Servicio de Acreditación Ecuatoriano
CR EA01
Criterios Específicos
R02
ACREDITACION DE
LABORATORIOS QUE
REALIZAN ENSAYOS
MICROBIOLOGICOS
2017-12-26
El presente documento se distribuye como copia no controlada. Su revisión vigente debe ser consultada en la página web:
www.acreditacion.gob.ec Elaborado por: DL W. Pérez Fecha: 2017-12-26 Revisado por: DGC CGT J. Rodríguez I. Martínez Fecha: 2017-12-26 Aprobado por: DE J. Zapata Fecha: 2017-12-26
ÍNDICE 1. OBJETO ... 3 2. ALCANCE...3 3. DOCUMENTOS DE REFERENCIA...3 4. DEFINICIONES ...4 5. RESPONSABILIDADES ...7 6. DESCRIPCIÓN ...7 6.1. INTRODUCCIÓN ...7
6.2. ESTRUCTURA DE LOS CRITERIOS A LA NORMA NTE INEN ISO/IEC 17025 ...7
6.3. DESARROLLO DE LOS CRITERIOS ESPECÍFICOS APLICABLES A LA NORMA NTE INEN ISO/IEC 17025 PARA LABORATORIOS MICROBIOLÓGICOS ...8
4. Requisitos relativos a la gestión. ...8
4.6 Compras de servicios y de suministros: reactivos y medios de cultivo ...8
5. Requisitos técnicos ...9
5.2 Personal...9
5.3 Instalaciones y condiciones ambientales...10
5.4 Métodos de ensayo y de calibración y validación de los métodos ...11
5.4.5 Validación de los métodos ...11
5.4.6 Estimación de la incertidumbre de la medición ...13
5.5 Equipos ...13
5.6 Trazabilidad de las mediciones...14
5.6.2 Requisitos específicos...14
5.6.2.1 Calibración ...14
5.6.3 Patrones de referencia y materiales de referencia ...14
5.6.3.2 Materiales de referencia ...15
5.6.3.3 Verificaciones intermedias ...15
5.6.3.4 Transporte y almacenamiento ...15
5.7 Muestreo ...15
5.8 Manipulación de los ítems de ensayo o de calibración ...15
5.9 Aseguramiento de la calidad de los resultados de ensayo y de calibración ...15
5.10 Informe de los resultados ...17
5.10.2 Informes de ensayos ...17
1. OBJETO
El objetivo del presente documento es establecer los lineamientos específicos que deben cumplir los laboratorios acreditados o en proceso de acreditación que realizan ensayos microbiológicos, con el propósito de demostrar el cumplimiento de los requisitos de la Norma NTE INEN ISO/IEC 17025 cuando incluyen ensayos microbiológicos dentro del alcance de acreditación mediante puntualizaciones relativas a este tipo de ensayos.
2. ALCANCE
El presente documento es aplicado por el SAE para la evaluación de Laboratorios que realizan ensayos microbiológicos, en sus instalaciones permanentes o in situ.
Los laboratorios de análisis microbiológicos que soliciten la acreditación deberán cumplir los requisitos generales establecidos en la norma NTE INEN ISO/IEC 17025:2006, “Requisitos generales para la competencia de los laboratorios de ensayo y de calibración”, y los criterios establecidos en el documento CR GA01 “Criterios generales para la acreditación de laboratorios de ensayo y calibración según la norma NTE INEN ISO/IEC 17025”, así como las directrices contenidas en el presente documento.
Se considera que los análisis microbiológicos incluyen pruebas de esterilidad, detección, aislamiento, recuento e identificación de microorganismos (virus, bacterias, hongos y protozoos) y sus metabolitos en diferentes materiales y productos, o cualquier tipo de ensayo en el que se utilicen microorganismos como parte de un sistema de detección, así como la utilización de microorganismos para ensayos ecológicos. De ahí se deduce que algunas de las directrices contenidas en el presente documento, como las referentes a la bioseguridad de los laboratorios, tendrán que ser interpretadas en consecuencia. Este documento sirve también para los laboratorios que utilizan técnicas en áreas relacionadas con la microbiología, como bioquímica, biología molecular y cultivos celulares, aunque esos laboratorios pueden tener que cumplir otros requisitos adicionales.
El presente documento trata sobre la calidad de los resultados de los ensayos, sin abordar específicamente aspectos relacionados con la salud y la seguridad. No obstante, los laboratorios deben cumplir las prácticas de la legislación nacional vigente en materia de salud, seguridad y medio ambiente, aplicables. Es importante recordar que, las cuestiones relacionadas con la salud y la seguridad pueden influir en la calidad de los ensayos. La actividad analítica a la que se dedica el laboratorio definirá el nivel de bioseguridad con que se debe trabajar.
La norma NTE INEN ISO/IEC 17025 sigue siendo el documento que prevalece y, en caso de conflicto constituirá la base para su resolución por parte del SAE.
3. DOCUMENTOS DE REFERENCIA
NTE INEN ISO/IEC 17025:2006 Requisitos generales para la competencia de los Laboratorios de ensayo y de calibración
NTE NTE-INEN-ISO/IEC 17011:2005 Evaluación de la conformidad — Requisitos generales para los organismos de acreditación que realizan la acreditación de organismos de evaluación de la conformidad
NTE INEN-ISO/IEC 17000:2006 Evaluación de la Conformidad – Vocabulario y principios generales
ILAC G-27:06/2017 Analysis and recommended solution
EA-4/10 G:2002 Accreditation for Microbiological laboratories.
CEA-ENAC-20 Rev. 1 Mayo 2017 Serie 1. Criterios Específicos de Acreditación. Análisis microbiológico (ENAC).
ALACC (2010) Guidelines for Laboratories Performing Microbiological and Chemical Analyses of Food and Pharmaceuticals, 2010 (AOAC)-An Aid to Interpretation of ISO/IEC 17025:2005
ILAC-G27:06/2017 Guidance on measurements performed as part of an inspection process
ISO 9000:2015 Sistemas de gestión de la calidad. Fundamentos y vocabulario
VIM (JCGM 200:2012) International Vocabulary off Metrology – Basic and General Concepts and Associated Terms.
(3rd edition, 2008 version with minor corrections) GUM (JCGM 100:2008) Evaluation of measurement data — Guide to the
expression of uncertainty in measurement (GUM 1995 with minor corrections)
ISO 11133:2014(en)ISO Microbiology of food, animal feed and water.
/TS 11133-1:2009 Preparation, production, storage and performance testing of culture media (ver detalles principals cambios en section 8 donde se reflejan cambios en la familia 11133:2014- 1,2,3
ISO/TS 11133-2:2003 Microbiology of food and animal feeding stuffs -- Guidelines on preparation and production of culture media -- Part 2: Practical guidelines on performance testing of culture media
ISO/TR 13843:2000 Water quality Guidance on validation of microbiological methods.
ISO 3534-1:2006 Statistics -- Vocabulary and symbols -- Part 1: General statistical terms and terms used in probability. ST/NAR/26/Rev.1 Glosario de términos sobre garantía de calidad y
buenas prácticas de laboratorio. UNODC 2012
Red PARF Documento Técnico. 11 Buenas prácticas de la OMS para laboratorios de microbiología farmacéutica. OMS 2013.
4. DEFINICIONES
Calibración: “Operación que bajo condiciones especificadas establece, en una primera etapa,
una relación entre los valores y sus incertidumbres de medida asociadas obtenidas a partir de los patrones de medida, y las correspondientes indicaciones con sus incertidumbres asociadas y, en una segunda etapa, utiliza esta información para establecer una relación que permita obtener un resultado de medida a partir de una indicación.
NOTA 1 Una calibración puede expresarse mediante una declaración, una función de calibración, un diagrama de calibración, una curva de calibración o una tabla de calibración. En algunos casos, puede consistir en una corrección aditiva o multiplicativa de la indicación con su incertidumbre correspondiente.
NOTA 2 Conviene no confundir la calibración con el ajuste de un sistema de medida,
a menudo llamado incorrectamente “auto calibración”, ni con una verificación de la
calibración.
NOTA 3 Frecuentemente se interpreta que únicamente la primera etapa de esta definición corresponde a la calibración”. [Vocabulario Internacional de Metrología]
Cepas de referencia: Microorganismos definidos por lo menos al nivel de género y especie, catalogados y descritos según sus características y preferiblemente de origen conocido [ISO 11133- 1:2009].
Cepas de reserva: Cepas idénticas obtenidas mediante un único subcultivo de una cepa de referencia [ISO 11133-1:2009].
Cultivos de referencia: Subcultivo primario obtenido de una cepa de reserva [ISO 11133-1:2009].
Desviación negativa: Ocurre cuando el método alternativo da un resultado negativo sin confirmación y el método de referencia da un resultado positivo. Esta desviación se convierte en un resultado falso negativo cuando puede demostrarse que el resultado verdadero es positivo. Desviación positiva: Ocurre cuando el método alternativo da un resultado positivo sin confirmación y el método de referencia da un resultado negativo. Esta desviación se convierte en un resultado falso positivo cuando puede demostrarse que el resultado verdadero es negativo. Especificidad: Fracción del número total de cultivos o colonias negativos que son asignados correctamente con el método utilizado [ISO/TR 13843:2000].
Exactitud relativa: Grado de concordancia entre los resultados del método evaluado y los obtenidos utilizando un método de referencia reconocido.
Efecto de matriz: Alteración o interferencia directa o indirecta en respuesta a la presencia de otros analitos o sustancias interferentes en la muestra. [UNODC 2012].
Incertidumbre: “Parámetro, asociado al resultado de una medición, que caracteriza la dispersión
de los valores que podrían razonablemente ser atribuidos al mensurando.
NOTA 1 El parámetro puede ser, por ejemplo, una desviación típica (o un múltiplo de ésta) o la semiamplitud de un intervalo con un nivel de confianza determinado.
NOTA 2 La incertidumbre de medida comprende, en general, varios componentes. Algunos pueden ser evaluados a partir de la distribución estadística de los resultados de series de mediciones y pueden caracterizarse por sus desviaciones típicas experimentales. Los otros componentes, que también pueden ser caracterizados por desviaciones típicas, se evalúan asumiendo distribuciones de probabilidad, basadas en la experiencia adquirida o en otras informaciones.
NOTA 3 Se entiende que el resultado de la medición es la mejor estimación del valor del mensurando, y que todos los componentes de la incertidumbre, comprendidos los que provienen de efectos sistemáticos, tales como los componentes asociados a las correcciones y a los patrones de referencia, contribuyen a la dispersión”. [Vocabulario
Internacional de Metrología VIM]
Material de referencia: Material o substancia uno o más de cuyas propiedades tienen valores suficientemente homogéneos y claramente establecidos como para poder ser utilizados en la calibración de un aparato, la evaluación de un método de medida o la asignación de valores a materiales [Guía ISO 30:1992].
Material de referencia certificado: Material de referencia, acompañado de un certificado, en el cual uno o más valores de sus propiedades han sido certificados mediante un procedimiento que establece su trazabilidad a una realización exacta de la unidad en la que se expresan los valores de dichas propiedades. Cada valor certificado se acompaña de una incertidumbre y el nivel de confianza correspondiente [Guía ISO 30:1992].
Límite de cuantificación: Aplicado a análisis microbiológicos cuantitativos – Número mínimo
de microorganismos dentro de una variabilidad definida que puede determinarse en las condiciones experimentales del método evaluado
Límite de detección: Aplicado a análisis microbiológicos cualitativos – Número más bajo de
microorganismos que se pueden detectar, pero en cantidades que no pueden estimarse exactamente [OMS: 2013].
Condiciones de repetibilidad: condición de medición, dentro de un conjunto de condiciones que incluye el mismo procedimiento de medición, el mismo lugar y mediciones repetidas del mismo objeto u objetos similares durante un periodo corto de tiempo [JCGM 200:2012; VIM]. Precisión en condiciones de repetibilidad, es decir, condiciones según las cuales los resultados independientes de una prueba se obtienen con el mismo método, sobre objetos de prueba idénticos, en el mismo laboratorio, por el mismo operador, usando el mismo equipo y dentro de intervalos de tiempo cortos. [ISO 3534-1:2006].
Reproducibilidad: Precisión de medida bajo un conjunto de condiciones de reproducibilidad. Condiciones de reproducibilidad: condición de medición, dentro de un conjunto de condiciones que incluye diferentes lugares, operadores, sistemas de medida y mediciones repetidas de los mismos objetos u objetos similares [JCGM 200:2012; VIM].
Sensibilidad: Fracción del número total de cultivos o colonias positivos que son asignados correctamente con el método utilizado [ISO 13843:2000].
Trazabilidad: Capacidad para seguir la historia, la aplicación o la localización de todo aquello que
está bajo consideración
NOTAS: Al considerar un producto, la trazabilidad puede estar relacionada con:
• el origen de los materiales y las partes; • la historia del procesamiento;
• la distribución y localización del producto después de su entrega (ISO 9000:2005) En el campo de la Metrología se acepta la definición dada en el apartado 6.10 del JCGM 200:2012; VIM:
Propiedad de un resultado de medición por la cual dicho resultado puede relacionarse con una referencia mediante una cadena ininterrumpida y documentada de calibraciones, cada una de las cuales contribuye a la incertidumbre de medición por medio de una cadena
ininterrumpida de comparaciones teniendo todas las incertidumbres determinadas.
[Vocabulario Internacional de Metrología VIM]
Validación: Confirmación, mediante la aportación de evidencia objetiva, de que se han cumplido los requisitos para el uso pretendido o aplicación específica prevista [ISO 9000:2005].
Verificación, d on de l o s r e q u i s i t o s e s p e c i f i c a d o s son a d e c u a d o s p a r a u n u s o p r e v i s t o [ JCGM 200:2012; VIM].
Verificación: Confirmación, mediante la aportación de evidencia objetiva, de que se han cumplido los requisitos especificados [ISO 9000:2005].
Sesgo: La diferencia entre el valor esperado de los resultados de prueba y un valor de referencia
aceptado.
Nota. El sesgo es el error sistemático total en contraste con el error aleatorio. Puede existir uno o más componentes del error sistemático que contribuyen al sesgo. Una mayor diferencia sistemática con respecto al valor de referencia aceptado se refleja por un valor de sesgo mayor (4.9).
5. RESPONSABILIDADES Comité Técnico:
Revisar el contenido técnico del documento y sugerir mejoras o modificaciones al mismo. Director del Área de Laboratorios:
Identificar posibles riesgos que puedan generarse de la aplicación de este documento. Establecer control y cumplimiento de este documento así como la revisión y/o modificaciones
que se puedan generar por observaciones del personal técnico del SAE o Comité técnico o por actualización de documentos normativos de referencia.
Personal técnico del SAE, evaluadores, laboratorios acreditados y en proceso de acreditación:
Conocer y cumplir con lo establecido en este documento en el proceso de acreditación de laboratorios microbiológicos.
6. DESCRIPCIÓN 6.1. INTRODUCCION
La Norma NTE INEN ISO/IEC 17025 y los Criterios Generales de Acreditación de Laboratorios de Ensayo y Calibración, CR GA01, establecen y complementan los requisitos establecidos en la norma con directrices específicas tanto para los evaluadores como para los laboratorios que realizan ensayos microbiológicos., los criterios que deben cumplir los laboratorios de ensayo y calibración para demostrar competencia. Sin
embargo, para la aplicación de estos requisitos en los laboratorios de ensayos que realizan ensayos microbiológicos se ha considerado adecuado establecer un conjunto de directrices que complementen dicha Norma y criterios y que son los que se facilitan en este documento, a manera de criterios específicos.
6.2. ESTRUCTURA DE LOS CRITERIOS A LA NORMA NTE INEN ISO/IEC 17025:2006 A efectos de clarificar la estructura del presente documento debe entenderse que la palabra “debe” se utiliza para indicar las disposiciones que, al reflejar los requisitos de la NTE INEN ISO/IEC 17025, son obligatorios. La palabra “debería” se utiliza para indicar disposiciones que, no siendo obligatorias, son consideradas por el SAE como un medio reconocido de cumplir con los requisitos. Los laboratorios cuyos sistemas no sigan las recomendaciones del SAE de alguna manera solo podrán optar por la acreditación si pueden demostrar que cumplen la cláusula aplicable de la NTE INEN ISO/IEC 17025 y la intención de las directrices de un modo equivalente. Los números y títulos colocados en letra negrita a partir del numeral 6.3 corresponde a los requisitos de la NTE INEN ISO/IEC 17025. No se incluyen los textos, dado que estos deben cumplirse en su totalidad.
Para facilitar la lectura del presente documento, para los criterios del SAE se mantiene la numeración del requisito de la Norma NTE INEN ISO/IEC 17025, únicamente con la inclusión de la letra CE antes del numeral respectivo, si existe varios criterios a una misma cláusula se enumerará en forma secuencial en cursiva iniciando desde el 1.
Ejemplo: CE.5.3.1.1 sería la directriz 1, desarrollada por el SAE, relativa al requisito de la cláusula 5.3.1 de la Norma.
El presente documento ha sido revisado por el Comité Técnico del Sector Laboratorios de Ensayo de Alimentos del SAE, el mismo que se encuentra conformado por los representantes de las partes interesadas del proceso de acreditación y con el aporte de expertos en microbiología.
6.3. DESARROLLO DE LOS CRITERIOS ESPECÍFICOS APLICABLES A LA NORMA NTE INEN ISO/IEC 17025 PARA LABORATORIOS MICROBIOLÓGICOS
4. Requisitos relativos a la gestión.
4.6 Compras de servicios y de suministros: Reactivos y medios de cultivo
CE 4.6.1.1 Cada lote de reactivos y kits adquirido debe ser identificado, rotulado y aprobado siguiendo el respectivo procedimiento. Los registros incluirán: descripción, lote, fecha de: recepción, apertura, apariencia, aprobación/ rechazo y firma o iniciales de la persona responsable.
CE 4.6.1.2 El laboratorio debe asegurar que todos los reactivos (incluidas las soluciones de reserva), medios, diluyentes y otras suspensiones estén debidamente etiquetados, indicando, según sea apropiado, identidad, concentración, condiciones de conservación, fecha de preparación, fecha de caducidad validada y/o períodos recomendados de almacenamiento. Asimismo, los registros deben permitir la identificación de la persona responsable de la preparación.
CE 4.6.1.3 Los registros de medios deshidratados deben incluir: nombre, lote del fabricante, fechas de: recepción, apertura, preparación para control de calidad, aprobación, expiración y la firma o iniciales de la persona responsable.
CE 4.6.1.4 Los medios deshidratados deben ser rotulados con un esquema de identificación.
CE 4.6.1.5 Cada lote de medio de cultivo ingresado al laboratorio debe ser verificado antes de su utilización y si el medio no es utilizado frecuentemente se debe establecer las frecuencias para realizar el control de calidad de los mismos periódicamente.
Los registros deben incluir:
- Identificación del medio de cultivo - Número de lote
- Fecha de preparación
- Propiedades físicas (pH, volumen, apariencia, etc.), cuando aplique. - Resultados de selectividad y controles de esterilidad.
- Resultados de productividad cada cierto tiempo de acuerdo con el uso. - Fecha de aprobación o rechazo.
- Firma o iniciales de la persona responsable.
CE 4.6.1.6 Incluir dentro de los procedimientos una sistemática para el manejo de la disposición de los medios expirados o caducados.
CE 4.6.1.7 Todos los medios de cultivo deben ser tra zab les sometidos a pruebas de control de calidad. Esto incluye: preparación, trazabilidad al medio, pH si amerita, apariencia, lotes de esterilización (con sus respectivos registros), llenados de volumen, lote del medio y cantidad.
CE 4.6.1.8 Para los medios listos para el uso, el laboratorio tiene que estar debidamente informado de las especificaciones de calidad del fabricante, que como mínimo incluirán lo siguiente:
• Nombre de los medios y lista de componentes, incluido cualquier suplemento. • Período de validez y criterios de aceptabilidad aplicados.
• Condiciones de conservación. • Control de esterilidad.
• Control del crecimiento de los microorganismos de interés y de los microorganismos no deseados (con referencias a sus colecciones de cultivos) y criterios de aceptabilidad. • Controles físicos y criterios de aceptabilidad aplicados.
CE 4.6.1.9 Es necesario considerar si el fabricante del medio suministrado en una forma directamente utilizable o parcialmente completa dispone de un sistema de calidad reconocido (por ejemplo, certificación según ISO 9001), caso contrario el laboratorio deberá verificar que el material suministrado cumple las especificaciones establecidas, partiendo del supuesto de que dicho material es homogéneo.
CE 4.6.2.1 El laboratorio debe asegurar que la calidad de los reactivos utilizados sea apropiada para los ensayos realizados. Debe verificar la idoneidad de cada uno de los lotes de reactivos críticos para el ensayo, al inicio y durante su período de validez, utilizando microorganismos de control positivo y negativo que sean trazables a colecciones de cultivos nacionales o internacionales reconocidos.
CE 4.6.2.2 Debe existir un procedimiento o instructivo, para la aceptación de medios de cultivos preparados en los que se evalúa la idoneidad de los mismos.
CE 4.6.2.3 Todos los medios (y diluyentes y otras suspensiones) que se suministren en una forma directamente utilizable o parcialmente completa deben ser validados antes de su utilización. La evaluación de su efecto en la recuperación o supervivencia de los microorganismos de interés y la inhibición o supresión de los microorganismos no deseados tiene que ser plenamente cuantitativa; los atributos (por ejemplo, propiedades físicas y bioquímicas) deben evaluarse utilizando criterios objetivos.
CE 4.6.2.4 Para la preparación de medios debe utilizarse agua destilada, des ionizada o de ósmosis inversa, salvo que el método del ensayo especifique otra cosa. La calidad del agua debe monitorearse periódicamente para verificar la conductividad y control microbiológico de Aerobios Mesófilos.
5. Requisitos técnicos 5.2 Personal
CE 5.2.1.1 Los análisis microbiológicos deben ser realizados o supervisados por personal que demuestra competencia técnica ya sea a través d e l conocimiento, experiencia comprobada o titulación superior en microbiología o equivalente. Se admitirán otras titulaciones siempre que el personal tenga experiencia comprobada relacionada con el alcance de acreditación del laboratorio, la cual estará conforme al grado de complejidad. El personal debe tener la necesaria experiencia profesional práctica o formación para que se le permita realizar trabajos cubiertos por el alcance de acreditación, sin supervisión o se considere que tiene experiencia suficiente como para supervisar el trabajo acreditado. Algunas disposiciones específicas de la legislación nacional pueden sobrepasar las directrices contenidas en este documento.
CE 5.2.1.2 Cuando un método o técnica no se utilice de manera regular, se debe demostrar la competencia del personal antes de realizar el ensayo. El laboratorio d o c u m e n t a r á el intervalo crítico entre la realización de sucesivos ensayos.
CE 5.2.1.3 En algunos casos, puede que sea más apropiado relacionar la competencia con una técnica o instrumento en particular, más que con métodos.
CE 5.2.2.1 La dirección del laboratorio debe asegurar que el personal haya recibido formación adecuada para que sean competentes en la realización de los ensayos y en el manejo de los equipos. Dicha formación incluirá entrenamiento en técnicas básicas, como
preparación de placas, recuento de colonias, técnicas asépticas, etc., y la calificación se determinará aplicando criterios objetivos.
5.3 Instalaciones y condiciones ambientales
CE 5.3.1.1 Los requisitos ambientales específicos para las áreas de ensayo deben estar documentados y monitoreados e n el caso de parámetros críticos (humedad relativa, temperatura, recuentos microbianos ambientales).
CE 5.3.2.1 Las áreas de trabajo que requieran deben estar debidamente ventiladas y mantenidas a una temperatura adecuada. Esto puede conseguirse con ventilación natural o forzada, o mediante el uso de aire acondicionado (para el caso de aquellas que influyan directamente sobre los resultados). Cuando se utilice aire acondicionado, se emplearán filtros adecuados, que tendrán que inspeccionarse, mantenerse y reponerse según el tipo de trabajo realizado.
CE 5.3.3.1 La ubicación, el diseño y la distribución de las diferentes dependencias del laboratorio debe ser tal que el peligro de contaminación de las muestras ya sea derivado de las condiciones ambientales, contaminación cruzada u otras causas, sea mínimo.
CE 5.3.3.2 El área de lavado (después de la descontaminación) puede compartirse con otras áreas del laboratorio afines (por ejemplo: preparación de medios, esterilización de materiales, etc.) siempre que se adopten las debidas precauciones para evitar la transferencia de trazas de substancias que podrían afectar negativamente al crecimiento microbiano.
CE 5.3.3.3 Los equipos del laboratorio no deben moverse habitualmente entre las distintas áreas, para evitar una contaminación cruzada accidental.
CE 5.3.3.4 En el laboratorio de biología molecular debe disponerse de materiales para uso exclusivo de cada área de trabajo. Ej. Área de extracción de ADN, Área de PCR, etc.
CE 5.3.3.5 Para laboratorios de microbiología que manejen microorganismos patógenos (grupo de r i e s g o II, III y IV- según la OMS) y d e Biología Molecular d e b e n contar mínimo con una cabina de flujo laminar para el desarrollo de sus ensayos.
CE 5.3.3.6 No es aceptable que el laboratorio de microbiología ocupe una sola sala polivalente.
El área analítica y sembrado debe estar separada de la de preparación de medios de cultivo y lavado de material.
Cualquier tipo de separación utilizada debe garantizar que no se produzca contaminación cruzada entre todas las actividades del laboratorio.
CE 5.3.3.7 Se debe evitar cualquier elemento en el diseño del laboratorio que genere algún tipo de contaminante.
Para disminuir la contaminación debería adoptarse las siguientes medidas en las áreas de preparación de muestras, siembra y resiembra:
• superficies lisas e impermeables en paredes, techos, suelos y mesas de trabajo; • uniones cóncavas suelo-pared en las Áreas de preparación de muestra y siembra; • apertura mínima de ventanas y puertas mientras se estén realizando los ensayos; • las tuberías no deben estar expuestas de manera que puedan convertirse en
focos de contaminación;
• anaqueles de materiales no porosos que faciliten la limpieza; • instalaciones y accesorios debidamente sellados;
• materiales y equipos colocados de forma que se facilite su limpieza;
• ausencia de mobiliario, documentos u objetos que no sean los estrictamente necesarios para la realización de los ensayos.
CE 5.3.3.8 En el laboratorio microbiológico se utilizará una indumentaria apropiada para el tipo de ensayos que se realicen (en caso necesario, con protectores del cabello, nariz y boca, barba, manos, pies, etc.). El personal se despojará de dicha indumentaria antes de abandonar el área. Esto es especialmente importante en los laboratorios de análisis de patógenos y de laboratorio de biología molecular, donde, por ejemplo, el paso de un área con una elevada carga de ADN a otra con una baja carga de ADN podría producir sin querer contaminación cruzada. En muchos casos será suficiente utilizar una bata de laboratorio. CE 5.3.5.1 Las áreas de trabajo deben tener espacio suficiente como para poder mantenerse limpias y ordenadas. El espacio requerido dependerá del volumen de análisis realizados y de la organización interna del laboratorio. Dicho espacio tendrá que cumplir los requisitos de la legislación nacional, siempre que ésta exista.
CE 5.3.5.2 El laboratorio debe tener procedimientos o tener evidencia del cumplimiento de los siguientes parámetros:
• Aplicación de técnicas asépticas y plan de acción de desinfectantes. • Prueba de efectividad antimicrobiana cuando lo amerite.
• Limpieza y desinfección regular de las superficies de trabajo, baños con agua, incubadoras, refrigeradoras, etc.
• Mediciones de la calidad microbiológica del aire.
• Mantenimiento y reemplazo de filtros en cabinas de flujo laminar. • Eliminación de desechos y tratamiento de vertidos accidentales. • Control de plagas (cuando aplique).
• Medición de la calidad fisicoquímica del agua destilada (conductividad o resistividad). CE 5.3.5.3 Debe establecer un programa documentado de limpieza y desinfección para las instalaciones, equipos y superficies del laboratorio que tenga en cuenta los resultados de la vigilancia de las condiciones ambientales y la posibilidad de contaminación cruzada.
CE 5.3.5.4 Para control se debe determinar los criterios o límites microbiológicos con base en la experiencia del laboratorio o a referencias internacionales. En caso de que dichos niveles superen lo establecido, deben tomarse las acciones correctivas necesarias y describir las medidas a tomar para corregir las situaciones en caso de desviaciones.
5.4 Métodos de ensayo y de calibración y validación de los métodos 5.4.5 Validación de métodos
CE 5.4.5.1.1 La validación de los métodos de ensayo debe reflejar las condiciones reales de ensayo. La extensión de la validación necesaria dependerá del método y su aplicación.
CE 5.4.5.2.1 El laboratorio debe demostrar que una versión modificada de un método cumple las mismas especificaciones que el método original.
CE 5.4.5.2.2 Si se utilizan métodos oficiales, métodos normalizados o métodos de organismos nacionales o internacionales reconocidos, o basados en ellos, antes de analizar cualquier muestra, los laboratorios deberán verificar su capacidad para cumplir de forma satisfactoria todos los requisitos establecidos en dichos métodos, si no los tuvieran deberán determinar al menos en los ensayos cuantitativos: límite de cuantificación, recuperación (eficiencia) y reproducibilidad y en los cualitativos el límite de detección, sensibilidad y especificidad. [CEA-ENAC-20 Rev1]
A continuación, se indican las características de funcionamiento que al menos se deben confirmar en estos casos teniendo en cuenta la naturaleza del método:
- Métodos cuantitativos: Recuperación
En cuanto a la estimación de la recuperación debe evaluarse a partir de valores de referencia.
Estos valores podrían obtenerse por comparación con métodos de referencia, a partir de muestras inoculadas con materiales de referencia o cepas de referencia o a partir de resultados de Inter laboratorios.
Reproducibilidad
Se considera una referencia adecuada las pautas establecidas en el documento técnico ISO/TS 19036. Hay que tener en cuenta que, se debe realizar el cálculo de la precisión (precisión intermedia) en muestras con diferentes niveles de contaminación (ISO/TS 19036). En el caso de muestras con alto nivel de contaminación se deben realizar las correspondientes diluciones decimales para permitir el recuento de las placas, dentro del intervalo que se establece en documentos de referencia (ej. normas ISO 8199 e ISO 7218)
- Métodos cualitativos: Límite de detección
La estimación del límite de detección requiere del empleo de suspensiones de inóculo con niveles de concentración bajos. El propio intervalo de confianza a estos bajos niveles hace que, desde un punto de vista estadístico, no se pueda conocer de forma exacta si un determinado inóculo contiene o no el microorganismo a detectar. Por tanto, es aceptable comprobar el método con bajos niveles de inóculos de microorganismos diana de forma que se evalúen diferencias entre las distintas matrices, analistas, equipos etc., verificándose la capacidad del laboratorio para obtener resultados reproducibles y eficaces a estos niveles. Asimismo, puede obtenerse información sobre las características de funcionamiento de los métodos de:
- Actividades de control de calidad interno: Los resultados obtenidos en las actividades de control de calidad interno aplicando el método de ensayo a confirmar, pueden ser utilizados en la comprobación del método (ej. verificación de nuevas matrices).
-Participación en intercomparaciones (Control de calidad externo): Los resultados obtenidos en la participación en intercomparaciones también pueden ser utilizados para la comprobación de un método. Para ello, el laboratorio deberá evaluar la idoneidad y calidad del programa de intercomparación, valorando si es adecuado utilizar la información proporcionada por el ejercicio en la comprobación.
Puede tomarse como referencia lo dispuesto al respecto en ISO/TS 19036.
CE 5.4.5.2.3 Cuando la acreditación abarca diversos tipos de muestras (por ejemplo: alimentos), las diferencias debidas a las matrices deben tenerse en cuenta al momento de validar el método.
CE 5.4.5.2.4 Los laboratorios deben mantener los datos sobre validación de los sistemas de ensayo comerciales (kits) que utilicen. Estos datos pueden obtenerse de ejercicios de intercomparación o de datos sobre validación remitidos por los fabricantes y sujetos a la evaluación de una tercera parte (por ejemplo: AOAC). Si no se dispone de datos sobre
validación o si éstos no son plenamente aplicables, el laboratorio será responsable de completar la validación del método.
CE 5.4.5.3.1 Para la validación de métodos de ensayos microbiológicos cuantitativos cuando sea aplicable: debe considerarse los límites de detección y cuantificación. Exactitud y precisión para diferentes niveles. [CEA-ENAC-20 Rev1]
La validación debe ser tan amplia como sea necesario para satisfacer las necesidades del tipo de aplicación o del campo de aplicación dados. Por tanto, para este tipo de métodos, el laboratorio deberá evaluar su idoneidad para su ámbito de aplicación, así como las actividades necesarias a realizar para garantizar su validez técnica.
CE 5.4.5.3.2 Para la validación de los métodos de ensayo microbiológicos cualitativos, tales como los que el resultado se expresa en términos de detectado/no detectado, y los procedimientos de confirmación e identificación del microorganismo, deben ser validados estimando, cuando sea apropiado, su especificidad, sensibilidad desviación positiva, desviación negativa, límite de detección, eficiencia (recuperación), efecto matricial (debe realizarse cuando se está desarrollando un método nuevo o fuera de su alcance). [CEA-ENAC-20 Rev1]
5.4.6 Estimación de la incertidumbre de la medición
CE 5.4.6.2.1 La estimación de Incertidumbre no es de aplicación a métodos cualitativos ni número más probable (NMP). [CEA-ENAC-20 Rev1]
En el caso de ensayos microbiológicos de recuento en productos agroalimentarios el documento ISO/TS 19036 puede utilizarse como referencia. En el caso de análisis microbiológico de aguas existe el documento ISO 29201.
CE 5.4.6.3.1 Los distintos componentes individuales de la incertidumbre deben
identificarse y demostrar que están bajo control y evaluar su contribución a la variabilidad de los resultados.
5.5 Equipos
CE 5.5.2.1 Como parte de su sistema de calidad, el laboratorio adicionalmente al programa de mantenimiento y calibración del funcionamiento de sus equipos debe disponer de evidencias de las verificaciones de los equipos utilizados en los ensayos (cuando aplique). CE 5.5.2.2 La frecuencia de las calibraciones y verificaciones se establecerá en función de la experiencia documentada y dependerá del uso, el tipo y el funcionamiento previo de los equipos.
CE 5.5.2.3 El material volumétrico debe estar calibrado y/o verificado para garantizar la trazabilidad de todo el lote conforme a lo establecido en la Política de Trazabilidad del SAE cuando estos afecten significativamente al resultado.
CE 5.5.2.4 Cuando se utilice una única autoclave para separar las cargas de descontaminación y esterilización deben tomarse las debidas precauciones, que garanticen la limpieza eficaz de la autoclave, las cuales deben estar documentadas y registradas. CE 5.5.5.1 Se debe controlar la temperatura de funcionamiento de autoclaves, incubadoras, baños termostáticos, estufas y conservar los registros, cuando sea de importancia para el ensayo.
5.6 Trazabilidad de las mediciones 5.6.2 Requisitos específicos 5.6.2.1 Calibración
CE 5.6.2.1.1 La calibración de los equipos debe ser trazable a patrones nacionales o internacionales, conforme a la Política de trazabilidad del SAE.
CE 5.6.2.1.1.1 En caso de que el laboratorio realice sus propias calibraciones internas deberá cumplir los mismos requisitos exigidos a los laboratorios de calibración (por ejemplo: cálculo de incertidumbre, condiciones ambientales, etc.) conforme a la Política de trazabilidad de las mediciones emitida por el SAE, PL01.
5.6.3 Patrones de referencia y materiales de referencia 5.6.3.2 Materiales de referencia
CE 5.6.3.2.1 Para demostrar la trazabilidad, el laboratorio debe utilizar cepas de referencia de microorganismos obtenidos directamente de una colección nacional o internacional reconocida, cuando exista alguna. Alternativamente también podrían utilizarse cepas comerciales siempre que el laboratorio pueda demostrar en el momento de su uso que todas las propiedades relevantes son equivalentes.
CEPAS DE REFERENCIA
1. Número de pases que se pueden realizar a una cepa procedente de CC/BRC (Colección de Cultivos Microbianos reconocida o Centro de Recursos Biológicos Microbianos):
- La reconstitución de la cepa y su primera siembra en medio de cultivo es sólo una activación y no debe considerarse un pase.
- La activación es una etapa necesaria y crítica y debe hacerse en los medios de cultivo indicados por la Colección. El laboratorio debe conservar registros de dicha etapa.
- Los pases que se hayan realizado en la Colección de procedencia no deben ser tenidos en cuenta por el laboratorio ni afectan al número de pases que puede realizar (los pases realizados en la Colección forman parte de los “Antecedentes” de la cepa y quedan registrados en la ficha de cada cepa que la Colección debe mantener actualizada).
- El laboratorio debe demostrar que el número de pases que realiza a las cepas no afecta a sus características (en función de su uso previsto). Debe tenerse en cuenta que a mayor número de pases mayor riesgo de contaminación y de que se produzcan mutaciones.
2. Verificación de las cepas procedentes de CC/BRC en el laboratorio:
No es necesario que el laboratorio confirme la identidad de la cepa de referencia ya que ésta viene aportada con el certificado.
Las verificaciones que realiza el laboratorio dependerán, en cada caso, del uso previsto de la cepa. Por tanto, el laboratorio deberá confirmar en el laboratorio únicamente las características (bioquímicas, morfológicas, etc.) que le afecten según el uso de dicha cepa en su laboratorio. Por otro lado, en cada pase debe evaluarse la viabilidad y la pureza.
CE 5.6.3.2.2 Las cepas de trabajo no deben ser subcultivadas para sustituir las cepas de reserva. Los derivados comerciales de las cepas de referencia pueden utilizarse solo como cepas de trabajo.
5.6.3.3 Verificaciones intermedias
CE 5.6.3.3.1 Las cepas de trabajo no deben ser subcultivadas salvo que así se requiera y se defina en un método normalizado o que el laboratorio pueda aportar evidencias documentadas de que no se ha producido ningún cambio en ninguna propiedad importante.
5.6.3.4 Transporte y almacenamiento
CE 5.6.3.4.1 Se debe disponer de un procedimiento para la manipulación, almacenamiento, conservación, mantenimiento y uso de las cepas de referencia. 5.7 Muestreo
CE 5.7.1.1 El transporte y conservación de las muestras deben hacerse en unas condiciones apropiadas para mantener su integridad (por ejemplo, refrigeradas o congeladas, según sea necesario). Dichas condiciones deben ser controladas, manteniendo un registro de las mismas. Cuando sea apropiado, se documentará claramente quién es el responsable del transporte, la conservación de las muestras entre el muestreo y su entrega al laboratorio de ensayo.
CE 5.7.2.1 El muestreo debe ser realizado únicamente por personal debidamente calificado. Cuando sea aplicable, las condiciones ambientales, como la contaminación atmosférica y la temperatura, se vigilarán y registrarán en el lugar del muestreo. Asimismo, se registrará la hora en que se realiza el muestreo.
5.8 Manipulación de los ítems de ensayo o de calibración
CE 5.8.1.1 El laboratorio debe registrar toda la información relevante y, en particular, lo siguiente, cuando aplique:
a. fecha y, cuando sea oportuno, hora de la llegada de la muestra;
b. estado de la muestra en el momento de su entrega y, cuando sea necesario, temperatura; c. características de la operación de muestreo (fecha de muestreo, condiciones de muestreo
CE 5.8.4.1 Las muestras que se encuentren a la espera de ser analizadas deben almacenarse en condiciones adecuadas para reducir al mínimo cualquier modificación en la población microbiana presente. El laboratorio debe definir y registrar dichas condiciones de conservación.
CE 5.8.4.2 Las muestras deben conservarse hasta que se hayan obtenido los resultados del ensayo, o más tiempo según sea necesario. Cuando se sepa que algunas porciones de muestras de ensayo del laboratorio están altamente contaminadas, deben descontaminarse antes de su eliminación.
CE 5.8.4.3 Se debe mantener un procedimiento para la correcta eliminación de materiales contaminados.
5.9 Aseguramiento de la calidad de los resultados de ensayo y de calibración
CE 5.9.1.1 Un programa de controles periódicos es necesario para demostrar que controla la variabilidad (por ejemplo, entre analistas y entre equipos o materiales, etc.). Dicho programa debe abarcar todos los ensayos incluidos en el alcance de acreditación del laboratorio. [CEA-ENAC-20 Rev1]
En el ámbito de los ensayos microbiológicos, la implantación de actividades de control de calidad adecuadas resulta especialmente importante, dado que no siempre es posible caracterizar de forma completa el funcionamiento de estos procedimientos de ensayo. No
obstante, es factible establecer sistemas que permitan garantizar el adecuado control de los procedimientos de ensayo microbiológicos.
El aseguramiento de la calidad debe ser tanto interno como externo y puede aplicarse de diferentes formas:
Control interno
- Control de las condiciones de trabajo: proporciona información sobre la esterilidad de los medios y materiales auxiliares utilizados y en general, sobre la buena práctica en la realización de los ensayos.
Deben existir criterios para la desviación permitida. Ensayos cuantitativos:
- Control de la precisión: muestras naturales sin inocular y/o muestras naturales inoculadas. - Control de recuperación: muestras según lo establecido en el apdo. 3.1 (Recuperación). Ensayos cualitativos:
- El control de calidad interno debe incluir actividades que garanticen un adecuado control del método a niveles bajos de contaminación (ver Límite de detección). Estas actividades de control de calidad deben realizarse en la medida de lo posible con muestras naturales tanto positivas (inoculadas o contaminadas naturalmente) como negativas.
Control externo (intercomparaciones)
La participación en intercomparaciones permite una evaluación del sesgo de forma que el laboratorio pueda demostrar que se mantiene dentro de los criterios de aceptación definidos por normas, reglamentos, por el cliente o por el laboratorio.
Todas las actividades de aseguramiento de la calidad deberán planificarse de forma que, en el tiempo y en función del alcance del método, se incluya una adecuada representación de la variedad de matrices con las que trabaja el laboratorio, complementándose así los resultados obtenidos en la validación inicial.
Por último, la periodicidad de las actividades de control de calidad tanto interno como externo deberá establecerse considerando diversos factores como pueden ser:
La robustez del método utilizado (en función de los controles específicos incluidos en el mismo, método de referencia o de rutina, pruebas de confirmación, datos de validación, vigencia del método etc.).
La frecuencia con la que el laboratorio ejecuta dichos análisis (dado que se debe asegurar que el laboratorio mantiene la destreza en la ejecución del mismo en cuanto a los materiales, equipos y cualificación del personal).
Los resultados históricos de aseguramiento de calidad, así como la correcta evaluación de los mismos.
Los resultados obtenidos en el conjunto de acciones de evaluación de la calidad (ej. siembra por duplicado de placas, verificación del factor de dilución, interlaboratorios, muestras blancas, control de medios de cultivo, controles ambientales, cualificación del personal etc.). CE 5.9.1.2 El intervalo entre estos controles dependerá del diseño del programa y del número de ensayos realizados.
CE 5.9.1.3 En circunstancias especiales, un laboratorio puede estar acreditado para realizar un ensayo que rara vez se demanda. Se reconoce que, en tales casos, un programa continuo de control interno de la calidad no siempre será apropiado, siendo preferible un sistema que se realice en paralelo al ensayo y que demuestre que los resultados son satisfactorios.
CE 5.9.1.4 Los laboratorios deben participar regularmente en ensayos de aptitud relacionados con el alcance de su acreditación, dando preferencia a los programas de ensayos de aptitud que utilicen matrices apropiadas, conforme lo establecido en C R GA10 Criterios Generales para la participación en Ensayos de Aptitud-SAE.
CE 5.9.1.5 Siempre que sea posible, los materiales de referencia deben utilizarse con matrices apropiadas.
5.10 Informe de los resultados 5.10.2 Informes de ensayos
CE 5.10.2.1 El resultado no debe expresarse como “cero para una unidad definida” salvo que sea un requisito reglamentario. Los resultados de los análisis cualitativos deben expresarse como “detectado/no detectado” o “ausencia/presencia” de acuerdo al método de referencia utilizado por el laboratorio, en una cantidad o volumen de muestra definidos. También pueden expresarse en referencia al límite de detección del método.
CE 5.10.2.2 En análisis cuantitativos, cuando el número de microorganismos esté bajo el límite de cuantificación, debe expresarse el resultado como menor al límite de cuantificación para una unidad definida.
7. REGISTROS Ninguno