Quito - Ecuador
NORMA TÉCNICA ECUATORIANA NTE INEN 1529-16:2013 Primera revisión
CONTROL MICROBIOLÓGICO DE LOS ALIMENTOS.
SHIGELLA. MÉTODO DE DETECCIÓN
Primera edición
MICROBIOLOGICAL CONTROL OF FOODS. SHIGELLA. DETECTION METHOD
First edition
DESCRIPTORES: microbiología de los alimentos, microbiologico, shiguella
AL 01.05-313
CDU: 614.31:579.67.87 CIIU: 9320
ICS: 07.100.30
CDU: 614.31 :579.67.87 CIIU: 9320
ICS: 07.100.30 AL 01.05-313
Norma Técnica Ecuatoriana
Voluntaria
CONTROL MICROBIOLÓGICO DE LOS ALIMENTOS SHIGELLA
MÉTODO DE DETECCIÓN
NTE INEN 1529-16:2013 Primera revisión
2013-09
1. OBJETO
1.1 Esta norma establece un método cualitativo para la detección de Shigella en alimentos, que contempla las fases de pre enriquecimiento y enriquecimiento selectivo.
2. ALCANCE
2.1 Este método solo es aplicable para detectar la presencia o ausencia de Shigella en alimentos.
3. DEFINICIONES
3.1 Para efectos de esta norma, se adoptan las siguientes definiciones:
3.1.1 Shigella: Género perteneciente a la familia Enterobacteriaceae. Está integrado por microorganismos de forma bacilar, Gram negativos, inmóviles, que fermentan la glucosa sin producción de gas. No atacan la salicina ni el adonitol. No atacan el citrato ni producen acetil-metil-carbinol. No producen H2S ni hidrolizan la urea; no producen fenilalanina desaminasa; no licuan la gelatina ni descarboxilan la lisina, no fermentan la lactosa (la Shigella sonnei fermenta la lactosa, pero lentamente).
3.1.2 Detección de Shigella: Es la determinación de la presencia o ausencia de los microorganismos pertenecientes a este género por métodos adecuados.
3.1.3 Pre enriquecimiento: Tratamiento reparador de las células lesionadas utilizando medios mínimos sencillos exentos de agentes químicos selectivos.
3.1.4 Enriquecimiento selectivo: Tratamiento para estimular la multiplicación de las células bacterianas deseadas y reducir o inhibir el crecimiento de la flora competitiva, utilizando medios con agentes químicos selectivos.
4. DISPOSICIONES GENERALES
4.1 Por ser Shigellas, entre las bacterias entero patógenas, las más difíciles de aislar de los alimentos, se debe considerar, si es necesario o no, someter a la muestra a las fases de pre enriquecimiento y de enriquecimiento selectivo.
5. MÉTODO DE ENSAYO 5.1 Fundamento
5.1.1 Este método se basa en la utilización del agar XLD que contiene xilosa como agente diferenciador.
En este medio, las colonias de Shigella aparecen rojas debido a la incapacidad de la mayoría de ellas de fermentar la xilosa. A estas colonias se las somete a pruebas bioquímicas y si presentan reacciones características, según l tabla A.1, se las confirma serológicamente.
(Continúa) DESCRIPTORES: Microbiología de los alimentos, análisis, microbiológico, determinación de shigella.
NTE INEN 1529-16 2013-09
5.2 Equipos
5.2.1 Requisitos básicos: Toda la vidriera y utensilios que se utilicen en los ensayos deben ser de material inerte y resistente a esterilizaciones repetidas, además, deben estar perfectamente limpios y estériles.
5.2.2 Molino de carne para laboratorio, provisto de placas cribadas, cuyos agujeros no excedan de 4 mm de diámetro.
5.2.3 Licuadora de 8000 a 45000 rpm, con vasos de metal o vidrio de capacidad adecuada, y para esterilizar.
5.2.4 Homogeneizador para masajear las muestras
5.2.5 Equipo para esterilizar material, medios de cultivo y reactivos: autoclave y equipo para esterilizar por filtración
5.2.6 Estufa de secado con regulador de temperatura.
5.2.7 Incubadora, con regulador de temperatura, para cultivos a 37°C 5.2.8 Microscopio
5.2.9 Refrigeradora
5.2.10 Balanza de 0,1 g de sensibilidad 5.3 Reactivos y materiales
5.3.1 Reactivos y medios de cultivo
5.3.1.1 Requisitos básicos: para que exista uniformidad en los resultados, es necesario preparar los medios de cultivo con reactivos que sean de grado analítico, o, utilizar medios de cultivo completos, deshidratados, que deben reconstituirse según la instrucción del fabricante.
a) Composición y preparación de los medios de cultivo y reactivos. Ver NTE INEN 1529-1.
a.1) Agar xilosa-lisina-desoxicolato (XLD).
a.2) Agar MacConkey (NAC)
a.3) Agar desoxicolato (CD) o agar SS a.4) Agar Levine (EMB)
a.5) Agar citrato de Simmon.
a.6) Agar hierro triple azúcar (TSI) a.7) Agar soja tripica (TSA) a.8) Agar nutritivo
a.9) Agar nutritivo semisólido a.10) Caldo selectivo cistina a.11) Caldo urea (o agar)
a.12) Caldo lisina soja tripica (TSB) a.13) Caldo lisina descaroboxilasa a.14) Caldo tritona (Ljutov)
a.15) Caldo GN de enriquecimiento, según Hajna a.16) Caldo tritona (Ljutov)
a.17) Caldo nutritivo
a.18) Caldo base con purpura de bromocresol a.19) Reactivo de Kovacs
a.20) Solución de hidróxido de sodio 1 N a.21) Solución de ácido clorhídrico 1 N
a.22) Solución de fosfato tripotásico al 8% (K3PO4.7H2O) a.23) Solución fisiológica
a.24) Colorantes para Gram Antisueros
a.25) Antisueros Shigella poligrupos A, B, C, D y Alkalescens-Dispar a.26) Agar entérico Hektoen (HE)
a.27) Medio de L-Ornitina descarboxilasa
NTE INEN 1529-16 2013-09
5.3.2 Materiales
5.3.2.1 Mechero Bunsen 5.3.2.2 Gradillas o tuberas
5.3.2.3 Asas y agujas para cultivos
5.3.2.4 Materiales varios: cucharas, cuchillos, pinzas, tenedores, espátulas, tijeras, saca-bocados, etc.
5.3.2.5 Tubos de ensayos de 150 mm x 20 mm; 160 mm x 16 mm; 120 mm x 12 mm, 100 mm x 12 mm.
5.3.2.6 Probetas graduadas
5.3.2.7 Pipetas bacteriológicas de punta ancha graduadas en 1/10 de cm³.
5.3.2.8 Placas Petri de vidrio de 100 mm x 15 mm 5.3.2.9 Erlenmeyer
5.3.2.10 Frascos para muestreo con tapas de rosca, autoclavables 5.3.2.11 Pipetas Pasteur
5.3.2.12 Láminas o laminillas de vidrio, adecuadas para usar en ensayos de aglutinación 5.4 Preparación de la muestra
5.4.1 La unidad analítica debe provenir de una unidad de muestra de por lo menos 100 g, según la NTE INEN 1529-2 y debe ser preparada según la referida norma.
5.4.2 Las unidades de muestras perecederas que llegan al laboratorio deben mantenerse en refrigeración 0°C a 5°C, por no más de 24 h, En general, las muestras deben ser mantenidas en las condiciones adecuadas al producto hasta el momento del ensayo.
5.5 Procedimiento
5.5.1 Las muestras que han sufrido tratamientos de conservación y que las células de Shigella están debilitadas, someterlas a pre enriquecimiento procediendo a partir de 5.5.4.1.
5.5.2 La muestras que no han sufrido tratamientos de conservación y que contienen pequeño número de células no debilitadas de Shigella, someterlas a enriquecimiento selectivo procediendo a partir de 5.5.5.1.
5.5.3 En muestras que no han sufrido tratamientos físicos o de conservación y que contienen un número apreciable de células no debilitadas de Shigella, proceder a partir de 5.5.6.1 sin someterlas a pre enriquecimiento ni enriquecimiento selectivo.
5.5.4 Pre enriquecimiento
5.5.4.1 Muestras con tratamiento de conservación. En un frasco de boca ancha con tapa de rosca, asépticamente, pesar en pequeños pedazos 25g ± 0,1 g de muestra, obtenidas de las distintas zonas de la unidad de muestra y añadir 225 cm³ de caldo TSB. Si la muestra es líquida, transferir 25 cm³.
5.5.4.2 En una licuadora, homogeneizar entre 15 000rpm y 20 000 rpm por no más de 2 minutos, comenzar con pocas revoluciones. Omitir la trituración si la muestra es líquida, pulverulenta, molida o triturada, estas deben ser para suspender la muestra. Si la muestra es menor de 25 g, hacer proporcionalmente la dilución y tener en cuenta en el resultado.
5.5.4.3 Ajustar el pH del homogeneizado a 6,8 ± 0,2 con una solución estéril de hidróxido de sodio 1 N o ácido clorhídrico 1 N o de fosfato tripotásico al 8% (K3PO4. 7H2O).
5.5.4.4 Tapar el frasco, agitando de vez en cuando, dejar a temperatura ambiente durante 2 h.
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5.5.4.5 Continuar con el numeral 5.5.5.4.
5.5.5 Enriquecimiento selectivo
5.5.5.1 Muestras sin tratamiento de conservación que contienen pequeño número de células no debilitadas. En cada uno de dos frascos, de boca ancha y con tapa de rosca, de las distintas zonas de la unidad de muestra, pesar asépticamente 25 ± 0,1 g, en pequeños pedazos.
5.5.5.2 Añadir 225 cm³ de calcio GN a uno de los frascos, y 225 cm³ de caldo selenito cistina al otro. Homogeneizar según lo indicado en 5.5.4.2
5.5.5.3 Ajustar el pH a 6,8 ± 0,2 procediendo según 5.5.4.3, tapar los frascos y continuar con el numeral.
5.5.5.4 Muestras provenientes del cultivo de pre enriquecimiento. Al término de las 2 h de incubación (5.5.4.4), transferir 10 cm³ a un matraz que contenga 100 cm³ de caldo GN, y otros 10 a otro con 100 cm³ de caldo selenito-cistina. Tapar los frascos y mezclar delicadamente.
5.5.5.5 Aflojar las tapas ¼ de vuelta e incubarlos entre 35°C y 37°C, por 16h ± 2 h: O con un equipo que brinde un efecto anaeróbico equivalente, de modo tal que el intercambio de gas pueda ocurrir fácilmente, sin contaminación. y continuar con el numeral 5.5.6.2.
5.5.6.1 Siembra en placas de agares selectivos-diferenciales
5.5.6.1 Muestras sin tratamiento de conservación que contienen considerable número de células no debilitadas. Tratar a estas muestras según lo indicado en 5.5.4.1 a 5.5.4.2, y de esta solución, pipetear 0,5 cm³ en la superficie seca de cada una de dos placas individuales de los agares XLD, MAC y SS. Con una varilla en L. diseminar uniformemente el inóculo sobre la superficie del agar hasta que sea absorbido por el medio.
5.5.6.2 Muestras provenientes del cultivo de enriquecimiento selectivo. De cada uno de los cultivos de enriquecimiento selectivo (5.5.5.5), con un asa, sembrar en estría en la superficie seca de placas de agar XLD, MAC y SS, de modo que se obtengan colonias bien aisladas (primer sub cultivo).
5.5.6.3 Examinar las placas de acuerdo a 5.5.6.5 Si el crecimiento es pobre y no aparecen colonias.
Sospechosas de Shigella, incubar otras 24h y luego examinarlas.
5.5.6.4 Concluidas las 24 h adicionales de incubación de los cultivos de enriquecimiento selectivo (9.6.3) Realizar un segundo subcultivo según 5.5.6.2 a 5.5.6.3.
5.5.6.5 Aspecto de las colonias de Shigella en los medios de agar selectivos
a) Agar XLD. Las colonias típicas de Shigella son del mismo color que el medio de cultivo, transparentes, generalmente de 1 mm de diámetro. Las colonias con centro negro no son del genero Shigella y que pueden pertenecer a los géneros Proteus, Salmonella o Citrobacter.
b) Agar SS, agar MAC. Las colonias típicas de Shigella son incoloras y transparentes.
5.5.7 Selección y purificación de colonias
5.5.7.1 De cada una de las placas positivas, identificadas según 5.5.6.5, seleccionar cinco colonias típicas y/o sospechosas, bien aisladas y confirmarlas por separado, según el numeral 5.5.8 si hay medios de cinco, confirmar todas.
5.5.7.2 Si en alguna placa no hay colonias bien aisladas, con un asa de cultivo, sin rozar en el agar, tocar solo el centro de la colonia seleccionada y después de inoculada e incubada en caldo TSB (35ºC de 6h a 12 h) sembrar en estría la superficie seca de placas individuales de agar EMB o agar MAC, de modo que se obtengan colonias bien aisladas.
5.5.7.3 Invertir las placas e incubadas durante 20h a 24h entre 35°C y 37ºC.
5.5.7.4 Elegir las colonias incoloras (lactosa negativas), sembrar en tubos de agar nutritivo inclinado e incubarlas entre 35°C y 37ºC durante 20h a 24h.
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5.5.7.5 Hacer extensiones a partir de los cultivos en agar nutritivo inclinado, teñirlos por el método de Gram y verificar la presencia de solo bacilos Gram negativos, no capsulados ni esporulados. Si se comprueba la pureza de los cultivos, utilizarlos para la confirmación bioquímica.
5.8 Confirmación bioquímica. Los ensayos confirmatorios (ver tabla A.1) deben realizarse a partir de colonias previamente seleccionadas y purificadas y deben de preceder a las pruebas serológicas.
5.5.8.1 Prueba exploratoria en agar TSI. A cada una de las colonias seleccionadas 5.5.7.1 ó a cada uno de los cultivos obtenidos en 5.5.7.5, con una aguja inoculados en tubos individuales de agar TSI, sembrando por picadura en la columna del agar y el sesgo mediante estría para tomar las colonias de las placas tener el cuidado indicado en el numeral 5.5.7.2.
a) Incubar los tubos entre 35°C y 37ºC por 24horas ± 2 horas.
b) Retener los cultivos en agar TSI que presenten las siguientes reacciones típicas del género Shigella: superficie inclinada roja (reacción alcalina), columna amarilla (reacción ácida), sin ennegrecimiento (sin producción de H2S), sin burbujas o grietas en el agar (sin producción de gas, excepto ciertos biotipos de Shigella flexneri 6).
c) Si en algún tubo de agar TSI el cultivo es mixto, purificado siguiendo lo indicado en el numeral 5.5.7.2 a 5.5.7.5.
5.5.8.2 Pruebas complementarias. Con cada uno de los cultivos puros en agar TSI que presentan reacciones típicas de Shigella, realizar las siguientes pruebas (Ver anexo A):
a) Prueba de la ureasa: Sembrar en caldo urea, o en estría en agar urea, inclinado. Incubar 24h ± 2 h entre 35°C y 37ºC. Descartar los cultivos en los que el color del medio ha cambiado a rosa más intenso o cereza intenso (reacción positiva). Las shigellas dan una reacción negativa (color inalterado).
b) Prueba de movilidad: Inocular por picadura tubos de agar nutritivo semisólido hasta una profundidad de aproximadamente 5 mm. Incubar entre 35°C y 37ºC por 24 a 48 h. Si el crecimiento es solo a lo largo de la picadura sin extenderse fuera de ella, la movilidad es negativa. Las shigellas son inmóviles.
c) Pruebas de la lisina-descarboxilasa: Inocular en el fondo de la superficie liquida del caldo lisina- descarboxilasa, cubrir con una capa de vaselina líquida estéril de aproximadamente 1 cm de altura. Incubar entre 35°C y 37ºC y examinar diariamente durante 4 días. Las shigellas no descarbosilian la lisina y el color del medio permanece amarillo.
d) Prueba de la utilización del citrato: Sembrar en estría en la superficie inclinada de agar citrato de Simmon. Incubar 4 días entre 35°C y 37ºC. La reacción es positiva cuando el color verde del medio cambia a azul. Las shigellas dan reacción negativa.
e) Prueba del indol: Sembrar el cultivo en análisis en un tubo con agua triptona. Incubar 48 h entre 35°C y 37ºC. Adicionar al tubo de 0,2 a 0,3 cm³ del reactivo de Kovacs. La formación de un color púrpura en la capa del reactivo indica una reacción positiva. Amarillo, una reacción negativa. Las shigelas pueden dar una reacción positiva o negativa.
f) Prueba del malonato: En un tubo con caldo malonato inocular el cultivo en análisis. Incubar 48h ± 2h entre 35°C y 37ºC. el cambio del color verde del medio a azul oscuro indica una reacción positiva.
Las shigellas dan reacción negativa.
g) Prueba de la salicina: Inocular el cultivo en análisis en caldo purpura de bromocresol con salicina.
Incubar de 4 a 5 días entre 35°C y 37ºC, examinar diariamente la producción de ácido (color amarillo) y la producción de gas, permaneciendo inalterado el color del medio.
h) Prueba de la fenilalanina desaminasa: Sembrar en estría en la superficie inclinada de agar fenilalanina. Incubar 24 horas a 37ºC. Despues de este periodo añadir unas gotas de solución de cloruro férrico 0,5 M. La reacción es positiva cuando aparece un color verde azulado oscuro. Las shigellas dan una reacción negativa.
NTE INEN 1529-16 2013-09
i) Si es necesario, se puede realizar otras pruebas bioquímicas adicionales, tales como: la descarboxilación de la arginina y ornitina; fermentación del inositol, adonitol, maltosa, arabinosa, manitol; etc.
5.5.9 Confirmación serológica (Aglutinacion en porta-objetos).
5.5.9.1 Debe realizarse después de las pruebas bioquímicas utilizando cultivos de 18h a 24 h en agar nutritivo inclinado, que sean puros y no autoaglutinables, procedentes del crecimiento en TSI.
a) Comprobarla eficacia de los antisueros, ensayándolos con cultivos testigos conocidos.
b) Preparar una suspensión densa del microorganismo en análisis, suspendiendo el crecimiento en el agar inclinado de 18h a 24 h (5.5.7.1) en aproximadamente 1 cm³ de solución fisiológica;
tener cuidado para asegurar una suspensión uniforme.
c) Con un lápiz graso, marcar secciones de alrededor 2,5 cm de lado, en una lámina de vidrio o en la cara interna de una placa Petri de vidrio.
d) Poner una gota (0,05 cm³) de la suspensión bacteriana en cada una de las secciones marcadas, adyacentes.
e) Colocar una gota de solución salina sobre una de las gotas de la suspensión bacteriana y con un asa estéril, mezclar bien. Es el control negativo de la suspensión bacteriana y no debe autoglutinarse. Ver el numeral 5.5.9.3 literal b.
f) Colocar una gota del antisuero Shigella poligrupo D sobre la otra gota de la suspensión bacteriana y mezclar bien.
g) Balancear el porta objeto o la placa Petri por 1 a 2 minutos para conseguir que los microorganismos se aproximen unos a otros. Evitar una evaporación excesiva
h) Observar la reacción contra un fondo negro, de preferencia, con ayuda de una lupa.
i) La aglutinación positiva será rápida y completa. Una reacción positiva presenta los grumos suspendidos en una fase liquida totalmente clara.
j) Si no hay aglutinamiento con el antisuero Shigella poligrupo D, ensayar con los poligrupos A, A1, B, C,C1,C2 y poliantisuero Alkalescens-Dispar.
k) La aglutinación con alguno de los poliantisueros es una evidencia presuntiva de la presencia de Shigella, sin embargo, las pruebas serológicas no pueden usarse solas, sino que deben ser precedidas por las bioquímicas.
l) Los cultivos que después de las pruebas bioquímicas parecen ser Shigellas, pero que no se aglutinan o se aglutinan lentamente, deben ser tratados térmicamente, calentando la suspensión en un baño de agua hirviente, durante 15 a 60 minutos. Enfriar la suspensión, ensayarla nuevamente con los antisueros y ver si se aglutina.
m) Para identificar el tipo específico, realizar las pruebas bioquímicas y serológicas de tipos específicos dentro del grupo.
5.5.9.2 Clasificación de la reacción
a) Autoaglutinable. Cuando los microorganismos se aglutinan espontáneamente en ausencia del antisuero. La mezcla suspensión bacteriana – solución fisiológica debe permanecer inalterada, pues, es el control negativo de la suspensión bacteriana.
b) Positiva. Cuando los microorganismos en presencia de un antisuero se aglutinan rápida y completamente, entonces, se forman grumos en la mezcla suspensión bacteriana – antisuero.
Una reacción positiva con un antisuero Shigella poligrupo identifica el microorganismo como miembro del poligrupo.
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c) Negativa. Cuando en presencia de un antisuero los microorganismos no se aglutinan, permaneciendo inalterada la mezcla suspensión bacteriana – antisuero. Una reacción parcial o retardada debe ser considerada como negativa.
d) Diferenciación bioquímica adicional se recomienda llevar a cabo ensayos adicionales de diferenciación bioquímica para una mejor identificación de las cepas: algunas cepas de especie Escherichia coli y Shigella son similares
e) Acetato de sodio. Se siembra en estría en la parte inclinada del medio del acetato de sodio con el cultivo puro. Utilícese un asa recta para minimizar la cantidad de medio de cultivo transferido con el inoculo. Incube en condiciones aeróbicas durante 2 días a 37°C ± 1°C. Examine el medio verde para determinar el crecimiento: un resultado positivo se observa cuando el medio se torna azul. Observe el crecimiento, un color azul indica una reacción positiva, si no se produce, incube el medio de cultivo durante 2 días adicionales a 37°C±1°C.Examine nuevamente el medio. Las especies de Shigella no crecen o crecen muy pobremente. Las cepas de E.coli producen colonias azules con el medio a su alrededor de color azul/verde.
5.5.9.3 Interpretación de los resultados.
a) Son consideradas Shigella aquellas capas que presentan reacciones bioquímicas típicas (tabla A. 1) y dan reacciones serológicas positivas.
b) Pueden ser Shigella aquellas cepas que presentan reacciones bioquímicas típicas según la tabla A.1 pero que no dan reacciones serológicas positivas (8.5.9.1 literal i); cepas que no presentan reacciones bioquímicas típicas según la tabla A.1, pero dan reacciones serológicas positivas y las cepas autoaglutinables que dan reacciones bioquímicas típicas. La identificación final de estas cepas se realiza en centros especializados.
c) No son consideradas como Shigella las capas que no presenten reacciones bioquímicas típicas y reacciones serológicas positivas.
6. INFORME DE RESULTADOS
6.1 Si de los medios de enriquecimiento selectivo, no se desarrolla colonia alguna de Shigella en las placas de los medios sólidos selectivos secundarios, reportar. “no se aisló Shigella en 25 g (u otra cantidad) de producto examinado; el medio solido selectivo secundario fue agar XLD, MAC, SS”.
6.2 Si de uno o de los dos medios liquidos selectivos, hubo desarrollo de Shigella en las placas de los medios solidos selectivos secundarios, reportar: “se aislo Shigella en 25 g (u otra cantidad) de producto examinado; el medio liquido selectivo fue (caldo GN y/o caldo selenito cistina), el medio solido selectivo secundario fue (agar XLD, SS, MAC); las pruebas bioquímicas realizadas fueron…; los antisueros con que aglutina y la marca fueron…”
6.3 Indicar la norma de referencia.
6.4 Si en la identificación final intervino algún centro especializado, indicar el nombre exacto del centro.
6.5 Indicar cualquier condición no especificada en esta norma o considerada como opcional. El Informe debe incluir todos los detalles necesarios para la completa identificación de la muestra.
(Continúa)
NTE INEN 1529-16 2013-09
ANEXO A
TABLA A.1. Reacciones bioquímicas y serológicas de los miembros del género Shigella
Prueba o sustrato Reacción
Medio de serotipos que tiene esta
reacción
TSI
Glucosa-ácido Columna amarilla 100
Glucosa-gas Sin burbujas ni
grietaba 97,9
Lactosa-acido Sesgo rojos 99,7
Sacarosa-acido Sesgo rojo 99,1
H2S Sin
ennegrecimiento 100
Ureasa Color inalterado 100
Descarboxilación de
la L-lisina Color amarillo 100
Utilización de citrato Sin crecimiento y
color inalterado 100
Indol Anillo purpura/ 37,8
anillo amarilloc 62,2 Fenilalanina-
Desaminasa Color inalterado 100
Movilidad Crecimiento a lo
largo de la picadura 100
Salicina Color inalterado 100
Malonato Color inalterado 100
Suero polivalente Aglutina 100
a: Dos biotipos de S.flexnery 6 pueden producir una pequeña cantidad de gas.
b: La S.sonnel y algunas capas fermentan la lactosa lentamente (11,4%en 3 días o más).
c: Las cepas pertenecientes al grupo D son siempre negativas, pero las de los grupos A, B y C pueden ser positivas.
(Continúa)
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TABLA A.2
Diferenciación bioquímica u confirmación de Shigella o especies provenientes de Escherichia coli, Hafnia y especies de Providencia
Prueba E.coli Especies
de Hafnia Providencia Shigella sonnei
Shigella flexneri
Shigella
dysenteriae Shigella boydii
H2S de TSI - - - -
Gas glucosa (TSI)
+ V + - - -e -e
Motilidad + V V - - - -
Ureasa - - V - - - -
L-Lysina descarboxilasa
V + - - - - -I
L-Ornitina descarboxilasa
V + - + - - -
Formación de Indol
+ - + - Vd (61%) Vd (44%) Vd (29%)
ß-
Galactosidasa
+ V - +(95%) - Vf(50%) Vf(11%)
Formación de ácido:
Dulcitol V V - - Vg(9.4%) Vg(4.5%) Vg(6.7%)
Glucosa + + - +(100%) +(100%) +(100%) +(100%)
Lactosa V V - -c -a - -a
Mannitol + + V +(99%) +b (94%) - +(98%)
Melibiosa V V V - V V V
Rafilosa V V - -c(2,5%) V(53%) - -
Salicín V V - - - - -
Sorbitol + - - - V(31%) V(29%) V(42%)
Sucrosa V - V -c(1,5%) - - -
Xylosa + + - - - Vh(4,0%) V(57%)
V: cepas variables dentro de o entre serovariedades de una especie y, cuando dadas, (x%) indica el porcentaje de cepas positivas 1).
a Algunas cepas de S. flexneri serotipo de 2a y S. boydii 9 producir ácido.
b Algunas cepas de S. flexneri serovares 4 y 6b no producen ácido.
c Shigella sonnei produce ácido después de la incubación de varios días.
d Algunos serotipos de Shigella dysenteriae y S. flexneri serotipo 6 y S. boydii son negativos.
e Las cepas de S. flexneri correos y S. boydii serotipos 13 y 14 producen ácido y gas.
f Las cepas de S. dysenteriae serotipo 1 y S. boydii serovar 13 son siempre positivos.
g Las cepas de S. dysenteriae g serovar 5 y S. flexneri serotipo 6 son positivos.
h Las cepas de S. dysenteriae h serotipos 8 y 10 son positivos y 4 y 6 son variables.
i sólo las cepas de S. boydii serovar 13 son positivos.
(Continúa)
NTE INEN 1529-16 2013-09
APÉNDICE Z
Z.1 DOCUMENTOS NORMATIVOS A CONSULTAR
Norma Técnica Ecuatoriana NTE INEN 1529-1 Control microbiológico de los alimentos. Preparación de medios de cultivo y reactivos
Norma Técnica Ecuatoriana NTE INEN 1529-2 Control microbiológico de los alimentos. Toma, envío y preparación de muestras para el análisis microbiológico
Z.2 BASES DE ESTUDIO
Norma Colombiana. NTC 5567:2007. Microbiología de alimentos y de alimentos para animales.
Método horizontal para la detección de Shigella spp. Bogotá, 2007
Norma Internacional ISO 21567:2004. Microbiology of food and animal feeding stuffs – horizontal method for the detection of Shigella spp. Geneva, 2004
INFORMACIÓN COMPLEMENTARIA
Documento:
NTE INEN 1529-16 Primera revisión
TÍTULO: CONTROL MICROBIOLOGICO DE LOS
ALIMENTOS. SHIGELLA. MÉTODO DE DETECCIÓN
Código:
AL 01.05-313 ORIGINAL:
Fecha de iniciación del estudio:
REVISIÓN:
Fecha de aprobación anterior por Consejo Directivo 1996-02-27 Oficialización con el Carácter de Obligatoria por Acuerdo No. 0106 de 1996-04-09
publicado en el Registro Oficial No. 928 de 1996-04-18
Fecha de iniciación del estudio: 2012-07-30 Fechas de consulta pública: 2012-12-03 a 2013-01-02
Subcomité Técnico de:
Fecha de iniciación: Fecha de aprobación:
Integrantes del Subcomité:
NOMBRES:
Mediante compromiso presidencial N° 16364, el Instituto Ecuatoriano de Normalización – INEN, en vista de la necesidad urgente, resuelve actualizar el acervo normativo en base al estado del arte y con el objetivo de atender a los sectores priorizados así como a todos los sectores productivos del país.
Para la revisión de esta Norma Técnica se ha considerado el nivel jerárquico de la normalización, habiendo el INEN realizado un análisis que ha determinado su conveniente aplicación en el país.
La Norma en referencia ha sido sometida a consulta pública por un período de 30 días y por ser considerada EMERGENTE no ha ingresado a Subcomité Técnico.
INSTITUCIÓN REPRESENTADA:
Otros trámites: Esta NTE INEN 1529-16:2013 (Primera revisión), reemplaza a la NTE INEN 1529-16:1996 La Subsecretaría de la Calidad del Ministerio de Industrias y Productividad aprobó este proyecto de norma Oficializada como: Voluntaria Por Resolución No. 13285 de 2013-08-13 Registro Oficial No. 83 de 2013-09-18
Instituto Ecuatoriano de Normalización, INEN - Baquerizo Moreno E8-29 y Av. 6 de Diciembre Casilla 17-01-3999 - Telfs: (593 2)2 501885 al 2 501891 - Fax: (593 2) 2 567815
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