11 kn. de publicación: ES kint. Cl. 6 : A61K 31/565, A61K 31/57

Texto completo

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ESPA ˜NA

C07D 209/30, C07D 457/02

//(A61K 31/57, A61K 31:565)

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TRADUCCION DE PATENTE EUROPEA

T3

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86 umero de solicitud europea: 91830402.3 k

86 Fecha de presentaci´on : 27.09.91 k

87 umero de publicaci´on de la solicitud: 0 483 077 k

87 Fecha de publicaci´on de la solicitud: 29.04.92

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54 T´ıtulo: Procedimiento para desarrollar la s´ıntesis de una droga contraceptiva y de control del

ciclo menstrual que tiene propiedades anticinet´osicas, oncost´aticas y terap´euticas para el tratamiento de los tumores de mama y melanomas.

k 30 Prioridad: 28.09.90 IT 21596 /90 11.12.90 IT 22338 /90 16.09.91 IT MI912438 k 73 Titular/es:

I.F.L.O. S.a.s. di Giorgio e Aldo Laguzzi Via Prandina, 7

I-20127 Milano, IT

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45 Fecha de la publicaci´on de la menci´on BOPI:

01.04.96

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72 Inventor/es: Fraschini, Franco;

Duranti, Ermanno; Di Bella, Luigi; Stankov, Bojidar y Laguzzi, Aldo

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45 Fecha de la publicaci´on del folleto de patente:

01.04.96

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74 Agente: opez Marchena, Juan Luis

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5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 DESCRIPCION Antecedentes de la invenci´on

La presente invenci´on se refiere a procedimientos para desarrollar la s´ıntesis de una droga contracep-tiva y de control del ciclo menstrual que tiene propiedades anticinet´osicas, oncost´aticas y terap´euticas para el tratamiento de los tumores de mama y melanomas, a partir de la melatonina.

Despu´es de a˜nos de estudios y experimentos, relacionados con el mecanismo de acci´on de la melato-nina, este indol se considera en la actualidad como el producto hormonal m´as importante de la gl´andula pineal.

Los avances en el campo de la investigaci´on de los receptores han llevado a la localizaci´on de dos centros receptores importantes de la melatonina en el SNC: lapars tuberalisde la gl´andula pituitaria, y los n´ucleos supraquiasm´aticos (NSC) del hipot´alamo.

Estudios en profundidad han permitido descubrir la base biol´ogica del mecanismo de acci´on de la melatonina y sus dos derivados halogenados (2-bromo y 2-yodomelatonina).

Algunos experimentos realizados por diversos grupos de investigadores han confirmado parte de los descubrimientos anteriores, y han demostrado que la capacidad de la melatonina para inhibir la repro-ducci´on, en condiciones experimentales dadas, puede estar relacionada con una acci´on directa del indol en los elementos responsables de la hormona en el SNC y la gl´andula pituitaria.

As´ı, por la investigaci´on anterior se sabe que la melatonina puede utilizarse potencialmente como droga contraceptiva humana.

De hecho, la investigaci´on realizada recientemente ha demostrado la posibilidad del uso de la me-latonina en asociaci´on con un compuesto progest´ınico (noretisterona), como potente contraceptivo que, adem´as, proporciona varias ventajas, tales como un bajo riesgo de concepci´on (inferior al 1%), menor riesgo de alteraciones vasculares (no se utiliza ning´un compuesto estrog´enico) y per´ıodos pre-menstruales y menstruales menos dolorosos, as´ı como per´ıodo premenop´ausico menos molesto (se sabe que la melato-nina y sus agonistas tienen efectos sedantes).

En los ´ultimos a˜nos, se han utilizado como contraceptivos la noretisterona sola, as´ı como otros deri-vados progest´ınicos, conocidos generalmente con el nombre de “minip´ıldora”.

La noretisterona, cuando se utiliza en forma de “minip´ıldora”, no ha proporcionado sin embargo resul-tados notables para prevenir embarazos indeseados (hay un riesgo de concepci´on de aproximadamente un 2,35%). Se ha comprobado que otros compuestos progest´ınicos, tales como el 1-norgestrel, proporcionan mejores resultados con dosis reducidas (de 0,08 a 0,16 mg).

Por otro lado, se ha observado que, para poder expresar su acci´on contraceptiva, la melatonina nece-sitaba dosis comparativamente elevadas (100-200 mg).

Resumen de la invenci´on

As´ı, la finalidad de la presente invenci´on es la de proporcionar un procedimiento para la preparaci´on de 2-yodomelatonina y 2-bromomelatonina, potentes agonistas de la melatonina.

Seg´un un aspecto de la presente invenci´on, esta finalidad, junto con otros objetos que aparecer´an con mayor claridad en la exposici´on que sigue, se alcanzan con los procedimientos ense˜nados en las reivindi-caciones independientes.

En las sobre-reivindicaciones se definen otras caracter´ısticas de los procedimientos en cuesti´on. M´as concretamente, los procedimientos inventivos para la s´ıntesis de la 2-bromo- y la 2-yodomelatonina se realizan bas´andose en los siguientes esquemas funcionales:

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5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 S´ıntesis de la 2-bromomelatonina (N-acetil-2-bromo-5-metoxitriptamina)

A una soluci´on de melatonina (1,16 g; 5 mM) en ´acido ac´etico anhidro (10 ml) se a˜nade lentamente, bajo agitaci´on, una soluci´on de bromosuccinimida (NBS: 0,89 g; 5 mM), en ´acido ac´etico anhidro (30 ml).

La mezcla de reacci´on se agita bajo nitr´ogeno a temperatura ambiente durante tres horas. Al cabo de este tiempo, se enfr´ıa en ba˜no de hielo y se neutraliza a un pH de 7 con una soluci´on al 50% de NaOH, igualmente bajo nitr´ogeno; se obtiene de ese modo una suspensi´on cremosa.

La fase acuosa se extrae cuatro veces con cloroformo; las fases org´anicas combinadas se lavan dos veces con una soluci´on saturada de NaCl y se secan sobre sulfato s´odico anhidro. El disolvente se retira a presi´on reducida, a fin de que se proporcionen 2 g de un producto bruto en la forma de un aceite marr´on-amarillento.

El producto bruto se purifica por cromatograf´ıa de centelleo (gel de s´ılice; EtOAc; ciclohexano; 8:2), obteni´endose as´ı 0,70 g (rendimiento 45%) del producto.

Se cristaliza con EtOAc: hexano; temperatura de fusi´on: 146-149◦C (en Kofler). La reacci´on puede ir seguida por CLT, con el uso de acetato de etilo como fase m´ovil. El espectro NMR confirma la estructura del producto obtenido.

S´ıntesis de la 2-yodomelatonina (N-acetil-2-yodo-5-Metoxitriptamina)

A una soluci´on de melatonina (2,32 g: 10 mM) en cloroformo (70 ml), enfriada a -20◦C, se a˜nade N-yodosuccinimida (NIS: 2,25 g: 10 mM): la mezcla de reacci´on se agita a -20◦C durante 4,5 horas.

La soluci´on org´anica se lava con soluci´on saturada de carbonato s´odico (1 vez) y con agua (dos veces) y a continuaci´on se seca sobre sulfato s´odico anhidro.

El disolvente se retira a presi´on reducida y la materia bruta se purifica por cromatograf´ıa de centelleo (al´umina anhidra; EtOAc), obteni´endose as´ı 0,5 g de un producto que se recristaliza con EtOAc, con trazas de hexano.

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5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Toxicidad:

En el caso espec´ıfico de la melatonina, se han realizado ensayos de toxicidad aguda con: 1) Ratas, DL50por v´ıa intraperitoneal = superior a 462 mg/Kg

2) Ratas, DL50por v´ıa oral = superior a 800 mg/Kg

3) Conejos, DL50 por v´ıa intravenosa = superior a 394 mg/kg

(per´ıodo de observaci´on, 14 d´ıas) y la toxicidad subaguda en:

4) Ratas, DL50por v´ıa subcut´anea = superior a 192 mg/Kg

(per´ıodo de observaci´on, 25 d´ıas).

Las pruebas hematol´ogicas, bioqu´ımicas y electrofor´eticas, y los ensayos para determinar el estado y peso de ´organos, m´edula ´osea y an´alisis histol´ogicos no muestran ninguna toxicidad particular y, de acuerdo con estas observaciones, que muestran la baja toxicidad de cada compuesto individual y de sus asociaciones, puede darse una opini´on favorable en cuanto al comienzo de la experimentaci´on cl´ınica.

En lo que se refiere a la toxicidad de la 2-yodomelatonina y la 2-bromomelatonina, las pruebas de toxicidad aguda se realizaron:

1) en ratas por v´ıa oral: DL50superior a 200 mg/Kg

2) en ratones por v´ıa oral e intraperitoneal: DL50superior a 100 mg/Kg.

Adem´as, todos los detalles relacionados con la administraci´on, as´ı como las dosis indicadas, pueden cambiarse seg´un los pacientes espec´ıficos que deben ser tratados, sin apartarse por ello del ´ambito de la invenci´on, que se basa fundamentalmente en procedimientos para la s´ıntesis de la 2-yodomelatonina o la 2-bromomelatonina y sus derivados, bien sea individualmente como en asociaci´on con un progesteno en la terapia contraceptiva y en la terapia para el control del ciclo menstrual, as´ı como en la terapia preventiva oncost´atica de tumores de mama y melanoma y en la terapia anticinet´osica.

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5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 REIVINDICACIONES

1. Procedimiento para realizar una s´ıntesis de la 2-yodomelatonina (es decir, la N-acetil-2-yodo-5-metoxitriptamina) para obtener una droga con propiedades anticinet´osicas, oncost´aticas, preventivas y terap´euticas, para el tratamiento de tumores de mama y melanomas, caracterizado porque la citada s´ıntesis se define por la f´ormula siguiente:

2. Procedimiento para la s´ıntesis de la 2-yodomelatonina seg´un la Reivindicaci´on 1,caracterizado

porque el citado procedimiento comprende los pasos de proporcionar una soluci´on de melatonina (2,32 g: 10 mM) en cloroformo (70 ml), enfriar esta soluci´on a -20 ◦C; introducir en la citada soluci´on enfriada N-yodosuccinimida (NIS: 2,25 g: 10 mM) a fin de proporcionar una mezcla de reacci´on; agitar la citada mezcla a -20◦C durante un per´ıodo de 4,5 horas; lavar la citada soluci´on org´anica con soluci´on saturada de carbonato s´odico (1 vez) y agua (2 veces), y a continuaci´on secar la citada soluci´on org´anica lavada en sulfato s´odico anhidro.

3. Procedimiento para la s´ıntesis de la 2-yodomelatonina seg´un la Reivindicaci´on 1,caracterizado

porque dicho procedimiento comprende los pasos adicionales de retirar el disolvente de dicha mezcla a presi´on reducida, de manera que se proporcione una materia bruta; purificar la citada materia bruta por cromatograf´ıa de centelleo (al´umina anhidra; EtOAc) a fin de proporcionar una cantidad deseada (0,5 g) de un producto que se recristaliza a partir de EtOAc con trazas de hexano, de manera que se obtengan 0,4 g (rendimiento, 10-12%) de un producto que tiene una t. f. de aprox. 142◦C.

4. Procedimiento para la s´ıntesis de la 2-bromomelatonina (N-acetil-2-bromo-5-metoxitriptamina),

caracterizadoporque dicha s´ıntesis de define por la f´ormula siguiente:

5. Procedimiento para la s´ıntesis de la 2-bromomelatonina, seg´un la Reivindicaci´on 4,caracterizado

porque dicho procedimiento comprende los pasos de introducir lentamente, en una soluci´on de melatonina (1,16 g; 5 mM) en ´acido ac´etico anhidro (10 ml), bajo agitaci´on, una soluci´on de bromosuccinimida (NBS: 0,89 g: 5 mM) en ´acido ac´etico anhidro (30 ml).

6. Procedimiento para la s´ıntesis de la 2-bromomelatonina, seg´un la Reivindicaci´on 4, caracteri-zado porque dicho procedimiento comprende el paso de agitar dicha mezcla de reacci´on para nitr´ogeno a temperatura ambiente durante tres horas; enfriar dicha mezcla en ba˜no de hielo y neutralizar la mezcla enfriada a un pH de 7 con el uso de una soluci´on de NaOH al 50%, bajo nitr´ogeno, a fin de proporcionar una suspensi´on cremosa.

7. Procedimiento para la s´ıntesis de la 2-bromomelatonina, seg´un la Reivindicaci´on 4,caracterizado

porque dicho procedimiento comprende adem´as el paso de extraer cuatro veces la fase acuosa con cloro-formo y lavar dos veces las fases org´anicas combinadas con una soluci´on saturada de NaCl, secar las fases org´anicas combinadas en sulfato s´odico anhidro y retirar el disolvente a presi´on reducida de manera que se obtengan 2 g de un producto bruto en forma de aceite marr´on-amarillento.

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5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60

(rendimiento, 45%), de un producto, y cristalizar acto seguido dicho producto (EtOAc: hexano): t. f. 146-149◦C (en Kofler), efectu´andose la reacci´on por CLT, con el uso de acetato de etilo como eluyente.

9. Compuestocaracterizadopor el hecho de que consiste en la 2-bromomelatonina.

NOTA INFORMATIVA:Conforme a la reserva del art. 167.2 del Convenio de Patentes Europeas (CPE) y a la Disposici´on Transitoria del RD 2424/1986, de 10 de octubre, relativo a la aplicaci´on del Convenio de Patente Europea, las patentes europeas que designen a Espa˜na y solicitadas antes del 7-10-1992, no producir´an ning´un efecto en Espa˜na en la medida en que confieran protecci´on a productos qu´ımicos y farmac´euticos como tales.

Esta informaci´on no prejuzga que la patente est´e o no inclu´ıda en la mencionada reserva.

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