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NSAYOS MICROBIOLÓGICOS U.T. 14 U. T. 14. MICROBIOLOGÍA AMBIENTAL (10h)

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U. T. 14

MICROBIOLOGÍA AMBIENTAL

(10h)

1. Introducción

2. Tipos de contaminantes biológicos

3. Flora microbiana presente en el ambiente

4. Control del riesgo biológico en ambientes laborales 5. Muestreo de agentes biológicos en el aire

6. Criterios para manipular, transportar, almacenar y eliminar las muestras

INSTITUTO NACIONAL DE SEGURIDAD E HIGIENE EN EL

TRABAJO

Notas Técnicas de Prevención

NTP 203: CONTAMINANTES BIOLÓGICOS: EVALUACIÓN EN AMBIENTES LABORALES

http://www.insht.es/InshtWeb/Contenidos/Documentacion/FichasTecnicas/NTP/Ficheros /201a300/ntp_203.pdf

NTP 209: METODO PARA EL RECUENTO DE BACTERIAS Y HONGOS EN EL AIRE http://www.insht.es/InshtWeb/Contenidos/Documentacion/FichasTecnicas/NTP/Ficheros /201a300/ntp_299.pdf

NTP 609: AGENTES BIOLÓGICOS: EQUIPOS DE MUESTREO (I)

http://www.insht.es/InshtWeb/Contenidos/Documentacion/FichasTecnicas/NTP/Ficheros /601a700/ntp_609.pdf

NTP 609: AGENTES BIOLÓGICOS: EQUIPOS DE MUESTREO (II)

http://www.insht.es/InshtWeb/Contenidos/Documentacion/FichasTecnicas/NTP/Ficheros /601a700/ntp_610.pdf

NTP 211: AGENTES BIOLÓGICOS: ANÁLISIS DE LAS MUESTRAS

http://www.insht.es/InshtWeb/Contenidos/Documentacion/FichasTecnicas/NTP/Ficheros /601a700/ntp_611.pdf

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1.- Introducción

La higiene industrial clasifica los contaminantes que se pueden presentar en el ambiente de los puestos de trabajo en químicos, físicos y biológicos.

Los contaminantes biológicos en contraposición a los contaminantes químicos y agentes físicos, son seres vivos, microorganismos con un determinado ciclo de vida, capaces de reproducirse, que al penetrar en el hombre causan enfermedades de tipo infeccioso o parasitario

A su vez indicar que los agentes biológicos forman parte de nuestra vida, se encuentran en todos los hábitats, en el aire, en el agua, en la tierra e incluso en nuestro cuerpo y que la mayoría de los microorganismos conocidos son inofensivos para el hombre salvo algunos de ellos que son patógenos y pueden causar enfermedades mas o menos graves.

El aire contiene en suspensión diferentes tipos de microorganismos, especialmente bacterias y hongos. La presencia de uno u otro tipo depende del origen, de la dirección e intensidad de las corrientes de aire y de la supervivencia del microorganismo.

Los virus son las formas de vida más simples. Están constituidas únicamente por material genético: ADN (Acido desoxirribonucleico) o ARN

Son parásitos obligados, es decir, precisan de un huésped para poder reproducirse.

La infección la llevan a cabo inyectando su material genético en las células del huésped. Una vez en su interior se sirven de la maquinaria biológica del huésped para producir copias de sí mismos hasta lograr su total recomposición y en un número tal que rompe las

membranas celulares pasando así a infectar nuevas células.

Las bacterias son organismos más complejos que los virus y a diferencia de ellos son capaces de vivir, en un medio adecuado, sin la necesidad de un huésped para completar su desarrollo. Es de destacar la capacidad de elaborar esporas que presentan algunas bacterias.Las esporas no son más que formas de vida resistentes a condiciones adversas. Pueden resistir, durante años incluso, altas temperaturas, sequedad, falta de nutrientes, etc., recuperando su estado normal y capacidad infectiva al entrar en contacto con un medio adecuado para su desarrollo. Los hongos son formas complejas de vida que presentan una estructura vegetativa denominada micelio que está formada por hifas (estructuras filiformes por las que circula el citoplasma plurinucleado). Esta estructura vegetativa surge de la germinación de sus células reproductoras o esporas.

Su hábitat natural es el suelo, pero algunos componentes de este grupo son parásitos tanto de hombres y animales como de vegetales.

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Supervivencia

La supervivencia, reproducción y dispersión en el aire de virus, bacterias, hongos y otros contaminantes biológicos, dependen, en gran medida, de las condiciones del entorno en que se encuentran. Factores tales como la temperatura, la humedad relativa, el movimiento del aire, la luz y las fuentes de alimento, principalmente, van a determinar el grado en que los microorganismos se encontrarán en el ambiente.

En general, las temperaturas bajas inhiben el crecimiento de muchos microorganismos; no obstante, algunos de ellos (por ejemplo, mohos y levaduras) se desarrollan bien en ambientes fríos. Otras especies microbianas (por ejemplo, Aspergillus sp, Legionella pneumophila o Thermoactinomyces vulgaris), alcanzan su desarrollo óptimo a temperaturas elevadas.

Los ambientes muy húmedos favorecen el desarrollo de los hongos, de las bacterias y de los ácaros del polvo doméstico. El movimiento del aire contribuye al transporte, mantenimiento y paso al aire de los contaminantes biológicos procedentes del exterior o contenidos en un reservorio del interior.

El grado y tipo de luz también pueden favorecer o inhibir el desarrollo de los microorganismos. Por ejemplo, la luz ultravioleta inhibe dicho crecimiento y la ausencia de luz impide la formación de esporas de algunos hongos (Altemaria sp.).

Los organismos vivos precisan de nutrientes para su supervivencia y desarrollo; éstos son muy variados pero resumiendo, se podría decir que el agua y la materia orgánica son los dos recursos principales de que se sirven estos organismos para vivir. Por lo tanto, todos aquellos materiales y estructuras en las que se reúnan esas dos condiciones pueden ser considerados como substratos colonizables por los microorganismos

El R.D. 664/ 1997, de 12 de mayo, sobre protección de los trabajadores contra los riesgos relacionados con la exposición a agentes biológicos durante el trabajo (BOE nº 124 de 24 de Mayo), define los contaminantes biológicos como microorganismos con inclusión de los genéticamente modificados, cultivos celulares y endoparásitos humanos, susceptibles de originara cualquier tipo de infección, alergia o toxicidad.

El mismo R.D. clasifica los agentes biológicos en 4 grupos de riesgo:

1. Agente biológico del grupo 1: aquél que resulta poco probable que cause una enfermedad en el hombre.

2. Agente biológico del grupo 2: aquél que puede causar una enfermedad en el hombre y puede suponer un peligro para los trabajadores, siendo poco probable que se propague a la colectividad y existiendo generalmente profilaxis o tratamiento eficaz.

3. Agente biológico del grupo 3: aquél que puede causar una enfermedad grave en el hombre y presenta un serio peligro para los trabajadores, con riesgo de que se propague a la colectividad y existiendo generalmente una profilaxis o tratamiento eficaz.

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4. Agente biológico del grupo 4: aquél que causando una enfermedad grave en el hombre supone un serio peligro para los trabajadores, con muchas probabilidades de que se propague a la colectividad y sin que exista generalmente una profilaxis o un tratamiento eficaz.

La siguiente tabla, esquematiza las características de los distintos agentes biológicos para su clasificación dentro de un grupo de riesgo determinado:

GRUPO DE RIESGO DEL AGENTE

BIOLÓGICO RIESGO INFECCIOSO

RIESGO DE PROPAGACIÓN A LA COLECTIVIDAD PROFILAXIS O TRATAMIENTO EFICAZ

1 Poco probable que causeenfermedad. NO Innecesario.

2

Pueden causar enfermedad y constituir un peligro para los

trabajadores. Poco probable

Posible generalmente.

3

Puede provocar una enfermedad grave y constituir un serio peligro para los trabajadores.

Probable Posible generalmente.

4 Provocan una enfermedadgrave y constituyen un serio

peligro para los trabajadores.

Elevado No conocido en laactualidad.

De esta forma, los agentes biológicos del Grupo de Riesgo 1 (GR-1) serían aquellos que, habitualmente, no están asociados con enfermedades en el hombre.

El GR-2 lo constituyen agentes asociados con enfermedades en el hombre, que raramente son serias, y para las cuales existen habitualmente medidas preventivas o terapéutic

El GR-3 lo componen agentes que están asociados con enfermedades graves o mortales, para las cuales son posibles intervenciones de tipo preventivo o terapéutico (alto riesgo individual pero bajo para la colectividad).

El GR-4 lo forman agentes que, probablemente, causan una enfermedad grave o letal en el hombre, para las cuales las intervenciones preventivas o terapéuticas no son eficaces (alto riesgo individual y para la colectividad).

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Para conocer la clasificación de los agentes biológicos a los que podamos estar expuestos, podemos consultar el anexo II del RD 664/1997, en donde están clasificados en los grupos 2, 3, o 4, siguiendo el criterio expuesto en la tabla anterior.

Incluye además un listado de agentes biológicos en el que se indica su grupo de riesgo y otras características perjudiciales como: producción de toxinas, reacciones alérgicas, …

En los contaminantes biológicos no es posible establecer unos "valores máximo permitidos" generalizados y válidos, porque son seres vivos capaces de reproducirse, porque en una misma especie bacteriana pueden existir cepas con distinto poder patogénico y factores como la temperatura y la humedad ambientales pueden condicionar su presencia. Para el estudio y control de los contaminantes biológicos, el Consejo de las Comunidades Europeas está desarrollando normas (directivas) sobre la protección de los trabajadores contra los riesgos relacionados con la exposición a agentes biológicos durante el trabajo.

2. Tipos de contaminantes biológicos Virus

Son las formas de vida más simples, constituidas únicamente por material genético: ADN ó ARN y una cápside o cubierta proteica.

Son parásitos obligados, es decir, precisan de un huésped para poder reproducirse. La infección la llevan a cabo inyectando su material genético en las células del huésped. Una vez en su interior se sirven de la maquinaria biológica del huésped para producir copias de sí mismos hasta lograr su total recomposición y en un número tal que rompe las membranas celulares pasando así a infectar nuevas células.

Bacterias

Son organismos más complejos que los virus y a diferencia de ellos son capaces de vivir, en un medio adecuado, sin la necesidad de un huésped para completar su desarrollo. De todos modos un buen número de ellos son patógenos para el hombre.

Algunas bacterias son capaces de elaborar esporas. Las esporas no son más que formas de vida resistentes a condiciones adversas. Pueden resistir, durante años incluso, altas temperaturas, sequedad, falta de nutrientes,..., recuperando su estado normal y capacidad infectiva al entrar en contacto con un medio adecuado para su desarrollo.

Protozoos

Son organismos unicelulares siendo algunos de ellos parásitos de los vertebrados.

Su ciclo vital es complejo, a veces necesitan de varios huéspedes para completar su desarrollo. La transmisión de un huésped a otro la realizan habitualmente insectos.

Hongos

Son formas complejas de vida con una estructura vegetativa llamada micelio que está formada por hifas (estructuras filiformes por las que circula el citoplasma plurinucleado). Esta estructura vegetativa surge de la germinación de sus células reproductoras o esporas. Su hábitat natural es el suelo, pero algunos componentes de este grupo son parásitos tanto de hombres y animales como de vegetales.

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Helmintos

Son organismos pluricelulares con ciclos vitales complejos y con diversas fases en su desarrollo.

Así, es frecuente que completen cada una de sus fases de desarrollo (huevo-larva-adulto) en diferentes huéspedes (animales/hombre), y que la transmisión de un huésped a otro sea realizada por diferentes vectores (agua/alimentos/insectos/roedores...).

Artrópodos

Son organismos pluricelulares con ciclos vitales complejos y con diversas fases en su desarrollo, (huevo-larva-adulto) fases que pueden ser completadas en diversos huéspedes siendo transmitidas de unos a otros por varios vectores.

Algunas especies de artrópodos son endoparásitos, es decir, atraviesan la superficie del cuerpo.

Otras especies no penetran en el organismo sino que viven temporalmente sobre él, pudiendo causar el efecto adverso para la salud al inocular en el huésped toxinas que producen diversas modificaciones patológicas.

3.- Flora microbiana presente en el ambiente

-La flora microbiana del aire es transitoria y variable. De forma natural no existe ningún ambiente estéril.

- Los m. o no pueden desarrollarse en el aire, pero es el vehículo de partículas de polvo y gotas, portadores de m. o

- El contenido y tipo de m o en el aire depende de las fuentes de contaminación: Gérmenes expelidos al toser o estornudar

Partículas de polvo en suspensión

Microorganismos procedentes de aerosoles

Gérmenes procedentes de conductos de sistemas de aire acondicionado Materia orgánica en descomposición.

- El número de m o del aire interior depende: Del tiempo y tipo de ventilación Grado de hacinamiento

Actividad de los ocupantes

Los m o son expedidos en gotitas por la nariz y boca al estornudar, toser y hablar.

Las gotitas mayores sedimentan sobre superficies o el suelo como el polvo que puede ser transportado por el aire durante la actividad del lugar

Las gotitas más pequeñas pueden permanecer en el aire durante un tiempo considerable, cuando su tamaño es menor de 5 micras pueden llegar a los alvéolos pulmonares y causar patología

La elevada supervivencia de algunos microorganismos en el polvo puede ocasionar riesgos de infección, sobre todo en hospitales, dando lugar a infecciones nosocomiales.

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MICROORGANISMOS PRESENTES EN EL AIRE INTERIOR - Bacterias

- Hongos: mohos y levaduras - Virus

- Protozoos

Bacterias presentes en el aire interior

Sobre todo se encuentran bacterias Gram. (+): • Staphylocuccus epidermidis y aureus, • Aerococcus, Micrococcus y Streptococcus.

• En menor medida, Peptostreptococcus, Mycobacterium, Corynebacterium, Bacillus....

Las bacterias Gram. (-) no suelen ser abundantes.

Acinetobacter, Aeromonas, Flavobacterium y especialmente Pseudomonas, Neisseria, Moraxella. etc.

Legionella pneumophila puede entrar en los edificios en el aire procedente de aerosoles de torres de refrigeración próximas.

ENFERMEDADES MICROORGANISMO

Amigdalitis, bronquitis, escarlatina Streptococcus pyogenes

Difteria C. diphteriae

Neumonía S. pneumoniae, Staphylococcus aureus

Neumonía atípica M. pneumoniae, C.pneumoniae, C.psitaci

Meningitis Neiseria meningitidis

Meningitis epiglotis, neumonía Haeniophyllus influenzae

Tosferina Bordetella pertussis

Tuberculosis Mycobacterium tuberculosis

Legionelosis Legionella pneumophila

Actinomicosis Actiomyces israeli

Fiebre Q Coxiella burneti

Carbunco pulmonar Bacillus anthracis

Brucelosis Brucella melitensis, abortus, suis

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- Hongos más frecuentes en aire interior - MOHOS esporas de:

• Cladosporium, • Penicilium, • Aspergilus • Eurotium.

• Alternaria, Acremoninum, Fusarium, Mucor, Scopularipsis, Monosporium, Botrytis, Cephalosporium.

ENFERMEDADES HONGOS

Neumonía Pneumocystis canini

Cryptococcus neoformans Blastomyces dermatitidis

Micosis sistémicas Histopíasma capsulatum

Coccidioides immitis Aspergillus fumigatus -Levaduras • Rhodotorula • Sporobolomyces - Virus

- Orto y Paramixovirus, Poxivirus, Picornavirus,

ENFERMEDADES MICROORGANISMOS

Resfriado común RhInovirus, Mastadenovirus

Gripe Influenzavirus

Bronquitis, neumonía PneumovIrus, Mastadenovirus

Sarampión Morbilivirus Parotiditis Rubulavirus Poliomielitis Enterovirus Viruela Orthopoxvirus Varicela Varicellovirus Rubéola RubIvirus Rabia Lyssavirus

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4. Control del riesgo biológico en ambientes laborales

El estudio sobre exposición a agentes biológicos requiere valorar el riesgo derivado de la exposición en el ambiente laboral, para ello es necesario:

 muestrear todas las áreas y equipos a controlar,  incubar las muestras para que crezcan los m.o. y

 medir e identificar cada especie microbiana (ó agente biológico).

Las áreas en las que ha de hacerse el muestreo varían según el tipo de trabajo ó industria:

5. Muestreo de agentes biológicos en el aire

La medición de agentes biológicos no es un proceso sencillo, ya que son seres vivos y sus requerimientos vitales condicionan la medición que deberá ser planificada cuidadosamente. Un aspecto muy importante a resolver es cómo se han de medir.

Muchos equipos de muestreo de bioaerosoles son similares a los utilizados para captación de agentes químicos; aunque modificados en el tipo de soporte de captación. El material de estos soportes debe permitir la supervivencia de los agentes biológicos hasta que sean analizados en el laboratorio, por ello deben proporcionar alimento y agua y no dañar las células al captarlas.

De forma general se puede decir que:

 Para muestrear m.o. se utilizan medios de cultivo (sólidos, semisólidos ó líquidos).  Para captar formas resistentes (esporas, granos de polen...) ó productos (endotoxinas, micotoxinas, glucanos,...), el soporte de captación más utilizado es el filtro.

Muestreo de m.o. en el aire. Características del equipo

Para elegir el muestreador de bioaerosoles más adecuada podemos seguir el esquema de abajo:

**

Las principales características que ha de cumplir un muestreador de aerosoles son:

• Conducir el aire hacia el equipo a una velocidad uniforme y provocar las mínimas pérdidas posibles en el dispositivo de entrada del aire.

• Mantener el caudal de aire dentro de unos márgenes razonables teniendo en cuenta las posibles variaciones en el suministro eléctrico, carga de las baterías o las pérdidas de carga en el equipo.

• Permitir el uso de diversos soportes de captación (placas de cultivos de tamaño estándar, porta objetos, filtros de distintos tipos, diámetros y tamaño de poro, etc.).

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• Permitir la colocación y extracción de los soportes de captación de forma sencilla. • Proteger el soporte de captación de posibles contaminaciones.

• Minimizar las fugas de aire que pueden causar errores en la medición o permitir que aire no pase sobre el medio de captación.

• Expulsar el aire aspirado a suficiente distancia para evitar el reingreso del aire ya muestreado.

• Captar un amplio rango de tamaños de partículas con una eficacia consistente; o tener una elevada eficacia de captación para tamaño de partícula deseado, mientras que excluye otras fracciones o las capta con menor eficacia.

• Captar las distintas fracciones de tamaño de partícula con eficacias similares a las existentes en el tracto respiratorio humano.

• Mantener la integridad física, química y biológica del material captado.

• Permitir el análisis de las muestras mediante el uso de diferentes técnicas analíticas. • Ser resistente y fácil de limpiar y desinfectar.

• Ser de fácil manejo, portátil, fiable y económico.

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Principios de captación en los muestreadotes de aerosoles

Las partículas microbianas pueden separarse de los aerosoles usando diferentes fuerzas. Los muestreadotes se clasifican en base a la/s fuerza/s física/s que aplican para captar: • Equipos inerciales (impactadores, ciclones, equipos centrífugos);

• Equipos de toma de muestra con filtro y • Otros equipos y otras técnicas

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1. Impactación inercial

La inercia de las partículas es la fuerza que consigue separarlas del aire. La inercia de una partícula depende de su masa y su velocidad. En la zona de captación del equipo la corriente de aire que ha penetrado es obligada a cambiar de dirección y las partículas que tienen suficiente inercia son separadas del flujo de aire impactando sobre una superficie (sólido ó líquido). Aquí se muestra cómo impactan las partículas sobre diferentes medios.

2. Filtración

Las partículas suspendidas se captan en un material poroso cuando el aire lo atraviesa. La captación de una partícula depende de su diámetro aerodinámico, del tamaño del poro del filtro y del caudal de aire que atraviesa el filtro. Los principios de captación son:

Tamizado – capta partículas mayores que el tamaño del poro del filtro

Impactación – dependiendo de su inercia, masa y velocidad las partículas pueden separarse de sus líneas de flujo cuando éstas se dividen al chocar con las fibras del filtro. Interceptación – partículas pequeñas que siguen las líneas de flujo de aire que ya han chocado con las fibras, cuando pasan cerca de éstas son atraídas y retenidas por ellas debido a su carga electrostática.

Difusión – las partículas pequeñas suspendidas en el aire tienen un comportamiento similar al de las moléculas (siguen las leyes del movimiento Browniano) y pueden quedar retenidas cuando chocan con las fibras por azar.

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3. Otras técnicas

Sedimentación – consiste en ubicar placas de Petri con medio de cultivo adecuado en las zonas escogidas para el muestreo. Tras el periodo de muestreo se recogerán las placas y se procesarán según las técnicas analíticas microbiológicas más apropiadas.

Tipos de equipos de muestreo 1 Impactación 2 Filtración 3 Borboteo 4 Otros 1-ImpactadoresMuestreador de rendija

En estos muestreadores el aire penetra a través de una o cuatro rendijas con flujos de aire de 30 I/min y 700 I/ min, según el modelo, y es impulsado sobre la superficie de impactación que consiste en: una placa con medio de cultivo, un portaobjetos o una cinta adherente. La placa de cultivo permite la incubación, recuento de colonias e identificación de las especies microbianas; los portaobjetos y las cintas, permiten la observación directa al microscopio de las partículas captadas. Estos soportes de captación pueden estar estáticos o colocados sobre un soporte giratorio dotado de distintas velocidades. Al disponer de un único nivel de captación no se obtiene información sobre la distribución por tamaño de partícula. Este equipo tiene un diámetro aerodinámico de corte (dae50) calculado de 0,67 pm. En la figura 3 se muestra un esquema de este tipo de muestreador.

FIGURA 3 Esquema de un muestreador de rendija

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Muestreador Andersen

Este muestreador es un impactador en cascada que capta las partículas en una serie de placas con medio de cultivo a un caudal de aire de 28,3 I/min. En general, este impactador tiene seis niveles de captación, cada nivel está separado del siguiente por un elemento perforado por 400 orificios, debajo de cual se coloca la placa con medio de cultivo, en cada nivel todos los orificios tienen el mismo diámetro, pero de un nivel al siguiente disminuye el tamaño del diámetro de los orificios, lo que provoca un aumento de la velocidad del aire al pasar de un nivel a otro. La captación se basa en la inercia de las partículas, en el primer nivel se separan las partículas de mayor tamaño; las de menor tamaño, cuya inercia no es lo suficientemente grande, son arrastradas por la corriente de aire que pasa al siguiente nivel, al aumentar la velocidad también aumenta la inercia de las partículas arrastradas, algunas serán captadas en el segundo nivel mientras que otras seguirán en el aire pasando al tercer nivel, y así sucesivamente. El resultado final es una separación por tamaño de partícula. Los diámetros de corte teóricos para cada uno de los niveles son, del nivel 1 al nivel 6, respectivamente: 7 μm, 4,7 μm, 3,4 μm 2,1 μm, 1,1 μm y 0,65 μm.

Otros modelos de este equipo se presentan con uno o dos niveles de captación. El modelo con un solo nivel dispone de una placa perforada (400 orificios), su caudal de aire es de 28,3 I/min y el diámetro de corte teórico es de 0,65 pm. En el modelo con dos niveles, las placas perforadas disponen de 200 orificios, un caudal de aire de 28,3 I/min y unos diámetros de corte teóricos de 8,0 μm y 0,95 μm respectivamente. Este muestreador es uno de los designados como de referencia en las pruebas de ensayo para la validación de otros muestreadores. En la figura 4 se muestra un esquema de este muestreador.

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Muestreadores multiorificio

El muestreador SAS (Surface air system) es un equipo portátil con un único nivel de captación basada, asimismo, en la inercia de las partículas. La captación de las partículas tiene lugar en una placa RODAC con medio de cultivo. Existen dos modelos calibrados a dos caudales de aire (90 I/min y 180 I/min). El equipo dispone de un cabezal con 219 orificios, un ventilador y un programador del tiempo de muestreo (intervalos de 20 segundos), permitiendo un mínimo de 20 segundos y un máximo de 5 minutos. El diámetro de corte teórico es de 2,0 μm.

Estudios comparativos realizados con este muestreador y otros de referencia, como el muestreador Andersen, muestran una reducción de la eficacia de captación del 50%. En la

figura 5 se muestran este muestreador y otros de características similares como son: el muestreador M air T (Millipore) o el muestreador MAS-100 (Merck).

FIGURA 5 Muestreadores multiorificio

Recolector RCS

(Reuter centrifugal system)

Un volumen de aire es impulsado por una hélice sobre una cinta de plástico portadora de alvéolos yuxtapuestos con medio de cultivo adecuado. Partículas y m.o. son proyectados por acción de la fuerza centrífuga sobre el medio de cultivo

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Muestreador May (impingement)

Consiste en borbotear un volumen de aire a través de una solución isotónica contenida en un frasco lavador.

La determinación cuantitativa se hace por los métodos microbiológicos habituales

2-Equipos de filtración

Por filtración se entiende la captación de partículas suspendidas en el aire al quedar retenidas en un material poroso cuando este lo atraviesa. El un sistema que permite tomar muestras personales, lo que permite conocer la exposición de trabajadores en su ambiente de trabajo. Se utilizan cuando se pretende evaluar los componentes de los bioaerosoles más resistentes, como esporas, polen, etc.

El equipo de toma de muestras consiste en una bomba de aspiración de aire a la que se le une un portafiltros, que es una caja que contiene al filtro. Como en los sistemas anteriores, es

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importante controlar el tiempo de muestreo y el caudal que utilizamos, para determinar el volumen de muestreo

3-Frascos borboteadores:

Funcionan conduciendo una corriente de aire al interior de un frasco que contiene un medio de captación líquido. Las partículas son transferidas al líquido, que puede se agua destilada, soluciones salinas tamponadas o medios de cultivo diluidos.

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4-Otros

Técnica de sedimentación en placa.

Se le quita la tapa a una placa de Petri con agar PCAS de modo que quede expuesta al aire durante un tiempo controlado. Durante ese tiempo algunas partículas de polvo con microorganismos sedimentarán sobre la superficie del agar. Después se cierra la placa y se incuba.

El procedimiento es muy tosco y no permite conocer el volumen de aire tratado, pero da una estimación grosera del grado de contaminación del aire de una habitación. Además, permite obtener cultivos de los diferentes tipos de microorganismos presentes en el polvo.

Los anteriores procedimientos permiten recoger los microorganismos presentes en el aire pero esta vez conociendo el volumen de aire que se ha tratado. Por lo tanto, hacen posible un recuento más exacto que la ruda técnica anterior.

Comparación de idoneidad de los distintos equipos muestreadores

En el cuadro vemos las principales ventajas y desventajas de algunos muestreadores ambientales de contaminantes biológicos

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5. Elección del soporte de captación

Normalmente el soporte de captación de muestras biológicas es un medio de cultivo, y su elección depende del tipo de m.o. que deseamos estudiar.

Debemos distinguir entre medios de cultivo generales ó universales (como agar nutritivo ó agar PCA en los que crece todo tipo de m.o; agar Sabouraud con cloranfenicol donde crecen hongos y levaduras), y medios de cultivo específicos ó restrictivos que sólo permiten crecer a un número limitado especies microbianas (medio McConkey: para enterobacterias; Agar

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Sangre: para estreptococos; Medio Chapman: para estafilococos; Tripticase-Soy-Agar (TSA) : para brucelas, etc.…).

La elección de uno u otro depende de los contaminantes que se espera encontrar.

6. Criterios para manipular, transportar, almacenar y eliminar las muestras

En la mayoría de los métodos de muestreo el soporte en que se recogen los agentes biológicos es una placa con medio de cultivo.

Los m.o. presentes en el medio ambiente y las manos de la persona que toma la muestra pueden producir error en la medición si crecen en el medio de cultivo junto a los agentes biológicos investigados.

Para evitar estos errores conviene tener en cuenta algunas precauciones al manipular equipos y material para muestreo biológico:

• Esterilizar los soportes y medios de cultivo utilizados. • Desinfección del equipo de muestreo.

• Desinfección de las manos y uso de guantes estériles para la manipular las muestras. • Sellado de los soportes hasta su utilización y tras la captación de la muestra.

• Transporte inmediato al laboratorio para su procesamiento.

• Procesamiento de las muestras mediante técnicas analíticas adecuadas. • Almacenamiento limitado (en nevera), de las muestras.

• Destrucción de los cultivos por esterilización en autoclave y eliminación posterior de las muestras (se incineran ó se eliminan por empresa Gestora autorizada).

Normativa

El establecimiento de un valor guía, en forma de un número máximo de partículas viables, para microorganismos en ambientes interiores es complejo debido a que el número de variables que influyen es demasiado elevado y al mismo tiempo existen muchísimas variedades de microorganismos.

La ACGIH (American Conference of Governmental Industrial Hygienist) en 1989 publicó un guía (Bioaerosols: Assessment and Control) en la que se incluían como recomendación los siguientes valores:

Conteo total de hongos en suspensión <500 ufc/m3 Conteo total de bacterias en suspensión <500 ufc/m3

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Sin embargo esta guía ha sido sustituida por otra en 1999 que excluye las valoraciones numéricas. En España se dispone de la norma UNE 100012 Higienización de sistemas, que incluye los siguientes valores numéricos:

 Se considera ambiente interior limpio < 800 ufc/m3

 Se hace atención al fenómeno de amplificación bacteriana, el aire interior no debe presentar una presencia de bacterias mayor de 200 ufc/m3 que el exterior. Valores para la contaminación por microorganismos en las superficies interiores de los sistemas de climatización:

- Estándar microbiológico de superficies interiores de conductos previo a la limpieza: Se considera inaceptable >100 ufc/25 cm2

- Como valor indicativo se recomienda un valor máximo de 100 ufc/m3 en el aire de impulsión después de realizar una limpieza de conductos.

La norma alemana VDI 6022 norma de higiene de sistemas de ventilación y climatización, incluye en la sección 3.3 Condiciones químicas y microbiológicas del aire, una referencia genérica "donde no existan reglamentos sanitarios respecto al contenido de gérmenes y materia biológica el aire exterior existente se considerara como referencia. La cantidad de polvo, bacterias, hongos, y sustancias biológicas en el aire de impulsión no deberá exceder al exterior en ninguna categoría. Esto aplica especialmente al espectro de gérmenes".

Conclusión

Una vez que los microorganismos se han asentado en un substrato (reservorio) e iniciado su desarrollo (amplificación), su paso al aire (diseminación), estará condicionado por varios factores, como pueden ser: su arrastre provocado por el movimiento del aire, de las personas o de la maquinaria; la alteración del reservorio debida principalmente, a obras de demolición, al movimiento de tierras o a las operaciones de limpieza.

Referencias

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