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PorO. F. PICCINI (*), R. AZCON, E. J.BEOMAR yJ. M. BAREA
SUMMARY
INTERACTION RHIZOBIUM-MYCORRHIZA ON THE NUTRITION ANO
GROWTH OF TRIFOLlUM REPENS IN ACID SOIL. EFFECT OF LIME ANO ROCK PHOSPHA TE
The dryweight gain, nitrogen fixation and nutrient uptake ofclover (T. repens)
plants in symbiosis with selected R. trifolii strains and vesicular-arbuscular my -corrhizas (VAM) and grown in acid soil have been examined under greenhouse conditions. The addition of rack phosphate to the soil significantly (P ~ 0.05) in -creased both plants dry weights and nutrients concentration. Nitrogenase activity,
measured as acetylene reduction, was also greater (P ~ 0.05) when the soil was added with rack phosphate. No effect could be observed by liming treatment of the soil ascompared to the soil without amendment. The best results were always obtained by the combined application of rack phosphate and lime. In all cases the response of the plants to the inoculation with the different microorganisms varied according to the «specific» Rhizobium-M ycorrhiza combinations.
INTRODUCCION
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,
1983)
.
(*) Dirección actual: Facultad de Agronomía, Universidad Nacional Agraria de laSelva, Huanuco, Perú.
INTERACCION RHlZOBIUM-MICORRIZA
175
La actividad
nitrogenasa
se determinó
mediante
la técnica de
la
re-ducción del acetileno a etileno descrita
por Hardy
elal
.
(1968)
, y
la
for-mación de rnicorrizas,
de acuerdo con la técnica de Phillips y Hayman
(1970)
.
El
peso
s
eco de las plantas y el
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entes de las mismas
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zó de
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s de haber sido secadas a 60
°
e
durante 48 h. Los datos
obtenidos
se
sometieron a
un análisis
de varianza para comprobar
la
sig-nific
a
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ística de los tratamientos
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TABLA 1
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Peso seco de la parte aérea de plantas de trébol blanco (T. repens) inoculado con hongo VAM YR.trifolii en un suelo ácido (T), adicionado con roca fosfórica (PR),
encalado (C) ytratado con roca fosfórica ycal(PR +C)
Peso seco (mg) Glomus sp. G.fasciculatus Suelo R. trifolii 162X95 l48NB 162X95 148NB T 38 a 62 ab 44 a 46 a PR 78 ab 102 b 114b 74ab C 30a 44a 38a 32a PR+C 98 b 118 b 98 b 68 ab
Losresultados seguidos de la misma letra no son significativamente diferentes (P,;;;0.05), se-gún eltest de Duncan.
176 ANALES DE EDAFOLOGIA y AGROBIOLOGIA
En la Tabla 2 se presentan los resultados correspondientes
a la
activi-dad nitrogenasa de
Trifolium repensinoculado con
R. trifolii,en relación
con los distintos tratamientos.
El encalado del suelo no afectó la actividad
fijadora de nitrógeno.
Sin embargo,
tanto la aplicación
de roca fosfórica
como el tratamiento
combin
a
do
de los dos anteriores aumentaron
de
for-ma
significativa (p
~
0.05) tal actividad,
sobre todo en plantas
micorriza-das con Glomus sp.
TABLA 2
Actividad nitrogenasa de raíces noduladas de plantas de trébol blanco (T. repens) inoculado con hongo VAM YR.trifolii en un suelo ácido (T), adicionado con roca
fosfórica (PR), encalado (C) ytratado con roca fosfórica y cal(PR +C)
Actividad nitrogenasa (nano moles C2H4/maceta.hora)
Glomus sp. G.fasciculatus Suelo R.trifolii l62X95 l48NB 162X95 148NB T 19 a 20a 18a 20a PR 89 b 85 b 151cb 156 cb C 6a 4a 15 a 13 a PR+C 188 e 295d 205 e 136cb
Los resultados seguidos de la misma letra no sonsignificativa mente diferentes (P ,,:;0.05), se -gún el test de Duncan.
La concentración
de nutrientes (N,
P,
K,
ea
yMg) de las plantas
cre-cidas en presencia de los
diferentes
tratamientos
se detalla en la Tabla 3.
En
ella se puede observar que la adición de roca fosfórica mejoró
conside-rablemente la absorción de todos los nutrientes,
mientras que el encalado
no
es
efectivo. En el caso de la aplicación conjunta (roca fosfórica
ycal),
las plantas micorrizadas con Gl
omus
sp. presentaron
valores más elevados
de
contenido en nutrientes
,
excepto el K,
mientras que las micorrizadas
con
G
.
fasciculatusno denotaron
tal efecto comparando
la aplicación
conjunta
con la adición de sólo roca fosfórica. Es de hacer notar que
Glo-mu
s
sp.
fue más efectivo en
'
asociación
con R. trifolii 148NB, mientras
que Gi
fasciculatus
compatibilizó
mejor con R. trifolii 162X95.
DISCUSION
Los resultados obtenidos
indican que la aplicación de
'roca fosfórica a
un
suelo ácido incremehta
el
peso seco
yconcentración
en nutrientes
de
plantas d
e
trébol blanco inoculadas
con
R.trifolii
yhongos VAM (Tablas
INTERACCION RHIZOBIUM-MICORRIZA
177
TABLA 3
Contenido en nutrientes de plantas de trébol blanco (T. repens) inoculado con hon-go VAM YR. trifolii enunsuelo ácido (T), adicionado con roca fosfórica (PR),
en-calado (C) ytratado con roca fosfórica y cal (PR +C)
Contenido (mg/maceta)
Glomus sp. G.fasciculatus
Nutriente Suelo R. trifolii
162X95 148NB 162X95 148NB N T 0,64 0,94 0,67 0,63 PR 1,22 1,34 1,81 1,15 C 0,36 0,62 0,47 0,31 PR+C 1,77 2,08 1,28 0,95 P T 0,03 0,04 0,04 0,03 PR 0,15 0,18 0,20 0,15 C 0,03 0,03 0,03 0,02 PR+C 0,17 0,25 0,19 0,13 K T 0,48 0,78 0,68 0,87 PR 0,94 2,02 1,04 0,77 C 0,39 0,45 0,39 0,36 PR+C 0,54 0,76 0,55 0,45 Ca T 0,68 1,11 0,76 0,74 PR 2,34 3,10 3,42 2,07 C 0,60 0,91 0,79 0,70 PR+C 3,53 3,92 3,57 2,34 Mg T 0,17 0,28 0,22 0)4 PR 0,51 0,65 0,74 0,47 C 0,15 0,23 0,18 0,15 PR+C 0,69 0,83 0,72 0,46
178 ANALES DEEDAFOLOGIA y AGROBIOLOGIA
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(1984).
RESUMEN
Se ha estudiado en condiciones de invernadero el crecimiento, fijación de ni
-trógeno yabsorción de nutrientes de plantas de trébol blanco (T. repens) en sim
-biosis con R. trifolii ymicorrizas vesículo-arbusculares, crecidas en un suelo ácido. La adición de roca fosfórica al suelo incrementó significativamente (P ,,;;0.05) el crecimiento ynutrición de las plantas de trébol. Igualmente, la actividad
nitro-genasa, medida como reducción del acetileno fue mayor (P
<
0,05) cuando alsue-lo seadicionó roca fosfórica. Elencalado no produjo ningún efecto sobre los pará-metros mencionados en comparación con las plantas crecidas en el suelo sin pre
-viotratamiento. Los mejores resultados se obtuvieron cuando el suelo fue
someti-do al tratamiento combinado de encalado yadición deroca fosfórica.
En todos los casos, la respuesta de las plantas en la inoculación con los
dife-rentes microorganismos empleados varió según las combinaciones «específicas»
que se establecieron entre las distintas razas de Rhizobium y hongos VAM en -sayados.
Departamento deMicrobiologta; Estación Experimental delZaidin.
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.
Profesor Alabareda, 1,Granada.
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.
INTERACCION RHIZOBIUM-MICORRIZA
179
BIBLIOGRAFIA
ABBOTT, L. K. and ROBSON, A. D. (1977): Growth stimulation of subter
ra-neum clover with VAM. Australian Joumal of Agricultural Research: 23.
639-649.
ALEXA DER, M. (1977): Introduction ofsoil microbiology. Wiley ySons. New York, p.467.
ALLEY, M. M. (1981): Short-term soil chemical and crop yield responses to li
-mestone applications. Agronomy Joumal: 73, 687-689.
BACHE, B. W. (1980): In.: EfTects of acid precipitation on terrestial ecosystems
(T.C. Hutchinson and M. Havas, ed.) 173-182, Plenum, New York.
BAREA, J. M. and AZCON-AGUILAR, C. (1983): Mycorrhizas and their signif i-cance in nodulating nitrogen-fixing plants. Adv. inAgronomy, 36. 1-56. BARNES, J. S. and KAMPRATH, E. J. (1975): Commun. Soil Sciende Plant
Anal. .C. Agric. Stn. Tech. Bull. 229.
HARDY, R. W. F.; HOLSTEN, R. D.; JACKSON, E. K. and BURNS, R. C.
(1968): The acetylene-ethylene assay for N2 fixation: laboratory and fieldeva
-luation. Plant Physiol., 43, 1.185-1.207.
ENGELST AD, O. P.; JUGSUJINDA, A.; DE DA TTA, S. K. (1974): Response
by flooded rice to phosphate rocks varying in citrate solubility. Soil Science SocoAm. Proc. 28, 524-529.
EVA 'S, H. J. and RUSSELL, S.A. (1971): Physiological chemistry ofsymbiotic nitrogen fixation by legumes. In: the chemistry and biochemistry ofnitrogen fi-xation. Ed. J. R. Postgate, pp, 191-244,. Plenun, New York.
HARDY R. W. F. and BURNS, R. C. (1968): Biological nitrogen fixation. Annu.
Re .Biochem. 37,331-358.
HAYMA , D. S. (1984): Methods for evaluating and manipulating vesicular
-arbuscular mycorrhiza. In: Microbiological methods for Environmental Bio
-technology. Socofor Ap. Bac. Ed. J. M. Grainger and J. M. Lynch. Academic
Press. ew York, pp. 95-117.
HAY ES, R. J. and LUDECKE, T. E. (1981): Yield, root morphology and che
-mical composition of two pasture legumes as afTected by lime and phosphorus
applications to anacid soil. Plant and Soil, 62,241-254.
JUE, A. S. R. and KANG, B. T. (1979): .Commun. Soil Sci. Plant Anal, 10,
993-1003.
RHASAWNEH, F. E. and DOLL, E. C. (1978): The use of phosphate rock for di
-rect application to soils. Adv. Agron, 30, 159-206.
MOSSE, B. (1977): Plant growth responses to vesicular-arbuscular mycorrhiza.
Response of Sthylosanthes and maize to inoculation in unsterile soils. New
Phytol, 78,277-288.
PHILLIPS, J. M. and HA YMAN, D. S.(1970): Improved procedures for clearing
roots and staining parasitic and vesicular-arbuscular mycorrhizal fungi for ra -pid assessment of infection. Trans. Br.Mycol. Soco55, 158-161.
POWELL, C. L. (1977): Mycorrhizas in hill country soils. Il. EfTects of several
mycorrhizal fungi on clover growth in sterile soils. Nature, London, 264.
436-448.
SANCHEZ, P. A. and UEHARA, G. (1980): In:The role ofphosphorus in agr
i-culture (F. E. Khasawneh, E.
c
.
,
Sample and E. J. Kamprath, eds.), pp.263-310. Am. SocoAgron. Madison, Wisconsin.
