniquete positivo 11 73.5 5 20 < 0.00 Hematocrito elevado 22 64.7 0 0 < 0.00 Dolor abdominal 18 52.9 20 42.6 0.12 Hipoproteinemia 8 23.5 0 0 < 0.00 Infección primaria 6 20 13 41.9 -Ascitis 1 2.9 0 0
-Tabla 2. Distribución y asociación de alelos de HLA-DRB1 en los participantes del estudio
FHD (n = 34) FD (n = 47) Controles (n = 99)
Alelo numero fa numero fa numero fa
DR8 15 0.441 16 0.340 33 0.116 DR4 12 0.352* 30 0.638 47 0.237 DR2 9 0.264 11 0.234 18 0.090 DR13 6 0.176 6 0.127 10 0.050 DR14 5 0.147 4 0.085 21 0.106 DR7 4 0.117 6 0.127 22 0.111 DR11 4 0.117 1 0.021+ 20 0.101 DR1 2 0.058 5 0.106 10 0.050 DR3 2 0.058 2 0.042 11 0.055 DR9 2 0.058 0 0.000 3 0.015 DR12 2 0.058 0 0.000 2 0.010 DR10 1 0.029 1 0.021 1 0.005
* Frecuencia disminuida en FHD comparado con FD (p = 0.011)
Discusión
•A pesar de tener una población de estudio pequeña es el primer estudio que reporta una asociación en alelos de HLA de clase II
•La frecuencia de HLA-DRB1*04 fue menor en las personas que tuvieron FHD comparados con los que tuvieron FD.
•Sujetos homocigotos para HLA-DRB1*04 tuvieron menos posibilidades de padecer FHD en comparación con sujetos HLA-DRB1 negativos
•Sujetos con HLA-DR11 tuvieron menos posibilidades de desarrollar FD en comparación con controles sanos.
Limitaciones
•Solamente se analizaron alelos de clase II y no de clase I
•Solamente se analizaron alelos de HLA-DR
•La muestra del estudio (81 sujetos) pudo haber sido demasiado pequeña para poder describir otras asociaciones
“Relación entre el complejo principal de histocompatibilidad y
la proliferación de linfocitos T ante el estímulo con antígenos
de virus dengue en pacientes que han padecido fiebre por
dengue/fiebre hemorrágica por dengue”.
Jorge A. Falcón Lezama
Metodología
Población de estudio:
~120 sujetos con antecedente de infección por virus dengue
Metodología
Tipificación de HLA de clases I y II Ensayos de proliferación de linfocitos
Antígenos:
Virus dengue 1-4 inactivados
Péptidos sintéticos derivados de la proteína E Den-2* específicos para HLA-DR4
Péptido 1: TLDEFELIKTEAKHPA Péptido 2: NLEYTIVITPHSGEE
“Análisis del polimorfismo de la región promotora del gen de
TNF-α en sujetos con dengue”.
Alma Rosa García Trejo
Metodología
Población de estudio:
73 sujetos con antecedente de infección por virus dengue 162 controles sanos
Metodología
4066pb
TNF α
COMPLEJO PRINCIPAL DE HISTOCOMPATIBILIDAD
GenBank L11698 Homo sapiens tumo...(gi:409223) pri 21 Oct 1993 GenBank U42625 Homo sapiens TNF...(gi:1353717) pri 05- Jun 1996
GenBank X02910 Human gene for tu...(gi:37209) pri 17- Feb 1997
1254 pb +131 -308 -238 tata box -20 -1123 0 -308 -107 pb -238 -155 pb G G G C A T G G G G A C G G/A G G A A T C G G A G C A G/A
Resultados
FHD (31 / 62) FD (39 / 78) Controles (162/324 n (fg) n (fg) n TNF-α genotipo Polimorfismo -308 TNF 1/1 27 0.870 37 0.948 148 0.913 TNF 1/2 4 0.129 2 0.051 14 0.086 TNF 2/2 0 0.0 0 0.0 0 0.0 Polimorfismo -238 n=169/338) TNF G/G 31 1 38 0.974 147 0.869 TNF G/A 0 0.0 1 0.025 21 0.124 TNF A/A 0 0.0 0 0.0 1 0.005 TNF-α alelos Polimorfismo -308 TNF 1 58 0.935 76 0.974 310 0.956 TNF 2 4 0.064 2 0.025 14 0.043 Polimorfismo -238 n=169/338 TNF G 62 1 77 0.987 315 0.931 TNF A 0 0 1 0.012 23 0.068 (fg)CONCLUSIONES Y DISCUSIÓN
CONCLUSIONES Y DISCUSIÓN
•Los datos obtenidos no muestran diferencias significativas en la distribución de los polimorfismos de TNF- 238 y –308 entre pacientes con FHD y FD.
•Se observó una tendencia de mayor frecuencia del alelo TNF2 –308 en pacientes con FHD en relación con pacientes con FD.
•Estos datos necesitan ser analizados en el contexto de un grupo más grande de pacientes.
•Lo anterior podría tener implicaciones importantes en la patogénesis de las manifestaciones graves de dengue.