PRESENTACIÓN HEMOCULTIVOS – Dr. Mario Vilaró

(1)

Di

ó i

i

bi ló i

Diagnóstico microbiológico

de endocarditis y sepsis

Mario L. Vilaró

HOSPITAL PRIVADO CENTRO MEDICO DE

CORDOBA CORDOBA

Curso de Postgrado

“Actualización en Bacteriología Clínica” Módulo III

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BACTERIEMIAS Clasificación

• TRANSITORIAS:

BACTERIEMIAS. Clasificación

- Corta duración

- Se producen:

Se producen:

* Movilizar tejidos infectados

* Manipular mucosas (endoscopia

Manipular mucosas (endoscopia

Proc. Odont.)

* Comienzo de infecciones

Comienzo de infecciones

bacterianas agudas. (neumonía,

artritis meningitis)

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BACTERIEMIAS Clasificación

INTERMITENTES

BACTERIEMIAS. Clasificación

• INTERMITENTES:

- Episodio que se controla y luego se

repite con el mismo microorganismo.

- Se producen en:

* Colecciones no drenadas

* Infecciones focales (Otitis media

neumonía)

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BACTERIEMIAS Clasificación

CONTINUA

BACTERIEMIAS. Clasificación

• CONTINUA:

- Todos los hemocultivos son positivos

- Se observan en:

* Endocarditis.

* Infecciones endovasculares.

* Brucelosis.

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Factores que Afectan el

R

di i

t

Rendimiento

del Hemocultivo

• Antisepsia de la piel.

• Antibioticoterapia previa

• Volumen y Número de Frascosy

• Tiempo de incubación

• Convencional vs. Automatizado

• Utilización de frascos anaerobios

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• Los efectos de volumen de sangre, número de muestras consecutivas y tiempo de incubación

fueron evaluados en 37 568 hemocultivos ensayados fueron evaluados en 37.568 hemocultivos ensayados por el sistema automatizado BACTEC.

• Modificación de los parámetros preestablecidos para hemocultivos manuales

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¿Qué volumen de muestra hay que

?

tomar?

• No se debe sobrepasar la relación 1/100No se debe sobrepasar la relación 1/100 con respecto al frasco de cultivo.

• Si se aumenta el volumen de sangre (20 • Si se aumenta el volumen de sangre (20

ml. Por ej.) se debe sembrar en dos frascos

(8)

¿Cuántas muestras es necesario

?

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HEMOCULTIVOS MANUALES

Se debe obtener TRES muestras por Se debe obtener TRES muestras por

cada episodio de bacteriemia ó

ó

Un Mínimo de DOS muestras

NO HAY QUE TOMAR UNA MUESTRA UNICA NO HAY QUE TOMAR UNA MUESTRA UNICA EL VOLUMEN DE SANGRE NO ES EL ÓPTIMO

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• Los resultados de este estudio demostraron q e 2 hemoc lti os en n período de 24 hs que 2 hemocultivos en un período de 24 hs. detectaron aproximadamente el 90% de las bacteriemias

bacteriemias.

• Para mejorar la detección al 99% fueron necesarias 4 muestras.

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¿Cuando se debe hacer una

t

ió ?

extracción?

• Las muestras deben tomarse lo másLas muestras deben tomarse lo más próximo al inicio de la fiebre y los

escalofríos escalofríos.

(12)

¿Cuánto tiempo incubarlos?

• El tiempo de incubación rutinario deEl tiempo de incubación rutinario de los hemocultivos es de 5 días para sistemas automatizados y de 7 días sistemas automatizados y de 7 días para manuales.

• La incubación prolongada debe

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¿Cuánto tiempo incubarlos?

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• Las bacteriemias por el grupo HACEK son raras.

• La prolongación del tiempo de incubación no ha demostrado ser efectiva

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Preparación de la piel

• La desinfección de la piel es fundamental a laLa desinfección de la piel es fundamental a la hora de tomar la muestra.

• Evitar zonas de piel frecuentemente p

contaminadas o con pérdida de integridad

• Luego de palpar la vena desinfectar la zona con g p p alcohol iodado dejando actuar 2 min.

• Luego limpiar con alcohol 70. • No volver a palpar la vena

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• SCN es el microorganismo encontrado

con mayor frecuencia en la flora normal de la piel y constituye también el germen

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Conclusión: la preparación de la piel con chlorhexidina es más eficaz que la preparación con solución

es más eficaz que la preparación con solución yodo-povidona para reducir la contaminación

de los hemocultivos

La disminución de la actividad de la yodo- povidona se y p Relaciona al tiempo requerido para

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Inoculación de la muestra

• Retirar la tapa protectoraRetirar la tapa protectora

• Desinfectar el tapón de goma

I l i j ió b l

(19)

(20)

¡NO

¡

(21)

(22)

HEMOCULTIVOS MANUALES

• Usar frascos de medios comercial.

– Medios enriquecidos (BHI ,extractos de levadura, cistina, y una mezcla de cofactores, vitaminas y minerales)

– Anticoagulante (Polianetol sulfonato de sodio 0,03. Anticoagulante con actividad anticomplementaria que inhibe parcialmente la capacidad fagocitaria de los

l it i t tibióti i l ó id

leucocitos y a ciertos antibióticos aminoglucósidos y polipeptídicos.

– Atmósfera

• Guardar la relación medio-inóculo 1:10

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HEMOCULTIVOS MANUALES

• Controles:Controles:

– 24 hs. sub-cultivo “a ciegas”

Si sospecha de meningococo subcultivar a – Si sospecha de meningococo subcultivar a

las 6 hs.

– 48 hs segundo sub-cultivo “a ciegas” – 48 hs. segundo sub-cultivo a ciegas – 7 días sub cultivo + Gram de la botella.

Observación macroscópica (turbidez – Observación macroscópica (turbidez,

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Hemocultivo seriado:

el frasco anaerobio

¿Qué perdemos si no lo

incluimos?

Dr. Jorge Santoianni Dr. Jorge Santoianni Dra Silvia C Predari Dra Silvia C Predari

Instituto de Investigaciones Médicas Instituto de Investigaciones Médicas

Dra. Silvia C. Predari Dra. Silvia C. Predari

gg

Alfredo Lanari Alfredo Lanari

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Conclusiones

Es importante recuperar los aislamientos de Es importante recuperar los aislamientos de anaerobios para la realización de los estudios de anaerobios para la realización de los estudios de

vigilancia , para conocer los patrones de resistencia vigilancia , para conocer los patrones de resistencia gg

locales, y las resistencias emergentes, cuyos resultados locales, y las resistencias emergentes, cuyos resultados sirven para modificar conductas terapéuticas.

sirven para modificar conductas terapéuticas.

El incremento en la población de pacientes El incremento en la población de pacientes inmunocomprometidos, debilitados y añosos que inmunocomprometidos, debilitados y añosos que u oco p o et dos, deb tados y a osos queu oco p o et dos, deb tados y a osos que algunos centros atienden, también sostiene la

algunos centros atienden, también sostiene la

necesidad de realizar los hemocultivos en los frascos necesidad de realizar los hemocultivos en los frascos para anaerobios.

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• La interpretación de los hemocultivosLa interpretación de los hemocultivos es clínica, no debiendo el microbiólogo descartar un aislamiento sin antes

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Jerarquización de hemocultivos

i i

positivos

HEMOCULTIVO HEMOCULTIVO

POSITIVO

CLINICAMENTE

SIGNIFICATIVO NO SIGNIFICATIVO

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Hemocultivos

Gérmenes que nunca son Gérmenes que nunca son

contaminantes GRUPO A

• S. pneumoniae • P.multocida

GRUPO A • H.influenzae • N.meningitidis • S.moniliformis • L.monocytogenes g

• Brucella spp

• M. tuberculosis

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Gérmenes que raramente son

t

i

t

contaminantes

GRUPO B

• S.aureus

• S pyogenes

GRUPO B

S.pyogenes

• S.agalactiae

S C G

• S. grupo C y G • Enterobacterias

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Gérmenes que en la mitad de las veces son lí i t i ifi ti

clínicamente significativos

GRUPO C GRUPO C

• S. viridans

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Gérmenes que generalmente son

t

i

t

contaminantes

• SCN

GRUPO D

SC

(32)

(33)

La contaminación de los hemocultivos

es un problema complejo que requiere de una Actitud multidisciplinaria

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Aislamientos de los:

GRUPO C

Aislamientos de los:

GRUPO D

• Clínica compatible

Evaluar todos estos parámetros en conjunto

Clínica compatible • Nº de aislamientos

Ai l i t t té il

• Aislamiento en una muestra estéril

(válvula cardíaca, líquido articular, LCR, t )

etc)

(35)

Aislamientos

Polimicrobianos

Aislamientos

Polimicrobianos

Evaluar cada aislamiento individual acorde a Criterios anteriores

• Clínica compatible

• Foco asociado o diferentes focos para • Foco asociado o diferentes focos para

distintos microorganismos. ¾Abdominal

¾Abdominal

¾Genitourinario

¾Necrotizante de piel y partes blandas

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Sistema automatizado de detección de sépsis y bacteremias BACTEC 9000-séps s y bac e e as C C 9000

Becton and Dickinson

• Se usa para cultivar sangre y líquidos de punción estériles.

Detección de la producción del CO2 por • Detección de la producción del CO2 por

parte de los microorganismos

• Medios de cultivo con resinas que permitenMedios de cultivo con resinas que permiten cultivar a un paciente intra tratamiento.

• Mayor velocidad de detección por cultivo en agitación constante (T medio 12 hs). • Lectura de cada botella cada 10 minutos

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Incubación

• El sistema trabaja con código de barras. • Sólo se pueden usar los medios de cultivoSólo se pueden usar los medios de cultivo

recomendados por el fabricante.

• Existen disponibles diferentes medios de cultivo:

– Gérmenes comunes Anaerobios

– Anaerobios – Hongos

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Incubación

• La muestra es introducida en el aparato de acuerdo a lo indicado por el sistema

computarizado computarizado.

• Se cultiva bajo agitación constante

• La lectura de fluorescencia se realiza cada 10 minutos.

• El sistema interpreta los valores obtenidos de

acuerdo a curvas de variación en la fluorescencia acuerdo a curvas de variación en la fluorescencia. • La variaciones significativas y sugestivas de

crecimiento bacteriano son indicadas como positivos por medio de una alarma

positivos por medio de una alarma.

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Automatización en bacteriología clínica

• Ventajas:

– Aumento en la velocidad del diagnósticoAumento en la velocidad del diagnóstico

– Disminución de los días cama de internación. – Disminución en los costos de internación y

t d t t i t gastos de tratamiento

– Estandarización de los procedimientos – Calidad de los reactivos usadosCalidad de los reactivos usados

– Disminución en la selección de gérmenes resistentes.

Dismin ción en los gastos de personal – Disminución en los gastos de personal – Mejora en la calidad del diagnóstico de