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PRÁCTICA 10
OBSERVACION DE CROMOSOMAS y CELULAS EN
MITOSIS EN MERISTEMOS TERMINALES DE RAICES
DE ALIUM CEPA (L.)
Materiales:
Microscopio
Portaobjetos y cubreobjetos Bisturí
Vidrio de de reloj o pozillos de porcelana. CIH.0.1N.
Orceina acética
Mechero de alcohol. Pinzas de madera Papel de filtro
Raices de cebollas, ajos etc.
Método:
Poner las cebollas en agua durante varios días hasta que se desarrollen las raíces, para conseguirlo se colocan las cebollas sobre un vaso, de tal forma que el agua toque la parte inferior del bulbo. Es necesario que los vegetales se mantengan a 10°-12° C. y a oscuras, (un frigorífico casero reúne perfectamente estas condiciones).
Cuando las raíces tengan 7 o más milímetros de longitud se cortan con una tijera solamente la parte apica1 de unos 4 mm. de longitud aproximadamente.
Las raíces así obtenidas se colocan en un vidrio de reloj que contenga orceina acética al 2%.
mechero de alcohol hasta la emisión de vapores pero cuidando de que no llegue a hervir (antes de empezar a calentar añadir al vidrio unas gotas de CIH.0.1N). Posteriormente se deja reposar en la mesa de 10 a 15 minutos. Esta operación se (antes de empezar a calentar añadir al vidrio unas gotas de CIH.0.1N). Posteriormente se deja reposar en la mesa de 10 a 15 minutos. Esta operación se (repite tres o cuatro veces, después del último calentamiento dejar reposar durante quince minutos. Seguida-mente se toma con las pinzas los dos primeros milímetros de las raíces, separando previamente la cofia de consistencia más dura. A continuación se realiza un "SQUASH" aplastando el cubreobjetos contra el portaobjetos. Generalmente se utiliza la punta de un lápiz de grafito golpeando suavemente y describiendo espirales. De esta forma se eliminarán las burbujas de aire que entorpecen la realización de la práctica.
Limpiar el exceso de colorante con papel de filtro y observar al microscopio por encima de los 500X.
Resultados:
Se observan los ápices las raíces extendidos, en ellos se destacan las células más o menos rectangulares según su proximidad a la punta. En la mayor parte de las células del ápice se pueden observar los cromosomas fuertemente teñidos, a modo de pequeños filamentos más o menos nítidos e individualmente perfilados, según la fase del ciclo mitótico en la que se encuentren.
Describir mediante un dibujo y las explicaciones pertinentes cada una de las fases observadas dentro del ciclo celular.
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Duración del ciclo mitótico.
Se observarán cinco campos microscópicos por alumno a 800X contabilizando al menos 100 células, los resultados se utilizan para completar el cuadro adjunto:
Realizar en un diagrama de sectores el porcentaje de 360º que tendría cada una de las fases de la mitosis.
INTER PROF META ANA TELO
Nº1
Nº2
Nº3
Identifica el estado en el que se encuentran estas células fotografiadas en el Laboratorio de Biología del Colegio Maravillas.
REACCION DE FEULGEN :
Esta reacción es específica de los núcleos celulares y de los cromosomas, por esta razón se ha utilizado en estudios cualitativos y cuantitativos.
Fundamento:
Se basa .en la capacidad de los monosacáridos (en este caso desoxirribosa, presente en el A.D.N.) para reducir el reactivo se Schiff que en estado normal es incoloro. El azúcar tiene que deshacerse de la correspondiente base nitrogenada, para ello sometemos la preparación a una suave hidrólisis con CIH. Una vez que el A.D.N. se ha liberado de los grupos nitrogenados quedan tantos radicales aldehídicos libres como bases se hallan eliminado, estos grupos aldehídicos son los que se reducen dando el color rojo-magenta típico de la reacción.
Cuando se ensaya sobre A.R.N. la reacción es negativa ya que la hidrólisis de este ácido provoca una degradación a nucleótidos directamente no liberando los grupos aldehídicos responsables de la reacción.
Materiales:
Raíces de cebolla
Fijador Carnoy (Alcohol y ácido acético 3:1) Agua destilada C1H 5N.
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Agua sulfurosa Acido acético 50%. Microscopio
Portaobjetos y cubreobjetos.
Los tejidos se mantendrán una hora en el fijador Carnoy lavándose cuidadosamente una vez transcurrido el tiempo. Las raíces se introducen en un vidrio de reloj con CIH 5N. durante 30 minutos, agitándose constantemente, una vez tratada con el ácido se lavan cuidadosamente con el agua destilada. A continuación se depositan las raíces en el reactivo de Schiff en un recipiente cerrado herméticamente (a oscuras) durante 20 minutos y agitando de vez en cuando. Una vez pasado el tiempo se lavan las raíces en agua sulfurosa para eliminar el reactivo no utilizado. Después se lava en agua corriente y se preparan las raíces para el "Squash". La observación microscópica se hará por encima de los 500X.
A continuación se depositan las raíces en el reactivo de Schiff en un recipiente cerrado herméticamente (a oscuras) durante 20 minutos y agitando de vez en cuando. Una vez pasado el tiempo se lavan las raíces en agua sulfurosa para eliminar el reactivo no utilizado. Después se lava en agua corriente y se preparan las raíces para el "Squash". La observación microscópica se hará por encima de los 500X.
Resultados: Expresar gráficamente y comentar los campos observados al microscopio. Reactivo de Schiff:
0.5 gr. de Fuschina básica + 100 m!. de agua desionizada + 1 gr. de metabisulfi to sódico + 10 m!. de C1H 1N., introducir en agitador magnético durante 2h. hasta que se decolore la solución, añadir carbón activo durante los últimos diez minutos
de agitación; filtrar. El reactivo debe observarse incoloro. (agua sulfurosa:10ml. de.CIH 1N. + 10 ml·de metabisulfito sódico al 5% + 180 mI. de agua destilada. Esta preparación no puede conservarse y ha de prepararse de nuevo para ser utilizada).
